替普瑞酮诱导AD模型大鼠海马HSP70表达及其神经保护作用的研究

目的 研究替普瑞酮（Geranylgeranylacetone，GGA）诱导阿尔茨海默病（Alzheimer disease，AD）模型大鼠海马热休克蛋白70（heat shock protein70，HSP70）表达及其对AD大鼠的神经保护作用。方法 90只SD大鼠随机分为替普瑞酮组、模型组与生理盐水组，双侧海马注射Aβ1-42。建立阿尔茨海默病大鼠模型，替普瑞酮组给予替普瑞酮800mg·kg^-1·d^-1灌胃，余两组给予等量生理盐水灌胃；术后1d、7d、14d、21d并于Y迷宫行为学测试后处死大鼠；采用western-blot方法检测各组大鼠海马HSP70表达的变化，HE染色观察海马神经元形态学改变，TUNEL法检测海马神经元凋亡。结果术后14d、21d模型组大鼠学习记忆能力较生理盐水组明显减退（P〈0．05），替普瑞酮组较模型组明显改善（P〈0．05）；术后7d、14d、21d模型组大鼠海马HSP70表达较生理盐水组逐渐减少（P〈0．05），替普瑞酮组HSP70表达明显增加（P〈0．05）；术后21d模型组大鼠海马CA1区神经元结构紊乱，细胞减少，凋亡细胞较生理盐水组明显增加（P〈0．01），替普瑞酮组凋亡细胞较模型组显著减少（P〈0．05），细胞形态学改变减轻。结论替普瑞酮能够诱导AD模型大鼠海马HSP70表达，减少大鼠海马神经元凋亡而产生神经保护作用，改善大鼠的学习记忆能力。     

丁苯酞对血管性痴呆大鼠认知功能、海马神经元结构及nNOS的影响

目的研究丁苯酞对血管性痴呆（VD）大鼠认知功能、海马神经元结构、及神经元型一氧化氮合酶（nNOS）的影响。方法采用结扎双侧颈总动脉方法制备慢性前脑缺血动物模型,100只老龄大鼠随机分5组,应用水迷宫、透射电镜及免疫组化方法对各组大鼠学习记忆、神经元结构、nNOS表达进行观察。结果与假手术组比较,大鼠学习记忆能力在造模后差异有显著性意义（P〈0.05）;大鼠海马区神经元在造模后变性水肿明显,与模型组比较,丁苯酞不同剂量治疗1月后,大鼠学习记忆能力明显改善（P〈0.05）,神经元变性水肿减轻,nNOS阳性神经元表达减少（P〈0.05）。结论丁苯酞能显著改善VD大鼠学习记忆能力;减轻神经元变性水肿;抑制nNOS阳性神经元表达。     

慢性脑低灌注对2型糖尿病模型大鼠空间学习记忆能力的影响及胆碱能神经元损伤的机制探讨

目的探讨2型糖尿病（DM）是否加重慢性脑低灌注（CCH）大鼠胆碱能神经元及空间学习记忆能力损伤。方法SD大鼠24只,随机分为4组（均n=6）：①对照组（正常饮食＋假手术）;②DM组[高脂饮食＋链脲佐菌素（STZ）];③CCH组[正常饮食＋双侧颈总动脉永久性结扎（2-VO）];④DM-CCH组（高脂饮食＋STZ＋2-VO）。采用Morris水迷宫测试各组大鼠学习记忆能力;免疫组化学法检测海马区乙酰胆碱转移酶（CHAT）阳性细胞表达和免疫印迹法检测海马ChAT相对表达量。结果DM＋CCH组逃避潜伏期与对照组比较明显延长,第2-4天（P〈0．001）、第5天（P〈0．01）;目标象限时『目】百分比明显低干对照组（P〈0．01）、DM组（P〈0．05）和CCH组（尸〈O．05）。DM＋CCH组海马区ChAT阳性细胞表达明显减少,ChAT相对表达量较对照组显著减少（P〈0．01）、DM组（P〈0．05）和CCH组（P〈0．05）显著减少。结论DM可加重CCH大鼠的空间学习记忆能力障碍,可能与海马区胆碱能神经元损伤有关。     

