血糖及皮肤组织糖含量对大鼠浅二度烫伤创面愈合影响的实验研究

目的研究血糖及皮肤组织糖含量对浅二度烫伤创面愈合的影响。方法96只清洁级SD大鼠随机分成正常组和以STZ诱导的速发型糖尿病组,并造成10%体表总面积(TBSA)的浅二度烫伤模型,分别测定伤前、伤后第1天、3天、5天、7天、10天和14天的血糖、皮肤或创面组织糖含量;大体和组织学动态观察创面愈合过程;伤前和伤后3d、7d和14d检测表皮细胞增殖周期。结果糖尿病大鼠血糖浓度明显高于正常组(27.28mmol/L±0.80mmol/Lvs4.65mmol/L±0.14mmol/L,P<0.01);皮肤组织创面中局部的糖含量与血糖变化有显著的相关性(r=0.881,P<0.05),糖尿病组大鼠浅二度烫伤创面局部糖含量明显高于正常烫伤组(14.2mmol/L±3.0mmol/gvs4.5mmol/L±0.5mmol/g,P<0.01)。糖尿病烫伤创面愈合明显延迟,新生上皮明显减少,表皮细胞进入S期和G2/M期百分比增殖较正常大鼠显著减少。结论糖尿病大鼠局部创面组织糖含量增加与血糖变化密切相关,而创面局部糖含量的增加与创面愈合延迟存在着不可分割的联系。高糖环境可抑制浅二度烫伤创面表皮细胞增殖。     

滇黄精对糖尿病大鼠创面愈合的促进作用

  目的：探讨滇黄精对糖尿病大鼠创面愈合的作用。  方法：取雄性SD大鼠,腹腔注射链脲佐菌素(STZ,45 mg/kg)诱导糖尿病大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、阳性药(西格列汀,9 mg/kg)组和滇黄精低剂量(2 g/kg)、高剂量(8 g/kg)组,每组6只；另设6只正常大鼠作为对照组。各组灌胃给予相应药物。连续干预4周后,在每只大鼠背部中央制备一个直径为2.0 cm的圆形全层皮肤缺损伤口,继续药物干预17 d。创面损伤后第3、7、14、17天,观察各组创面愈合情况及愈合率。创面损伤后第17天,取创缘皮肤组织,HE染色后光镜下观察形态学变化,并测量表皮层和真皮层厚度。  结果：创面损伤后第7、14、17天,滇黄精低、高剂量组的创面面积较模型组明显缩小,创面愈合率较模型组显著升高(P<0.05,P＜0.01)。创面损伤后第17天,滇黄精干预组的创面皮肤组织病变较模型组明显减轻,可见大量成纤维细胞与胶原纤维,炎症细胞浸润较少,新生血管较多,且高剂量组的促愈合作用更为明显。与模型组相比,滇黄精低、高剂量组表皮层厚度均显著增加(P＜0.01),滇黄精高剂量组真皮层厚度亦明显增加(P＜0.01)。  结论：滇黄精可减轻糖尿病大鼠创面皮肤组织病变,增加表皮层和真皮层厚度,促进创面愈合。     

糖尿病烫伤大鼠血糖变化及其与创面皮肤组织糖含量的关系

目的:探讨2型糖尿病大鼠二度烫伤后血糖变化及其与创面组织糖含量之间的关系.方法:采用清洁级大鼠,分成正常组(n=24)和枸橼酸-枸橼酸钠镁液配置成2%浓度(STZ)诱导的速发型糖尿病组(n=24),造成10%体表总面积(TBSA)的浅二度烫伤模型,分别取伤后1、3、5、7、10 d和14 d创面皮肤组织块样本,采用生化技术测定血糖浓度和创面皮肤中的糖含量;并对创面进行组织学观察.结果:皮肤组织创面中局部的糖含量与血糖变化有显著的相关性(P＜0.05),糖尿病大鼠浅二度烫伤创面中局部糖含量明显高于正常组(P＜0.01),且创面呈现延迟愈合或者加深不愈.结论:糖尿病大鼠局部创面组织糖含量增加与血糖变化密切相关,而创面局部糖含量的增加与创面愈合延迟存在着不可分割的联系.     

