核因子-κB在糖尿病大鼠视网膜中的表达及意义

目的 观察核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)在大鼠糖尿病早期视网膜中的表达及其在糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)发病过程中的作用.方法 清洁级健康成年雄性Wistar大鼠110只,随机分为正常对照组(NC组,24只)和糖尿病造模动物组(DM组,86只).大鼠腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱发糖尿病模型,取成模的72只大鼠随机分为2周、4周、12周和20周组,每组各18只.到上述各时间点后分别取DM组大鼠6只和NC组大鼠2只并处死,免疫印记法观察NF-κB蛋白在不同病程糖尿病大鼠视网膜的表达,采用免疫组织化学法观察NF-κB在不同病程糖尿病大鼠视网膜组织和血管的表达.结果 NC组正常大鼠视网膜中NF-κB p65的蛋白质水平非常低,为17.72±8.57,DM组糖尿病诱导成功后2周NF-κB p65蛋白质表达为38.45±12.37,并随时间的延长其表达增加,4周时的免疫印记反应强度最高为89.41±19.79,各时间点蛋白质表达比NC组明显增强(均为Jp<0.01).DM组大鼠糖尿病诱导成功后2周,视网膜表层血管即散在出现NF-κB阳性染色颗粒,4周时在视网膜内核层及内核层血管均出现NF-κB阳性染色细胞,为胞核染色,并随着病程的延长,12周时在视网膜表面血管、内核层、内核层血管和外丛状层均出现大量阳性染色细胞;NC组大鼠视网膜血管铺片没有NF-κB表达.DM组大鼠糖尿病诱导成功后2周,视网膜血管壁出现散在NF-κB阳性染色颗粒,以后随病程延长,NF-κB阳性细胞逐渐增多,12周时最多,以后保持不变.结论 NF-κB在DR发生发展过程中可能起重要作用.     

单核细胞趋化蛋白-1在早期糖尿病大鼠视网膜中的表达及意义

目的　探讨单核细胞趋化蛋白 1 (MCP 1 )在早期糖尿病大鼠视网膜中的表达及其与糖尿病视网膜病变(DR)的关系。 方法　Wistar大鼠随机分为正常对照组 (NC组 )和糖尿病模型组 (DM组 ),每组 12只。大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱发糖尿病模型。8周时全部处死,采用Western免疫印迹法和免疫组织化学法,分析MCP 1在早期DM大鼠视网膜中的表达,对免疫印迹结果采用计算机图像分析系统处理。 结果　8周时,免疫印迹结果显示视网膜中MCP 1的表达DM组明显高于NC组(P<0 01),免疫组织化学法显示 8周时DM大鼠视网膜表面血管、内核层均可见MCP 1阳性着染细胞。 结论　MCP 1在视网膜组织中的表达与DR的发生有密切关系。     

过氧化物酶增生体激活受体-γ激动剂对糖尿病大鼠血-视网膜屏障通透性的影响

目的观察过氧化物酶增生体激活受体-γ（PPAR-γ）激动剂罗格列酮对链脲佐菌素（STZ）诱导的早期糖尿病（DM）大鼠血-视网膜屏障通透性的影响。方法 90只Wistar大鼠随机分为正常对照组、DM组和DM＋罗格列酮组,每组30只。采用STZ腹腔内注射法制作DM模型。DM＋罗格列酮组造模后3d给予罗格列酮3mg/kg灌胃,每日1次,正常对照组和DM组大鼠以同样的方法给予同等剂量的DMSO灌胃。于给药后4、8、12周时处死各组大鼠各5只,进行伊凡思蓝（EB）左心室灌注后制备视网膜消化铺片并进行血-视网膜屏障通透性测定,对视网膜消化切片上视网膜血管壁的周细胞和内皮细胞进行计数,评估大鼠高血糖对视网膜毛细血管的影响。结果造模后4、8、12周,DM组和DM＋罗格列酮组大鼠的血糖水平较正常对照组明显升高,差异均有统计学意义（P〈0.01）。造模后DM组大鼠随着时间的延长,视网膜毛细血管壁周细胞减少,内皮细胞增多,毛细血管迂曲、扩张,血-视网膜屏障通透性增加（P〈0.01）,且视网膜血管的渗透值与正常对照组比较也明显增加,差异有统计学意义（P〈0.01）。DM＋罗格列酮组视网膜微血管病理损害明显减轻,血-视网膜屏障通透性较DM组和正常对照组明显降低,差异均有统计学意义（P〈0.01）,且该变化呈时间依赖性。结论作为一种外源性PPAR-γ激动剂,罗格列酮能减少视网膜毛细血管的渗透性,对血-视网膜屏障具有保护作用,可能成为治疗糖尿病视网膜病变的新药物。     

