齐墩果酸对宫颈癌细胞HeLa侵袭及凋亡的影响

目的探讨齐墩果酸对宫颈癌HeLa细胞侵袭以及细胞凋亡的影响。方法以HeLa细胞为研究对象,不同浓度的齐墩果酸处理细胞,CCK-8法观察其对HeLa细胞生长的抑制率;Transwell体外侵袭模型检测其对HeLa细胞侵袭能力的影响;Western blot检测不同浓度作用下HeLa细胞caspase-3、bcl-2蛋白表达的变化;ELISA检测各组细胞MMP-2、MMP-9的表达。结果齐墩果酸对对HeLa细胞的增殖及侵袭具有明显的抑制作用。0.2、0.4、0.8μmol/L的齐墩果酸作用下,HeLa细胞caspase-3的表达量分别比未处理组提高了0.31、0.80、0.98倍,而bcl-2的表达量分别降低了26.49%、49.72%和59.46%。不同浓度齐墩果酸作用下,HeLa细胞MMP-2和MMP-9的表达均有所下降,且呈一定的剂量依赖性。结论齐墩果酸可以抑制HeLa细胞的侵袭,并且诱导细胞的凋亡。     

齐墩果酸强化阿托伐他汀降脂效果的临床观察及初步机制

目的研究齐墩果酸对阿托伐他汀在高脂血症患者降脂效果的影响并初步探讨其机制。方法选取高脂血症患者107例,分为单独应用阿托伐他汀治疗组或阿托伐他汀联合应用齐墩果酸治疗组,治疗观察疗程为3个月。分别检测两组治疗前后血液TC、LDLC、TG和HDLC水平。比较两组治疗前后血脂水平变化以及两组间血脂水平差异。用ELISA法分别检测两组治疗前后血清PCSK9浓度。结果治疗前阿托伐他汀组和阿托伐他汀+齐墩果酸组包括TC、LDLC、TG和HDLC等在内的一般资料匹配,差异均无显著性。两组治疗均取得显效,与同组治疗前比较,治疗后两组中TC、LDLC和TG均明显下降,差异具有显著性(P<0.05);阿托伐他汀+齐墩果酸组与阿托伐他汀组比较,TC和LDLC下降效果更加明显,两组差异具有显著性(P<0.05)。两组初始血清PCSK9浓度差异无显著性(72.4±4.2μg/L比71.1±3.9μg/L;P>0.05)。治疗后,阿托伐他汀组血清PCSK9浓度升高了约30%,与治疗前比较差异具有显著性(72.4±4.2μg/L比95.1±3.7μg/L;P<0.01);阿托伐他汀+齐墩果酸组血清PCSK9浓度略有升高(71.1±3.9μg/L比77.6±4.4μg/L),与治疗前比较差异不具显著性;但是阿托伐他汀组血清PCSK9浓度明显高于阿托伐他汀+齐墩果酸组,差异具有显著性(95.1±3.7μg/L比77.6±4.4μg/L,P<0.05)。Spearman相关分析表明血清TC(r=0.76,P=0.001)和LDLC(r=0.72,P=0.001)与PCSK9浓度显著相关,而HDLC和TG与PCSK9浓度相关性不明显。结论血清PCSK9浓度与TC和LDLC明显相关,齐墩果酸可强化阿托伐他汀对高脂血症患者的降脂效果,其作用可能与齐墩果酸抑制PCSK9表达有关。     

硫化氢上调ABCA1的表达促进HepG2细胞载脂蛋白形成

目的探讨硫化氢对HepG2细胞ATP结合盒转运体A1(ABCA1)蛋白及载脂蛋白形成的影响。方法将硫化氢供体硫氢化钠(NaHS)以不同浓度(25、50、100、200及400μmol/L)处理HepG2细胞24h后,采用MTT法检测NaHS对HepG2细胞细胞存活率的影响;HepG2细胞以100μmol/LNaHS处理4、12及24h,实时定量PCR检测NaHS对HepG2细胞ABCA1及载脂蛋白A1(ApoA1)、载脂蛋白A2(ApoA2)mRNA的影响,Westernblot检测NaHS对ABCA1、ApoA1及ApoA2蛋白的影响。结果 MTT结果显示,除400μmol/L以外,25、50、100及200μmol/LNaHS对HepG2细胞的生长无抑制作用;Westernblot量效结果显示,NaHS呈浓度依赖性地上调ABCA1蛋白的表达;时效结果显示,100μmol/LNaHS作用4、12及24h,均能上调ABCA1表达及促进培养上清ApoA1、ApoA2的分泌,但不具时间依赖性;实时定量PCR结果显示,ABCA1、ApoA1及ApoA2的mRNA均增加,其变化与蛋白表达变化一致。结论硫化氢可以促进HepG2细胞ABCA1表达,进而促进载脂蛋白形成。     

