高糖及高糖波动对MG63细胞株氧化应激的影响

目的 研究波动性葡萄糖和恒定高葡萄糖对MG63细胞增殖、细胞周期及氧化应激的影响,探讨波动性葡萄糖造成糖尿病性骨质疏松症可能的发病机制.方法 体外培养的人成骨肉瘤MG63细胞株,随机分为正常对照NG组(葡萄糖浓度为5.5mmol/L),恒定高葡萄糖HG组(含葡萄糖33.3mmol/L),波动性葡萄糖FG组(5.5/33.3mmol/L),共作用24h.MTT比色分析法测定细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率.取MG63细胞培养上清液,以黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,以硫代巴比妥酸为底物检测丙二醛(MDA)含量.结果 (1)高糖及高糖波动可抑制MG63细胞的增殖,与高糖组相比,高糖波动组的抑制效应更加明显.(2)高糖及高糖波动可阻滞MG63细胞周期,使G1期细胞比例增加,S期比例减少,诱导细胞凋亡.高糖波动组作用更加明显.(3)高糖作用下MG63细胞SOD活性降低(P＜0.05),MDA水平升高(P＜0.05),高糖波动组更加明显.结论 波动性葡萄糖可加重高糖环境下MG63细胞的氧化应激状态,抑制成骨细胞增殖,阻滞其细胞周期,诱导细胞凋亡.此可能是糖尿病性骨质疏松症的一个重要的发病机制.     

高糖通过转化生长因子β信号诱导肾小球内皮细胞向肌成纤维细胞转分化

目的 探讨高糖(HG)能否通过转化生长因子β(TGF-β)途径诱导大鼠肾小球内皮细胞向肌成纤维细胞转分化(EndMT).方法 体外培养大鼠肾小球内皮细胞(GEnC),分为正常对照组(NG,5.5 mmol/L)、高糖组(HG,15、30 mmol/L)、TGF-β抑制剂组(HG+LY36,30 mmol/L葡萄糖+10 μmol/L LY364947)以及高渗对照组(M,5.5 mmol/L葡萄糖+25.5 mmol/L甘露醇)和溶剂对照组(D,5.5 mmol/L葡萄糖+1 ml/LDMSO).采用Western印迹法检测各组细胞内皮细胞标志物claudin5和肌成纤维细胞标志物α-SMA表达变化;实时定量PCR法检测细胞TGF-β1和TGF-β2 mRNA表达改变;免疫荧光法观察细胞形态学变化以及血管内皮细胞标志物VE-cadherin和肌成纤维细胞标志物α-SMA的表达.结果 与NG组比较,HG组claudin5蛋白的表达量随葡萄糖浓度增加而降低(P＜0.05),α-SMA蛋白表达量随葡萄糖浓度增加而升高(P＜0.05),TGF-β1和TGF-β2 mRNA表达均升高(P＜0.05).与HG组比较,TGF-β抑制剂组claudin5蛋白表达量升高(P＜0.05),α-SMA蛋白表达降低(P＜0.05).高渗对照组和溶剂对照组改变差异无统计学意义.激光共聚焦免疫荧光结果显示,高糖处理可引起细胞形态由卵圆形向梭形改变,VE-cadherin表达减少,α-SMA表达增加;TGF-β抑制剂组细胞形态无明显改变.与HG组比较,TGF-β抑制剂组VE-cadherin表达增加,α-SMA表达降低(P＜0.05).结论 高糖诱导大鼠肾小球内皮细胞TGF-β表达增加及内皮细胞-肌成纤维细胞转分化.抑制TGF-β可抑制高糖引起的转分化,提示TGF-β参与了高糖引起的肾小球内皮细胞转分化过程.     

