NCSTN基因沉默对HaCaT细胞增殖分化的影响

【摘要】 目的 检测NCSTN基因稳定沉默的人永生化角质形成细胞（HaCaT）增殖活性及相关分化蛋白的改变，初步探索反常性痤疮发病的可能机制。方法 构建慢病毒介导shRNA沉默NCSTN基因的HaCaT细胞模型（shRNA组），转染空载慢病毒的HaCaT细胞作为阴性对照组，实时定量PCR和Western印迹法检测NCSTN基因的沉默效率。CCK8法检测HaCaT细胞增殖活性，实时定量PCR和Western印迹法检测HaCaT细胞角蛋白（CK1、CK5、CK7、CK10、CK14、CK16、CK17、CK18、CK19、CK20）及其他分化分子（内披蛋白、兜甲蛋白）mRNA和蛋白的表达。两组计量资料的比较采用两独立样本t检验。结果 shRNA组NCSTN mRNA及蛋白表达（0.42 ± 0.19、0.30 ± 0.07）均显著低于阴性对照组（1.00 ± 0.34、1.00 ± 0.26；t = 5.196、2.637，P < 0.001、< 0.05），基因沉默效率达70%。与阴性对照组相比，shRNA组HaCaT细胞明显增殖活跃，CK16、CK19蛋白表达显著下调（t = 3.787、3.817，P < 0.01、< 0.05），终末分化分子内披蛋白表达明显降低（t = 2.904，P < 0.05）。结论 稳定沉默NCSTN基因表达会引起HaCaT细胞异常增殖分化，为后续探究NCSTN基因突变引起反常性痤疮提供新思路。     

Omega-3预防过敏性疾病的meta分析

目的评价omega-3预防过敏性疾病的有效性和安全性。方法计算机检索英文数据库(PubMed、EMBASE、SCI、Cochrane Library)及中文数据库(中国生物医学文献数据库、中文科技期刊全文数据库、中国期刊全文数据库、中华医学会数字化期刊),并辅手工检索,检索时间截止至2013年5月,收集omega-3预防过敏性疾病的随机对照试验。采用Cochrane系统评价手册文献质量评价标准评价纳入研究质量,用RevMan 5.1软件进行Meta分析。结果共纳入6个RCT,各试验间基线均可比。Meta分析结果显示:Omega-3与安慰剂对比预防过敏性疾病(特应性皮炎,过敏性鼻炎,过敏性哮喘,食物性过敏)方面差异无统计学意义,各研究间不良反应报道较少,差异无统计学意义。结论虽然omega-3作为一种新型的免疫营养物质有其独特优势,但在omega-3预防过敏性疾病方面无明显效果。     

慢病毒介导shRNA沉默Nicastrin基因的人永生化角质形成细胞模型构建

目的 构建Nicastrin(NCT)基因的RNA干扰慢病毒表达载体,并在人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)上鉴定其沉默效率,构建NCT基因稳定下调的人永生化角质形成细胞模型,为后续研究NCT基因下调对角质形成细胞的生物学行为影响奠定实验基础.方法 设计3个靶向NCT基因特异性短发卡RNA(shRNA)表达序列并连接到慢病毒表达质粒pGLV3/H 1/GFP+ Puro中,成功构建慢病毒重组表达质粒,并通过测序鉴定.将构建的重组表达质粒与包装质粒共转染293T细胞,产生慢病毒颗粒,并测其滴度.将HaCaT细胞分为空白组(未感染病毒)、阴性对照组(NC组,感染空载病毒LV3-shNC)和干扰组(感染NCT-shRNA1、2、3慢病毒).流式细胞仪检测慢病毒转染效率,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western印迹检测靶基因的沉默效率,筛选出沉默效果最佳的干扰序列.结果 测序表明,NCT-shRNA慢病毒重组表达质粒构建成功.重组表达质粒与包装质粒共转染293T细胞后产生的慢病毒颗粒滴度为109 TU/ml.慢病毒感染HaCaT细胞后,流式细胞仪检测,慢病毒转染效率大于95％.qRT-PCR结果,与NC组相比,干扰组NCT mRNA表达量明显下降,其中NCT-shRNA1组NCT基因沉默效果最佳,干扰效率达到75％.Western印迹结果,与NC组相比,shRNA1组NCT蛋白表达抑制率为71.7％.结论 成功筛选出高效NCT-shRNA干扰序列,构建NCT-shRNA慢病毒重组表达载体,并构建NCT基因稳定下调的人永生化角质形成细胞模型.     

