Wnt信号转导通路蛋白在尖锐湿疣皮损中的表达

目的: 检测Wnt基因信号转导通路相关蛋白在尖锐湿疣(CA)皮损中的表达,探讨Wnt信号转导通路在CA皮损上皮细胞过度增殖中的意义.方法: 应用免疫组织化学方法检测Wnt信号转导通路相关蛋白Wnt-1、β-连环素(β-catenin)及E-钙黏蛋白(E-cadherin)在CA皮损中的表达.结果: Wnt-1蛋白在CA皮损中的表达水平显著高于对照组;β-catenin 蛋白呈异常表达,且异常表达率显著高于对照组;E-cadherin蛋白在CA皮损中的表达则显著低于对照组.结论: Wnt信号转导通路可能在尖锐湿疣皮损上皮细胞过度增殖中起着重要作用,且与HPV的分型有关.     

脂肪间充质干细胞对硬皮病小鼠的疗效及其对Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨脂肪间充质干细胞(ADSCs)对硬皮病(SD)小鼠的治疗效果及其对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:将40只C57BL/6J雌性小鼠随机平均分为空白组、PBS组、模型组及治疗组。模型组与治疗组通过背部皮下注射博来霉素(BLM)制备SD小鼠模型,空白组不予任何处理,PBS组注射同体积PBS溶液。造模成功后采用100μL ADSCs细胞悬液(2×1010个/L)皮下注射至治疗组小鼠背部局部皮下,每日1次,连续4周。观察各组小鼠皮肤组织病理改变,并检测其皮肤组织中羟脯氨酸含量、脾细胞中辅助性T细胞(Th)17和调节性T细胞(Treg)比例以及血清炎性因子水平。采用western blot检测皮肤组织中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平。结果:与空白组和PBS组相比,模型组Th17和Treg比例、血清白细胞介素(IL)-6、IL-17、Wnt2、Wnt3a及β-catenin蛋白水平均显著升高(P0.05),但IL-10水平显著降低(P0.05)。经ADSCs治疗后SD小鼠皮损组织硬化和炎症均得到明显改善,且羟脯氨酸含量显著降低(P0.05)。与模型组相比,治疗组Th17比例、血清IL-6及IL-17水平、Wnt2、Wnt3a及β-catenin蛋白表达均降低(P0.05),而Treg比例及血清IL-10水平均显著升高(P0.05)。结论:ADSCs能够通过调节T淋巴细胞和相关炎性因子分泌,改善SD小鼠机体炎症反应和皮肤组织纤维化,且该过程可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。     

MMP-3和TIMP-1在不同类型慢性皮肤溃疡创面表达研究

目的观察基质金属蛋白酶-3(MMP-3)和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)蛋白在不同类型慢性皮肤溃疡创面组织中的表达,探讨其病理机制。方法以静脉曲张性溃疡、血管炎性溃疡、压力性溃疡和坏疽性脓皮病患者及正常皮肤志愿者为研究对象,通过免疫组化法检测MMP-3和TIMP-1蛋白在不同类型慢性皮肤溃疡创面组织中的表达和分布规律。结果免疫组化显示:MMP-3和TIMP-1蛋白均呈核表达,相比正常皮肤,静脉曲张性溃疡、血管炎性溃疡和压力性溃疡MMP-3表达显著升高(P0.05);相比血管炎性溃疡,静脉曲张性溃疡、压力性溃疡、坏疽性脓皮病和正常皮肤组织TIMP-1表达均降低(P0.05)。结论 MMP-3和TIMP-1蛋白在不同类型慢性皮肤溃疡创面组织中表达存在差异:静脉曲张性溃疡和压力性溃疡创面组织中,MMP-3表达上调,TIMP-1表达下调;在血管炎性溃疡创面组织中TIMP-1表达上调。     

窄谱中波紫外线诱导人永生化表皮细胞凋亡的Wnt/β-catenin信号通路机制研究

目的探讨窄谱中波紫外线(NB-UVB)通过Wnt/β-catenin信号通路对人永生化表皮细胞(HaCaT cells)的增殖及凋亡影响。方法研究对象为人HaCaT细胞系,实验分为空白对照组、NB-UVB组、BIO组、NB-UVB+BIO组。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察细胞增殖能力;流式细胞仪(FCM)实验检测细胞凋亡;实时定量聚合酶链反应(PCR)、Western-blot检测细胞内的β-catenin、survivin、caspase-3表达水平。结果与正常对照组相比,NB-UVB组细胞增殖抑制作用及凋亡明显增强(P0.05),同时观察到NB-UVB组β-catenin及survivin表达降低,caspase-3表达增强(P0.05)。而NB-UVB+BIO组明显减弱了NB-UVB对HaCaT细胞的这些作用(P0.05)。结论NB-UVB可能通过下调Wnt/β-catenin信号通路、抑制HaCaT细胞的增殖及促进凋亡。     