重组人骨形态发生蛋白-2对鼠雪旺细胞增殖及生长相关蛋白GAP-43表达的影响

目的 观察重组入骨形态发生蛋白-2( rhBMP-2)对体外培养的乳鼠雪旺细胞增殖及生长相关蛋白( GAP-43)表达的影响。方法 将纯化的雪旺细胞分两组,一组设为对照,另一种加含终质量浓度为5 μg/L rhBMP-2的DMEM/F12培养液培养,在培养后0、12、24、36、48、72 h分别用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同时间点的A值并绘制生长曲线;用BrdU法测定雪旺细胞增殖率;用Western blot法检测GAP-43蛋白的表达水平。结果 经含5μg/L rhBMP-2培养液培养的雪旺细胞,在24、36、48 h细胞增殖率明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);实验组中GAP-43在24、36、48 h的表达也显著高于对照组(P＜0.05)。结论 rhBMP-2有促进雪旺细胞分裂增殖和GAP-43蛋白表达的作用,可能是其促进周围神经再生的重要机制之一。     

沉默1,25-二羟维生素D_3受体基因对高糖诱导的肾小管上皮细胞解偶联蛋白2表达及氧化应激的影响

目的:观察1,25-二羟维生素D_3(1,25-dihydroxyvitamin D_3,1,25-(OH)_2Vit D_3)及其受体(vitamin D receptor,VDR)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)解偶联蛋白2(UCP2)表达及氧化应激的影响,探讨1,25-(OH)_2Vit D_3在糖尿病肾病(DN)进展中的作用。方法:利用RNAi技术构建基因干扰表达载体质粒p GIPZ-VDR,脂质体介导质粒转染HK-2细胞,构建稳定转染细胞系。细胞分组:未转染低糖对照组(NG组,5.5 mmol/L D-葡萄糖)、稳转低糖控制组(CG组,5.5 mmol/L D-葡萄糖)、未转染高糖诱导组(HG组,30 mmol/L D-葡萄糖)、稳转高糖诱导组(THG组,30 mmol/L D-葡萄糖)、未转染高糖+Vit D_3处理组(VG组,30 mmol/L D-葡萄糖+10-7mol/LVit D_3)、稳转高糖+Vit D_3处理组(TVG组,30 mmol/L D-葡萄糖+10-7mol/LVit D_3)、稳转高渗对照组(MG组,5.5 mmol/L D-葡萄糖+24.5 mmol/L D-甘露醇)、稳转无水乙醇溶剂对照组(SG组,30 mmol/L D-葡萄糖+6.86×10-2mmol/L无水乙醇)。实时荧光定量PCR及Western blot法检测HK-2细胞中VDR及UCP2的mRNA和蛋白表达;比色法检测胞内总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力和丙二醛(MDA)水平。结果:(1)稳转细胞中VDR mRNA和蛋白表达显著低于转染空载质粒组(P0.01);(2)与CG组比较,HG组、THG组、TVG组中T-SOD活力均降低(P0.05)而MDA水平均显著升高(P0.05),但此三组之间比较T-SOD活力及MDA水平差异无统计学意义(P0.05);与THG组比较,VG组T-SOD活力显著升高(P0.05),MDA水平显著下降(P0.05);(3)与NG组比较,CG组UCP2 mRNA和蛋白表达差异无统计学意义(P0.05);与CG组比较,HG组和THG组UCP2mRNA及蛋白表达显著升高(P0.05),但此二组之间差异无统计学意义;与THG组比较,VG组UCP2mRNA和蛋白表达显著下降(P0.05),而TVG组UCP2mRNA和蛋白表达差异无统计学意义(P0.05)。结论:沉默VDR基因并不影响高糖诱导HK-2细胞时胞内UCP2高表达以及氧化应激水平增高;1,25-(OH)_2Vit D_3可能通过VDR介导的途径来调节细胞内UCP2的表达并抑制高糖诱导下的氧化应激反应。     

乙酰左旋肉碱预处理对低氧低糖诱导PC12细胞凋亡的影响

目的 评价乙酰左旋肉碱预处理对低氧低糖诱导PC12细胞凋亡的影响.方法 PC12细胞接种于96孔板中,采用随机数字表法,将细胞随机分为5组(n=6):对照组(C组)、细胞损伤组(Ⅰ组)和不同浓度乙酰左旋肉碱预处理组(A1-3组).C组加入含葡萄糖4.5 g/L的DMEM溶液孵育3h;Ⅰ组加入含葡萄糖0.5 g/L和Na2SO4 3 mmol/L的DMEM溶液孵育3h;A1-3组分别加入0.2、0.4和0.6 mmol/L乙酰左旋肉碱孵育24h,然后加入含葡萄糖0.5 g/L和Na2S2O4 3mmol/L的DMEM溶液孵育3h.采用MTT法检测细胞活力,采用TUNEL法检测细胞凋亡率,测定细胞SOD和ATP酶的活性和MDA含量.结果 与C组比较,Ⅰ组细胞活力降低,细胞凋亡率升高,SOD和ATP酶的活性降低,MDA含量增加(P＜0.05),A1-3组细胞活力、细胞凋亡率、SOD和ATP酶的活性和MDA含量差异无统计学意义(P＞0.05);与Ⅰ组比较,A1-3组细胞活力升高,细胞凋亡率降低,SOD和ATP酶的活性升高,MDA含量下降(P＜ 0.05);A1-3组间细胞活力、细胞凋亡率、SOD和ATP酶的活性和MDA含量比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 乙酰左旋肉碱预处理可通过抑制细胞凋亡,减轻低氧低糖诱导PC12细胞损伤.     