坎地沙坦对糖尿病大鼠视网膜VEGF和MCP-1表达的影响

目的:研究血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂坎地沙坦对糖尿病(DM)大鼠视网膜组织VEGF和MCP-1表达的影响。方法:链脲佐菌素(STZ)制备DM大鼠动物模型36只,随机分为DM模型组和坎地沙坦治疗组,另取18只正常SD大鼠作为正常对照组,每组均随机分为4,8,12wk3个亚组。视网膜铺片联合PAS染色观察视网膜微血管形态学变化,应用SABC免疫组织化学法检测坎地沙坦对大鼠视网膜组织VEGF和MCP-1表达的影响。结果:正常对照组视网膜血管网结构清晰,走行规则;DM模型组血管迂曲阻塞,走行不规则;治疗组见血管网迂曲情况较模型组明显改善,走行较规则。在对照组和模型4wk组中大鼠视网膜组织无VEGF和MCP-1阳性表达或只呈弱阳性表达;模型8wk和12wk组两者阳性表达明显增强,且随着病程延长呈递增趋势。治疗组两者的表达则均较同时期模型组明显减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:研究血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂坎地沙坦可降低DM大鼠视网膜VEGF和MCP-1的表达。     

脯氨酰羟化酶在糖尿病大鼠视网膜的表达及其意义

目的 观察探讨糖尿病(DM)大鼠视网膜组织中脯氨酰羟化酶(PHD-2)的表达及意义.方法 雄性Wistar大鼠108只,随机分为DM模型组和正常对照组,分别为60、48只.对DM模型组大鼠进行一次性腹腔注射1％链脲霉素枸橼酸(STZ)溶液建模,正常对照组腹腔注射等量的构橼酸缓冲液.造模后1、3、6个月,荧光显微镜下观察大鼠视网膜血管分布形态.造模后1～6个月,采用伊凡思蓝(EB)灌注视网膜铺片检测视网膜组织内EB浓度;免疫组织化学染色法观察大鼠视网膜PHD-2阳性染色的分布特点;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测大鼠视网膜中PHD-2、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果 荧光显微镜观察结果显示,正常对照组大鼠视网膜血管走行规则,浅深层血管形态清晰;DM模型组大鼠视网膜血管渗漏持续存在.造模后1～6个月,DM模型组大鼠视网膜血管外组织内EB含量较正常对照组明显增加,差异有统计学意义(t=3.810,2.722,2.845,2.342,2.456,3.823;P＜0.05).免疫组织化学染色结果显示,DM模型组及正常对照组大鼠视网膜中均可见PHD-2阳性染色,主要分布于视网膜内核层、神经节细胞层及血管壁.Western blot检测结果显示,DM模型组大鼠视网膜中PHD-2表达在造模后1、2个月时较正常对照组下降(t=16.230,16.390;P＜0.05);HIF-1a表达在造模后1、2、3个月时较正常对照组明显升高(t=27.073,36.709,10.176; P＜0.05);VEGF表达在造模后1～6个月均较正常对照组升高(t=13.547,31.984,21.897,8.912,9.019,14.046;P＜0.05).结论 PHD-2在DM大鼠视网膜组织中有丰富表达.PHD-2可能在糖尿病视网膜病变发生发展中有一定的调控作用,其作用途径及机制与VEGF作用通路有关.     

