蒺藜皂苷对体外培养视网膜神经节细胞的保护作用

目的观察不同浓度蒺藜皂苷（GSTT）对体外培养的大鼠视网膜神经节细胞（RGCs）存活率的影响。方法将出生后1～3天的SD乳鼠视网膜细胞，应用不同浓度的蒺藜皂苷分别与细胞共培养24h后，用MTT法检测492nm吸光度A值，并计算相应的存活率。结果10^-7g／L浓度的GSTF组RGCs的存活率为112．86％，（设对照组存活率为100％），10^-7g／L浓度的GSTT组RGCs的存活率高于对照组（P〈0．05）。结论GSTT能增加体外培养的大鼠视网膜神经节细胞的存活率，具有促进混合培养RGCs生长的作用。     

涤痰化瘀汤诱导人食管癌Eca—109细胞凋亡的作用的研究

目的：研究涤痰化瘀汤药物血清诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡作用。方法：采用MTT法测定细胞生长抑制率，通过流式细胞仪（AnnexinV检测），电镜观察凋亡细胞。结果：涤痰化瘀汤药物血清能明显抑制人食道癌Eca-109细胞生长，AnnexinV检测及电镜观察结果均表明药物血清能诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡，结论：涤痰化瘀汤能诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡。有望用于临床治疗食管癌。     

DSX对高眼压大鼠视网膜神经节细胞的保护作用研究

目的：观察中药提取物DSX对高眼压大鼠视网膜一氧化氮（NO）含量以及视网膜神经节细胞（RGCs）凋亡率的影响.方法：采用Akira法,烙闭大鼠上巩膜静脉,制作大鼠持续性高眼压模型,予中药提取物DSX进行治疗一个月.结果：DSX能一定程度阻止眼压升高,降低大鼠视网膜中NO的含量,减少视网膜神经节细胞的凋亡.结论：DSX能有效保护高眼压下的视网膜神经节细胞.     

益气养阴活血方药对高糖培养下视网膜神经节细胞生长抑制作用的影响

目的：观察益气养阴活血中药对高糖条件下大鼠视网膜神经节细胞（RGCs）生长抑制作用的影响。方法：体外培养新生大鼠视网膜神经节细胞,分为正常对照组、正常中药干预组、高糖组及高糖中药干预组。应用CCK-8测定各组RGCs不同培养时间的细胞生长抑制率。结果：高糖对RGCs呈时间依赖性抑制其生长（P〈0．01）,益气养阴活血中药血清可降低高糖培养下RGCs的生长抑制率（P〈0．01）。结论：益气养阴活血中药能在一定程度上减轻高糖对视网膜神经节细胞的生长抑制作用,对高糖条件下RGCs具有保护作用。     

红参对糖尿病视网膜神经节细胞的神经保护作用

目的通过观察糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)凋亡及对凋亡相关基因和神经营养因子表达的检测,探讨红参对RGCs的神经保护作用.方法链脲佐菌素诱导实验性DM大鼠模型.治疗组每日红参粉末灌胃给药1次.TUNEL法检测RGCs凋亡并记数RGCs凋亡数量.LSAB法检测bcl-2、Bax、bFGF在RGCs层的表达,图象分析仪检测免疫组化的显色强度并进行定量分析.结果DM大鼠RGCs凋亡数量显著增加,治疗组RGCs凋亡数量明显减少.LSAB法标记染色的bcl-2、Bax、bFGF在DM大鼠视网膜RGCs层表达增强,bcl-2、bFGF在治疗组表达增强,Bax表达减弱.bcl-2、bFGF表达与RGCs凋亡数呈负相关,Bax表达与RGCs凋亡数呈正相关.结论红参能促进bcl-2和bFGF的表达,抑制bax的表达,减少DM RGCs的凋亡,对RGCs具有神经保护作用.     