戊糖多硫酸钠通过抑制P38MAPK通路的激活干预高糖刺激下肾小管上皮细胞的增殖

目的观察戊糖多硫酸钠是否通过调控P38MAPK干预糖尿病肾病肾小管上皮细胞的损伤。方法利用不同浓度(10 mmol/L~50 mmol/L)葡萄糖刺激人近端肾小管上皮细胞(human renal proximal tubular epithelial cells,HK-2)48 h,应用CCK-8比色法检测肾小管上皮细胞增殖的改变。利用不同时间段(0~48 h)葡萄糖刺激细胞,用Western blot法检测P38MAPK蛋白的表达水平,分为正常对照组(CON组)、高糖组(high glucose,HG组,葡萄糖30 mmol/L)、戊糖多硫酸钠(pentosan polysuflate,PPS)组(PPS 200μg/ml)、高糖+戊糖多硫酸钠组(HG+PPS组),P38抑制剂组(SB 202190,20μmol/L),p38抑制剂+高糖组(SB+HG组)、p38抑制剂+戊糖多硫酸钠组(SB+PPS),刺激48 h后检测HK-2细胞增殖的改变,刺激6 h后检测HK-2细胞P38MAPK蛋白的表达水平。结果高糖刺激下HK-2细胞增殖在30 mmol/L的浓度最高。与HG组相比,加用戊糖多硫酸钠干预能明显抑制HK-2的增殖,差异有统计学意义(P均0.01);与正常对照组相比,高糖刺激HK-2细胞6 h后磷酸化(p)p38MAPK蛋白表达水平明显增加(P均0.01);与HG组相比,HG加戊糖多硫酸钠干预6 h后HK-2细胞p-p38MAPK蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P均0.05)。应用p38MAPK抑制剂SB202190(20μmol/L)处理细胞,与HG组相比,HG加用SB202190干预能明显抑制p-p38MAPK蛋白表达及HK-2细胞的增殖(P均0.05);与PPS组相比,PPS加SB202190干预后p-p38MAPK蛋白表达降低及HK-2细胞数目减少(P均0.05)。结论戊糖多硫酸钠可能通过抑制p38MAPK的表达,减少肾小管上皮细胞的增殖而对糖尿病肾病起保护作用。     

丙泊酚对体外高糖培养的人脐静脉内皮细胞中MDA、SOD和NF-κB的影响

目的 探讨丙泊酚对体外高糖培养的人脐静脉内皮细胞(HUMCEs)中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性及NF-κBp65表达的影响.方法 按体外培养HUMCEs的条件不同随机分为七组,葡萄糖5.5 mmol/L组(C1组)、甘露醇25 mmol/L组(C2组)、葡萄糖30mmol/L组(HG1组)、葡萄糖30mmol/L+脂肪乳90 μmol/L组(HG2组)、葡萄糖30 mmol/L+吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)50μmol/L组(HG3组)、葡萄糖30 mmol/L+丙泊酚25μmol/L组(HG4组)、葡萄糖30 mmol/L+丙泊酚100μmol/L组(HG5组).分别检测各组细胞的MDA含量、SOD活性及C1、HG1、HG3、HG4、HG5组中NF-κB p65表达量.结果 与C1、C2组比较,HG1组MDA含量升高,SOD活性降低,NFκB p65表达量增多(P＜0.05).与HG1组比较,HG3组、HG4组及HG5组的MDA含量均下降、SOD活性均升高、NF-κBp65表达量均降低(P＜0.05).与HG2组比较,HG3、HG4及HG5组的MDA含量均下降、SOD活性均升高(P＜0.05).与HG4组比较,HG5组MDA含量下降、SOD活性升高(P＜0.05);HG4、HG5组间NF-κB p65表达量差异无统计学意义.结论 丙泊酚与PDTC一样可抑制高糖对内皮细胞损伤,提示丙泊酚的作用与抑制NF-κB信号通路有关.     