右美沙芬对糖尿病视网膜神经病变中Caspase-3表达的影响

目的 观察右美沙芬对糖尿病大鼠视网膜神经病变中Caspase-3表达的影响.方法 健康成年Sprague Dawley大鼠48只,12只作为正常对照组(D组),36只大鼠链脲佐菌素腹腔注射建立糖尿病大鼠模型,并随机分为糖尿病模型组(A组),10 mg·kg-1右美沙芬治疗组(B组;造模成功后一次性腹腔注射10 mg·kg-1右美沙芬),30 mg·kg-1右美沙芬治疗组(C组;造模成功后一次性腹腔注射30 mg·kg-1右美沙芬),每组各12只.各组分别于4周末、8周末各处死大鼠6只,行免疫组织化学法检测视网膜组织Caspase-3蛋白的表达.结果 视网膜Caspase-3光密度值:A组4周、8周时分别为0.256±0.031和0.374±0.234,B组分别为0.244±0.122和0.352±0.152,C组分别为0.174±0.021和0.256±0.138,D组分别为0.074±0.018和0.072±0.233.A组4周Caspase-3蛋白表达主要见于神经节细胞层,8周时阳性表达进一步增加,扩展到内核层.C组Caspase-3表达变化规律与A组基本一致,但4周、8周时阳性表达量均低于A组(均为P＜0.05),A组与B组间4周和8周时Caspase-3阳性表达量差异均无统计学意义(均为P＞0.05).D组4周、8周时大鼠视网膜上几乎无Caspase-3阳性表达.结论 早期糖尿病大鼠视网膜Caspase-3参与了糖尿病视网膜病变的发病机制,右美沙芬可以抑制Caspase-3蛋白的表达,对糖尿病视网膜病变有一定的治疗作用.     

褪黑素对糖尿病大鼠视网膜组织中氧化应激反应及ICAM-1表达的影响

目的观察褪黑素对糖尿病（DM）大鼠氧化应激和视网膜组织中细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达的影响。方法36只Wistar大鼠随机取10只作为正常对照组;其余26只制成DM模型,将造模成功的20只大鼠随机分为褪黑素组和DM组,每组10只。褪黑素组大鼠每日左下腹腔注射10 mg/kg褪黑素进行干预治疗,正常对照组和DM组大鼠不进行治疗。12周后测各组大鼠的体重、血糖、血清一氧化氮（NO）及血清超氧化物歧化酶（SOD）值,并观察大鼠视网膜形态以及ICAM-1表达的不同。结果12周后,与正常对照组比较,DM组和褪黑素组大鼠体重均明显下降（t=5.15,t=3.62;P〈0.05）,血糖均升高（t=69.03,t=45.78;P〈0.05）,而DM组和褪黑素组体重（t=1.88,P=0.09）和血糖（t=-1.41,P=0.19）比较,差异均无统计学意义。与正常对照组比较,DM组和褪黑素组大鼠血清中SOD、NO水平均明显下降（P〈0.05）;与DM组比较,褪黑素组大鼠血清SOD值、血清NO水平均明显升高（t=9.45,t=2.11,P〈0.05）。组织病理学检查显示,DM组和褪黑素组大鼠视网膜结构紊乱,白细胞黏附于血管内皮;免疫组织化学检测显示2组大鼠视网膜标本中ICAM-1颗粒表达于视网膜血管内皮细胞,但褪黑素组较DM组表达明显降低。结论褪黑素可显著提高DM大鼠体内抗氧化能力、降低炎症反应,对DM引起的视网膜损伤有一定的保护作用。     

辛伐他汀对糖尿病大鼠视网膜血管内皮钙黏蛋白表达的影响

目的观察链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病视网膜血管内皮钙黏蛋白（VE-cadherin）的表达及辛伐他汀对VE-cadherin表达的影响,探讨他汀类药物可能的非调脂性治疗作用。方法尾静脉注射STZ法建立糖尿病大鼠模型,造模成功48只。成模次日起,24只大鼠每日给予辛伐他汀20 mg/kg灌胃为辛伐他汀组,24只等量生理盐水灌胃为糖尿病组;另选24只大鼠作为正常对照组。分别在造模后2、5、8周各组取8只大鼠采用伊凡思蓝（EB）法检测视网膜的渗透性,免疫组织化学和Western blot法检测各组大鼠视网膜VE-cadherin的表达情况。结果与正常对照组比较,辛伐他汀组和糖尿病组大鼠体重明显下降,差异均有统计学意义（P〈0.01）,血糖显著上升,差异均有统计学意义（P〈0.01）。与糖尿病组大鼠比较,各时间点辛伐他汀组大鼠体重均明显上升,而血糖均显著下降（P〈0.05）。免疫组织化学分析证实,VE-cadherin在糖尿病组大鼠视网膜血管呈黄褐色阳性表达。Western blot分析表明随着糖尿病视网膜病变（DR）的发生发展,糖尿病组视网膜血管表达VE-cadherin的量显著减少,与正常对照组和辛伐他汀组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。糖尿病组和辛伐他汀组EB渗透量明显高于正常对照组（P〈0.01）,辛伐他汀组低于糖尿病组（P〈0.05）。结论STZ诱导的糖尿病大鼠视网膜血管中VE-cadherin表达量减少,辛伐他汀可改善这种改变,提示辛伐他汀对DR有预防和治疗作用。     