涤痰化瘀汤诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡作用的研究

目的 :研究涤痰化瘀汤药物血清诱导人食管癌Eca - 1 0 9细胞凋亡作用。方法 :采用MTT法测定细胞生长抑制率 ,通过流式细胞仪 (AnnexinⅤ检测 )、电镜观察凋亡细胞。结果 :涤痰化瘀汤药物血清能明显抑制人食道癌Eca - 1 0 9细胞生长 ,AnnexinⅤ检测及电镜观察结果均表明药物血清能诱导人食管癌Eca - 1 0 9细胞凋亡。结论 :涤痰化瘀汤能诱导人食管癌Eca- 1 0 9细胞凋亡 ,有望用于临床治疗食管癌     

补肾活血中药对大鼠慢性高眼压模型视网膜神经节细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的影响

目的:观察补肾活血中药对SD大鼠慢性高眼压(elevated intraocular pressure,EIOP)模型视网膜神经节细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的影响。方法:采用烙闭上巩膜静脉法,制作大鼠慢性EIOP模型,随机分为模型对照组,补肾活血高剂量组、中剂量组、低剂量组,空白对照组。连续灌胃8周,并于8周末处死大鼠,观察其对EIOP大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)凋亡基因的影响。结果:补肾活血中药可上调大鼠EIOP视网膜神经节细胞抗凋亡基因Bcl-2、抑制凋亡促进基因Bax。结论:补肾活血中药可调控大鼠EIOP视网膜神经节细胞凋亡基因的表达。     

DSX对高眼压大鼠视网膜神经节细胞的保护作用研究

目的观察中药提取物DSX对高眼压大鼠视网膜一氧化氮(NO)含量以及视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡率的影响。方法采用Akira法,烙闭大鼠上巩膜静脉,制作大鼠持续性高眼压模型,予中药提取物DSX进行治疗一个月。结果DSX能一定程度阻止眼压升高,降低大鼠视网膜中NO的含量,减少视网膜神经节细胞的凋亡。结论DSX能有效保护高眼压下的视网膜神经节细胞。     

芍药苷对谷氨酸引起的PC12细胞损伤的保护作用

 目的探讨芍药苷对谷氨酸引起PC12细胞损伤的保护作用。方法MTT和测定细胞存活率,流式细胞仪测定细胞凋亡率,采用Fura3/AM为荧光指示剂,用1420 Vector2多标记免疫分析仪研究芍药苷对谷氨酸所致损伤PC12细胞内Ca²⁺的作用,流式细胞仪检测线粒体跨膜电位。结果芍药苷可明显提高谷氨酸诱导的PC12细胞还原MTT的能力,抑制该细胞LDH的释放;芍药苷还可抑制兴奋性氨基酸所引起的细胞内Ca²⁺含量的升高;剂量相关性地降低PC12细胞的凋亡百分率。结论芍药苷可抑制谷氨酸诱导PC12细胞凋亡,其作用机制可能与其抑制细胞内钙超载,稳定细胞线粒体跨膜电位有关。     

银杏叶注射液对兔慢性高眼压模型视网膜神经节细胞的保护作用

目的探讨银杏叶注射液对兔慢性高眼压模型视网膜神经节细胞的保护作用。方法采用2％α-糜蛋白酶注入家兔眼后房，造成实验性慢性高眼压。将造模成功的30只家兔随机分为三组，每组10只，分别给予以下治疗：静脉注射银杏叶注射液（银杏叶组）、银杏叶联合噻吗心安组（联合用药组）、不做任何治疗（模型对照组）。30天后各组分别进行视网膜神经节细胞凋亡检测正常节细胞计数和光镜观察视网膜各层病理改变和电镜观察神经节细胞超微结构的变化。结果每组均可观察到染色的阳性细胞，正常节细胞计数从多至少依次为联合用药组、银杏叶组和模型对照组（P〈0．001），光镜下模型对照组视网膜各层结构最紊乱，联合用药组视网膜各层组织最完整。结论高眼压能导致视网膜神经节细胞发生凋亡，而银杏叶注射液能阻止其凋亡的发生，对视网膜神经节细胞有一定的保护作用。     

