骨性关节炎患者关节软骨hMLH1启动子区甲基化水平

目的:通过对骨性关节炎(osteoarthritis,OA)患者关节软骨人类错配修复基因1(human MutL homologue1,hMLH1)启动子区甲基化状态及hMLH1蛋白表达的检测,探讨hMLH1启动子区甲基化在OA发生发展中的作用。方法:采用亚硫酸氢钠法处理基因组DNA,甲基化特异性PCR检测hMLH1基因启动子甲基化情况;免疫组织化学方法检测hMLH1蛋白的表达。结果:OA患者组关节软骨hMLH1启动子区甲基化阳性率明显高于健康人对照组(χ2=30.634,P<0.001);OA患者组关节软骨hMLH1蛋白表达率明显低于健康人对照组(χ2=37.724,P<0.001);OA患者关节软骨hMLH1启动子区启动子甲基化与蛋白表达呈显著负相关(rs=-0.554,P<0.001)。结论:OA患者关节软骨hMLH1启动子区发生了甲基化。其高甲基化状态影响了hMLH1蛋白的表达,可能参与OA疾病的发生发展。     

LTF基因在胃癌细胞株BGC823中的表达及其与启动子甲基化的相关性

目的：检测Lactotransferrin（LTF）基因在胃癌细胞株BGC823内的甲基化和表达情况,探讨LTF的DNA启动子区甲基化异常与其在胃癌内表达的相关性。方法：用亚硫酸氢盐测序PCR方法（BSP）检测BGC823启动子区甲基化状态,使用real-timePCR和Westernblot法分别检测LTF基因在BGC823内的mRNA和蛋白表达水平。同时使用去甲基化剂5-aza-CdR处理胃癌细胞株,观察给药前后的DNA甲基化状态和mRNA表达情况。结果：BGC823启动子甲基化率达53.6%,使用5-aza-CdR后,药物处理的两组（药物浓度2μmol/L组和药物浓度10μmol/L组）和对照组甲基化率差异和LTF的mRNA表达差异有统计学意义（P＜0.05）,并且随着BGC823启动子甲基化程度的下降,其mRNA和蛋白表达增加。而药物处理组间差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：LTF基因在胃癌细胞株BGC823内表现为较高甲基化状态,而且LTF的表达和其启动子区甲基化情况相关,使用去甲基化剂能逆转DNA的甲基化情况从而使其mRNA重新表达。     

胃癌细胞MGC803中LTF基因的表达及其启动子甲基化相关性研究

目的 检测胃癌细胞株MGC803内乳铁蛋白（LTF）基因的甲基化和表达情况,探讨LTF的DNA 启动子区甲基化异常 与其在胃癌内表达的相关性。方法 用亚硫酸氢盐测序PCR 方法检测MGC803 启动子区甲基化状态,使用real-time PCR 和Western blot 分别检测LTF 在MGC803内的mRNA 和蛋白表达水平。同时使用去甲基化剂5-aza-CdR 处理胃癌细胞株,观察给药前后的DNA 甲基化状态和mRNA 表达情况。结果 MGC803 启动子甲基化率达59.8%,使用5-aza-CdR 处理的两组（2滋mol/L组和10滋mol/L组）和空白对照组甲基化率差异、LTF 的mRNA表达差异均有统计学意义（均P＜0.05）,并且随着MGC803启动子甲基化程度的下降,其mRNA 和蛋白表达增加;而不同浓度药物处理组间差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论 LTF 基因在胃癌细胞株MGC803 内表现为较高甲基化状态,而且LTF的表达和其启动子区甲基化情况相关,使用去甲基化剂能逆转DNA 的甲基化情况从而使其mRNA 重新表达。     

