固定化酶催化合成半乳糖寡糖

以壳聚糖固定化米曲霉β－半乳糖苷酶,连续催化合成半乳糖寡糖（ＧＯＳ）,在填充床固定化酶反应器中,研究底物浓度、ｐＨ,反应温度和停留时间对ＧＯＳ连续合成的影响,最佳反应条件为：底物浓度４００ｇ／Ｌ,反应温度５０℃,ｐＨ５．８,停留时间３５ｍｉｎ,产物的最高得率为６２％。     

固定化牛肾氨基酰化酶拆分法制备D—丙氨酸

研究了以中空纤维固定化牛肾氨基酰化酶拆分ＤＬ－Ａｌａ制备Ｄ－Ａｌａ及反应的各种优化条件和固定化酶的动力学性质。实验结果表明,固定化酶反应的最适ｐＨ为７．０,最反应温度为３０￣３５℃;固定化酶拆分反应的酶量选择为５ｍｇ／ｍｌ,时空体积ＳＶ＝１．０,在ｐＨ７．０,３０℃条件下的全拆分底物浓度为０．１ｍｌ／Ｌ。固定化酶常温１周内拆分率稳定,但对热不稳定,４０℃条件下放置３０ｍｉｎ活力下降３０％。     

血清及高密度蛋白对氧磷酶活性的分光光度测定法

目的 在现有的实验条件下,获得稳定可靠的血清及高密度脂蛋白（high density lipoprotein,HDL) 中对氧磷酶J（paraoxonase,PON）活性的测定方法。方法 以乙酸苯酯为底物,在对氧磷酶的作用下水解,生成产物苯酚,测定5分钟内反应体系中在270nm处苯酚特征性的紫外吸收,换算为酶促反应速度。结果 通过观测底物浓度、pH、激活剂Ca^2 、抑制剂EDTA等对酶促反应的影响,得出最适的测定条件;底物浓度为5mmol/L,最适pH为8．0,必需激活剂Ca^2 浓度为2mmol/L。结论 在该反应条件下,测定不同浓度HDL或血清中该酶的活性,重复性和稳定性均符合要求。     

血清及高密度脂蛋白中对氧磷酶活性的分光光度测定法

目的　在现有的实验条件下 ,获得稳定可靠的血清及高密度脂蛋白 (high density lipoprotein,HDL)中对氧磷酶 (paraoxonase,PON)活性的测定方法。方法　以乙酸苯酯为底物 ,在对氧磷酶的作用下水解 ,生成产物苯酚 ,测定 5分钟内反应体系中在 2 70 nm处苯酚特征性的紫外吸收 ,换算为酶促反应速度。结果　通过观测底物浓度、p H、激活剂 Ca2 + 、抑制剂 EDTA等对酶促反应的影响 ,得出最适的测定条件 :底物浓度为 5 m mol/ L ,最适 p H为 8.0 ,必需激活剂 Ca2 +浓度为 2 mmol/ L。结论　在该反应条件下 ,测定不同浓度 HDL 或血清中该酶的活性 ,重复性和稳定性均符合要求     

乙酰短杆菌酶法合成5—甲基尿苷

用乙酰短杆菌完整细胞为酶源,以鸟苷和胸腺嘧啶为底物,酶法合成５－甲基尿苷。最佳反应条件为：底物浓度１００－２００ｍｍｏｌ／Ｌ,ｐＨ８．０,磷酸盐缓冲液尝试１０－５０ｍｍｏｌ／Ｌ,６０℃,摇床转速１２０ｒ／ｍｉｎ,反应１ｈ即达到平衡,５－甲基尿苷转化率达６０％以上。     