SCF/c-Kit反应轴调控ADSCs在糖尿病创面修复中的作用研究

探讨干细胞因子（SCF）/ 干细胞因子受体（c-Kit）信号调节脂肪间充质干细胞（ADSCs）增殖、迁移的作用机制,及其在糖尿病创面愈合中的作用。方法分离培养ADSCs。将其分为ADSCs 组、ADSCs+SCF（4 ng/ml,24 h）组和ADSCs+SCF+c-Kit siRNA（4 ng/ml,24 h）组;利用Western blot检测c-Kit、p-AKT、AKT蛋白的表达;采用CCK-8、细胞克隆形成检测增殖情况;采用Transwell法检测迁移情况。采用链脲佐菌素腹腔注射复制糖尿病小鼠模型,并复制背部直径为2cm 的全层皮肤缺损模型。将6 只糖尿病裸鼠随机分为实验组和对照组,对照组小鼠于创面周围以皮内注射方式注射1×106个未处理的ADSCs,实验组小鼠注射等量的经SCF（4 ng/ml）预处理24 h后的ADSCs。10 d后处死各组裸鼠,计算创面愈合率,苏木精- 伊红染色法检测真皮层与表皮层间的厚度,比较两组的差异。结果SCF 诱导c-Kit的表达呈时间、浓度依赖性（p <0.05）。SCF促进ADSCs的增殖、迁移,c-Kit siRNA抑制ADSCs的增殖、迁移（p <0.05）。SCF促进p-AKT的表达,c-Kit siRNA抑制c-Kit、p-AKT 的表达。实验组糖尿病裸鼠创面愈合率更高,真皮层与表皮层厚度大（p <0.05）。结论SCF/c-Kit 反应轴激活PI3K/AKT 信号通路,促进ADSCs 增殖、迁移。SCF 预处理能够促进糖尿病裸鼠创面愈合。     

中医病证相符的糖尿病慢性皮肤溃疡大鼠造模方法初探

目的 观察不同造模方法致糖尿病大鼠慢性皮肤溃疡创面形态及愈合时间的影响。方法 50只SD大鼠随机分为5组：皮肤缺损组（QS组：剪皮）,糖尿病组（DM组：STZ+剪皮）,糖尿病加金黄色葡萄球菌组（DMJJ组：STZ+剪皮+金葡菌）,糖尿病加激素组（DMJS组：STZ+剪皮+激素注射）,糖尿病加激素加异物组（DMYW组：STZ+剪皮+激素注射+异物埋置）。糖尿病模型稳定后每周测量血糖1次,每日称量体重、观察疮面情况、测量创面面积。12 d后处死,石蜡包埋肉芽组织观察其组织病理形态。结果 DMJJ组前5d愈合速度快于其余组（P<0.01）;DMYW组的愈合时间延长,DMYW组愈合率显著偏低,与其余组比较有统计学意义（P<0.01）。造模12 d其余组愈合率无统计学差异,DMYW组愈合率显著低于其余组（P<0.01）。结论 注射激素大鼠表现出中医“阴证”证型特点,糖尿病加激素注射加异物埋置复合因素造模法能使大鼠创面表现出与临床相似的“阴证”证型特点。     

乳猪肝脏提取物对糖尿病大鼠皮肤创伤的影响

目的:观察乳猪肝脏提取物对糖尿病大鼠皮肤创伤模型的影响。方法:建立1型糖尿病大鼠制作背部皮肤缺损模型,分为正常对照组、糖尿病对照组、乳猪肝脏提取物组,观察创面愈合情况。结果:在局部应用乳猪肝脏提取物后,乳猪肝脏提取物组促进毛细血管与创面垂直,胶原致密排列整齐,肉芽组织形成良好,成纤维细胞增殖较快,肉芽组织增生作用明显。而糖尿病对照组肉芽组织疏松,表皮不同程度增生,大部分未完全覆盖创面。伤后各组大鼠创面未见感染征象。乳猪肝脏提取物组与糖尿病对照组相比,创面愈合时间短,创面愈合率高,伤腔容积缩小显著,肉芽组织成熟(P<0.05或P<0.01)。结论:乳猪肝脏提取物对糖尿病大鼠皮肤创伤有明显的促进愈合的作用。     