维生素 D 受体基因启动子甲基 化异常与婴儿尿路感染相关性 研究

目的研究维生素D受体（VDR）基因启动子甲基化异常与婴儿尿路感染的关系。方法选择急性尿路感染患儿32例（尿路感染组）和同期健康体检婴儿30例（健康对照组）。采用荧光定量PCR法检测VDR、DNA甲基化转移酶（DNMTs）mRNA表达水平,重亚硫酸氢钠测序技术检测VDR基因启动子的甲基化水平。结果尿路感染组患儿VDRmRNA表达水平高于健康对照组婴儿,DNMT1mRNA表达水平低于健康对照组婴儿,两组比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）。两组DNMT3a、DNMT3bmRNA表达水平比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。尿路感染组患儿VDR基因启动子甲基化水平显著低于健康对照组婴儿,两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论尿路感染患儿VDRmRNA表达水平升高,VDR基因启动子的甲基化水平降低,VDR基因甲基化异常与婴儿尿路感染相关。     

胃癌患者hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化状态及其与蛋白表达的关系

目的：探讨胃癌组织中hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化及蛋白的表达与胃癌生物学行为的关系,并分析hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化与其蛋白表达的相关性。方法：采用甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR,MSP）技术和免疫组织化学SP法检测45例患者胃癌组织、正常胃组织中hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化情况及蛋白的表达。结果：hMLH1基因启动子区CpG岛在胃癌及正常组织中的甲基化阳性率分别为33.3%和0（P〈0.05）;hMLH1蛋白在胃癌及正常组织中的阳性率分别为57.8%和95.2%（P〈0.05）;hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化及蛋白的表达与胃癌的临床病理参数无关（P〉0.05）;hMLH1基因启动子甲基化与hMLH1蛋白表达呈明显的负相关（P〈0.05）。结论：hMLH1基因启动子区CpG岛的异常甲基化是引起蛋白表达缺失的主要原因,hMLH1蛋白表达缺失与胃癌的发生有关。     

散发性结直肠癌中hMLH1基因启动子区CpG岛MVPs图谱的绘制与分析

目的 绘制散发性结直肠癌患者hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化可变位点(methylation variable positions, MVPs)图谱,分析MVPs图谱与hMLH1蛋白表达的关系,寻找CpG岛中影响蛋白表达的关键CpG位点.方法 采用重亚硫酸盐测序方法检测患者hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化状态;采用免疫组化方法检测相应蛋白表达水平.结果 CpG岛1(CGI-Ⅰ)甲基化阳性率为20 %(6/30);CpG岛2(CGI-Ⅱ)甲基化阳性率为13.33 %(4/30).hMLH1蛋白表达阳性率为50 %(15/30).经χ2检验,CGI-Ⅰ甲基化与hMLH1蛋白表达缺失存在显著性差异(P＜0.05)、CGI-Ⅱ甲基化与hMLH1蛋白表达缺失无差异(P＞0.05).结论 CGI-Ⅰ甲基化可能导致hMLH1蛋白不表达,其中1～28 CpG位点为导致hMLH1蛋白表达缺失的关键区域.     

乳腺浸润性导管癌中CDH1基因甲基化状态及其临床意义

目的 探讨CDH1启动子基因甲基化在乳腺浸润性导管癌中的意义.方法 采用甲基特异性PCR和免疫组织化学染色方法分别检测乳腺癌组织、癌旁组织和乳腺正常组织中CDH1基因启动子甲基化状况及上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)表达情况.收集相关临床病理资料(遗传背景、年龄、肿瘤大小、腋窝淋巴结转移情况、肿瘤细胞分级、临床分期和分子亚型),分析CDH1基因甲基化在乳腺癌中的意义.结果 250例乳腺癌患者共发现113例CDH1基因启动子甲基化,甲基化率为45.20％,CDH1基因启动子甲基化组和非甲基化组相比E-cadherin蛋白表达水平明显减低,差异有统计学意义(x2 =21.360,P＜0.01).单因素分析结果显示,CDH1基因甲基化组和非甲基化组在腋窝淋巴结转移(x2=19.086,P＜0.01)、肿瘤组织学分级(x2=8.487,P=0.014)、人表皮生长因子受体2(CerbB-2)表达(x2=9.475,P=0.002)和分子分型(x2 =25.482,P＜0.01)比较,差异有统计学意义.COX回归分析显示,CDH1基因启动子甲基化和非甲基化组5年生存率比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 CDH1基因启动子甲基化引起基因mRNA表达下降,CDH1基因甲基化与乳腺癌的腋窝淋巴结转移相关,提示CDH1基因启动子甲基化在乳腺癌疾病进程中发挥了一定作用.     