山萘酚对HepG2细胞凋亡的影响

目的探讨山萘酚对人类肝癌细胞系HepG2细胞凋亡的影响。方法以不同浓度的山萘酚孵育HepG2细胞24 h后选取最佳药物浓度100μmol/L,再以不同的时间孵育HepG2细胞。采用MTT法检测细胞存活率;采用乳酸脱氢酶(LDH)活力定量试剂盒检测细胞上清LDH活性;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用蛋白印记法检测细胞凋亡相关蛋白的表达情况。结果山萘酚对HepG2细胞凋亡有诱导作用且呈剂量和时间依赖性。当山萘酚作用于HepG2细胞24 h后,随着山萘酚浓度的增加,细胞存活率逐渐降低,细胞凋亡率逐渐增高。与空白对照组相比,作用于HepG2细胞24 h后浓度为100μmol/L的山萘酚,细胞存活率显著降低[(60.58±3.74)%vs(100±2.28)%,P0.0001],细胞凋亡率明显升高[(16.43±0.07)%vs(0.68±0.09)%,P0.0001]。经蛋白印记检测,在山萘酚孵育HepG2细胞24 h的情况下,随着山萘酚浓度的增加,凋亡因子Cleaved-caspase3蛋白表达增加。当山萘酚浓度为100μmol/L时,随着山萘酚作用于HepG2时间的延长,细胞凋亡率也呈逐渐升高趋势。与空白对照组相比,浓度为100μmol/L的山萘酚作用于HepG2细胞24 h后,细胞存活率明显降低[(59.36±3.09)%vs(100±2.28)%,P0.0001],细胞凋亡率显著升高[(16.71±1.12)%vs(0.35±0.01)%,P0.0001],随着时间延长,Cleaved-caspase3表达增加。结论山萘酚对于人类肝癌细胞系HepG2细胞的凋亡具有诱导作用,呈剂量-时间依赖性。表明高浓度山萘酚可通过促进凋亡因子Cleavedcaspase3的表达诱导HepG2细胞凋亡,从而拥有潜在的抗肝癌活性作用。     

黄连素对人肝癌HepG2细胞增殖及血管内皮生长因子表达的影响

[目的]研究黄连素对人肝癌HepG2细胞增殖和血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响.[方法]分别以不同浓度(10、25、50、100μmol/L)的黄连素作用HepG2细胞24 h后,采用MTT法观察细胞增殖变化、实时定量PCR(Real-time PCR)检测VEGF mRNA表达水平变化、Western blot检测VEGF蛋白水平变化.[结果]黄连素可抑制HepG2细胞的增殖,并呈浓度依赖性;不同浓度的黄连素作用细胞24h后,HepG2细胞VEGF mRNA和蛋白表达均有所下降,且呈现出一定的量效关系.[结论]黄连素可抑制人肝癌HepG2细胞的增殖和VEGF的表达,抗血管生成可能是黄连素抗肝肿瘤的作用机制之一.     

熊果酸对肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的 体外观察熊果酸对肝星状细胞增殖与凋亡的影响,探讨熊果酸诱导肝星状细胞凋亡的可能作用机制. 方法 将不同浓度熊果酸作用于肝星状细胞HSC-T6及肝细胞L02,分别在药物作用24、48、72 h后用四甲基偶氮唑盐法检测熊果酸对HSC-T6及L02细胞增殖的影响;流式细胞仪检测熊果酸对HSC-T6凋亡的影响;光学显微镜观察熊果酸作用后细胞形态学变化情况;免疫细胞化学法检测HSC-T6中Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达情况. 结果 各种浓度的熊果酸均可抑制HSC-T6细胞的增殖,且呈剂量-时间依赖性;当熊果酸浓度为25、50、75μmol/L时可促进L02细胞增殖,浓度＞75μmol/L则表现为抑制L02细胞增殖.在病理形态学方面,熊果酸作用HSC-T6细胞48 h后,光学显微镜下可见细胞缩小变圆、核浓缩等.25、50、75 μmol/L熊果酸作用HSC-T6细胞48 h后,流式细胞仪检测显示细胞凋亡率分别为10.30%±3.85%、21.87%±4.46%、31.33%±6.18%,比对照组(2.93%±1.60%)明显升高(P＜0.01).免疫细胞化学显示Bax及Caspase-3蛋白表达较对照组升高(P＜0.05),且呈剂量依赖性,而Bcl-2蛋白表达水平与对照组无明显差异(P＞0.05).结论 在体外熊果酸可较明显地抑制HSC-T6细胞增殖,诱导其凋亡;对L02细胞的生长具有双向调节作用.熊果酸诱导HSC-T6细胞凋亡可能与降低Bcl-2/Bax比值、激活Caspase-3蛋白有关.     