慢性锂处理对大鼠海马NOS表达的影响

目的　 探讨不同浓度氯化锂对大鼠海马一氧化氮合酶 (NOS)活性和神经元型一氧化氮合酶 (nNOS)蛋白表达的影响 ,阐明锂对学习记忆的影响与NOS表达的关系。方法　将大鼠随机分为对照 (Cont)组和四个氯化锂(LiCl) (3,30 ,30 0 ,30 0 0mg/kg)组 ,分别给予普通饲料和含LiCl(3,30 ,30 0 ,30 0 0mg/kg)的饲料喂养 6 0d ,通过Y -迷宫实验 ,比较各组大鼠学习记忆能力的差别 ;采用黄递酶 (NADPH d)组织化学染色和ABC免疫组织化学染色方法观察各组大鼠海马CA1区、CA3区和齿状回 (DG)一氧化氮合酶 (NOS)与nNOS阳性细胞数的差别。 结果　3,30mg/kgLiCl组大鼠Y 迷宫实验成绩明显好于正常对照组 (P <0 .0 1) ;30 0 ,30 0 0mg/kgLiCl组大鼠则明显差于对照组 (P <0 .0 5 )。NADPH d和ABC免疫组织化学染色结果示 :LiCl(3,30mg/kg)组大鼠海马NOS与nNOS阳性细胞数明显多于Cont组 (P <0 .0 5 ) ;LiCl(30 0 ,30 0 0mg/kg)组大鼠NOS与nNOS阳性细胞数少于Cont组 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。 结论　 较低浓度的氯化锂能提高大鼠的学习记忆能力 ,增强NOS活性和nNOS蛋白表达 ,而较高浓度的锂则可能减低大鼠学习记忆能力 ,降低NOS活性和nNOS蛋白表达。     

γ-氨基丁酸能中间神经元的数量变化与颞叶癫癎关系的实验研究

目的 探讨含微白蛋白（PV）、钙视网膜蛋白（CR）、钙结合蛋白-D28K（CB）的梁静慧-氨基丁酸（GABA）能中间神经元在颞叶癫痫发生、发展中的作用。方法 采用氯化锂-匹罗卡品颞叶癫痢大鼠模型,应用免疫组化法分别于制模后6h、12h、24h、7d、15d及60d动态观察海马神经元PV、CR、CB的表达。结果 与对照组相比,实验组大鼠海马PV阳性神经元的数量在CA,区无明显变化,在CA,区呈进行性下降（P〈0．05～0．01）,7d时达最低值;在齿状回门区,6h即出现明显的下降（P〈0．05）,15d时达最低值（P〈0．01）,30d后开始上升,到60d时与对照组相比差异无显著性。实验组大鼠海马各区、各时点CR阳性神经元的数量较对照组均明显下降（P〈0．05～0．01）;在CA3区和CA1区24h组及在齿状回门区15d组数量达最低。CB阳性神经元的数量在CA3区与对照组无明显变化（P〉0．05）;在CA1区,6h后开始减少（P〈0．05）,7d后达最低值（P〈0．01）,然后稍有回升,但仍明显低于对照组（P〈0．05）;齿状回CB阳性神经元的数量7d时开始较对照组明显增加（P〈0．05）,并逐渐升高,60d时达高峰（P〈0．01）。结论 氯化锂-匹罗卡品颞叶癫痢模型中,海马GABA能神经元在CA1区和CA3区的变化可能诱发了颞叶癫痫的发作;在齿状回的改变可能在颞叶癫痫自发性复发性发作的发生和发展中起重要作用。     

海马注射β-淀粉样蛋白建立阿尔茨海默病大鼠模型的实验研究

目的：海马注射β-淀粉样蛋白（Aβ）建立阿尔茨海默病（AD）大鼠模型，并进行初步评价。方法：应用凝聚态Aβ1-40进行大鼠右侧海马齿状回（DG）背侧细胞带微量注射，2周后从学州记忆、海马组织病理和异常磷酸化tau蛋白表达的变化3个方面评价大鼠模型。结果：Aβ1-40注射后大鼠Morris水迷宫学习记忆能力明显受损（P〈0．01）；注射区内DG背侧细胞带神经元丢失（P〈0．01）；注射侧海乌内Aβ沉积；海马神经元内异常磷酸化tau蛋白的表达显著增加（P〈0．01）。结论：凝聚态Aβ1-40海马注射具有明确的在体神经毒性作用，可导致大鼠认知功能下降以及海马内Aβ沉积、神经元丢失和神经元内异常磷酸化tau蛋白的表达，可成功建立AD大鼠模型。     