创面消毒凝胶对皮肤损伤模型大鼠创伤皮肤的愈合作用及其网络药理学机制研究

目的 观察创面消毒凝胶对大鼠皮肤创伤后愈合的促进作用,并利用网络药理学探讨其潜在作用机制。方法 将48只大鼠采用随机数字表法分为空白组、模型组和给药组,每组16只。除空白组外,其余2组建立皮肤创伤模型,造模后给药组在伤口涂抹创面消毒凝胶(1.0 mg/mm²),空白组和模型组涂抹等体积的赋形剂,共涂抹28 d。于给药后第4,7,14,28天计算各组大鼠创面残留率;取造模处皮肤组织,行HE染色,观察各组大鼠皮肤病理变化。通过Cytoscape 3.7.2构建药物-成分-靶点-疾病网络,寻找核心成分及作用靶点,并利用AutoDock进行分子对接验证。结果 给药后第4天给药组大鼠伤口开始结痂,给药后第7天模型组大鼠伤口开始结痂;与空白组比较,给药后第4,7,14,28天模型组大鼠创面残留率均明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,给药后第7,14,28天给药组大鼠创面残留率均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。空白组大鼠皮肤组织真皮层和表皮层完整,少有炎症细胞。模型组大鼠表皮层增厚,真皮层内有大量炎症细胞,给药后...     

外源性P物质对糖尿病大鼠烫伤创面组织愈合及新生血管化的影响

目的 研究外源性P物质（SP）对烫伤创面组织愈合及新生血管化的影响。方法 84只Wistar大鼠经腹腔一次性注射链脲佐菌素（STZ）诱导建立糖尿病大鼠模型后,于背部制备直径2 cm的深Ⅱ度烫伤创面。根据创面不同处理方式将大鼠随机分为实验组（局部注射SP）和对照组（局部注射与实验组等量的磷酸缓冲液）,每组42只。分别于创面形成后当日和第1、3、7、10、14、21 天,观察创面并计算创面愈合率;免疫组织化学染色观察创面组织中新生血管内皮细胞表面标志物CD31表达,计算微血管密度。结果 创面形成后第7天,实验组创面愈合率明显高于对照组,为（42.69±3.26）% vs（30.24±1.17）%（P<0.01）。免疫组织化学检测发现,自创面形成后第7天起,实验组创面组织中CD31表达及微血管密度均明显高于对照组（P<0.01）。结论 外源性SP具有促进糖尿病烫伤创面愈合作用,其机制可能与上调创面组织中CD31表达,使新生血管再生加速有关。     

上皮生长因子对烧伤创面真皮层愈合的实验研究

以重组人上皮生长因子治疗大白鼠深Ⅱ°创面，定期活检。结果，创面在愈合过程中，炎症程度轻，皮肤全层细胞DNA周期中，S＋G2期含量明显高于对照组（P＜0．01）。创面愈合后真皮层胶原排列接近正常。说明烧伤创面外用上皮生长因子可降低创面炎症程度及减少愈合后疤痕增生的倾向。     

糖尿病大鼠深Ⅱ度烫伤创面成纤维细胞生物学行为的改变

目的研究糖尿病深Ⅱ度烫伤对真皮成纤维细胞(FB)生物学行为的影响。方法以链脲菌素(STZ)诱导糖尿病的深Ⅱ度10%TBSA烫伤大鼠模型,观察创面愈合情况。流式细胞术检测真皮组织中FB细胞周期;TUNEL法检测FB凋亡;伤后0、3、7、21d检测皮肤组织的羟脯氨酸含量。结果糖尿病大鼠深二度烫伤后愈合延迟,糖尿病组烫伤后进入S期的成纤维细胞数量明显低于正常组(P<0.01,P<0.05),创面凋亡细胞数量高于正常组(P<0.01,P<0.05);烫伤前和烫伤后糖尿病组皮肤组织单位面积羟脯氨酸含量均低于正常大鼠(P<0.01,P<0.05)。结论在糖尿病病理状态下,皮肤损伤后主要的修复细胞FB增殖异常,凋亡增多,胶原含量减少,可能是创面修复延迟的原因之一。     

Accelerated healing of diabetic wound using artificial dermis constructed with adipose stem cells and poly(L-glutamic acid)/ chitosan scaffold

Background Diabetic wound is one of the most serious complications of diabetes mellitus.There are no significantly effective therapies for chronic non-healing diabetes ulcer so far.This study aimed to ...     