血管紧张素-(1-7)在拮抗血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞Cx43间隙连接上调中的作用

目的探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞Cx43间隙连接中作用。方法AngⅡ处理培养心肌细胞24h。PD98059和Ang-(1-7)在AngⅡ刺激细胞前1h加到培养基中,对照组加等体积药物溶剂DMSO。用Western blot分析和电镜观察心肌细胞Cx43表达和间隙连接。结果Western blot分析显示用10-9~10-6mol/L AngⅡ刺激细胞24h,Cx43的表达与对照组相比呈浓度依赖性增加;用AngⅡ0.1μmol/L刺激心肌细胞24h,与对照组相比Cx43表达上调、磷酸化ERK1/2活性增加(P<0.01),ERK1/2激酶特异性抑制剂1μmol/LPD98059和0.1μmol/L Ang-(1-7)能阻断AngⅡ上调Cx43表达和磷酸化ERK1/2活性增加。电镜观察证明用AngⅡ0.1μmol/L刺激心肌细胞24h,AngⅡ处理组细胞间隙连接数目和大小较对照组增加(P<0.05),0.1μmol/L Ang-(1-7)能阻断AngⅡ增加心肌细胞间隙连接数目和大小。结论Ang-(1-7)通过抑制磷酸化ERK1/2活性增加,从而拮抗AngⅡ上调培养新生鼠心肌细胞Cx43间隙连接。     

NS-398对HepG2细胞增殖的抑制作用及机制探讨

目的探讨氮-2,环己氧-4,硝基苯—甲基磺胺（NS-398）对肝癌细胞株HepG2细胞的生长抑制作用及其机制。方法分别用100、200、300、400μmol/L的NS-398处理HepG2细胞,用MTT法测算肿瘤细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率,用免疫组化和Westernblot检测细胞的血管生长因子（VEGF）。结果NS-398呈剂量依赖性的方式抑制HepG2细胞增殖,并诱导其凋亡,随着NS-398浓度增大,S期细胞明显减少,有G1期细胞累积现象,其24h半数有效剂量（IC50）为300μmol/L。NS-398浓度为200μmol/L以上时HepG2细胞VEGF的表达与对照组相比,P〈0.01。结论NS-398对肝癌细胞增殖有抑制作用,并诱导其凋亡,可能与G1阻滞以及VEGF的表达受抑制有关。     

5-氮杂-2′-脱氧胞苷通过上调法尼酯X受体启动子甲基化水平抑制HepG2细胞载脂蛋白A表达

目的 探索5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）的DNA去甲基化作用对HepG2细胞载脂蛋白A（ApoA）表达的影响,并探讨其作用机制。方法 选取ApoA高表达细胞株HepG2细胞为研究对象。噻唑蓝法测定HepG2经不同浓度（0、10、20、40、80 μmol/L）的5-Aza-CdR处理不同时间（12、24、48、72、96 h）后细胞相对存活率;Western blot检测5-Aza-CdR不同浓度组HepG2细胞ApoA、法尼酯X受体（FXR）的表达水平;逆转录聚合酶链反应检测ApoA、FXR的mRNA水平;亚硫酸氢盐测序PCR检测FXR基因启动子在5-Aza-CR不同浓度组的甲基化水平。结果 与对照组相比,5-Aza-CR 10、20、40 μmol/L组在12、24、48、72 h各组间细胞存活率无统计学差异（P>0.05）,而在20 μmol/L 96 h组、40 μmol/L 96 h组、80 μmol/L 24 h组、80 μmol/L 48 h组、80 μmol/L 72 h组以及80 μmol/L 96 h组HepG2细胞存活率存在统计学差异（P<0.05）,选取0～40 μmol/L为5-Aza-CdR的安全浓度范围,0～72 h为合适作用时间。与对照组相比,5-Aza-CdR呈剂量和时间依赖性上调FXR蛋白、下调ApoA蛋白表达,其中以40 μmol/L组最为明显（P<0.05）;与对照组相比,5-Aza-CdR呈剂量依赖性上调FXR mRNA、下调ApoA mRNA表达,其中以40 μmol/L组最为明显（P<0.05）。随着5-Aza-CdR浓度的递增,FXR基因启动子甲基化水平呈下降趋势,其中对照组FXR基因启动子甲基化率为58.3%,而40 μmol/L组FXR基因启动子甲基化率仅为8.3%。结论 5-Aza-CdR通过DNA去甲基化作用促进FXR表达,从而下调ApoA的表达。     