血浆脂蛋白脂酶及肝酯酶的比色测定法

为探讨高脂血症、动脉粥样硬化的发病机理和脂蛋白代谢，作者建立了同时测定肝素化后血浆脂蛋白脂酶（ＬＰＬ）和肝脂酶（ＨＬ）活性的比色测定法。该法以脂肪乳剂为底物，在３７℃、ｐＨ８．３的条件下与一定量肝素后血浆保温３０分钟，血浆中的ＬＰＬ及ＨＬ可将底物中的甘油三酯（ＴＧ）水解为甘油和游离脂肪酸（ＦＦＡ）。用铜试剂法测定生成的ＦＦＡ的量，即可分别计算出ＬＰＬ和ＨＬ的活性。同时，对ＬＰＬ和ＨＬ的动力学进行了     

影响酶促反应因素的探讨

唾液中的淀粉酶水解 ,产物遇碘可生成不同的颜色。所以 ,我们通过观察温度、ｐＨ值、激活剂、抑制剂对唾液淀粉酶的影响来了解酶的作用条件。1　温度对酶活力的影响实验操作见表 1,将试管 1放入 37℃温水浴中 5ｍｉｎ ;将试管 2放入沸水中 5ｍｉｎ ;将试管 3放入冰水混合物中冷却 5ｍｉｎ。表 1　唾液淀粉酶活性与温度间关系　　　　　　编号试剂　　　　　　试管 1(ｍｌ)试管 2(ｍｌ)试管 3(ｍｌ)缓冲液ｐＨ =6 82 2 20 1 %的淀粉酶 (滴 ) 1 0 1 0 1 0　　 5ｍｉｎ后见试管 1变为无色 ;试管 2变为紫红色 ;试管 3变为蓝色。此现象说明唾液…     

聚乙二醇改性壳聚糖固定化L-天门冬酰胺酶反应性质研究

研究了聚乙二醇改性壳聚糖(PEG-CS)固定化L-天门冬酰胺酶催化缓冲液中天冬酰胺的反应过程,考察了底物浓度、给酶量、温度、搅拌速率等条件对固定化酶在缓冲液中间歇催化反应过程的影响;以及底物浓度、流量、温度、床层高度等因素对固定化酶在缓冲液中连续催化反应过程的影响。实验结果表明:在适当的反应条件下,聚乙二醇改性壳聚糖固定化L-天门冬酰胺酶可以很好地水解缓冲液中的天冬酰胺。     

乙二胺羟丙基壳聚糖固定化天门冬酰胺酶的反应性质

研究了乙二胺羟丙基壳聚糖固定化L-天门冬酰胺酰反应动力学性能，分别考察了固定化酶耐胃蛋白酶性能，保存条件对固定化酶活力的影响，固定化酶的米氏常数Km以及固定化酶在缓冲液中间歇催化底物和连续催化底物的反应动力学性能，结果表明，在适当的间歇和连续反应条件下，固定化酶均具有良好的水解天门冬酰胺性能和效率。     

速率法测定酶活性应注意的问题

在测定酶的浓度时 ,一般均使用速率法来测定。但是底物浓度对酶促反应速度有很大的影响 ,只有当底物浓度大大超过酶饱和度时 ,酶促反应速度才能保持恒速 ,即在零级反应期的反应速率才和酶浓度成正比。一级反应期的反应速率就不能准确反映酶的含量。　　绝大部分基层医院所使用的全自动或半自动生化分析仪还不具备底物耗尽指示系统。当酶的浓度较高或很高的时候 ,常常会产生由于底物消耗过多致使底物浓度不够而提早进入一级反应期 ,得到错误的结果 ,严重的会使很高单位的标本出现正常结果。但当产生这种情况时有一个特点即读数结束时的吸光度…     

一种新酶放大系统及其应用

建立了一种能广泛用于酶标免疫吸附分析的新酶放大系统。该系统采用Ｌ－乳酸脱氢酶、乳酸氧化酶、辣根过氧化物酶、ＮＡＤＨ和３，３＇，５，５＇－四甲基联苯胺组成一个循环体系，用以放大碱性磷酸酶产生的信号。与其它酶放大系统相比，具有灵敏度高和成本低的特点。     