小鼠衰老性记忆障碍的脑内突触形态学变化

本文定且研究了小鼠的海马CA3区和大脑皮层感觉运动区GrayⅠ型突触界面结构。衰老小鼠按一次性被动回避反应检测结果分成记忆宪好组和记忆衰退组，两组的统计比较结果表明：记忆衰退组突触后致密物质厚度极显著变小（在海马，P＜0．01；在皮层，P＜0．001）；海马CA3区突触活性带长度极显著变短（P＜0．01）；而上述两脑区突触间隙宽度则极显著增大（P＜0．01）；海马CA3区的正向弯曲型突触数显著减少，平坦型突触数显著增多（P＜0．05）．     

阿尔茨海默病大鼠模型海马MAPK的表达

目的探讨丝裂酶原激活蛋白激酶（mitogen activated protein kinase，MAPK）在阿尔茨海默病（Alzheimer’s diease，AD）发病中的变化及其可能机制。方法将β-淀粉样肽（beta—amyloid peptide，Aβ）1-40 1μl（10μg/μl）在立体定位仪下注人大鼠海马建立大鼠AD模型，2周后测水迷宫潜伏期、长时程增强（long term potentiation，LTP）、免疫组化SABC法检测MAPK的蛋白表达，并应用显微图像分析系统对二者的表达进行分析。结果AD模型组AB注射2周后，水迷宫潜伏期与模型组术前及对照组相比显著延长（P〈0．05）；模型组刺激前后fEPSP斜率变化及高频刺激增加的幅值与对照组相比显著下降（P〈0．01）；模型组海马CA，区、CA，区MAPK蛋白的表达显著降低（P〈0．05或P〈0．01）。结论AB可能通过抑制MAPK信号通路，导致大鼠海马LTP降低和学习记忆功能减退，参与AD学习记忆障碍和痴呆形成。     

血管性痴呆小鼠海马细胞外信号调节激酶免疫组化表达及其意义

目的探讨血管性痴呆小鼠海马CA1区锥体细胞细胞外信号调节激酶1（extracellular signal—regulated kinase 1，ERKI）的免疫组化表达及其意义。方法采用双侧颈总动脉线结反复缺血-再灌注法制备血管性痴呆（VaD）小鼠模型，共设健康对照组、假手术组及VaD模型组，利用跳台试验和水迷宫试验观测其行为学改变，应用免疫组化技术观测其海马CA1区锥体细胞ERK1的表达变化，对小鼠学习成绩和记忆成绩与ERK1免疫反应阳性锥体细胞免疫组化评分进行相关性分析。结果VaD模型组小鼠学习、记忆成绩低于健康对照组和假手术组（P〈0．05）。VaD模型组小鼠ERK1免疫反应阳性锥体细胞免疫组化评分（13．38&#177;3．32）较健康对照组（21．21&#177;9．15）和假手术组（21．00&#177;7．21）明显减少（P〈0．01），而且各组小鼠海马ERK1免疫反应阳性锥体细胞免疫组化评分与小鼠学习、记忆的各项参数存在相关关系。结论VaD小鼠海马CA1区锥体细胞ERK1表达减少可能是VaD小鼠学习、记忆成绩下降的分子机制之一。     

L—NA对大鼠学习记忆的影响及NO、SS相关性研究

目的 探讨一氧化氮（NO）和生长抑素（SS）在学习记忆过程中的作用及相互作用。方法 大鼠海马微量注射一氧化氮合酶（NOS）抑制剂N-ω硝基－L精氨酸（N-ω－Nitro-L-Arginine,L-NA) 后采用Y型电迷宫观察大鼠学习记忆能力的改变,以硝酸还原酶法测定海马NO含量,以放射免疫法测定海马SS含量,并进行学习记忆能力、NO含量和SS含量相关性分析。结果 海马微量注射L－NA组大鼠与生理盐水对照组和正常对照组比较,海马中NO、SS含量明显下降（P＜0．01）。Y型电迷宫测定次数明显增加（P＜0．01）,L－NA组大鼠海马NO水平和SS水平呈显著正相关,NO、SS水平均与Y型电迷宫测试次数呈显著负相关。结论 海马中NO、SS水平的正常是机体实现正常学习和记忆过程的重要因素;NO可能通过调节SS的合成和释放,共同促进学习和记忆过程。     