维生素K_2对大鼠HepG2细胞侵袭和凋亡的影响及机制

目的探讨维生素K_2对大鼠HepG2细胞侵袭和凋亡的影响及机制。方法选取对数生长期的HepG2细胞,培养48h后加入不同浓度(1μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)的维生素K_2,同时设置对照组(仅加培养液),培养48 h后检测HepG2细胞的增殖、侵袭和凋亡以及肝癌衍生生长因子(hepatoma derived growth factor,HDGF)的表达。结果维生素K_2呈现剂量依赖性抑制HepG2细胞增殖、增加细胞凋亡指数并抑制HepG2细胞的穿透能力,与对照组相比差异均有统计学意义(P均0.05)。维生素K_2可呈现剂量依赖性抑制HDGF mRNA与蛋白表达水平,实验组表达水平显著低于对照组(F=20.332,P 0.001)。结论维生素K_2可抑制大鼠HepG2细胞的增殖、侵袭并促进凋亡,其作用机制可能与抑制HDGF基因与蛋白表达有关。     

烟酰胺单核苷酸对Huh7细胞胆固醇代谢调节作用的研究

目的探讨烟酰胺单核苷酸(NMN)对Huh7细胞胆固醇的调节作用及分子机制。方法用不同浓度(0、12.5、25、50、100、200μmol/L)NMN处理Huh7细胞24 h,采用细胞增殖及毒性检测试剂盒(CCK-8)检测NMN对细胞活力的影响;油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况;免疫荧光显微镜观察细胞对DiI-LDL的摄取能力;实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测细胞内肝细胞核因子1α(HNF1α)、前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)、低密度脂蛋白受体(LDLR)的mRNA和蛋白表达情况。结果 CCK-8实验结果显示,不同浓度NMN处理Huh7细胞24 h对细胞活力没有显著影响;油红O染色显示,LDL加入后细胞内红色脂滴数量随着NMN浓度增加而增多;免疫荧光显微镜观察结果显示,细胞核周红色荧光随着NMN浓度增加而增强;Western blot和qRT-PCR结果显示,100、200μmol/L NMN使Huh7细胞PCSK9、HNF1αmRNA和蛋白的表达显著降低,LDLR mRNA和蛋白的表达明显升高(P0.01)。结论 NMN可能通过介导HNF1α/PCSK9/LDLR信号通路参与调节Huh7细胞的胆固醇代谢,增强肝细胞对LDL的摄取能力。     