高糖诱导前列腺上皮细胞微小RNA的差异表达及miR-301a的促增殖作用

目的 检测高糖刺激下微小RNA(miRNA)在前列腺组织及细胞中的差异表达,探讨高血糖对前列腺影响的分子机制.方法 将成年雄性SD大鼠随机分为对照组和高血糖组(＞300 mg/dl),应用miRNA芯片技术检测两组间miRNA表达谱的差异,并通过实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)方法验证;以qRT-PCR检测差异表达的miRNAs在高糖(50 mmol/L)培养的RWPE-1细胞中的表达;噻唑蓝(MTT)比色法检测转染miRNAs和/或高糖(25～50 mmol/L)培养的RWPE-1的增殖.结果 高血糖组大鼠前列腺组织中4个miRNA 上调(miR-186 2.405倍、miR-30la 2.202倍、miR-3652.093倍、miR-193 2.317倍),2个miRNA下调(miR-434 0.298倍、miR-361 0.386倍),差异均有统计学意义(P＜0.05);高糖培养下,RWPE-1细胞中各miRNAs的表达趋势与之一致.MTT实验中25 mmol/L组、50 mmoL/L组、miR-30la转染组的细胞吸光度(A)值分别为起始的175％、197％、188％,与对照组(122％)比较差异有统计学意义(p＜0.05);50 mmol/L高糖联合miR-301a抑制物转染组的A值为起始的143％,与50 mmol/L组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 体内外高糖条件均可引起前列腺miRNA表达谱变化,高糖通过miR-301a对前列腺上皮细胞的增殖有明显促进作用.     

三磷酸腺苷对体外培养大鼠雪旺细胞的作用

目的观察三磷酸腺苷（ATP）对体外培养的大鼠雪旺细胞的影响，探讨ATP促进周围神经再生的作用机制。方法用SD乳鼠坐骨神经双酶消化后的剩余组织块培养雪旺细胞，G-418纯化后培养24h，分成5组继续培养10d：ATP组（按不同浓度分4组）和正常组。相差显微镜下观察计数，绘制各自的增殖曲线。在24和72h对各组细胞进行流式细胞分析。结果0．1mmol ATP组雪旺细胞的增殖不明显；1、10mmol组24h和72h后处于S期的雪旺细胞明显增多；100mmol组雪旺细胞数则明显减少；1、10、100mmol组和对照组的倍增时间分别为6．4、5．6、10．2、8．0d，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论ATP能显著地促进雪旺细胞的增殖从而促进外周神经再生，但其作用具有浓度依赖性，高浓度ATP反而抑制雪旺细胞的增殖。     

高糖通过ERK1/2通路对人肾小管上皮细胞脂联素表达的影响

目的通过体外培养人肾小管上皮细胞(human proximal tubular epithelial cells,HK-2),观察高糖对HK-2脂联素(adiponectin,ADPN)表达水平的影响并探讨其可能机制。方法将培养的HK-2细胞分为4组:①低糖对照组(5.6 mmol/L葡萄糖);②PD98059(职K1/2信号传导通路的抑制剂)组(5.6 mmol/L葡萄糖+50μmol/L PD98059);③高糖组(30 mmol/L葡萄糖);④高糖+PD98059组(30 mmol/L葡萄糖+50μmol/L PD98059)。各组分别培养48 h后荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测HK-2细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activator receptor,PPAR-γ)及脂联素mRNA的表达,免疫印迹(Western blotting)法检测各组脂联素蛋白的表达水平。结果 HK-2细胞表达脂联素;PD98059组与低糖对照组相比,PPAR-γmRNA及脂联素的mRNA和蛋白表达的差异均无统计学意义(均P0.05);与低糖对照组相比,高糖组PPAR-γmRNA及脂联素mRNA和蛋白表达均显著降低,差异均有统计学意义(均P0.05);与高糖组相比,高糖+PD98059组PPAR-γmRNA及脂联素mRNA和蛋白表达均显著升高,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论高糖可以降低HK-2细胞脂联素mRNA和蛋白的表达;高糖作用于HK-2细胞可能是通过激活ERK1/2信号传导通路降低PPAR-γ的表达,从而影响其脂联素的表达。     