L-谷氨酸/壳聚糖聚合物为支架的脂肪来源干细胞构建人造皮肤对糖尿病性损伤的加速愈合作用研究

研究背景 糖尿病性损伤如糖尿病足是糖尿病最严重的并发症之一。目前对慢性不愈合的糖尿病损伤尚没有明确有效的治疗方法。本研究探索应用以L-谷氨酸/壳聚糖为支架的人类脂肪来源干细胞构建的人造皮肤的可行性,这在链脲霉素致糖尿病的小鼠不愈合损伤的治疗上尚存很大争议。 方法 脂肪来源干细胞获得自新鲜的人体抽脂术,并间接体内扩增,之后植入L-谷氨酸/壳聚糖支架构建人造皮肤。将人造皮肤、单纯支架组织分别植于糖尿病模型小鼠损伤部位,并与正常小鼠及不处理糖尿病小鼠对比。同时分析人造皮肤的VEGF、TGFβ1表达,组织学指标,皮肤厚度和胶原含量。 结果 生长于支架的细胞显示了良好的增殖潜力和充分的基质胶原沉积,同时VEGF和TGFβ1保持较高的水平。人造皮肤治疗的糖尿病损伤相较单纯支架或者不处理的损伤明显愈合增速。组织学检查也显示皮肤修复提高。定量分析进一步显示人造皮肤厚度和胶原含量的增加。 总结 ASCs/ PLGA人造皮肤能有效促进糖尿病损伤愈合,其机制可能是血管生长因子和胶原合成的增加。     

低分子壳聚糖对实验性糖尿病大鼠血糖的调节作用

目的:观察低分子壳聚糖对链脲佐菌素(STZ)诱导的实验性糖尿病大鼠血糖的调节作用。方法:腹腔一次性注射STZ复制大鼠糖尿病模型,观察低分子壳聚糖的降血糖效应及其对大鼠体重和血胰岛素含量的影响。结果:STZ诱导的糖尿病大鼠血糖升高、体重降低(P<0.01),血胰岛素无明显变化(P>0.05)。低分子壳聚糖可显著降低糖尿病模型大鼠的血糖浓度,使血胰岛素含量升高(P<0.01),并能对抗体重的降低(P<0.01)。结论:低分子壳聚糖对实验性糖尿病有明显的治疗效果,其作用与降低血糖浓度,增加胰岛素分泌有关。     

胰岛素对糖尿病大鼠潜在皮肤病变防护作用的机理研究

目的探讨胰岛素对糖尿病潜在皮肤病变保护作用的机理。方法用链脲佐菌素(STZ)将8周龄雄性SD大鼠诱导成速发型糖尿病大鼠模型,分为应用胰岛素强化控制血糖组(A组)(n=27)和未控制血糖组(B组)(n=27),并以正常大鼠作对照(C组)(n=27),分别于致病后4、8和12周获取大鼠背部中央的皮肤标本。应用HE染色,观察皮肤组织学的改变;应用Beckman′s生化自动分析仪检测皮肤组织匀浆的糖含量;采用F3010荧光分光光度计和免疫组织化学技术测定皮肤中晚期糖基化终末产物(AGE)含量的变化;应用透射电镜观察皮肤微血管超微结构的改变。结果组织学观察,致病后12周B组糖尿病大鼠皮肤明显变薄,表皮细胞层次欠清晰,部分表皮缺乏复层排列;真皮层部分胶原萎缩、肿胀,退化变性,并伴随程度不等的炎性细胞浸润;皮下脂肪进行性萎缩或消失。A组糖尿病大鼠皮肤未出现上述明显的组织学改变。B组糖尿病大鼠皮肤糖含量在各时相点均明显高于A组和C组(P<0.01),而A组与C组之间差异无统计学意义(P>0.05)。B组和A组糖尿病大鼠皮肤胶原提取液的荧光值均高于相应年龄正常大鼠,病程越长,荧光值增加越明显。8周和12周的B组糖尿病大鼠皮肤胶原提取液的荧光值明显高于同期A组的糖尿病大鼠;8周时B组为(34U/mg±4U/mg),A组为(29U/mg±3U/mg,P<0.05);12周时B组为(41U/mg±4U/mg),A组为(32U/mg±4U/mg,P<0.05)。免疫组织化学检查亦显示B组糖尿病大鼠皮肤中AGE表达阳性率于8周和12周均显著高于A组,8周时B组为32%±4%,A组为25%±5%,(P<0.05);12周时B组为39%±5%,A组为27%±4%,(P<0.05)。透射电镜观察A组糖尿病大鼠皮肤血管内皮细胞变性和基底膜增厚程度均明显好于B组。结论皮肤中AGE蓄积和高糖是糖尿病皮肤病变的重要致病因素之一,胰岛素对糖尿病大鼠潜在皮肤病变具有防护作用,其作用机制可能与严格控制血糖、抑制AGE的合成、阻断AGE的作用环节等有关。     