黄芩苷对体外氧化应激模型中肝型脂肪酸结合蛋白表达的影响及其意义

目的 研究黄芩苷对体外氧化应激模型中肝型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)表达的影响及其意义. 方法 用终浓度为400 μ mol/L的过氧化氢(H2O2) 37℃避光孵育细胞20min,建立体外诱导氧化应激模型.应用甲基噻唑基四唑法(MTT)检测不同浓度黄芩苷作用细胞的存活率,确定24h、48 h黄芩苷的半数中毒浓度(TC50).流式细胞技术检测不同浓度黄芩苷(25、50、100μmol/L)作用后活性氧(ROS)的表达、细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)活性变化,实时PCR和Western blot检测肝细胞内L-FABP基因和蛋白表达.数据分析采用单因素方差分析.结果 根据MTT法得出25、50、100 μ mol/L的黄芩苷作用于细胞24h的存活率为83.60％±3.47％,72.36％±2.18％,70.16％±2.04％,F值为386.24,P＞0.05;作用于细胞48h的存活率为84.93％±3.11％,76.16％±2.45％,72.72％±2.31％,F值为475.92,P＞0.05.直线回归法得出黄芩苷持续作用24h和48h的TC50分别为153.2、170.6μmol/L.在此范围内,用25、50、100μmol/L浓度的黄芩苷分别作用Chang肝细胞24、48 h后,ROS含量24 h分别为37.0±3.30,22.90±3.84,29.60±2.52,F值为70.06,P＜0.05 ; 48h分别为35.77±2.35,21.80±3.10,23.87±1.98,F值为110.92,P＜0.05,而400μ mol/L H2O2组ROS含量24h和48h分别为45.50±3.47,48.80±2.70,以50μmol/L的黄芩苷作用48h效果最为显著.用50μmol/L黄芩苷处理48h后细胞内SOD活性为(51.53±1.91)μ g/mg,GSH为(49.85±1.45) U/mg;与对照组SOD为(26.36±1.23)μ g/mg,GSH为(25.11±1.74) U/mg,F值分别为93.81和92.51,P值均＜0.05).尽管50μmol/L黄芩苷处理48 h后细胞内L-FABP在mRNA水平并无明显变化,但50μmol/L黄芩苷处理48 h后细胞内L-FABP蛋白表达与对照组相比增加约80％.结论 黄芩苷能通过增强L-FABP蛋白表达,增加细胞内SOD和GSH的活性发挥抗氧化作用.     

PCSK9-siRNA在抗ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞凋亡中对Bax、Bcl-2表达的影响

目的 研究PCSK9siRNA在抗ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞凋亡中对Bax、Bcl-2表达的影响.方法 用不同浓度ox-LDL处理THP-1源性巨噬细胞不同时间,免疫印迹法检测Bax、Bcl-2表达变化.应用Lipofectamine2000分别转染30、50 nmol/L和80 nmol/L PCSK9 siRNAs 进THP-1 源性巨噬细胞中,作用24 h后加入ox-LDL 处理48 h,免疫印迹法分析细胞Bax、Bcl-2表达,Hoechst33258染色观察形态评价细胞凋亡.结果 随着ox-LDL浓度的增加,Bax蛋白表达上调,而Bcl-2蛋白表达下调,呈浓度依赖性,80 μg/mL ox-LDL处理组作用最为明显;80 μg/mL ox-LDL处理THP-1源性巨噬细胞不同时间后,Bax蛋白表达上调,而Bcl-2蛋白表达下调,呈时间依赖性,48 h处理组作用最为明显;PCSK9 siRNA能明显下调Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达,且均呈浓度依赖性;Hoechst33258染色显示,PCSK9 siRNA转染组细胞凋亡明显减少.结论 PCSK9 siRNA在抗ox-LDL诱导的THP-1 源性巨噬细胞凋亡中下调促凋亡蛋白Bax表达,上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达.     

齐墩果酸对人早幼粒白血病NB4细胞增殖的影响及其机制

目的 探讨齐墩果酸对NB4细胞增殖的影响及其作用机制.方法 40、60、80和100 μmol/L的齐墩果酸分别处理体外培养的人早幼粒白血病NB4细胞24、48和72 h后,MTT比色法检测NB4细胞活力;实时荧光定量PCR分析凋亡相关基因Bcl-2及Bax mRNA的表达.结果 齐墩果酸在体外具有明显的细胞毒性,可抑制NB4细胞增殖,且呈现时间和剂量依赖性;实时荧光定量PCR实验证明,NB4细胞经齐墩果酸处理后,促凋亡基因Bax表达上调,抗凋亡基因Bcl-2表达下调.结论 齐墩果酸在体外能抑制NB4细胞增殖,并使促凋亡基因Bax表达升高,抗凋亡基因Bcl-2表达降低,上调Bax和下调Bcl-2 mRNA的表达可能是其作用机制之一.     

