替米沙坦对人脐带动脉平滑肌细胞增殖的影响

摘 要 目的： 考察替米沙坦对体外培养的人脐带动脉平滑肌细胞（HUASMCs）增殖的抑制作用及对白细胞介素 6（IL-6）表达的影响。方法: 组织块贴壁法,HUASMCs原代培养,传3代细胞实验。MTT比色法检测同一浓度替米沙坦（50 μg·ml^-1）在不同作用时间（3～96 h）和不同浓度替米沙坦（0.5～500 μg·ml^-1）在同一作用时间（48 h）,对HUASMCs增殖的抑制作用。RT PCR和ELISA法检测低、中、高3种浓度的替米沙坦（1,10,100 μg·ml^-1）对HUASMCs表达IL-6 mRNA和因子的影响。结果: 不同作用时间的替米沙坦（50 μg·ml^-1）对HUASMCs的增殖有抑制作用(P<0.05),作用时间为48 h时,抑制作用最强,抑制率为（29.12±2.89）%。其后的作用时间72 h和96 h的抑制作用与48 h比无显著变化（P>0.05）。不同浓度的替米沙坦对HUASMCs增殖有抑制作用(P<0.05),当浓度为100 μg·ml^-1时,抑制作用最强,抑制率为（41.46±3.36）%。其后各浓度的抑制作用与100 μg·ml^-1比无显著变化（P>0.05）。低、中、高3种浓度的替米沙坦对HUASMCs表达的IL-6 mRNA和IL-6 含量均有抑制作用(P<0.05),并呈浓度依赖性(P<0.05)。结论: 替米沙坦抑制体外培养的HUASMCs增殖,对HUASMCs表达的IL-6 mRNA和因子分泌均有抑制作用。     

商陆多糖Ⅰ联合白细胞介素2对小鼠脾细胞杀瘤活性的影响

商陆多糖Ⅰ(PAP-I),0.3～3μg·ml^-1和小鼠脾细胞培养3～5d可显著增强其杀伤P815肿瘤细胞活性及IL-2(250～500IU·ml^-1)诱导的LAK细胞活性,最适浓度为1μg·ml^-1。PAP-I及IL-2和脾细胞培养的上清液对P815肿瘤细胞无细胞毒作用,但能增强脾细胞及LAK细胞杀瘤活性。PAP-I,5,10及50mg·kg-1,ip可增强脾细胞杀伤P₈₁₅和L₉₂₉细胞的活性及IL-2诱导的LAK细胞活性。     

商陆多糖Ⅱ体外对小鼠脾细胞增殖及产生集落刺激因子的影响

用[³H]TdR参入法检测小鼠脾细胞增殖能力及产生集落刺激因子(colony stimulating factor. CSF)含量.证明商陆多糖Ⅱ(PAP-Ⅱ)在31～500 μg·m^-1范围内显著促进小鼠稗细胞增殖。PAP-Ⅱ,31～125 μg·ml^-1可剂量依赖性地促进Con A(1,2.8μg·ml^-1),LPS(3,10,30 μg·ml^-1)诱导的淋巴细胞细咆增殖,随着PAP-Ⅱ剂量加大,对丝裂原诱导的淋巴细胞增殖反呈抑制作用。PAP-Ⅱ。10～500μg·ml^-1呈剂量及时间依赖性地促进脾细胞产生CSF,其最适剂量为100 μg·ml^-1。最佳时间为5 d,提示PAP-Ⅱ能增强免疫及促进造血功能。     

胶束电动毛细管色谱法分离和测定几种大黄含量

建立了胶束电动毛细管色谱法分离和测定几种大黄中大黄素、芦荟大黄素、大黄酸含量的测定方法。缓冲液为含0.025mol·L^-1十二烷基磺酸钠(简称SDS)的0.025mol,L-13-环己氨基-1-丙烷磺酸(简称CAPS)-乙腈(100:10),pH0.96。线性范围:芦荟大黄素为0.0025～0.0175mg·ml^-1(r=0.9999),大黄素为0.005～0.05mg·ml^-1(r=0.9999),大黄酸为0.005～0.035mg·ml^-1(r=0.9996)。回收率:芦荟大黄素为98.2%～101.8%,大黄素99.9%～101.9%,大黄酸99.2/～101.2%。此法简便、快速、重现性好。     

(+),(-)和(±)棉酚在雌大鼠抗早孕作用的研究

妊娠第6～9天大鼠,分别ig(±)和(-)棉酚80mg·kg^-1·d^-1和40mg·kg^-1·d^-1,结果有明显的抗早孕作用。然而(+)棉酚40mg·kg^-1·d^-1对大鼠生育无明显影响。(-)棉酚30μg·ml^-1能抑制体外培养黄体细胞孕酮的分泌。(+)棉酚10μg·ml^-1能促进黄体细胞分泌孕酮。hCG1IU·ml^-1能明显刺激体外培养颗粒细胞孕酮的分泌。(±)棉酚10和30μg·ml^-1皆能明显降低颗粒细胞对hCG的反应性。     