皮肤肿瘤中Wnt/β-连环蛋白信号通路的研究进展

Wnt/β-连环蛋白信号通路的异常活化常与皮肤肿瘤的发生发展密切相关.导致通路异常的因素较多,如分泌性Wnt蛋白失调;通路蛋白分子或旁路调控分子的突变;病毒感染和其他通路交叉影响等.通路的致瘤机制及对肿瘤的生物学影响还存在组织特异性,而皮肤肿瘤种类多,且组织来源广泛.因此探索Wnt通路在皮肤肿瘤中差异及组织特异性将对肿瘤靶向治疗研究有指导意义.

Abstract：

The abnormal activation of Wnt/β-catenin signaling pathway is usually and closely related to the occurrence and development of cutaneous tumors.There are various factors causing the abnormality of this pathway, such as deregulated expression of secreted Wnt protein, mutations of proteins involved in this pathway or regulatory molecules in bypass pathway, viral infection, interaction with other pathways, and so on.In addition, the tumorigenic mechanisms of this pathway and its biologcal effects on tumors are considered to be tissue-specific.However, the types and tissue origins of cutaneous tumors are various.Therefore, exploring the disparities and tissue specificity of Wnt pathway in cutaneous tumors will provide a guide to the targeted therapy of tumors.     

补肾活血方对DKK1阻断Wnt信号通路后薄型子宫内膜容受性相关蛋白表达的影响

目的探讨补肾活血方对DKK1阻断Wnt信号通路后薄型子宫内膜容受性相关蛋白表达的影响。方法建立雌性SD大鼠肾虚血瘀薄型子宫内膜联合模型,将SD大鼠分为对照组、模型组、补佳乐组、补肾活血方高剂量组、补肾活血方中剂量组、补肾活血方低剂量组、Wnt信号通路阻滞剂Dickkopf-1(DKK1)组、DKK1+中药组;各组给予相应的方法干预后,经过大鼠3个动情周期,处死取材。分别检测各组子宫内膜β连环蛋白(β-catenin)、OCT4基因及ABCG2蛋白的表达。结果补肾活血方高剂量组与补佳乐组比较,β-catenin、OCT4基因、ABCG2蛋白的表达差异无统计学意义(P>0.05);DKK1组与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);DKK1+中药组与DKK1组比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论在改善β-catenin、OCT4基因、ABCG2蛋白表达方面,补肾活血方高剂量组能够达到与补佳乐相同的效果;补肾活血方可以增加DKK1阻断Wnt通路后β-catenin、OCT4基因、ABCG2蛋白的表达。     

尖锐湿疣皮损角质形成细胞中β-catenin的表达

目的探讨β-catenin与尖锐湿疣皮损角质形成细胞增生的关系。方法采用聚合酶链反应(PCR)方法检测尖锐湿疣皮损感染的HPV分型,将HPV16/18型皮损分为高危型组(CA1),HPV6/11型皮损分为低危型组(CA2),每组30例;分别应用免疫组织化学及逆转录聚合酶链(RT-PCR)方法检测β-catenin蛋白及β-catenin mRNA在CA1组和CA2组角质形成细胞中的表达。结果在正常皮肤组织中β-catenin蛋白阳性物质均表达于胞膜;CA1组和CA2组中主要表达于胞核和胞质,CA1组和CA2组角质形成细胞中β-catenin蛋白均呈异常表达,异常表达率(分别为86.70%,40.00%)均显著高于正常对照组(0);CA1组和CA2组角质形成细胞中β-catenin mRNA的表达水平(阳性分别为23例,18例)亦均显著高于正常对照组(阳性10例)。结论尖锐湿疣皮损角质形成细胞中β-catenin表达异常,在胞膜、胞浆及胞核的分布与正常角质形成细胞不同,可能与细胞过度增殖有关。     