CoCl2化学模拟肝癌体外缺氧模型的建立及对HIF-1α、VEGF基因的影响

目的观察不同浓度的氯化钴(CoCl_2)对人肝癌细胞生长及及其诱导化学性缺氧的最佳浓度和时间。方法通过不同浓度(0～800μmol/L)CoCl_2处理不同肝癌细胞系(HepG2、Hep3B、SMMC-7721和Bel-7402)24 h,利用CCK-8法检测四种人肝癌细胞株细胞存活率;选取100、200、300、400μmol/L CoCl_2作用不同肝癌细胞系0、12、24、48、72 h,利用CCK-8法检测四种人肝癌细胞株细胞存活率;确定最佳诱导浓度200μmol/L后,分别于0、6、8、12、24 h应用Real-time PCR检测VEGF mRNA的转录;确定好最佳诱导时间,采用Western-blot方法检测评估100、200、300、400μmol/L CoCl_2作用不同肝癌细胞系24 h后表达HIF-1α蛋白情况。结果 CoCl_2浓度在200μmol/L以内对人肝癌细胞株的生长无明显的抑制作用,当浓度大于200μmol/L、诱导时间大于24 h后明显抑制细胞生长,且抑制作用随着浓度的增加而增强(P0.05)。200μmol/L CoCl_2刺激四种肝癌细胞0、6、8、12、24 h时VEGF mRNA转录递增。200μmol/L CoCl_2刺激细胞24 h时,能诱导并稳定维持四种肝癌细胞HIF-1α蛋白表达。结论 CoCl_2诱导肝癌细胞化学性缺氧的最佳浓度为200μmol/L,此时最佳时间为24 h。     

海南美登木对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨海南美登木提取物在体外对人肝癌HepG2细胞株增殖和凋亡的影响。方法海南美登木提取物0、10、40μg/ml分别作用HepG2细胞24 h后,以Hoechst 33528染色法观察细胞核的形态学变化;分别用海南美登木提取物0、10、20、40、60、80μg/ml在24、48、72 h对人肝癌HepG2细胞进行处理,细胞生长的抑制率采用MTT法检测,对各时间点的IC50进行计算;流式细胞仪检测海南美登木提取物0、20、60μg/ml作用人肝癌HepG2细胞24 h后对细胞周期的影响,对细胞凋亡的作用采用Annexin-V-FITC/PI双染法检测。结果海南美登木提取物能抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,且呈时间和浓度依赖性,抑制率较阴性对照组有显著差异;HepG2细胞在海南美登木提取物干预后染色观察,呈典型的核质浓缩、核碎裂、凋亡小体形成的凋亡变化,且依赖于浓度变化;细胞数量在G2/M期增加,而G0/G1期明显减少,与0μmol/L组相比,呈浓度依赖性的凋亡峰有显著差异。双染法检测细胞凋亡率发现与0μmol/L组相比呈浓度依赖性明显增加。结论海南美登木提取物可能通过使肝癌细胞滞留在G0/M期及诱导细胞凋亡等机制,抑制肝癌细胞的增殖。     

雌激素对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探究雌激素对人肝癌细胞株增殖和凋亡的影响。方法采用普通聚合酶链反应(PCR)技术、Western印迹实验检测肝癌细胞株中雌激素受体(ER)α、ERβ的mRNA和蛋白质的表达情况;细胞增殖实验检测雌激素对肝癌细胞增殖的影响;流式细胞术检测雌激素对肝癌细胞凋亡率的影响;Tunel染色法检测雌激素对肝癌细胞晚期凋亡率的影响;雌激素处理肝癌细胞株后,基因芯片技术检测表达增加的凋亡基因。结果 ERα和ERβ在肝癌细胞株SMMC7721、HepG2、Bel-7404、huh7、MHCC-97L、MHCC-97H、PLC、LM3、SK-HEP-1及Bel-7402中均有表达;不同浓度的雌激素处理肝癌细胞不同时间后,可显著抑制肝癌细胞增殖,且抑制效果存在时间和剂量依赖性;与0.00μmol/L组相比,不同浓度的雌激素(1.25、2.50、5.00、10.00、20.00、40.00、80.00和160.00μmol/L)处理HepG2、SMMC-7721细胞24 h、48 h后,HepG2和SMMC-7721细胞的细胞凋亡率增加,存在剂量和时间的依赖性;Tunel结果显示,与0.00μmol/L组相比,10.00μmol/L雌激素处理HepG2、SMMC-7721细胞48 h后,细胞晚期凋亡率均显著增加;20.00μmol/L雌激素处理SMMC-7721细胞48 h后,凋亡基因BAK1、GADD45A、HRK、LTA、TNFRSF-10A均表达增加。结论雌激素对人肝癌细胞具有抑制生长、诱导凋亡的作用。     