重明益损汤治疗气虚血瘀型外伤性视神经萎缩的临床研究

目的观察重明益损汤治疗气虚血瘀型外伤性视神经萎缩的疗效。方法辨证为气虚血瘀证的外伤性视神经萎缩(traumatic optic atrophy,TOA)患者100例,随机分为中药治疗组(50例54只眼)和对照组(50例63只眼),前者予口服重明益损汤,后者予口服甲钴胺(弥可保),2组均静脉滴注灯盏花素注射液。以14 d为1个疗程,共治疗3个疗程,比较2组治疗前后视力、视野、视觉诱发电位和中医证候积分的变化。结果中药治疗组显效12只眼,好转22只眼,总有效率63.0%;对照组显效8只眼,好转20只眼,总有效率44.4%,2组差异有统计学意义(P=0.045)。中药治疗组在视野平均缺损、丢失方差、视觉诱发电位P100波峰潜时,以及中医证候积分方面的改善情况好于对照组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论重明益损汤对气虚血瘀型TOA患者有一定疗效,在改善视力、视野、视神经传导方面优于口服弥可保治疗。     

密蒙花方对高糖状态下视网膜Mtiller细胞增殖的影响

目的从离体细胞研究层面,研究中药密蒙花方对高糖状态下视网膜Mfiller细胞损伤的保护作用。方法（1）采用大鼠视网膜Mfiller细胞在30mmol／L高糖下进行体外培养,模拟高糖环境,再分别给予20％含密蒙花方血清（以下均称合药血清）干预12h,24h、36h,观察密蒙花方含药血清对大鼠视网膜Mtiller细胞增殖的影响。（2）采用流式细胞仪AnnexinV—FITC／PI双色染色法观察密蒙花方对高糖状态下视网膜Mtiller细胞凋亡的影响。结果（1）高糖组较正常组吸光度（OD）值增高;含药血清组与高糖组相比,0D值明显降低,各合药血清组间比较,随着时间的延长,OD值逐渐降低,差异具有统计学意义（P〈0．05）。（2）高糖组较正常组细胞早期凋亡比例减少,活细胞比例增高,各含药血清组与高糖组相比,细胞早期凋亡比例增高,活细胞比例减少（P〈0．05）。密蒙花方通过诱导早期高糖状态下视网膜Mtiller细胞的早期凋亡,抑制细胞反应性增生,从而起到防护高糖状态下视网膜神经细胞损伤的作用。结论密蒙花方可以抑制早期高糖状态下视网膜Mfiller细胞的增殖。     

中药除风益损汤加减联合常规西药治疗超声乳化白内障吸除术后角膜水肿的疗效

目的：观察中药复方除风益损汤加减结合常规西药治疗超声乳化白内障吸除术后角膜水肿的疗效.方法：以我院治疗的经超声乳化手术后发生角膜水肿的患者共70例（130只眼）为研究对象,随机分为两组,对照组（65只眼）采用妥布霉素地塞米松滴眼液等常规西药治疗;观察组（65只眼）则采用中西医结合治疗,即在西药治疗基础上给予除风益损汤复方治疗;以患者恢复情况以及住院时间为指标评价其临床疗效.结果：经治疗后观察组、对照组总有效率95.38%（62/65）、70.77%（46/65）,组间比较（P﹤0.05）;观察组和对照组住院时间分别为（14±4）天、（24±2）天,组间比较（P﹤0.05）.结论：采用中药除风益损汤结合常规西药的方法治疗治疗超声乳化白内障吸除术后角膜水肿,不仅可有效降低再手术率以避免增加患者再手术的痛苦,还可以缩短疗程以减缓患者家庭经济压力,疗效确切,且安全、可靠,值得临床推广.     