5-羟色胺转运体与肠易激综合征患者躯体心理症状的相关性分 析简

目的 研究5-羟色胺转运体（SERT）与肠易激综合征（IBS）患者躯体和心理症状是否存在相关性.方法 选取2010年1月～2012年12月佛山市第一人民医院IBS患者154例为病例组,并按不同症状分为3个亚组（c-IBS组65例、D-IBS组47例、A-IBS组42例）,选择同期健康志愿者65名作为对照组.应用心理症状自评量表（SCL-90）来评价研究对象的心理状态;采用实时定量PCR法测定SERT信使RNA（mRNA）表达量,Western印迹法测定SERT蛋白表达水平.结果 SERT蛋白表达量：病例组（0.81±0.45）和对照组（0.79±0.47）比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.SERT mRNA转录表达量：病例组（0.46±0.25）和对照组（0.42±0.28）比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.C-IBS组SERT蛋白表达量（0.98±0.51）及mRNA表达量（0.58±0.23）均显著高于D-IBS组[（0.71±0.40）、（0.41±0.25）]、A-IBS组[（0.67±0.35）、（0.37±0.23）]和健康对照组[（0.79±0.47）、（0.42±0.28）],差异均有统计学意义（P＜0.05）.SERT蛋白表达量与躯体化症状（r=-0.681,P＜ 0.05）、敌意因子（r=-0.663,P＜ 0.05）、焦虑因子（r=-0.711,P＜0.05）和抑郁因子（r=-0.812,P＜0.05）呈负相关,与强迫症状、恐惧、偏执、人际关系敏感和精神病因子均无明显相关性（P＞0.05）.结论 IBS患者SERT的mRNA及蛋白量表达水平与患者的躯体和心理症状密切相关,越低则越容易出现躯体化症状、焦虑等情绪表现.     

5’-氮杂-2’-脱氧胞苷对 HT-29 和 LoVo 结直肠癌细胞株中 Wif-1 基因甲基化状态、mRNA 表达及蛋白表达的影响

目的：探讨甲基化酶抑制剂5’-氮杂-2’-脱氧胞苷（5’-Aza-2’-deoxycytidine,5’-Aza-CdR）对结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中W if-1基因甲基化水平及蛋白表达的影响。方法用不同浓度（0.5、1.0、1.5μmol/L）5’-Aza-CdR处理结直肠癌细胞株HT-29和LoVo。应用TaqMan探针为基础的实时定量PCR（Methylight）方法、SYBR Green PCR方法及蛋白印迹实验（Western blot）检测药物处理前后HT-29和LoVo细胞中W if-1基因的甲基化状态、mRNA和蛋白表达。结果 Methylight检测HT-29和LoVo细胞中Wif-1蛋白在药物作用后异常甲基化得到逆转;实时荧光定量PCR和Western Blot检测到0.5、1.0、1.5μmol/L 5’-Aza-CdR处理后W if-1基因mRNA和蛋白重新表达,实时荧光定量PCR检测DMSO对照组和不同浓度5’-Aza-CdR（0.5、1.0、1.5μmol/L）在HT-29细胞株相对表达量分别为（1.000±0.000）、（1.207±0.052）、（1.790±0.033）和（2.016±0.123）;在LoVo细胞株相对表达量分别为（1.000±0.000）、（1.294±0.048）、（1.893±0.061）和（2.204±0.041）。Western blot检测Wif-1蛋白检测DMSO对照组和不同浓度5’-Aza-CdR在HT-29细胞株相对表达量分别为（0.456±0.040）、（0.511±0.025）、（0.857±0.031）和（0.934±0.047）;LoVo细胞株相对表达量分别为（0.842±0.032）、（0.844±0.044）、（0.854±0.037）和（0.856±0.034）。以上作用均呈时间、剂量±赖性,W if-1基因mRNA在HT-29细胞株表达和LoVo细胞株表达差异均有高度统计学意义（F=144.823,P=0.000;F=476.195,P=0.000）。Wif-1蛋白表达在HT-29细胞株表达差异有高度统计学意义（F=129.674,P=0.000）,但Wif-1蛋白表达在LoVo细胞株表达差异无统计学意义（F=0.117,P=0.948）。结论结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中W if-1启动子甲基化可能是导致该基因表达下调甚至失活的主要原因。5’-Aza-CdR能够较成功地逆转结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中W if-1基因的甲基化状态?     