姜黄素对缺氧HepG2细胞中HIF-1α表达的影响及可能机制

目的:研究姜黄素对缺氧条件下人肝癌细胞HepG2中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响,并探讨其可能机制.方法:0、1、2、5、10 μmol/L的姜黄素处理缺氧条件下的HepG2细胞6 h后,用Westernblot免疫印迹法和RT-PCR检测HIF-1α的蛋白及mRNA的表达:0 μmol/L,10 μmol/L姜黄素,10 μmol/L姜黄素 10 μmol/L MG-132处理缺氧条件下的HepG2细胞6 h后,用Western blot检测HIF-1α和VEGF的蛋白水平.结果:HepG2细胞经1、2、5、10 μmol/L的姜黄素处理后,HIF-1α蛋白水平与对照组(0μmol/L姜黄素处理)比较明显降低(F=79.81,P<0.01),且降低程度随着姜黄素处理浓度的增加而变大.但各剂量组HIF-1α的mRNA水平与对照组比较无显著性差异;蛋白酶体抑制剂MG-132可以逆转姜黄素所致的HepG2细胞HIF-1α和VEGF蛋白表达抑制(F=68.47,83.79,均P<0.01).结论:姜黄素通过蛋白酶体途径,在转录后水平抑制缺氧HepG2细胞HIF-1α表达.     

丹参、黄芪、女贞子有效成分对HCT-8/VCR耐药性的影响及机制

[目的]探讨丹参成分(丹参酚酸B、丹参素钠)、黄芪成分(黄芪甲苷)、女贞子成分(熊果酸、齐墩果酸),对人结肠癌耐长春新碱细胞株(HCT-8/VCR)耐药性的影响及机制。[方法](1)CCK-8法检测5种成分对HCT-8/VCR的耐药性的逆转倍数。(2)Western blot检测5种成分干预后HCT-8/VCR中P-gp蛋白的表达。[结果](1)丹参酚酸B和丹参素钠对HCT-8/VCR耐药性的逆转倍数分别为15.123和4.855,差异有统计学意义(P0.05),黄芪甲苷、齐墩果酸、熊果酸对其耐药性的影响无统计学意义。(2)经5种成分干预72h后,丹参酚酸B、齐墩果酸及丹参素钠组P-gp蛋白相对表达量分别为0.755±0.035、1.033±0.078、0.943±0.101,与空白对照组的1.224±0.027比较差异有统计学意义(P0.0001);而黄芪甲苷、熊果酸与空白对照组比较差异无统计学意义。[结论]丹参酚酸B和丹参素钠能提高耐药细胞对化疗药物的敏感性,其机制可能与降低耐药细胞中P-gp的表达有关。     

双膦酸盐类药物对胃癌细胞生长增殖的作用机制

目的检测双膦酸盐类药物唑来膦酸对胃癌细胞生长增殖的研究机制。方法培养人胃癌细胞株MKN-28、SGC-7901和BGC-823,将细胞分为对照组和药物处理组,MTT法检测10、20、40、80μmol/L唑来膦酸对细胞株的影响。人胃癌细胞株加入10~80μmol/L的唑来膦酸,对照组不加药物,孵育1、3、6、12、24 h后计算不同浓度和时间对细胞的影响;人胃癌细胞株SGC-7901加入40μmol/L的唑来膦酸培养24 h后,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western印迹检测半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-9、Bcl-2蛋白的表达。结果 10、20、40、80μmol/L的唑来膦酸作用于胃癌细胞株(BGC-823、SGC-7901、MKN-28),唑来膦酸的半抑制浓度(IC50)为40μmol/L,用10~80μmol/L的唑来膦酸作用于BGC-823、SGC-7901、MKN-28胃癌细胞株1、3、6、12、24 h后,可见唑来膦酸抑制人胃癌细胞的生长且有时间和浓度的依赖性,唑来膦酸对胃癌正常黏膜细胞GES-1无抑制作用;人胃癌细胞SGC-7901经40μmol/L的唑来膦酸作用24 h后,流式细胞仪检测发现唑来膦酸处理组细胞凋亡情况显著高于对照组;经40μmol/L唑来膦酸作用后的人胃癌细胞中Caspase-3、Caspase-9蛋白表达量明显升高,而Bcl-2蛋白表达量与对照组相比明显减少。结论唑来膦酸能抑制胃癌细胞的生长且有时间和剂量依赖性,唑来膦酸可以促进细胞凋亡。