葛根素与血浆蛋白非共价结合的电喷雾离子阱质谱研究

 目的研究葛根素与人血清白蛋白和α₁-酸性糖蛋白之间的非共价结合特性。方法应用电喷雾离子阱质谱分别测定葛根素、人血清白蛋白、α₁-酸性糖蛋白及其所形成复合物的相对分子质量,通过结合前后的相对分子质量变化计算复合物化学计量比;通过Scatchard方程拟合计算复合物结合常数(K);根据热力学常数△H、△S推测复合物间的作用力类型。结果葛根素与人血清白蛋白、α₁-酸性糖蛋白形成的复合物的结合常数分别为7.59×10⁴和8.01×10⁴mol·L^-1,最大表观化学结合计量比分别为1∶5和1∶8。葛根素与人血清白蛋白、α₁-酸性糖蛋白间的作用力主要为静电引力。结论电喷雾离子阱质谱是一种研究药物与蛋白间非共价结合的灵敏快速和准确的方法。     

酮洛芬与血浆蛋白非共价结合的电喷雾质谱研究

 目的应用电喷雾离子阱质谱(ESI-MS)研究酮洛芬与人血清白蛋白、α₁-酸性糖蛋白的非共价结合。方法应用ESI-MS分别测定酮洛芬、人血清白蛋白、α₁-酸性糖蛋白以及酮洛芬与该两种蛋白形成的复合物的相对分子质量,通过结合前后的相对分子质量变化计算复合物化学计量比。考察了反应体系pH值以及质谱仪毛细管温度、锥孔电压等对药物与蛋白非共价结合的影响。结果酮洛芬(ketoprofen,KP)与人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)和α1-酸性糖蛋白(α₁-acid glycoprotein,AAG)形成非共价结合复合物的表观化学计量比分别为5∶1和4∶1。结论ESI-MS是研究药物与蛋白间非共价结合的一种新方法,具有灵敏、快速和准确的特点。     

荧光猝灭法研究马钱子碱、士的宁与人血清白蛋白的相互作用

目的研究马钱子碱、士的宁与人血清白蛋白(HSA)间非共价结合特性。方法采用荧光猝灭法计算药物与蛋白间的结合常数与结合位点数;根据不同作用温度时药物-蛋白非共价结合复合物的热力学参数变化,分析药物与蛋白间的主要作用力类型。结果当作用温度分别为25℃和35℃时,马钱子碱与HSA的结合常数(K)分别为2.12×104L/mol和1.97×104L/mol,结合位点数(n)分别为1.07和1.07;士的宁与HSA的K分别为6.34×103L/mol和3.05×103L/mol,n分别为1.01、0.97。马钱子碱、士的宁与HSA间的作用力主要为氢键和范德华力。结论马钱子碱、士的宁与HSA能自发形成不发荧光的复合物,这种药物蛋白结合可能对马钱子碱、士的宁的药动学过程产生一定影响。     

抗乙肝免疫核糖核酸与血浆蛋白结合的电喷雾离子阱质谱研究

 目的研究抗乙肝免疫核糖核酸(i-RNA)与人血浆蛋白间的非共价结合化学计量比。方法应用电喷雾质谱(ESI-MS)分别测定i-RNA、人血清白蛋白(HSA)、α₁-酸性糖蛋白(AAG)以及i-RNA与这两种蛋白形成的复合物相对分子质量,根据结合前后相对分子质量变化计算复合物化学计量比,根据i-RNA与人血浆蛋白间的ESI-MS滴定实验结果,计算i-RNA与人血浆蛋白间非共价结合的最大表观化学结合计量比。结果i-RNA与HSA和AGG形成非共价结合复合物的最大表观化学计量比分别为4∶1和3∶1。结论ESI-MS技术用于抗乙肝免疫核糖核酸与蛋白间的非共价结合化学计量比研究具有灵敏、快速和准确的特点。     

女贞子中齐墩果酸的定性分析及其与人血清白蛋白相互作用的电喷雾质谱研究

目的:对女贞子中主要药用成分进行定性分析,用电喷雾质谱法探究人血清白蛋白与齐墩果酸相互作用。方法:定性分析采用高效液相色谱电喷雾高分辨质谱(HPLC-ESI-MS)法,色谱柱使用Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18柱(2.1×150 mm,5-Micron),流动相为甲醇(A)-0.1%乙酸水溶液(B),梯度洗脱:0~30 min 10%-90%A,30~40 min 90%A,40-60 min 90%~10%A,柱温:30℃,进样量:1μL,流速:0.2 m L·min-1,女贞子乙醇提取物采用HPLC-ESI-MS负离子检测模式。结果:采用HPLC-ESI-MS定性地检测了女贞子乙醇超声提取液,鉴定出9种有效成分(齐墩果酸、红景天苷、特女贞苷、橄榄苦苷、芹菜素、委陵菜酸、2α-羟基熊果酸、2α-羟基齐墩果酸和19α-羟基-3-乙酰乌索酸)。电喷雾质谱观测到齐墩果酸能与人血清白蛋白形成较为稳定的1:1蛋白质复合物,其结合常数为1.63×104L·mol-1。结论:该方法定性分析了女贞子乙醇提取物中主要药用成分,首次用电喷雾质谱法研究了人血清白蛋白与齐墩果酸的相互作用,从分子水平上揭示了齐墩果酸与人血清白蛋白相互作用的质谱信息。     

咖啡因与人血清白蛋白相互作用的分子光谱研究

目的 研究咖啡因(CAF)与人血清白蛋白(HSA)间非共价结合特征,探讨CAF在血液中的存在方式.方法 在模拟人体生理条件下,应用分子光谱技术,确定CAF与HSA相互作用方式、主要作用力类型及热力学参数.结果 CAF通过动态猝灭机制导致HSA荧光猝灭.当作用温度为298K和310K时,CAF与HSA表观结合常数(Kb)分别为3.35×105和9.53 ×104 L·mol-1,结合位点数分别为1.23和1.09;二者结合距离为4.76 nm;主要作用力为氢键或范德华力;同步荧光图谱表明色氨酸、苯丙氨酸残基所处微环境极性增强.结论 CAF与HSA相互作用并形成超分子化合物,该结合作用是一自发过程.     