尿激酶型纤溶酶原激活物对高糖诱导大鼠系膜细胞增殖及表型转化的影响及其机制

目的 通过体外培养大鼠系膜细胞（MC）,观察尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）对高糖环境下MC增殖及表型转化的影响及其可能的信号转导机制。 方法 体外培养大鼠MC,分为4组：对照组、高糖组、高糖+渥曼青霉素组、高糖+uPA组。MTT法检测各组MC增殖情况。流式细胞仪分析各组MC细胞周期改变。Western印迹法检测各组MC表达CDK2与p27Kip1变化,并测定MC中信号蛋白Akt的活性。激光共聚焦显微镜检测各组MC中α-SMA表达方式及表达量变化。 结果 培养24 h后高糖组MC增殖程度较对照组显著增加（P < 0.01）,渥曼青霉素与uPA组可明显抑制细胞增殖（P < 0.01）。高糖刺激Akt活性,渥曼青霉素与uPA组Akt活性均较高糖组显著降低（均P < 0.01）。高糖组MC培养24 h后, p27Kip1蛋白表达较对照组显著减少（P < 0.01）;高糖+渥曼青霉素组、高糖+uPA组p27Kip1蛋白表达均较高糖组显著增加（均P < 0.01）;各组CDK2蛋白表达无明显变化。高糖组MC培养24 h后,胞质中α-SMA表达较对照组显著增加（P < 0.01）,并在核周出现聚集;高糖+渥曼青霉素组、高糖+uPA组α-SMA表达量均较高糖组显著减少（均P < 0.01）,其分布与对照组无显著差异。 结论 uPA可能通过抑制Akt信号分子活性,上调p27Kip1表达,拮抗高糖所致MC增殖与表型转化。     

消炎痛抑制肝细胞肝癌生长转移的研究

目的 观察消炎痛(Indomethacin)对有转移潜能的人肝癌MHCC97L细胞增殖侵袭的影响和对裸鼠肝癌生长和转移的抑制作用.方法 (1)体外实验:采用0.2 mmol/L的消炎痛分别作用于MHCC97L细胞,观察细胞增殖、侵袭实验、运动实验和血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达[酶联免疫吸附试验(ELISA)].(2)体内实验:建立转移性人肝癌裸鼠原位模型后,将裸鼠随机分为对照组和消炎痛组.6周后处死动物,测量肿瘤体积,计算抑瘤率、肺转移灶数目及肺转移率.免疫组织化学方法检测VEGF、MMP-2、环氧合酶-2(COX-2)蛋白的表达.结果 (1)体外实验:0.2mmol/L消炎痛明显抑制MHCC97L细胞增殖(P值均＜0.01),消炎痛组穿过人工基底膜(侵袭实验)和上室底膜(运动实验)的细胞数分别为2.2±1.3和4.4±1.1,明显低于对照组(11.4±1.9和12.8±1.8,P值均＜0.01);ELISA法检测发现,消炎痛组VEGF蛋白和MMP-2蛋白含量和对照组比较明显降低(P值均＜0.01).(2)体内实验:对照组、消炎痛组肿瘤体积分别为(1700 ±422)mm3 和(1170±585)mm3(P＜0.05),肺转移率分别为75%和50%(P＞0.05),平均肺转移灶数目分别为2.92±2.07和1.33±1.56(P＜0.05);与对照组比较,消炎痛组的抑瘤率为31.2%.免疫组织化学染色显示,消炎痛组VEGF、MMP-2、COX-2蛋白的表达和对照组比较均有降低(P值均＜0.01).结论 在一定条件下,消炎痛可抑制肝细胞肝癌的生长转移,其作用和抑制VEGF蛋白和MMP-2蛋白的表达有关.