槲皮素对糖尿病大鼠视网膜单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的 探讨槲皮素干预糖尿病大鼠视网膜病变的机制.方法 清洁雄性Wistar大鼠,随机分为正常对照组和糖尿病动物组,将成模大鼠随机分为糖尿病组,导升明组,槲皮素组.治疗20周.观察糖尿病大鼠一般情况变化,视网膜血管铺片观察毛细血管内皮细胞数(E)和周细胞数(P),并计算E/P比值,免疫组织化学法观察MCP-1在视网膜的表达,ELISA法检测玻璃体内MCP-1浓度.结果 20周时,与糖尿病阴性对照组相比,槲皮素治疗组体重明显增加,周细胞数明显增多,E/P值明显降低.与导升明阳性对照组相比,槲皮素治疗组体重、周细胞数和E/P值无明显差异.20周时,正常对照组视网膜血管未见MCP-1阳性细胞表达糖尿病组走形迂曲的视网膜毛细血管壁上有大量MCP-1阳性细胞表达,而槲皮素和导升明组视煳膜血管铺片MCP-1表达情况与糖尿病组相比,无明显差别.20周时,正常大鼠玻璃体内存在少量MCP-1,糖尿病组、导升明组和槲皮素组大鼠玻璃体内含有大量MCP-1,相互之间无明显差异.结论 槲皮素对实验性大鼠视网膜病变有一定的治疗作用,但其作用不是通过抑制炎症介质MCP-1表达实现的.     

硫氧还蛋白在糖尿病大鼠视网膜中的动态表达

目的 观察硫氧还蛋白( thioredoxin,Trx)在糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠视网膜中的表达部位及动态变化规律.方法 成年Sprague Dawley(SD)大鼠随机分为2组,糖尿病组(DM组)一次性腹腔注射链脲佐菌素制作大鼠DM模型;对照组(NC组)注射同等剂量的柠檬酸缓冲液.在注射后4周、8周、12周,采用免疫组织化学法检测Trx在各组大鼠视网膜中的定位表达,采用Real-time PCR测定视网膜Trx mRNA表达.结果 免疫组织化学结果显示,NC组与DM组大鼠视网膜神经纤维层、神经节细胞层、内核层有Trx阳性表达,表达位于细胞浆.Real-time PCR结果显示正常大鼠视网膜有Trx mRNA的表达;与NC组相比,DM组各时间点TrxmRNA表达下降,4周时DM组Trx mRNA相对表达量为0.42±0.03,约为NC组(1.00±0.03)的0.42倍;8周时DM组Trx mRNA相对表达量为0.57±0.04,约为NC组(1.00±0.03)的0.57倍;12周时DM组Trx mRNA相对表达量为0.82±0.08,约为NC组(1.00±0.07)的0.82倍,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).DM组视网膜组织Trx mRNA在4～12周表达逐渐升高,至第12周时仍未达到正常水平,第4周与第12周相比差异有统计学意义(P=0.00).结论 在糖尿病视网膜病变时,Trx mRNA表达下降,说明氧化应激反应产生过多的活性氧使得Trx mRNA表达量下降.随着DM病程的延长,视网膜Trx mRNA表达量逐渐升高,这可能是Trx系统功能下降、自由基增多引起的一种代偿性反应.     