大黄酸及其金属配合物与牛血清白蛋白的相互作用

目的 研究大黄酸(RH)及其配合物与牛血清白蛋白(BSA)之间的相互作用.方法 采用多种光谱技术测定,用Stern-Volmer方程等对数据进行处理.结果 大黄酸及其配合物均能显著猝灭BSA的内源荧光并以静态猝灭为主.在293K和300K时,RH-Fe与BSA结合常数分别为3.55×105 L/mol和2.46×105 L/mol,RH-Co与BSA结合常数分别为4.83×105 L/mol和1.87×105 L/mol,RH-Mn与BSA结合常数分别为4.12×105 L/mol和1.83×105L/mol.根据热力学参数判断大黄酸及其配合物间力主要是范德华力和氢键;依据F(O)rster的偶极-偶极非辐射能量转移理论,计算出大黄酸及其钴、铁、锰配合物在蛋白质中的结合位置与色氨酸残基间的距离分别为为2.22,2.57,3.14和2.59 nm.结果还表明在同一温度下,金属离子如钴离子、锰离子、铁离子的存在会影响大黄酸与BSA的结合.结论 大黄酸形成配合物后与BSA的结合显著增强,会对大黄酸及金属离子的储运产生影响.     

川芎嗪与人血清白蛋白相互作用的热力学研究

目的在模拟人体生理条件下研究川芎嗪与人血清白蛋白（HSA）的相互作用。方法采用紫外光谱法、荧光光谱法和同步荧光光谱法,研究川芎嗪与HSA的相互作用。结果紫外光谱测定：川芎嗪与HSA结合常数K=1.57×104L/moL。荧光光谱测定：川芎嗪对HSA的内源荧光有显著的猝灭作用,猝灭机制为静态猝灭。川芎嗪与HSA形成1∶1复合物,结合常数K=1.58×1 04L/moL。川芎嗪与HSA间的结合距离r=3.5 5 nm,其作用力以静电作用力为主。同步荧光光谱测定：结合位点靠近色氨酸,并使色氨酸的疏水性增强。共存金属离子（Co2＋、Zn2＋、Cu2＋等）对川芎嗪与HSA的相互作用有一定的影响。结论通过测定川芎嗪与HSA结合的相关参数,建立川芎嗪与HSA的体外结合模型。     

龙葵多糖细胞毒活性物质基础研究

目的研究龙葵多糖细胞毒活性的物质基础。方法从龙葵青果中分离出龙葵粗多糖;Sevage法除去游离蛋白;10%H2O2脱色,95%乙醇沉淀,分离出龙葵多糖。龙葵多糖经DEAE-52纤维素柱色谱分离得多糖-蛋白复合物;采用SDS-PAGE电泳法检测多糖-蛋白复合物是否为糖蛋白,并测定其相对分子质量;MTT法检测多糖-蛋白复合物对乳腺癌细胞MCF-7的IC50;多糖-蛋白复合物再经SephadexG-200凝胶柱色谱精制,采用MTT法进行活性检测。结果 SDS-PAGE电泳法测得龙葵多糖-蛋白复合物是相对分子质量3.0×104和2.5×104的2种糖蛋白的复合物,经MTT法测得其对乳腺癌细胞MCF-7的IC50为804.51μg/mL;多糖-蛋白复合物经SephadexG-200凝胶柱色谱精制得糖蛋白A、B,并测得其对MCF-7的IC50分别为532.96、613.91μg/mL。结论龙葵多糖细胞毒活性的物质基础是相对分子质量为3.0×104和2.5×104的2种糖蛋白。     

荧光猝灭法研究大黄酚与牛血清白蛋白的相互作用

目的:运用荧光猝灭光谱研究了模拟人体生理条件下大黄酚与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。方法:以BSA为荧光剂,大黄酚为荧光猝灭剂,在激发波长278 nm下的荧光光谱,根据Stern-Volmer方程、位点结合模型和Lineweawer-Burk双倒数曲线方程,求出了大黄酚与BSA结合的结合类型、结合位点数和结合常数等参数。并利用Van’t Hoff方程求得反应的热力学参数,讨论了大黄酚与蛋白质的主要作用力类型。结果:大黄酚与BSA形成复合物从而猝灭BSA的内源荧光,且其荧光猝灭机理符合静态机制。在25℃和37℃下大黄酚与BSA结合的结合常数分别为:4.923×104 L.mol-1和5.928×104 L.mol-1;结合分子数分别为:0.8551和1.0583。热力学数据表明大黄酚与BSA以疏水作用为主,同时也存在较弱的静电作用。结论:大黄酚在体内能够被血清白蛋白存储和转运,且结合时可能改变了BSA的构象。