基于“通肾络、益脾肾”治法研究足细胞凋亡及自噬

[目的]基于中医"通肾络、益脾肾"治法,探讨通络益肾方对体外高糖培养的小鼠肾小球足细胞自噬和凋亡蛋白SIRT1、BNIP3、P62、Bax表达的调控影响。[方法]成熟无特定病原体(SPF)级SD雄性大鼠40只,随机分为正常组、中药高、中、低剂量组各10只。按照人与大鼠体表面积折算方法计算出大鼠所需中药灌胃浓度:高剂量浓度4.76 g/mL、中剂量浓度2.38 g/mL、低剂量浓度1.19 g/m L,灌胃10 d取含药血清备用。足细胞分6组,正常组5.6 mmol/L葡萄糖+10%正常大鼠血清、高糖组30mmol/L葡萄糖+10%正常大鼠血清、通络益肾方含药血清高、中、低干预组30 mmol/L葡萄糖+10%高、中、低剂量大鼠血清、高渗组甘露醇24.5 mmol/L+10%正常大鼠血清。细胞培养48 h后收集,Hoechst33342荧光染色,观察各组足细胞凋亡状况及形态变化;流式细胞仪检测足细胞凋亡率;Western Blot检测细胞内自噬标志蛋白SIRT1、P62及促凋亡蛋白BNIP3、Bax表达水平。[结果]流式细胞仪检测结果显示通络益肾方中、低剂量组可降低高糖诱导的足细胞凋亡率(P0.01或P0.05),高剂量组不能改善凋亡情况(P0.05);Hoechst33342荧光染色观察结果也证实通络益肾方中、低剂量组可降低高糖诱导的足细胞凋亡率;蛋白印迹结果显示,与高糖组相比,通络益肾方中、低剂量组自噬标志蛋白SIRT1表达升高,自噬标志蛋白P62及促凋亡蛋白BNIP3、Bax蛋白表达下降(P0.05或P0.01),高剂量组SIRT1、BNIP3、P62、Bax蛋白表达未见明显改变(P0.05)。[结论]中剂量、低剂量通络益肾方能够启动细胞自噬减少高糖刺激下体外培养足细胞凋亡,降低细胞凋亡率及凋亡蛋白的表达。     

十全大补汤调整肉桂剂量对氧化损伤大鼠真皮成纤维细胞内活性氧水平和线粒体膜电位的影响

目的探讨十全大补汤调整肉桂剂量对氧化损伤大鼠真皮成纤维细胞内活性氧水平和线粒体膜电位的影响。方法原代培养成纤维细胞,用H2O2造成氧化损伤成纤维细胞模型,以血清药理学方法获取含不同剂量肉桂的十全大补汤大鼠血清,用含药血清对成纤维细胞模型进行干预。运用流式细胞术结合DCFH—DA、JC-1探针方法检测成纤维细胞胞内活性氧和线粒体膜电位。结果含不同剂量肉桂的十全大补汤均具有良好的清除活性氧作用,组间差异无统计学意义（P〉0．05）。2倍肉桂组阻滞线粒体膜电位下降明显,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论不同肉桂剂量十全大补汤可清除氧化损伤的大鼠真皮成纤维细胞胞内活性氧,2倍肉桂剂量可起到抑制细胞凋亡的作用。     

参附汤对移植小鼠造血干细胞归巢干预作用的研究

目的:观察参附汤对移植后小鼠造血干细胞归巢的影响。方法:以转GFP基因的Balb/c荧光小鼠作为供鼠,以普通Balb/c小鼠为受鼠,进行造血干细胞移植,移植后抽取4只小鼠作为单纯照射组以观察照射剂量是否充足外,其余小鼠随机分为参附组和空白组,参附组给予参附汤,空白组给予0.9%生理盐水灌胃,分别于移植后+3、+7、+14天随机抽取骨髓标本,用激光共聚焦显微镜观察荧光细胞的归巢数量,流式细胞仪检测骨髓单个核细胞的sca-1+细胞的表达率。结果:激光共聚焦显微镜检测显示,参附组小鼠造血干细胞归巢的数量较空白组增多,并随移植时间的推移,呈逐渐增多的趋势。流式检测显示,骨髓单个核细胞的sca-1+细胞+3、+7、+14天的表达率分别为(5.36±1.27)%、(5.77±1.14)%、(5.42±1.14)%,与空白组相比,二者间有显著性差异(P<0.05)。结论:具有温阳补肾作用的参附汤能促进自体移植小鼠造血干细胞的归巢。     