金属硫蛋白3基因启动子甲基化与自闭症的相关性

目的:探讨金属硫蛋白3(MT3)基因启动子区甲基化及基因表达与自闭症的关系及其意义。方法:采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对33例自闭症患者和39例对照组儿童的外周血白细胞中MT3基因启动子区域子42个CpG位点甲基化进行定量检测,并采用实时荧光定量PCR技术(RT-PCR)检测其MT3mRNA的水平。结果:自闭症患者中15个CpG位点甲基化程度与对照组相比较差异有统计学意义(P均<0.05),与对照组儿童相比,MT3mRNA表达水平在自闭症患者中增加(P<0.01)。MT3基因部分CpG位点(CpG39.40.41.42.43)甲基化改变与其mRNA相对表达量呈负相关(r=-0.308,P<0.05)。结论:自闭症儿童MT3基因部分CpG位点低甲基化改变可能会引起该基因mRNA改变,这为自闭症的病因学研究提供了新的思路。     

甲基化抑制剂5－Aza－CdR对肺癌A549细胞株DNMT1及c－myc、MKi－67、p53基因表达的影响

目的：探讨甲基化抑制剂5－氮杂－2′脱氧胞苷（5－Aza－CdR）对肺癌A549细胞株中DNA甲基转移酶1（DNMT1）、c－myc、MKi－67和p53基因表达的影响。方法将肺癌A549细胞株分为两组,实验组采用5－Aza－CdR处理,对照组不加药处理;药物处理72 h后,采用FQ－PCR技术检测A549细胞株DNMT1及c－myc、MKi－67、p53基因mRNA的表达,Western blot检测DNMT1及c－myc、MKi－67、p53蛋白的表达。结果实验组DNMT1、c－myc和MKi－67mRNA的表达量明显低于对照组,而p53 mRNA的表达量明显高于对照组,两组比较差异均有统计学意义（ P＜0.01）;实验组DNMT1、c－myc和MKi－67蛋白的表达量明显低于对照组,而p53蛋白的表达量明显高于对照组,两组比较差异均有统计学意义（ P＜0.01）。结论甲基化抑制剂5－Aza－CdR可使肺癌A549细胞中DNMT1、c－myc、MKi－67基因表达降低,p53基因表达升高,这可能与基因启动子区域出现的去甲基化有关,可为去甲基化药物临床治疗肺癌提供理论依据。     