β-连珠蛋白及其信号通路和靶基因调控细胞衰老的研究进展

β-连珠蛋白(β-catenin)是经典的Wnt信号通路关键性的下游效应器,它在许多器官组织的发育和成人体内平衡等方面发挥许多重要作用。据国外学者研究发现β-catenin在调控细胞衰老方面有着非常重要的作用,β-catenin介导不同的靶基因,表现出既参与抗细胞衰老,又促进细胞衰老的双向调控机制。该文对β-catenin及其信号通路和靶基因调控细胞衰老的研究进展作文献综述,试图从信号网络和基因蛋白水平来推测β-catenin调控细胞衰老的作用机制可能是其与不同的信号通路或是相关靶基因的交互作用各异,导致其如同一个调控细胞衰老的开关一样,会产生或是抗细胞衰老的作用,或是导致细胞衰老的作用。     

Wnt信号转导通路及其在皮肤肿瘤中的作用

Wnt信号转导通路与胚胎发育及肿瘤发生密切相关。目前认为Wnt通路的组成主要包括:细胞外因子Wnt、跨膜受体卷曲蛋白、散乱蛋白、结肠腺瘤样息肉病基因产物、β-连环蛋白及T细胞因子/淋巴样增强因子等一系列蛋白。细胞外因子Wnt激活的信号与受体结合后,通过胞质蛋白的一系列相互作用,能够使胞浆内β-连环蛋白保持稳定并累积,进而入核与转录因子T细胞因子/淋巴样增强因子联合作用激活靶基因的转录,而且在Wnt信号通路的不同阶段有各种蛋白因子进行调控。Wnt信号通路的异常激活与人类某些肿瘤的发生、发展有关。     

PI3K和磷酸化Akt在尖锐湿疣皮损中的表达

目的:检测PI3K/Akt信号转导通路中PI3K和磷酸化Akt在尖锐湿疣皮损中的表达.方法:采用免疫组化和蛋白印迹法检测30例尖锐湿疣皮损及15例正常对照者皮肤活检组织中PI3K和磷酸化Akt的表达,并利用计算机图像采集与分析系统对免疫组化结果进行平均吸光度(A值)测定和对免疫印迹测定结果进行灰度扫描.结果:尖锐湿疣皮损中PI3K和磷酸化Akt的表达明显高于正常皮肤.蛋白印迹结果与免疫组化检测一致(两组比较,均P＜ 0.01).结论:PI3K/Akt信号通路异常激活可能参与了尖锐湿疣的发病.     

银屑病患者T细胞对表皮c-myc、bcl-2及p53蛋白表达影响的实验研究

目的 探讨银屑病患者T细胞促发表皮动力学改变的机制.方法将皮肤组织与银屑病患者外周血T细胞混合培养,免疫组化法检测培养前、培养后第3天、第6天表皮c-myc bcl-2及p53表达.结果未培养的银屑病患者皮损c-myc及p53表达增强,bcl-2表达减弱;银屑病正常皮肤表达无明显改变.银屑病正常皮肤及正常人皮肤分别与银屑病T细胞共培养后第3天,p53表达显著增强,共培养第6天后,c-myc表达显著增强,bcl-2表达显著降低,且银屑病正常皮肤与正常人皮肤受银屑病T细胞作用后二者间差异无显著性.结论c-myc、bcl-2及p53的异常表达与银屑病皮损表皮动力学紊乱密切相关;银屑病T细胞可影响表皮c-myc、bcl-2及p53的表达,从而影响表皮的增殖状态;银屑病发病的关键可能在于T细胞的异常,而不是表皮角质形成细胞。     

Wnt信号转导通路及其在皮肤肿瘤中的作用

Wnt信号转导通路与胚胎发育及肿瘤发生密切相关。目前认为Wnt通路的组成主要包括：细胞外因子Wnt、跨膜受体卷曲蛋白、散乱蛋白、结肠腺瘤样息肉病基因产物、β-连环蛋白及T细胞因子／淋巴样增强因子等一系列蛋白。细胞外因子Wnt激活的信号与受体结合后，通过胞质蛋白的一系列相互作用，能够使胞浆内β-连环蛋白保持稳定并累积，进而入核与转录因子T细胞因子／淋巴样增强因子联合作用激活靶基因的转录，而且在Wnt信号通路的不同阶段有各种蛋白因子进行调控。Wnt信号通路的异常激活与人类某些肿瘤的发生、发展有关。     