去松果体对大鼠学习能力及大脑皮质NOS表达的影响

目的探讨去松果体后其功能减退致褪黑素（ＭＴ）分泌减少对大鼠学习能力及大脑皮质一氧化氮合酶（ＮＯＳ）表达的影响。方法将大鼠进行Ｙ型迷宫测试,淘汰学习障碍的大鼠,将学习正常的大鼠随机分二组,实验组手术摘除松果体,对照组给予假手术,饲养４０天后再行Ｙ型迷宫测试,ＳＡＢＣ法检测神经元型一氧化氮合酶（ｎＮＯＳ）表达。结果实验组大鼠学习能力明显低于对照组大鼠（Ｐ〈０．０１）,而大脑皮质、内侧隔核－斜角带核（Ｓ     

神经元型一氧化氮合酶在学习记忆过程中的变化和作用

目的　探讨神经元型一氧化氮合酶 (neuronalnitricoxidesynthase,nNOS)及一氧化氮 (nitricoxide ,NO)在学习记忆机制中的相关作用。方法　采用免疫组化方法观察Y迷宫空间辨别学习训练后大鼠不同脑区nNOS表达变化 ,并探讨特异性nNOS抑制剂 7 nitroindozal(7 NI)、钙拮抗剂尼莫通 (nimotop)腹腔注射对大鼠学习获得和记忆再现能力的影响。结果　学习训练后海马各亚区nNOS样神经元数量及染色强度明显增加 ,而皮层和纹状体区则无显著变化 ;7 NI以剂量依赖方式损伤大鼠的学习获得能力 ,但不影响记忆再现 ,尼莫通则对这两种能力均有破坏。结论　提示学习记忆过程可能伴有nNOS合成及活性增加 ,nNOS/NO在学习获得阶段具有重要作用。     

大鼠轻型颅脑损伤后星形胶质细胞与神经元的病理改变

目的 探讨轻型颅脑损伤（TBI）后神经元及星形胶质细胞改变的病理生理过程。方法 将24只成年SD大鼠随机分为轻型TBI组（n=18）和假手术组（n=6）,轻型TBI组又分为伤后3 h（n=6）、伤后24 h（n=6）、伤后72 h（n=6）三亚组。采用液压冲击法制作轻型TBI模型。采用胶质纤维酸性蛋白（GFAP）染色检测星形胶质细胞,采用Fluoro-Jade B（FJ-B）荧光染色检测变性神经元。结果 与假手术组相比,轻型TBI后3 h、24 h、72 h邻近顶叶皮质、海马CA2/3区GFAP阳性细胞数量均明显减少（P<0.05）;缺失区周围星形胶质细胞肿胀增生明显。FJ-B阳性神经元在损伤后3 h无明显增加（P>0.05）,伤后24 h皮层区FJ-B阳性神经元显著增加（P<0.05）,伤后72 h海马区FJ-B阳性神经元显著增加（P<0.05）。伤后72 h伤侧皮层区与海马区GFAP阳性细胞数和FJ-B阳性细胞数呈显著负相关（r=-0.8285,P<0.05）。结论 轻型TBI后星形胶质细胞超急性期（3 h）即出现损害和胶质反应,神经元则在急性期（24 h）至亚急性期（72 h）出现明显损害,星形胶质细胞缺失程度可以反应神经元损伤程度。     

神经元型一氧化氮合酶在血管性痴呆大鼠海马中的表达

目的 探讨神经元型一氧化氮合酶(nNOS)在血管性痴呆(VD)大鼠海马中的表达。方法 将60只大鼠随机分为：对照组、VD12h组、VD1d组、VD3d组、VD7d组。采用反复夹闭双侧颈总动脉方法建立VD大鼠模型，用HE染色观察各组大鼠海马CA1区神经元的数目；应用免疫组化染色和Western印迹方法检测nNOS在大鼠海马中的表达。结果 VD12h组、VD1d组、VD3d组、VD7d组大鼠海马CA1区神经元数均明显下降。nNOS在对照组大鼠海马CA1区中弱表达．在VD12h组表达增强．VD1d组进一步增强，VD3d和7d组表达逐渐减弱。结论 nNOS可能参与缺血早期海马神经元的损害，是VD的发病机制之一。     