解毒护肝饮药物血清对异烟肼致HepG2坏死和凋亡的干预

目的 观察解毒护肝饮药物血清对异烟肼致人肝癌细胞株(human hepatocellular carcinoma cell lines,HepG2)病变的干预,并分析其机制。方法 制备解毒护肝饮和甘草酸二铵的药物血清,建立异烟肼致HepG2细胞损伤模型,以解毒护肝饮和甘草酸二铵药物血清加入HepG2培养液,观察对HepG2坏死和凋亡的干预,以及对HepG2 Fas/FasL表达的影响,以评价解毒护肝饮的疗效机制。结果 解毒护肝饮药物血清对异烟肼致HepG2损伤有明显抑制作用,可以减少HepG2细胞凋亡和坏死,并减少其Fas/FasL表达,效果优于甘草酸二铵胶囊组。结论 以清热利湿解毒兼养阴化瘀为治法的解毒护肝饮有确切的减少异烟肼致HepG2坏死和凋亡的作用,其抗细胞凋亡作用与减少HepG2的Fas/FasL的表达有关。     

白术茯苓汤不同配比对脾气虚克罗恩病大鼠结肠P物质及血清白介素-8的影响

目的：考察白术茯苓汤不同配比对脾气虚克罗恩病大鼠结肠黏膜SP和血清IL-8水平的影响;初步探讨该方治疗脾气虚CD的神经-免疫机制。方法：采用破气耗气加饥饱失常法结合Morris方法复制脾气虚CD大鼠模型,以白术茯苓汤不同配比灌胃给药,免疫组化法检测结肠黏膜sP,酶联免疫吸附法检测血清IL-8的含量。结果：与空白组相比,模型组SP、IL-8升高（P〈0．05）;与模型组比较,B5组（白术：茯苓=12：15）、B6组（白术：茯苓=15：12）和B7组（白术：茯苓=18：9）SP的表达明显降低（P〈0．05）;B6组、B7组血清IL-8的含量显著降低（P〈O．05）。结论：白术茯苓汤B6、B7剂量配比组能显著降低脾气虚CD模型SP,下调IL-8水平,减轻结肠炎症反应,发挥治疗CD的作用。．     

丹酚酸B对骨髓间充质干细胞存活的影响及其作用机制研究

目的探讨丹酚酸B(SalB)对骨髓间充质干细胞(MSC)存活的影响及其作用机制。方法体外培养MSC,建立体外缺血缺氧(OGD)模型。实验分MSC组、MSC+OGD组和MSC+OGD+不同浓度丹酚酸B组,MSC+OGD+丹酚酸B组在进行OGD处理前30 min,加入相应浓度的SalB进行预处理。通过Hochest33342染色和Annexin-V/PI双重染色流式细胞仪检测细胞凋亡和存活,经Rhodamine 123染色观察细胞线粒体膜电位的变化,通过Western blot检测Bcl-2和Bax的表达。结果 Hochest33342染色和Annexin-V/PI流式细胞仪检测显示,MSC经OGD处理后,出现明显的凋亡现象(P0.01)。OGD处理前加入SalB与单纯OGD处理比较,MSC的凋亡明显减少,存活细胞数目显著增多(P0.05,P0.01)。OGD处理可以降低Rhodamine 123的表达,减少Bcl-2水平、增加Bax水平(P0.01);与OGD组比较,10μmol/L丹酚酸B预处理可增加Rhodamine 123的表达,并可增加Bcl-2水平、减少Bax水平(P0.05)。结论 SalB预处理可阻止线粒体凋亡途径,从而减少MSC凋亡,提高干细胞的存活率。     

补肾壮筋汤含药血清对力学刺激诱导软骨细胞凋亡的影响

目的探讨补肾壮筋汤含药血清对力学刺激诱导软骨细胞凋亡的影响。方法提取兔补肾壮筋汤含药血清,将软骨细胞培养基分为普通培养基组、空白兔血清培养基组(空白培养基组)及补肾壮筋汤培养基组(含药培养基组),对各组软骨细胞进行四点弯曲机械应力加载诱导凋亡。收集软骨细胞,流式细胞仪测定软骨细胞的凋亡率,并测定相应培养基中的IL-1β和NO的含量。结果含药培养基组中软骨细胞的凋亡[(19.55±7.98)%]比普通培养基组[(39.32±13.45)%]及空白培养基组[(37.87±9.67)%]低,差异有统计学意义(P<0.05);含药培养基组IL-1β和NO含量也低于其他两组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论补肾壮筋汤含药血清对应力加载诱导软骨细胞的凋亡具有保护作用。