大肠杆菌β-半乳糖苷酶ED和EA的克隆、表达及活性测定

目的：制备大肠杆菌β-半乳糖苷酶（β- galactosidae）酶供体(ED)和酶受体(EA)片段,获得具有全酶活性的β-半乳糖苷酶。方法：以pSV-β- galactosidase control vector为模板设计引物,用PCR方法获得ED和EA片段DNA序列,插入克隆载体pGEM-T-easy中,获得重组质粒,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,将酶切目的片段分别插入原核表达载体pET20b+,并转化大肠杆菌BL21,通过IPTG诱导表达出ED、EA融合蛋白,以亲和层析纯化蛋白,通过ED与EA蛋白形成β-半乳糖苷酶、全酶活性试验来判断ED、EA的功能。结果：获得与pSV-β- galactosidase control vector一致的ED、EA碱基序列,构建了重组表达质粒pET20b-ED及pET20b-EA,并分别转化入大肠杆菌DE3,以IPTG诱导行SDS-PAGE电泳,在相对分子质量为14 000及116 000处分别可见ED蛋白和EA蛋白条带,应用镍凝胶亲和层析纯化获得目的蛋白。结论：成功地制备了ED、EA蛋白,形成全酶活性的β-半乳糖苷酶。     

苯丙氨酸氨解酶的包被及其对家兔肠道苯丙氨酸吸收的影响

目的考察苯丙氨酸氨解酶(L-phenylalanine ammonia-lyase,PAL)的包被条件,并考察其对家兔肠道苯丙氨酸吸收的影响。方法绿豆芽(Phaseolus radiatusL.)来源的PAL通过光照、硫酸铵盐析和不同的柱层析等制备过程,使PAL纯化到电泳纯。酶活性的测定用紫外分光光度法,苯丙氨酸含量采用荧光比色法。结果PAL被纯化了74.6倍,并经聚丙烯酰胺凝胶(PAG)固定化(T∶C=8∶30)。该固定化酶比活0.153 U.g-1,固定化百分数为64%。将PAG固定化酶在人工胃液和人工胰液中保温不同时间后,发现该固定化PAL在1 h后全部失活。将PAG固定化的PAL过120目尼纶筛网制成微粒,再用硝酸纤维膜包被,在人工胃液中不同时间保温,发现酶活性可维持2.5 h,包被的酶颗粒在光镜下呈球形,直径2~11.4μm,自然干燥保存1个月不破坏。用硝酸纤维膜包被的PAL与L-苯丙氨酸同时注入家兔小肠腔内,与正常对照比较,PAL对苯丙氨酸有明显消除作用,吸收量减少,血苯丙氨酸浓度上升缓慢。结论该包被条件温和,PAL损失减少,预期可作为口服的酶制剂应用于临床。     

蚯蚓纤溶酶的分离纯化及其动力学性质研究

目的：建立一种高效的蚯吲纤溶酶（ＥＦＥ）的分离纯化技术,并研究其特性。方法：蚯蚓经组织匀浆、缓冲液抽提与选择性热变性,再经抑制剂１,６－己二胺（ＨＤ）偶联的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ亲和层析,ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换层析。结果及结论：分离纯化得到具有强烈纤溶活性的酶组分（ＥＦＥ－Ｆ１、２,ＥＦＥ－Ｆ３）。其中ＥＦＥ－Ｆ３对合成底物Ｓ－２２８８和Ｃｈｒｏｍｏｚｙｍ Ｐ的Ｋｍ分别是０．０１ｍｍｏｌ／Ｌ和０．０２ｍｍｏｌ／Ｌ,ＨＤ的Ｋｉ为１ｍｍｏｌ／Ｌ;该酶热稳定性强,能抗４ｍｏｌ／Ｌ脲。     

基因多态性对吉西他滨疗效影响的研究进展

随着药物基因组学、药物遗传学的发展,基因指导下个体化治疗成为提高化疗疗效的有效途径之一.确定药物的相关预测性分子标志物有助于指导临床治疗,提高疗效.吉西他滨(gemcitabine)作为多种肿瘤的有效化疗药物,其疗效与不良反应的差异与相关基因多态性的关系日益受到人们的关注.本文就吉西他滨各相关酶的基因多态性情况及其对疗...     