印迹基因PHLDA2在孕妇子痫前期胎盘中的差异表达和甲基化状态

 了解印迹基因PHLDA2在孕妇子痫前期胎盘中表达水平及甲基化状态变化,我们收集2017年6月-2018年12月于复旦大学附属妇产科医院分娩产妇的临床资料和胎盘组织,分为早发型子痫前期4例,晚发型子痫前期16例,正常对照组30例。采用Real-time PCR和焦磷酸甲基化测序检测和比较三组胎盘组织中印迹基因PHLDA2的相对表达量和甲基化情况。结果 发现,与对照组比较,早发型子痫前期PHLDA2 mRNA的相对表达量差异无统计学意义（P=0.406）,胎盘组织中PHLDA2启动子区甲基化程度差异性增加（P<0.001）;而晚发型PHLDA2 mRNA的相对表达量有差异性下降（P=0.019）,胎盘组织中PHLDA2启动子区甲基化程度差异性增加（P<0.001）。推测子痫前期孕妇胎盘组织中PHLDA2基因的低表达、启动子区高甲基化可能与子痫前期的发病有关。     

错配修复基因启动子甲基化和蛋白表达在葡萄胎的发生及恶变中的作用

目的探讨错配修复基因hMLH1和hMSH2启动子甲基化和蛋白表达在葡萄胎的发生及恶变中的作用.方法用甲基化敏感性核酸内切酶HpaⅡ酶切-PCR法,分析正常早孕人流绒毛、部分性葡萄胎(PM)、完全性葡萄胎(CM)和侵蚀性葡萄胎(IM)hMLH1和hMSH2启动子甲基化情况;免疫组化检测hMLH1和hMSH2原位蛋白表达.结果在正常早孕绒毛、PM、CM和IM组织中,hMLH1和hMSH2均表达于细胞滋养细胞,合体滋养细胞大多表达阴性,极少数为弱阳性.正常早孕绒毛组织均未发现hMLH1和hMSH2启动子甲基化,而hMLH1和hMSH2表达全部阳性,阳性率为100%,与PM、CM组织相比,启动子甲基化和蛋白表达均存在显著性差异(P＜0.05).IM中hMLH1和hMSH2启动子甲基化发生率分别为80.0%(12/15)和73.3%(11/15),与PM、CM相比无显著性差异(P＞0.05);IM hMLH1蛋白表达阳性率为54.5%(6/11),与PM、CM相比无显著性差异(P＞0.05);而hMSH2蛋白表达阳性率为36.4%(4/11),明显弱于CM,两者比较有显著性差异(P=0.044).CM和IM组织中hMSH2启动子甲基化与其蛋白表达间存在相关性(P值分别=0.001和0.039).结论hMLH1和hMSH2的高表达对正常细胞滋养细胞基因组的稳定性起着重要的作用;hMLH1和hMSH2启动子甲基化的发生和蛋白表达的缺失参与了葡萄胎的发生.     

刺猬信号基因HHIP启动子区甲基化与汉族老年骨质疏松症的相关性

目的 探讨老年骨质疏松症患者外周血中Hedgehog相互作用蛋白（HHIP）的启动子区甲基化。方法 选取2017年7月～2019年7月我院收治的102例汉族老年性骨质疏松症（SOP）患者为观察组,并选取同期于我院体检中心体检的100例汉族老年健康者为对照组。检测两组患者的血清骨代谢标记物I型前胶原氨基端肽（P1NP）和β骨原交联（β-CrossLaps）的水平以及血钙含量;分离两组患者外周血单个核细胞,荧光定量PCR检测HHIP、SHH、PTCH1、SMO、Gli1和Gli2的mRNA表达量;使用甲基化酶法检测单个核细胞中目标基因的启动子区甲基化状态,实时荧光定量RTqPCR检测目标基因表达。分析以上指标之间的相关性。结果 观察组SHH、PTCH1、SMO和Gli -mRNA在单个核细胞中下调,而HHIP的mRNA在单个核细胞中上调约4倍（均P＜0.05）。观察组中HHIP基因启动子区甲基化水平显著低于对照组（P＜0.05）。观察组的血钙低于对照组,而血清P1NP和β-CrossLaps显著高于对照组（均P＜0.05）。HHIP启动子区的甲基化水平与P1NP和β-CrossLaps呈负相关（均P＜0.05）。结论 外周血单个核细胞中刺猬信号基因的表达和HHIP的甲基化水平在汉族老年骨质疏松症诊断中具有一定价值,其水平与骨代谢异常具有相关性。     