玻璃体内注射色素上皮源性因子对大鼠早期糖尿病视网膜病变的保护作用

目的　观察玻璃体内注射色素上皮源性因子（ｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ-ｄｅｒｉｖｅｄｆａｃｔｏｒ,ＰＥＤＦ）对ＳＤ糖尿病大鼠视网膜ＰＥＤＦ、血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ）、炎性相关因子细胞间黏附分子-１（ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒｃｅｌｌａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅ-ｃｕｌｅ-１,ＩＣＡＭ-１）和单核细胞趋化蛋白-１（ｍｏｎｏｃｙｔｅｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎ-１,ＭＣＰ-１）以及细胞通透性相关因子紧密连接蛋白-１（ｚｏｎｕ-ｌａｏｃｃｌｕｄｅｎｓ-１,ＺＯ-１）和蛋白激酶Ｂ（ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＢ,ＰＫＢ,又称Ａｋｔ）表达的影响,探讨ＰＥＤＦ对早期糖尿病视网膜病变的保护作用。方法　选取６～８周龄ＳＤ大鼠６０只,随机分为４组:正常对照组（ＣＯＮ组）、糖尿病组（ＤＭ组）、糖尿病生理盐水注射组（ＤＭ＋ＮＳ组）和糖尿病ＰＥＤＦ注射组（ＤＭ＋ＰＥＤＦ组）。链脲佐菌素诱导建立糖尿病模型后第１周、２周、３周时,ＤＭ＋ＰＥＤＦ组大鼠玻璃体内注射ＰＥＤＦ,而ＤＭ＋ＮＳ组注射同样体积的生理盐水。第４周时处死大鼠,摘出眼球,进行视网膜组织病理学及电镜观察。并采用免疫组织化学方法检测视网膜ＰＥＤＦ、ＶＥＧＦ、ＩＣＡＭ-１、ＭＣＰ-１以及ＺＯ-１、Ａｋｔ的表达情况。结果　糖尿病大鼠均造模成功。４周糖尿病病程尚不能导致明显的视网膜新生血管形成。在透射电镜下,ＤＭ组大鼠视网膜可见神经节细胞水肿,线粒体肿胀变大,基质肿胀明显,可见大部分或全部的嵴消失,部分双侧膜融合,粗面内质网扩张,而玻璃体内ＰＥＤＦ注射可以明显地改善这一病理改变。ＤＭ组大鼠ＰＥＤＦ主要表达于视网膜神经纤维层、神经节细胞层以及内丛状层、光感受器基质以及色素上皮层、脉络膜等部位;ＶＥＧＦ主要表达于神经节细胞层,ＩＣＡＭ-１主要表达在光感受器层,ＭＣＰ-１主要表达在视网膜内层细胞,包括节细胞层和内核层,ＺＯ-１蛋白主要表达于内核层的细胞以及神经节细胞,Ａｋｔ主要表达于内丛状层以及脉络膜的细胞浆中。同ＣＯＮ组相比,ＤＭ组、ＤＭ＋ＮＳ组视网膜中ＰＥＤＦ、ＶＥＧＦ表达差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）,而ＩＣＡＭ-１、ＭＣＰ-１表达增加,ＺＯ-１、Ａｋｔ表达减少,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。ＤＭ＋ＰＥＤＦ组大鼠视网膜中ＰＥＤＦ、ＶＥＧＦ的表达较ＤＭ组和ＤＭ＋ＮＳ组差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）,但ＩＣＡＭ-１、ＭＣＰ-１表达减少,ＺＯ-１、Ａｋｔ表达增多,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。结论　ＰＥＤＦ可以明显地改善糖尿病视网膜病变早期视网膜神经节细胞的损害,通过减少炎性因子和增加细胞连接蛋白而减轻血-视网膜屏障的破坏,从而对早期糖尿病视网膜病变起一定的防治作用。     

An endothelin type A receptor antagonist reverses upregulated VEGF and ICAM-1 levels in streptozotocin-induced diabetic rat retina