白藜芦醇对病理性瘢痕成纤维细胞mTOR信号通路相关分子表达的影响

目的观察白藜芦醇对病理性瘢痕成纤维细胞mTOR信号通路关键分子PI3K、Akt、mTOR表达的影响。方法应用免疫荧光检测PI3K、Akt、mTOR在病理性瘢痕及正常皮肤组织成纤维细胞中的表达;病理性瘢痕成纤维细胞经不同浓度白藜芦醇处理后,分别应用RT-PCR、Western Blot检测PI3K、Akt、mTOR mRNA和蛋白的表达。结果免疫荧光检测结果显示,PI3K、Akt、mTOR在病理性瘢痕成纤维细胞中表达明显增强,且主要表达于细胞核,而在正常皮肤组织成纤维细胞中未见明显表达;RT-PCR及Western Blot检测结果显示,病理性瘢痕成纤维细胞经不同浓度的Res干预后,Akt和mTOR mRNA和蛋白表达量降低,并且呈剂量依赖关系,与对照组相比,差异具有统计学意义(P0.05),而PI3K mRNA和蛋白表达量降低不明显,与对照组相比差异无统计学意义(P0.05)。结论白藜芦醇抑制病理性瘢痕成纤维细胞增殖的机制可能与其下调mTOR信号通路关键分子Akt、mTOR表达有关。     

皮肤科学基础

20141251β-连珠蛋白及其信号通路和靶基因调控细胞衰老的研究进展（综述）/田黎明（华中科技大学武汉市第一医院皮肤科）,谢红付,李吉//临床皮肤科杂志.-2014,43（1）.-62～64 β-连珠蛋白（β-catenin）是经典的Wnt信号通路关键性的下游效应器,它在许多器官组织的发育和成人体内平衡等方面发挥重要作用。国外学者研究发现β-catenin在调控细胞衰老方面有着非常重要的作用,β-catenin介导不同的靶基因,表现出既参与抗细胞衰老,又促进细胞衰老的双向调控机制。     

Nicastrin基因突变的反常性痤疮患者皮损Notch-HES信号通路的表达

目的 检测nicastrin基因突变的反常性痤疮患者皮损标本中,nicastrin及其下游Notch-HES信号通路蛋白的表达。 方法 免疫组化法检测nicastrin及 Notch-HES信号通路分子在4例nicastrin基因突变的患者皮损石蜡标本的表达,并用6例正常皮肤组织作对照,同时采用Spearman相关分析,分析nicastrin与Notch-HES信号通路分子表达的相关性。 结果 Nicastrin蛋白广泛表达于表皮全层、皮肤附属器,如,毛囊皮脂腺单位、大汗腺及小汗腺。在携带nicastrin基因突变的患者皮损中,表皮及毛囊漏斗部nicastrin表达较正常对照明显减少;同时,Notch-HES信号通路分子表达亦较正常对照明显减少。Nicastrin蛋白与Notch1、Notch3以及HES-1的表达呈明显正相关（r分别为0.831、0.748、0.807,P值分别 < 0.01, < 0.05、 < 0.01）,而与Notch2、HES-5的表达之间的相关性,差异无统计学意义（r分别为0.597和0.591,均P > 0.05）。 结论 Nicastrin基因突变患者的皮损中nicastrin低表达,且与多种Notch-HES信号通路分子表达呈正相关,提示nicastrin表达减少可能通过影响下游Notch-HES信号通路的表达参与反常性痤疮的发病。     

雌二醇对黑素细胞Wnt5A、ROR2及β-catenin表达的影响

目的:明确雌二醇对体外培养的黑素细胞非经典Wnt5A/ROR2通路中Wnt5A、ROR2及β-catenin表达的影响.方法:将体外黑素细胞随机分为2组(n=6):DMEM培养液组(A组)和50 nM雌二醇组(B组).孵育6h后采用Western blotting检测Wnt5A、ROR2及α-catenin的表达.结果:与A组相比,B组Wnt5A及ROR2的表达均明显上调(P＜0.05),而α-catenin的表达无显著性差异(P＞0.05).结论:雌二醇诱导黄褐斑形成可能与激活非经典Wnt5A/ROR2通路有关.     