Runx3基因启动子甲基化及其蛋白表达与喉癌的关系

目的探讨Runx3基因启动子甲基化状态及其蛋白表达与喉癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组化SP法检测55例喉癌组织及癌旁正常黏膜组织中Runx3DNA的表达,并用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测Runx3基因启动子甲基化情况。结果55例喉癌组织标本中Runx3基因蛋白的表达较癌旁正常组织中表达明显降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;癌旁正常黏膜组织中无Runx3基因启动子的甲基化,喉癌组织中有32例（58.2%）检测到Runx3基因启动子的甲基化,2者比较差异有统计学意义（P〈0.05）;喉癌组织中Runx3基因启动子甲基化及Runx3蛋白的表达与性别、临床分型及分级、有无淋巴结转移均无关（均P〉0.05）;喉癌组织中Runx3基因启动子甲基化与Runx3蛋白表达呈负相关（r=-0.7092,P〈0.01）。结论Runx3基因启动子甲基化是其基因失活的可能机制之一,在喉癌的发生中起重要作用。     

类风湿关节炎患者外周血TWEAK基因启动子区甲基化状态及其表达

目的:通过检测外周血肿瘤坏死因子样凋亡弱诱导剂(tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis,TWEAK)基因DNA甲基化水平、mRNA表达水平及血清蛋白浓度,探究TWEAK基因与类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)发病机制的关联。方法:采用MassARRAY法检测112例RA患者和86例匹配的健康志愿者外周血TWEAK基因DNA甲基化水平,采用实时荧光定量PCR法检测外周血TWEAK基因mRNA表达水平,采用酶联免疫吸附测定法检测血清TWEAK蛋白浓度。比较RA组和健康对照组TWEAK基因DNA甲基化水平、mRNA表达水平及血清蛋白浓度,并分析其与疾病活动度的关系。结果:RA组TWEAK基因总体甲基化水平和CpG_11、CpG_17.18.19.20、CpG_40.41.42位点甲基化水平高于健康对照组(P=0.002,P=0.01,P=0.006,P=0.002),高疾病活动度组CpG_55.56位点甲基化水平高于中低疾病活动度组(P=0.041)。RA组外周血TWEAK基因mRNA表达水平低于健康对照组(P=0.023),高疾病活动度组TWEAK基因mRNA表达水平低于中低疾病活动度组(P=0.035)。RA组血清TWEAK蛋白浓度与健康对照组差异无统计学意义(P=0.508), 但其与mRNA表达水平呈正相关(r=0.482,P<0.001)。结论:TWEAK基因与RA的发病和病情活动程度密切相关,其高甲基化状态可能为调控mRNA低表达的表观遗传学机制之一,可作为临床监测和评价RA病情的重要指标之一。     

散发性结直肠癌中hMLH1基因甲基化的实验研究

[目的]检测散发性结直肠癌患者hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化状态,分析该基因甲基化与患者临床病理特征的相关性.[方法]采用重亚硫酸盐修饰测序法检测患者肿瘤组织和配对正常组织hMLH1基因甲基化状态,采用免疫组化方法检测其蛋白表达水平,并将甲基化状态与相应的蛋白表达水平及临床病理学资料进行统计学分析.[结果]正常组织的所有CpG位点均为非甲基化.肿瘤组织中CpG岛1(CGI-Ⅰ)甲基化阳性率为20%(6/30).hMLH1蛋白表达阳性率为50%(15/30).经X2检验,CGI-Ⅰ甲基化组与非甲基化组的hMLH1蛋白表达阴性率有显著性差异(P<0.05);低分化组的甲基化阳性率(100%)显著高于高中分化组(14.29%)(P<0.05).[结论]hMLH1基因启动子区CpG岛1甲基化可能导致hMLH1蛋白不表达;甲基化还与肿瘤的分化程度存在关联,提示甲基化还可作为结直肠癌预后的参考指标之一.     