Abstract：

Objective To study the effects of indomethacin on proliferation and invasion of hepatocellular carcinoma (HCC) cell line MHCC97L with metastatic potential and the effect of indomethacin on the growth and metastasis of HCC. Methods (1) In vitro; Proliferation, Transwell invasion assay, cell motility assay, vascular endothelial growth factor (VEGF) and matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) protein activity were evaluated after cells were treated with 0. 2 mmol/L indomethacin. (2)In vivo: Mice bearing xenografts in the liver were randomly divided into control and indomethacin groups. At the end of sixth week, the mice were killed and tumor volume, inhibitory rate, immunohistochemistry assay (IHA) and metastasis were evaluated. Results (1)In vitro; 0. 2 mmol/L indomethacin could inhibit the proliferation of MHCC97L cells markedly (P ＜0. 01). The average amount of invading cells per field in cell invasion assay and motility assay was 2. 2 ± 1. 3 and 4.4 ± 1. 1 respectively in indomethacin group, significantly less than in control group ( 11. 4 ± 1. 9 and 12. 8 ± 1. 8 respectively, P ＜0. 01). The expression of VEGF and MMP-2 in cells treated with indomethacin was significantly lower than in control group (P ＜0. 01). (2)In vivo; Tumor volume, incidence and number of lung metastases in control and indomethacin groups were (1700 ±422) mm3 and (1170 ± 585) mm3 (P ＜ 0. 05), 75% and 50% ( P ＞ 0.05), 2. 92 ± 2. 07 and 1.33 ±1.56 (P＜0. 05) , respectively. Inhibition rate in indomethacin group was 31.2%. IHA showed that the expression of VEGF, MMP-2, and cyclooxygenase-2 ( COX-2) was down-regulated in indomethacin group (P ＜0.01). Conclusion Indomethacin could inhibit the growth and metastasis of HCC, which was in part mediated by down-regulation of VEGF and MMP-2.     

消炎痛对人肝癌MHCC97L细胞增殖和细胞周期的影响

目的 观察消炎痛(Indomethacin)对有转移潜能的人肝癌MHCC97L细胞增殖和细胞周期的影响.方法 采用0.1、0.2、0.5 mmol/L消炎痛分别作用于MHCC97L细胞,观察细胞增殖、克隆形成率、形态学、生长曲线、流式细胞术分析(FCM).结果 消炎痛明显抑制MHCC97L细胞增殖和克隆形成,呈良好的剂量.效应关系.0.1、0.2、0.5 mmol/L消炎痛处理组细胞增殖抑制率依次升高,克隆形成率依次降低(P均<0.01),镜下可见明显的形态学改变.其中,0.5 mmol/L消炎痛组24、48、72 h细胞增殖抑制率分别为50.6%、47.1%、43.4%;集落形成率为(0.00±0.00)%.0.1、0.2、0.5 mmol/L消炎痛处理组细胞倍增时间分别为110.1、199.3、-614.2 h,与对照组(58.6 h)比较,0.1、0.2 mmol/L消炎痛处理组细胞倍增时间分别延长了2.17倍和3.40倍,而0.5mmol/L消炎痛处理组第6天的细胞均数[(3.4±0.4)×104个]少于初始细胞数(4×104个)结果细胞倍增时间为负值而无法计算.FCM显示,G1期细胞比例随消炎痛浓度增加而增加,S+G2期细胞比例随消炎痛浓度增加而降低(P均<0.01).结论 在一定条件下,消炎痛可抑制人肝癌MHCC97L细胞增殖和克隆形成,其作用部分是通过使细胞周期阻滞在G1期实现.     

Effect of tet methylcytosine dioxygenase 2 on the regulation of transforming growth factor-β1 expression in mesangial cells induced by high glucose