Diabetic retinopathy, a cause of blindness, is often associated with the upregulation of vascular endothelial growth factor (VEGF) in the retina. Recently, leukocyte adhesion (leukostasis) is claimed for the occlusion of retinal capillary vascularity, which ultimately assists in the progression of diabetic retinopathy. In addition, intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1), a representative factor for leukostasis, is increased in diabetic retina. Endothelin (ET)-1, a potent vasoconstrictor peptide, is closely linked to the pathogenesis of diabetic retinopathy. Different therapeutic interventions concerning VEGF have already been proposed to prevent diabetic retinopathy. However, no study has yet reported concerning the effects of ET-1 receptor antagonist on the upregulated VEGF and ICAM-1 in morphologically intact diabetic retina. The current study investigated the effect of ET(A) receptor antagonist (TA-0201; 1 mg kg(-1) day(-1)) on the expressions of VEGF and ICAM-1 in rat diabetic retina. Diabetes was induced by intraperitoneal injection of streptozotocin (70 mg/kg) in Sprague-Dawley rats, whereas control rats (Cont) received only citrate buffer. After 1 week, the streptozotocin-administered rats were randomly divided into two groups: ET(A) receptor antagonist-treated group (DM+TA-0201) and saline-treated group (DM+vehicle). After the treatment for 4 weeks, the retina was removed from the eyeball. In DM+vehicle group, the VEGF expression of retina was significantly increased (33.5 pg/mg) in comparison with that in the Cont group (25.1 pg/mg), and the upregulation of VEGF was reversed in DM+TA-0201 group (26.9 pg/mg), a phenomenon consistent with the change in VEGF mRNA levels. The expression of retinal ICAM-1 was increased in DM+vehicle group (55.1 pg/mg) compared with Cont group (43.8 pg/mg), and ET antagonism completely blocked this increase (43.8 pg/mg). Moreover, an increased leukostasis by 3.3-fold in DM+vehicle retina was returned to the control level by ET antagonism. In the current study, there was no obvious retinal morphological alteration from both the hematoxylin and eosin staining and the FITC-dextran angiography. Thus, ET(A) receptor antagonist might be useful in preventing the progression of diabetic retinopathy, as evidenced by suppressing the increase in VEGF and ICAM-1 levels as well as leukostasis in morphologically intact diabetic retina.     

糖尿病大鼠视网膜PEDF表达与神经退行性改变

目的观察色素上皮源性因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)在糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠视网膜中的表达以及视网膜神经细胞损伤情况,探讨早期糖尿病视网膜病变发病机制。方法 72只SD大鼠随机分为正常对照组、DM0.5个月组、DM1个月组、DM3个月组及DM5个月组。DM组大鼠利用链脲佐菌素建立DM模型。RT-PCR及Westernblot检测各组大鼠视网膜PEDFmRNA及蛋白的表达,TUNEL法行原位细胞凋亡检查,透射电镜观察视网膜超微结构改变。结果 PEDFmRNA及蛋白在正常大鼠视网膜的表达量分别为0.410±0.016、0.420±0.030;DM0.5个月组表达未见明显改变,分别为0.399±0.032、0.399±0.032,与正常对照组比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05);DM1个月组PEDFmRNA及蛋白表达开始减少,分别为0.344±0.044、0.375±0.028,与正常对照组比较,差异均有显著统计学意义(均为P<0.01);DM5个月组PEDFmRNA及蛋白表达量约为正常对照组的1/2,差异均有显著统计学意义(均为P<0.01)。TUNEL染色显示凋亡阳性细胞主要位于视网膜神经节细胞层,随病程延长逐渐增多。透射电镜显示DM0.5个月组仅视网膜神经纤维层发生轻微超微结构损伤,随病程延长,视网膜全层发生神经退行性病变。结论在发生临床可见的微血管病变前,DM大鼠已发生视网膜神经退行性改变,PEDF在视网膜的表达逐渐减少,提示其可能在早期糖尿病视网膜病变的发生、发展中发挥重要作用。     

Raf-1激酶抑制蛋白(RKIP)对糖尿病大鼠视网膜神经损伤的保护作用

目的　探讨Raf-1激酶抑制蛋白(raf-1 kinase inhibitory protein,RKIP)通过p38-MAPK通路对糖尿病(DM)大鼠视网膜神经损伤的保护作用。方法　雄性SD大鼠48只,采用随机数字表法将大鼠分为对照组、空白组、糖尿病组、RKIP组,每组12只;空白组、糖尿病组和RKIP组大鼠腹腔注射链脲佐菌素建立DM模型。RKIP组和空白组于模型建成第2周玻璃体内分别注射携带RKIP基因片段重组慢病毒(LV-RKIP)和等量空白病毒,对照组和糖尿病组注射等量生理盐水。注射10周后利用Western blot和免疫荧光化学检测各组RKIP、p38丝裂原激活蛋白激酶(p38-mitogen-activated protein kinase,p38-MAPK) 、胶质细胞谷氨酸转运体(L-glutamate/L-asparate transporter,GLAST)和谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)在视网膜中的表达,HE染色检测各组视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)密度。结果　与对照组相比,糖尿病组p38-MAPK表达升高,RKIP、GLAST、GS表达下降,RGC密度减少(均为P<0.01);与糖尿病组相比,空白组各指标差异均无统计学意义(均为P>0.05),RKIP组p38-MAPK表达降低,RKIP、GLAST、GS表达升高,RGC密度增多(均为P<0.01)。结论　糖尿病视网膜病变早期注射RKIP可降低视网膜细胞中p38-MAPK表达量,提高GLAST、GS表达活性,改善Müller细胞功能,减少RGC损害,提示RKIP对糖尿病视网膜病变中视网膜神经细胞具有保护作用。     