DETERMINATION OF CYCLIC AMP AND CYCLIC GMP IN PSORIATIC EPIDERMIS AND DERMIS

This article reports the cyclic AMP and cyclic GMP content of psoriatic epidermis and dermis and compares them with those of normal human skin. Cyclic AMP content of involved and uninvolved epidermis of psoriatic patients were found to be significantly decreased by 41% and 46% respectively (DNA data basis) as compared with normal human skin. Bttt cyclic AMP content of psoriatic dermis was increased by 103% (wet weight), as compared to uninvolved and normal human dermis. Cyclic GMP content of psoriatic epidermis was significantly increased by 124% and 150% (wet weight) as com pared with uninvolved and normal human epidermis. These changes may play an important role in causing psoriatic lesions.     

过表达趋化因子受体2促进脂肪间充质干细胞对皮肤损伤的修复

目的 探讨过表达趋化因子受体2（CCR2）是否能促进脂肪间充质干细胞(ADSCs)皮下移植对小鼠皮肤创伤修复的效率。方法 分离培养ADSCs,取3~5代细胞通过流式细胞技术检测ADSCs相关的细胞表面标志物CD73、CD105、CD44和CD31的表达,并分别置于骨、软骨和脂肪诱导分化培养基中进行诱导分化,检测其多向分化潜能。通过慢病毒感染法构建过表达CCR2的ADSCs。在实验小鼠脊背两侧皮肤上分别制备一个面积为0.8cm×0.8cm的机械创面,随机分成3组,分别皮下注射CCR2-EGFP-ADSCs、EGFP-ADSCs和磷酸盐缓冲液（PBS）到小鼠创面4周。每天记录创面愈合情况,并进行病理切片观察,与对照组对比分析。结果 分离培养的ADSCs高表达CD73、CD105和CD44,不表达CD31,具有骨、软骨、脂肪诱导分化潜能。过表达CCR2的ADSCs构建成功。小鼠皮肤创伤造模及移植细胞后,各组小鼠均存活,创面逐日缩小。CCR2-EGFP-ADSCs组、EGFP-ADSCs组和对照组第5、9天的创面愈合率分别为(68±3.1)%和(91±2.1)%、(63±2.7)%和(87±2.1)%、(58±3.5)%和(80±2.9)%。注射了ADSCs的两组愈合率均显著高于对照组（均P<0.05）。病理组织切片显示3组小鼠第9天创面真皮层较正常皮层均有增厚,且CCR2-EGFP-ADSCs组观察到明显的类毛囊结构,多于EGFP-ADSCs组,对照组未观察到类似结构。结论 过表达CCR2可促进ADSCs对皮肤损伤的修复。     

Influence of human fibroblasts on development and quality of multilayered composite grafts in athymic nude mice

In patients after extensive burn injury the lack of split thickness skin graft donor sites, and consecutive delay in wound closure are critical factors of morbidity and mortality. In addition limited functional and aesthetic results after transplantation of split thickness skin grafts present a socioeconomic problem. For improved wound closure the aim of this study was the development of a one stage technique for the establishment of a multi layer composite graft, existing of a collagen-GAG-matrix with silicon layer of a two layer synthetic dermal equivalent (DE) with integrated fibroblasts, and ceratinocytes. - In 64 athymic nude mice the evaluation of the multi layer skin grafts potential to re-establish a human epidermis, and high quality dermal structure was performed. In addition to clinical investigations we measured wound contraction, and analyzed histomorphologic, immunohistologic, "in situ hybridisation", and electro microscopic data. - Our results show, that the seeding of DE with human fibroblasts and ceratinocytes as a composite skin graft reproducible enabled a wound healing with an organised human dermis and epidermis within 10 - 15 days. The histological studies of the grafted composite skin grafts in this model showed morphologically a characteristic dermal-epidermal skin structure with a cornifying epithelium, being of human origin ("in situ hybridisation"). Through the co-cultivation of fibroblasts and ceratinocytes in the DE the generation and structural morphology of collagen fibres, and inflammatory reaction in the neodermis is positively influenced, and as a consequence wound contraction significantly reduced. In regard to the early preparation of composite grafts, and the minimal requirements for donor sites - with dependable stable reconstruction of the integument - this technique may present a step forward in the treatment of patients with extensive burns.