Anterior thalamic lesions reduce spine density in both hippocampal CA1 and retrosplenial cortex,but enrichment rescues CA1 spines only

Injury to the anterior thalamic nuclei (ATN) may affect both hippocampus and retrosplenial cortex thus explaining some parallels between diencephalic and medial temporal lobe amnesias. We found that standard‐housed rats with ATN lesions, compared with standard‐housed controls, showed reduced spine density in hippocampal CA1 neurons (basal dendrites, ?11.2%; apical dendrites, ?9.6%) and in retrospenial granular b cortex (Rgb) neurons (apical dendrites, ?20.1%) together with spatial memory deficits on cross maze and radial‐arm maze tasks. Additional rats with ATN lesions were also shown to display a severe deficit on spatial working memory in the cross‐maze, but subsequent enriched housing ameliorated their performance on both this task and the radial‐arm maze. These enriched rats with ATN lesions also showed recovery of both basal and apical CA1 spine density to levels comparable to that of the standard‐housed controls, but no recovery of Rgb spine density. Inspection of spine types in the CA1 neurons showed that ATN lesions reduced the density of thin spines and mushroom spines, but not stubby spines; while enrichment promoted recovery of thin spines. Comparison with enriched rats that received pseudo‐training, which provided comparable task‐related experience, but no explicit spatial memory training, suggested that basal CA1 spine density in particular was associated with spatial learning and memory performance. Distal pathology in terms of reduced integrity of hippocampal and retrosplenial microstructure provides clear support for the influence of the ATN lesions on the extended hippocampal system. The reversal by postoperative enrichment of this deficit in the hippocampus but not the retrosplenial cortex may indicate region‐specific mechanisms of recovery after ATN injury. © 2014 Wiley Periodicals, Inc.     

癫痫持续状态对发育期大鼠认知功能的影响及cAMP/PKA信号通路所起作用

目的 探讨癫痫持续状态(SE)对发育期大鼠认知功能的影响及环磷酸腺苷/蛋白激酶A(cAMP/PKA)信号转导通路在其中所起的作用.方法 SD大鼠32只按照完全随机数字表法分为SE组、生理盐水(NS)组,每组16只.戊四氮(PTZ)诱导大鼠SE,Morris水迷宫和Y迷宫实验观察大鼠学习记忆功能的改变,放射免疫分析法测定海马组织cAMP的含量,免疫组织化学方法检测海马各区PKA的表达.结果 SE组大鼠在Morris水迷宫中平均逃避潜伏期延长,原平台所在象限的游泳时间缩短,与NS组比较差异有统计学意义(P<0.05).在Y迷宫中达标所需的训练次数增多,24 h记忆保持率下降,与NS组比较差异有统计学意义(P<0.05).NS组大鼠海马cAMP的含量为(280.38±22.66)pmol/g,SE组为(147.25±16.83)pmol/g,差异有统计学意义(P<0.05).SE组CA3区和CA1区PKA的表达较NS组明显减少.结论 SE可以导致发育期大鼠认知功能障碍,其机制可能与cAMP/PKA信号转导通路的功能受损有关.