贝那普利对糖尿病大鼠视网膜微血管病变的保护作用

目的:探讨贝那普利(benazepril,BZ)对糖尿病大鼠视网膜微血管病变的保护作用及机制。方法:链脲佐菌素ip制备糖尿病大鼠模型,分为糖尿病组(DM)、贝那普利治疗组(BZ),同时设立正常对照组(Con)。治疗组每天灌胃给予BZ10mg/kg。24wk后放射免疫法测定血浆AngⅡ水平,免疫组织化学法和Westernblot技术检测视网膜VEGF蛋白表达,透射电镜观察视网膜血管基底膜厚度变化。结果:与Con组相比,DM组大鼠血浆AngⅡ水平明显增高(P<0.01),视网膜VEGF蛋白表达显著增强(P<0.01),视网膜微血管基底膜明显增厚;与DM组相比,BZ治疗后大鼠血浆AngⅡ水平明显降低(P<0.05),视网膜VEGF蛋白表达则显著减弱(P<0.01),视网膜微血管基底膜增厚明显减轻。结论:BZ可通过抑制血浆AngⅡ水平,减少糖尿病大鼠视网膜组织VEGF表达,抑制视网膜微血管基底膜增厚。     

SnoN蛋白及TGF-β在早期糖尿病大鼠视网膜组织中表达及意义

目的　观察ＳｎｏＮ蛋白及ＴＧＦ-β在糖尿病大鼠视网膜上的表达,探讨ＳｎｏＮ蛋白及ＴＧＦ-β与糖尿病视网膜病变（ｄｉａ-ｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＤＲ）的关系,为ＤＲ发病机制的研究提供新的理论依据。方法　选择健康雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠２０只,随机分为正常对照组与糖尿病（ＤＭ）组,每组各１０只。采用一次性腹腔注射５０ｍｇ?ｋｇ－１链脲佐菌素（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ,ＳＴＺ）的方法建立ＤＭ大鼠模型,正常对照组一次性给予等体积柠檬酸三钠-柠檬酸缓冲液腹腔注射。分别于造模后８周和１２周处死各组大鼠,均完整摘除各组大鼠的左眼球制成眼杯,采用免疫组织化学方法检测各组大鼠视网膜上ＳｎｏＮ蛋白及ＴＧＦ-β蛋白的表达。结果　造模后８周和１２周,ＤＭ组大鼠血糖值分别为（２２．６４±３．５７）ｍｍｏｌ?Ｌ－１、（２４．０８±１．６０）ｍｍｏｌ?Ｌ－１,均明显高于正常对照组的（４．６４±０．９１）ｍｍｏｌ?Ｌ－１、（４．５０±０．６６）ｍｍｏｌ?Ｌ－１,差异均有显著统计学意义（均为Ｐ＜０．０１）。正常对照组大鼠视网膜上ＴＧＦ-β无表达或弱表达,在造模后８周和１２周时,ＤＭ组大鼠视网膜上ＴＧＦ-β的ＯＤ值分别为０．１２１０±０．００５６、０．１５５０±０．００７０,均较正常对照组（０．０２２０±０．００７９、０．０２５０±０．００７０）明显增加（均为Ｐ＜０．０１）。正常对照组大鼠视网膜上ＳｎｏＮ蛋白高表达,在造模后８周和１２周时,ＤＭ组大鼠视网膜上ＳｎｏＮ的ＯＤ值分别为０．４１２０±０．０１１３、０．２１４０±０．００６９,均较正常对照组（０．９４５０±０．００７０、０．９４４０±０．００５１）明显降低（均为Ｐ＜０．０１）,且随着病程的延长,降低更明显。结论　ＳｎｏＮ蛋白对ＴＧＦ-β信号通路起负反馈抑制作用,能降低ＴＧＦ-β信号的强度和持续时间,因此对ＤＲ的防治具有重要意义。