乳腺癌患者外周血Metadherin基因表达的检测及其初步应用价值探讨

目的 建立检测Metadherin（MTDH）mRNA的SYBR GreenⅠ实时定量PCR的方法,了解乳腺癌患者外周血中MTDH mRNA的表达水平及其与各临床病理特征之间的关系.方法 利用相对定量的方法检测80例乳腺癌患者及健康女性人群外周血中MTDH mRNA 相对于GAPDH mRNA的表达量.结果 61例乳腺癌患者外周血中均有MTDH mRNA的表达,19例健康女性外周血中未见MTDH mRNA的表达.乳腺癌病例组中34例患者MTDH mRNA高表达,占55.7%,27例低表达,占44.3%,两者间表达差异有统计学意义（Ratio=2.02±0.81,P＜0.05）;乳腺癌患者外周血MTDH对GAPDH的相对表达量为（1.15±0.36）.MTDH基因表达与年龄、雌孕激素受体及HER-2无关（P＞0.05）;淋巴结转移组的MTDH mRNA表达量与无淋巴结转移组差异有统计学意义（P〈0.05）;MTDH mRNA表达水平在临床病理分期Ⅰ、Ⅱ与Ⅲ、Ⅳ之间差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法可成功检测MTDH基因的表达量,MTDH可能与乳腺癌发生发展密切相关.     

急性白血病患者WIF-1基因启动子甲基化及β连环蛋白表达的研究

目的 探讨急性白血病(AL)患者Wnt抑制因子1(WIF-1)基因启动子甲基化及β连环蛋白(β-catenin)的表达在白血病中的意义.方法 采用甲基化特异性PCR检测山东大学附属千佛山医院2009年1月至2010年6月55例AL患者及对照组骨髓单个核细胞WIF-1基因启动子甲基化情况,流式细胞术检测AL患者及对照组骨髓单个核细胞β-catenin表达.结果 32.7％(18/55)的AL患者WIF-1基因启动子区域有异常甲基化,对照组末检测到WIF-1基因甲基化,两组差异有统计学意义(P＜0.05).甲基化组首次诱导治疗完全缓解率(38.9％,7/18)低于非甲基化组(81.1％,30/37),差异有统计学意义(P＜0.05).甲基化组与非甲基化组β-catenin的表达(17.5％±3.3％、15.4％±3.6％)均高于对照组(10.5％±1.5％,均P＜0.05);甲基化组β-catenin的表达高于非甲基化组(P＜0.05).结论 WIF-1基因启动子甲基化及β-catenin过表达可能参与了AL患者Wnt/β-catenin途径的异常激活.     

母爱剥夺对成年大鼠情绪及多巴胺转运蛋白基因表达的影响

目的：研究母爱剥夺对雄性大鼠成年后情绪及脑纹状体多巴胺转运蛋白（dopamine transporter,DAT）基因表达的影响,探讨DNA甲基化是否参与调控DAT基因的表达。方法：新生幼鼠随机分为实验组和对照组,实验组出生后第1至14天,每天母子分离6 h。12周龄时,采用高架十字迷宫、旷场实验评定2组大鼠的情绪水平,采用RT-PCR法检测纹状体DAT mRNA表达水平,亚硫酸测序法检测DAT基因启动子区DNA甲基化水平。结果：实验组大鼠在新异环境中的探索能力下降、焦虑水平较低,大脑纹状体DAT mRNA表达显著低于对照组(P＜0.05),DAT基因启动子区的DNA甲基化水平差异没有统计学意义（P＞0.05）。结论：母爱剥夺对雄性大鼠成年后的情绪有持久的影响,且抑制纹状体DAT mRNA的表达;DNA甲基化可能不是DAT表达下降的机制。