Abstract：

Objective To observe the influence of status epilepticus (SE) on cognitive function of immature rats and explore the role of hippocampal cAMP/PKA signaling pathway in cognitive function impairment of immature rats. Methods Immature male SD rats were assigned randomly to 2 groups: SE group, induced by intraperitoneal injection of pentylenetetrazole (PTZ, n=16), and normal saline control group (n=16). Learning and memory tests using the Morris water maze and Y-maze were performed 7 d after SE. After testing, alterations of content of cAMP were detected by radioimmunoassay,and the expression of PKA in the hippocampus was examined by immunohistochemistry. Results SE rats exhibited learning and memory deficits in the Morris water maze and Y-maze tests: as compared with those in the controls in Morris water maze, the mean escape latency of searching the platform obviously prolonged and the swimming time in the original platform region significantly shortened in SE rats (P<0.05); as compared with those in the controls in Y maze, the number of standard training times obviously increased and the rate of retention of memory significantly decreased in SE rats (P<0.05). At the same time, the cAMP content in hippocampus of SE rats ([147.25±16.83] pmol/g) was significantly lower as compared with that in controls ([280.38±22.66] pmol/g), and the expression of PKA in the CA3 and CA1 areas within hippocampal area of SE rats was obviously decreased as compared with that in controls (P<0.05). Conclusion SE could result in learning and memory deficits in immature rats, which may be related to the impairment of hippocampal cAMP/PKA signaling pathway.     

氨甲酰化促红细胞生成素衍生物对小鼠低氧脑损伤保护作用的研究

目的：观察氦甲酰化促红细胞生成素衍生物（CEPO）对低氧所致小鼠海马损伤的保护作用。方法：成年雄性C57／B6小鼠置低氧（8％O2）分别处理0,5、1．5、3和6h,记录各组小鼠复氧后连续6及30d的Y迷宫训练错误反应次数。用免疫组化检测海马神经元核蛋白（NeuN）。在此基础上,将经Y迷宫训练筛选的小鼠低氧处理6h,并分为3组：CEPO组、促红细胞生成素（EPO）组和生理盐水组,隔日1次分别腹腔注射CEPO、EPO和生理盐水,共15次。第10和30天对小鼠进行Y迷宫测试,记录错误反应次数。用NeuN免疫组化检测给予药物干预2次（72h）后各组小鼠海马神经元的脱失状况。结果：①低氧处理的小鼠学习能力明显下降,以低氧3h组和6h组尤为明显;第30天Y迷宫测试时,低氧6h组的错误反应次数最高;NeuN免疫染色显示低氧后复氧3d的各组小鼠海马各亚区神经元均有明显脱失,以低氧6h组最为明显。②第10和30天Y迷宫测试显示,低氧小鼠经CEPO或EPO干预后Y迷宫的错误反应次数明显低于生理盐水处理的小鼠;NeuN免疫染色显示低氧小鼠给予CEPO或EPO处理后海马神经元脱失明显少于生理盐水处理的小鼠。结论：低氧处理6h的小鼠学习和记忆能力明显降低,海马神经元损伤严重。CEPO具有与EPO相似的减轻低氧所致学习和记忆损伤、减少海马神经元脱失的作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对血管性痴呆大鼠海马胆碱能神经元的影响

目的皮下注射碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)于血管性痴呆大鼠,研究用药前后大鼠海马胆碱能神经元的变化。方法制作血管性痴呆(VD)大鼠模型,随机取用VD大鼠模型12只,分治疗组6只,痴呆组6只。另外,取假手术组6只。皮下注射bFGF于治疗组中血管性痴呆大鼠。治疗5周后,以Morris水迷宫定位航行试验和空间探索试验来检测大鼠的学习记忆能力,乙酰胆碱转移酶(ChAT)免疫组织化学染色观察海马CA1区胆碱能神经元数目的变化。结果治疗组大鼠海马CA1区胆碱能神经元数目较痴呆组明显增多。结论皮下注射bFGF后能迁移至海马,诱导海马产生具有ChAT活性神经元,所产生的ChAT活性神经元可能就是胆碱能神经元。     

γ-氨基丁酸对慢性脑缺血致血管性痴呆大鼠学习记忆能力的影响

目的观察γ-氨基丁酸（GABA）对慢性脑缺血致血管性痴呆（VD）大鼠学习记忆能力及海马CA1区神经元形态学的影响。方法将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、GABA组,采用双侧颈总动脉永久性结扎法建立VD模型。GABA组术后腹腔注射GABA0.5g.kg-1.d-1,连续注射60d;用Morris水迷宫实验检测大鼠空间学习记忆能力;Nissl染色观察大鼠海马CA1区神经元形态学变化。结果 GABA能明显改善VD大鼠学习记忆能力,也能减轻海马CA1区神经元损伤。结论 GABA能改善慢性脑缺血致VD大鼠的学习记忆能力,减轻海马神经元损伤可能是其机制之一。