维德思治疗带状疱疹疗效观察

带状疱疹是一种常见病，由水痘一带状疱疹病毒引起。本研究的目的在于观察维德思治疗带状疱疹的效果。维德思(Vahrex)是万乃洛韦(Valaciclovir)的商品名，是一种新的口服核苷类抗病毒药，由葛兰素威康开发研制。本研究于1997年12月至1998年6月在北京三家医院进行，其中北京协和医院共入选23例，完成20例，取得较好结果，现报告如下：     

反常性痤疮八例分析

目的 探讨反常性痤疮的临床特点及治疗经验.方法 回顾性分析于我院住院治疗的8例反常性痤疮患者的临床资料.结果 8例患者入院时皮损均有瘢痕、脓性分泌物和不同程度的疼痛,6例出现高热.男7例,女1例,发病年龄6 ～ 30岁,平均17岁.7例患者无家族史.由于该病多病灶的特点,选择局部或系统药物治疗,常用药物包括抗生素、异维A酸和糖皮质激素,也可选择使用抗雄激素类药物、免疫抑制剂以及肿瘤坏死因子α抑制剂.手术扩大切除用于治疗严重的HurleyⅢ级.4例行手术治疗的患者住院时间为8～47d,平均27.75 d.4例未行手术治疗的患者住院时间为13 ～ 123 d,平均46.5 d.4例患者出院后病情反复;1例经手术治疗痊愈,出院5年后于肛周新发脓肿、结节;3例失访.结论 反常性痤疮的发病可以有家族性也可散发.以抗生素、异维A酸和糖皮质激素类药物最为常用.外科手术的目的是切除瘢痕束和引流脓肿.     

痤疮相关综合征的研究进展

近年来研究表明,痤疮不仅是一种皮肤病,也是一些系统疾病或综合征的主要表现,在某些情况下可能反映存在系统异常,并为研究性激素、先天性／获得性免疫、炎症反应及遗传因素的相互作用提供了一个理想的疾病模型。了解这些综合征的分子机制、临床表现及治疗进展有助于深入理解痤疮的发病机制,开发出治疗痤疮的新方法。     

口服依曲替酯治疗一例外阴硬化性萎缩性苔藓取得效果

患者51岁,女性,已绝经2年。主诉为外阴瘙痒及尿病1年,并曾在妇科外用抗真菌药物治疗6月无效。检查发现,外阴及会阴肿胀,伴白色角化。右侧大阴唇糜烂。妇科检查示阴道及阴道分泌物正常。外周血细胞计数及自动化学分析在正常范围内。抗甲状腺微粒体抗体、抗甲状腺球蛋白抗体、抗胃壁细胞抗体及抗内因子抗体均阴性。小阴唇上白色角化处活检示角化过度,局灶性颗粒层增厚,皮突消失,棘细胞大小及排列不规则,表皮基底细胞液化变性。在真皮上部与中部上层可见胶原纤维肿胀并有透明变性,真皮上部淋巴管显著扩张,真皮中部有致密的淋巴样细胞浸润。这些均为硬化性萎缩性苔藓的典型病变。给予患者口服依曲     

系统性红斑狼疮外周血淋巴细胞凋亡和循环中自身核抗原的关系

系统性红斑狼疮（ＳＬＥ） 是一种针对自身细胞核抗原的免疫性疾病，其核抗原中最主要的包括核小体复合物、组蛋白和ＤＮＡ。细胞程序性死亡或凋亡的特征是将细胞核染色质裂解为寡聚核小体，然后将其释放到细胞外空间。这些核小体是否作为免疫原驱动自身免疫反应；ＳＬＥ患者外周血淋巴细胞凋亡是否与ＳＬＥ的发病有关，本文就ＳＬＥ细胞凋亡与自身抗原来源之间的关系作一综述。     

皮损表现为皮角样和蛎壳样银屑病一例

患者女， 58岁。全身起鳞屑斑 1年，头部皮角样皮损半年。患者于 1年前头皮部出现类圆 形的厚积鳞屑斑 4处，稍痒，此后，面颊部、躯干、四肢也陆续出现数 10余个圆形或类圆 形的鳞屑斑，其上有较厚的鳞屑，皮损偶有轻痒，未治疗。半年前，无明显诱因，头皮原 4 处红斑鳞屑皮损出现糜烂、渗液、结痂，并逐渐形成皮角样皮损，于 1999年 10月 11日来 本院就诊。发病以来，无发热，无关节痛，无外阴溃疡史。有青霉素过敏史。家族中其母亲 及妹妹有银屑病史。体检：各系统均未见明显异常。皮肤科情况：头皮 4个类似于皮角的皮损，其中有毛发穿出…