放射酶分析法检测红细胞胰岛素降解酶活性

本文采用放射酶分析法检测红细胞胰岛素降解酶活性（ＥＩＤＥＡ）。该方法应用方便、灵敏度极高、结果准确。并对酶反应最佳条件进行了实验探讨，底物Ｋｍ为０．０９ｍＵ／ｍｌ，最适ｐＨ值７．４０，延滞期２５分钟，２５～４０分钟测得ＢＩＤＥＡ基本一致。批内ＣＶ为３．０的，批间ＣＶ为３．３％。氯化物、ＥＤＴＡ可抑制该酶活性。５０例健康人红细胞胰岛素酶活性为８０，１８±１３．８０Ｕ／ｍｇＨｂ，无性别、年龄差异。     

蛇毒纤溶酶的体内过程及药物代谢动力学研究

以１２５Ｉ－蛇毒纤溶酶作示踪剂对蛇毒纤溶酶的体内过程及药代动力学进行了研究。实验结果表明，静脉注射后，大鼠体内血药浓度时程曲线为二房室模型，Ｔ１／２β分别为６．１ｈ（低剂量），６．３ｈ（中剂量）和５．６ｈ（高剂量）。小鼠尾静脉注射后３ｈ，各脏器中放射性活性达到峰值，其值（％）大小顺序如下：肾（１．３４）＞肺（（１．０９）＞肝（０．９０）＝脾（０．９０）＞心（０．５１）＞肌肉（０．４５）＞脑（０．２９）。１２５Ｉ－蛇毒纤溶酶主要从尿排泄，静脉注射后，７２ｈ内尿排泄率达８５．６％，而粪排泄仅为５．４％，胆汁排泄率为１２％。     

标本溶血对心肌酶测定值的影响

目的探讨溶血标本对心肌酶测定值的影响。方法将50例健康母亲脐带血标本人为造成不同程度溶血,测定溶血前后的心肌酶活性。结果标本溶血后心肌酶活性明显高于溶血前（P〈0.05或P〈0.01）,且随着溶血程度加重心肌酶活性逐渐升高。结论溶血标本对心肌酶活性的测定有严重影响,溶血程度越重其影响越大。     

急性心肌梗塞后全血粘度变化及与心肌酶学相关性的探讨

AMI时心肌酶学与全血粘度均明显升高。本文旨在探讨全血粘度在AMI时的变化规律,及与心肌酶学的关系。结果心肌酶学有典型的曲线变化规律,全血粘度亦呈曲线样变化,两量之间无直线回归关系。它们从不同方面反映出心梗时血液的生化生理变化过程。在监测AMI转归上意义同等重要。     

心力衰竭患者心肌组织ACE2和ACE基因表达

目的 观察心力衰竭(简称心衰)患者不同心功能状态下血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme, ACE2)和ACE基因表达变化,探讨其与心衰患者心功能的关系.方法 通过手术取材,采用RT-PCR技术检测30例瓣膜病所致不同程度心衰患者和5例正常人心肌组织中ACE2和ACE mRNA表达.结果 瓣膜病所致心衰患者心肌组织ACE2和ACE mRNA表达均较正常组明显升高(P＜0.01),其中中重度心衰患者升高尤为显著(P＜0.01).轻度心衰患者心肌组织ACE2/ACE mRNA比值较正常组升高,中重度心衰时ACE2/ACE mRNA比值下降.结论 心衰患者心肌组织ACE2和ACE基因表达明显增强.轻度心衰患者ACE2/ACE mRNA比值升高可能是心脏的代偿机制,促进AngⅡ降解,增加Ang1-7合成,保护残存的心功能.中重度心衰患者ACE2/ACE mRNA比值降低,引起AngⅡ过度激活,加速心衰恶化.