Objective To investigate the role of tet methylcytosine dioxygenase 2 (TET2) in the regulation of transforming growth factor-β1 (TGF-β1) expression in human glomerular mesangial cells induced by high glucose. Methods Cultured human glomerular mesangial cells were divided into normal control group (5.5 mmol/L glucose) and high glucose group (30.0 mmol/L glucose) which was cultured for 12 h to 72 h. The gene expression of TET2 in mesangial cells were inhibited by small molecule chemical called SC1, and which were divided into high glucose group (30.0 mmol/L glucose+DMEM), DMSO group (30.0 mmol/L glucose+0.1%DMSO) and SC1 group (30.0 mmol/L glucose+3 μmol/L SC1). The mRNA and protein expression of TGF-β1, TET1 to 3 and α-smooth muscle actin (α-SMA) was detected by quantitative real-time PCR and Western blotting. Methylation of CpG islands in the regulation region of TGF-β1 was detected by bisulfite sequencing PCR (BSP). The activity of mesangial cell proliferation was assessed by colorimetry of thiazolyl blue (MTT). Results Compared with normal control group, the mRNA and protein expression of TET2 in mesangial cells induced by high glucose was increased significantly in a time-dependent manner (all P＜0.05), but the expression of TET1 and TET3 was not affected. Meanwhile methylation rate of 4 CG sites from 24 h to 72 h were decreased in the first exon of TGF-β1 (P＜0.01), but not in the promoter. Compared with high glucose group, when the expression of TET2 was inhibited by SC1, the methylation rate of TGF-β1 was recovered evidently (P＜0.05), the mRNA and protein expression of TGF-β1 and α-SMA was suppressed, and the proliferation of mesangial cells was decreased (all P＜0.05). Conclusions Demethylation of the CpG island mediated by TET2 may play an important role in the expression of TGF-β1 and mesangial cell phenotype transformation induced by high glucose.     

Effect of high glucose on the Notch signal pathway in mesangial cells and intervention of the cordyceps sinensis

Objective To investigate the expression of Notch signaling molecules, transforming growth factor-β (TGF-β) and fibronectin (FN) in mesangial cell induced by high glucose, and the underlying mechanism of cordyceps sinensis. Methods Rat glomerular mesangial cells were divided into following groups: normal control group (5.5 mmol/L glucose), hypertonic control group (5.5 mmol/L glucose+19.5 mmol/L mannitol), high glucose group (25.0 mmol/L glucose), DAPT inhibitor group (25.0 mmol/L glucose+1 μmol/L DAPT), cordyceps sinensis intervention group (25.0 mmol/L glucose+10 mg/L cordyceps sinensis). Cell proliferation was detected by MTT. The protein and mRNA expression of Notch signaling molecules (Notch1, Jagged1 and Hes1), TGF-β and FN was detected by Western blotting and real time PCR. Results Compared with normal control group, high glucose induced mesangial cell proliferation, as well as the mRNA and protein expression of Notch1, Jagged1, Hes1, TGF-β1 and FN was up-regulated in high glucose group (all P＜0.05). Compared with that in high-glucose group, DAPT and cordyceps sinensis inhibited high glucose-induced mesangial cell proliferation and down-regulated the mRNA and protein expression of Notch pathway, TGF-β1 and FN (all P＜0.05). Conclusion By inhibiting the abnormal activation of Notch signaling pathway and TGF-β signaling pathway, cordyceps sinensis may alleviate high glucose-induced mesangial cell proliferation and reduce extracellular matrix accumulation, thus protecting kidney.     

带蒂神经植入脊髓后许旺细胞的存活与迁移

目的：探讨神经组织移植后许旺细胞存活、增殖及诱导轴突再生的能力。方法：成鼠胸髓损伤后,分别移植带血管蒂正中神经（VN组）和游离正中神经（PN组）,术后8周行组织学检查和形态计量分析。结果：带血管蒂正中神经组移植神经与脊髓连接紧密,有较多新生轴突,许旺细胞大量存活和增殖,NF,S－100阳性反应均明显高于游离正中神经组。结论：带血管蒂周围神经移植较接近生理状态,许旺细胞存活并向脊髓实质内迁移和大量增殖,其诱导损伤轴突再生的能力也优于游离周围神经移植。     

红细胞生成素对体外培养许旺细胞的作用

目的 观察促红细胞生成(erythropoietin,EPO)对体外培养许旺细胞分泌胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和细胞周期的影响,探讨EPO促进外周神经再生的可能机制. 方法 将原代培养、纯化的许旺细胞随机分成三组:A组(10%胎牛血清DMEM液)、B组(10%胎牛血清DMEM液加10U/ml EPO),C组(10%胎牛血清DMEM液加50 U/ml EPO),应用ELISA测定培养上清液中的GDNF水平,流式细胞术检测细胞周期分布. 结果 与A组相比,B组和C组培养上清液中的GDNF明显增高,许旺细胞处于S期百分比(S%)和(S+G_2M)%都有明显升高. 结论 EPO可增加体外培养许旺细胞分泌GDNF,并且能提高许旺细胞的增殖活性,这可能是其促进外周神经再生的重要机制之一.