microRNA-136基于Wnt信号通路在黑素瘤EMT中的作用

目的探讨microRNA-136(miR-136)基于Wnt信号通路在黑素瘤上皮-间充质细胞转化(EMT)中的调控作用。方法常规培养正常小鼠A9细胞(阴性对照组)和小鼠黑素瘤B16细胞,采用脂质体转染法将B16细胞分为空白组(只转染试剂,无转染序列)、NC组(转染miR-136 nc)、miR-136模拟组(转染miR-136模拟物)、miR-136抑制组(转染miR-136抑制剂)。通过qRT-PCR法检测各组细胞中miR-136的表达,qRT-PCR及Western blot实验分别检测各组细胞Wnt3a、β-catenin、Ecadherin及N-cadherin mRNA及蛋白表达的差距。结果与阴性对照组相比,其他各组miR-136表达均显著降低,空白组与NC组比较差异无统计学意义(P0. 05)。相对于空白组与NC组,miR-136模拟组miR-136表达显著增加(P 0. 05); miR-136抑制组miR-136的表达明显降低(P 0. 05)。与对照组相比,其他各组E-cadherin mRNA及蛋白表达显著降低(P均0. 05)。β-catenin、Wnt3a、N-cadherin的mRNA及蛋白表达显著增加(P均0. 05)。空白组与NC组比较差异无统计学意义(P 0. 05)。与空白组和NC组相比,miR-136模拟组E-cadherin的mRNA及蛋白表达显著增加(P 0. 05);β-catenin、Wnt3a和N-cadherin的mRNA及蛋白表达均显著降低(P均0. 05)。miR-136抑制组E-cadherin的mRNA及蛋白表达显著降低(P均0. 05),而β-catenin、wnt3a和N-cadherin的mRNA及蛋白表达显著升高(P均0. 05),组间差距均具有统计学意义。结论黑素瘤细胞中miR-136水平较正常细胞降低,过度表达的miR-136通过下调Wnt信号传导途径,抑制黑素瘤细胞的EMT。     

淋巴样增强因子1在尖锐湿疣皮损及其癌变组织中的表达

目的:研究淋巴样增强因子1在高危型人乳头瘤病毒(HPV)16/18感染所致的尖锐湿疣及其癌变组织中的表达,探讨Wnt信号通路在尖锐湿疣癌变中的作用.方法:对经HPV分型PCR检测试剂盒检测HPV16/18型阳性的35例尖锐湿疣组织和6例尖锐湿疣癌变组织,应用免疫组化方法检测淋巴样增强因子1在尖锐湿疣皮损及其癌变组织中的表达水平.结果:尖锐湿疣患者皮损及其癌变组织中淋巴样增强因子1表达水平均显著高于正常对照组.结论:Wnt信号通路的激活在尖锐湿疣癌变发生机制中可能起着十分重要的作用.     

强脉冲光对皮肤成纤维细胞 TGF-β／Smads信号传导通路表达的影响

目的：探讨强脉冲光对皮肤成纤维细胞TGF-β／Smads信号传导通路表达的影响。方法：将原代培养人正常皮肤成纤维细胞分为2组,即强脉冲光（ IPL）照射组和未用 IPL照射的对照组。采用Western blot和RT-PCR法分别检测2组细胞的TGFβ受体Ⅱ、Smad4、Smad7蛋白和mRNA水平,并比较两组的差异性。结果：IPL照射后皮肤成纤维细胞的TGFβ受体Ⅱ、Smad4蛋白和mRNA表达水平均升高,Smad7蛋白和mRNA表达水平降低,与对照组比较差异均有统计学意义（ P值均＜0.05）。结论：IPL照射人皮肤成纤维细胞后,TGF-β／Smads信号传导通路活性增强,其在IPL非剥脱性嫩肤机制中占有重要地位。     

强脉冲光对皮肤成纤维细胞TGF-β/Smads信号传导通路表达的影响

目的:探讨强脉冲光对皮肤成纤维细胞TGF-β/Smads信号传导通路表达的影响。方法:将原代培养人正常皮肤成纤维细胞分为2组,即强脉冲光(IPL)照射组和未用IPL照射的对照组。采用Western blot和RT-PCR法分别检测2组细胞的TGFβ受体Ⅱ、Smad4、Smad7蛋白和mRNA水平,并比较两组的差异性。结果:IPL照射后皮肤成纤维细胞的TGFβ受体Ⅱ、Smad4蛋白和mRNA表达水平均升高,Smad7蛋白和mRNA表达水平降低,与对照组比较差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论:IPL照射人皮肤成纤维细胞后,TGF-β/Smads信号传导通路活性增强,其在IPL非剥脱性嫩肤机制中占有重要地位。