关附甲素对实验性心律失常和心肌收缩性的影响

关附甲素(GFA)浓度为20～3oμg·ml^-1时,可以降低无K⁺高Ca²⁺液灌流离体大鼠心脏诱发VT和VF的发生率。清醒大鼠ivGFA2.5～10mg·kg^-1,可依剂量性显著增加北草乌头碱引起室性早搏的用量。清醒犬ivGFA10mg·kg^-1,可逆转哇巴因引起VT,并对麻醉犬(10～20mg·kg^-1),由ACh诱发房颤有明显的抑制作用。GFA10mg·kg^-1iv可明显减慢麻醉犬或清醒犬心率,对心肌收缩性(V_max和V_pm)只有轻度而短暂的抑制,但对左室收缩压,心搏量和心输出量无明显影响。     

力达霉素对碱性成纤维细胞生长因子诱导的肿瘤细胞PKC活性的抑制

目的研究和探讨力达霉素对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的癌细胞中信号转导的抑制作用。方法MTT法检测LDM和阿霉素(ADR)对3种人癌细胞系的增殖抑制作用。受体结合实验检测LDM对bFGF与其受体结合的作用。Western blotting检测bFGF受体复合物的形成，流式细胞测定细胞内Ca²⁺的流动，免疫印迹法测定bFGF所诱导的3种PKC亚型的活性。结果MTT法实验结果，LDM在体外对3种人癌细胞均显示出强烈的增殖抑制作用。按IC₅₀值进行比较表明，LDM的活性比ADR强1 000倍以上。LDM抑制［¹²⁵I］-bFGF对大鼠肺细胞膜受体的IC₅₀为2.0×10^-4 nmol·L^-1。LDM能阻碍bFGF与其受体复合物的形成，LDM (10 nmol·L^-1)预孵育2 h可阻止bFGF诱导的细胞内Ca²⁺效应。免疫印迹法证明，LDM可抑制bFGF诱导的癌细胞的3种PKC亚型的活性。结论力达霉素抗肿瘤作用的机制之一可能是通过阻断bFGF受体的信号转导途径。     

藳本内酯和丁烯酜内酯对bFGF诱导的大鼠平滑肌细胞异常增殖的抑制作用

目的研究藳本内酯和丁烯酜内酯与大鼠主动脉平滑肌细胞的亲合活性，及其对主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用。方法采用大鼠主动脉细胞膜色谱模型观察藳本内酯和丁烯酜内酯的保留特性；培养并分离纯化大鼠主动脉平滑肌细胞，采用bFGF诱导平滑肌细胞增殖，以MTT比色法检测藳本内酯和丁烯酜内酯对平滑肌细胞增殖的抑制作用。结果藳本内酯和丁烯酜内酯与大鼠主动脉平滑肌细胞膜有亲和性，其保留行为与钙离子受体拮抗剂维拉帕米相似；藳本内酯和丁烯酜内酯不会引起正常大鼠主动脉平滑肌细胞增殖，但能明显抑制bFGF诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞的增殖。其有效浓度分别为5.5和11.1 μmol·L^-1(P<0.05)。结论藳本内酯和丁烯酜内酯与大鼠主动脉平滑肌细胞具有亲和力，能抑制血管平滑肌细胞的异常增殖。     

大黄素对血管生成的抑制作用

目的研究大黄素对血管生成的抑制作用及相关作用机制。方法用鸡胚观察药物对血管生成的影响;用培养的内皮细胞检测大黄素抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡作用。结果大黄素150和300 μg/egg对鸡胚的血管生成的抑制率分别为37.6%和63.2%。大黄素抑制内皮细胞增殖，在有bFGF、无bFGF、有VEGF的条件下，其IC₅₀值分别为5.56，8.40和6.91 mg·L^-1。大黄素可诱导内皮细胞凋亡，并可干扰内皮细胞周期，出现G₂/M期阻滞；可导致Cyclin B1,P34^cdc2和Bcl-2等蛋白的表达下调，但对Bax的表达无影响。结论大黄素有抑制血管生成作用，有可能应用于肿瘤治疗。     

常春卫矛提取物对 H2O2诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

摘 要 目的：研究常春卫矛乙醇、乙酸乙酯和正丁醇提取物分别对血管内皮细胞ECV 304氧化损伤的保护作用。方法: 体外培养ECV 304细胞,以H2O2诱导ECV 304细胞氧化损伤为模型,分别将常春卫矛乙醇、乙酸乙酯和正丁醇提取物（终浓度为400,200,100,50,25 μg·ml^-1）作用于细胞24 h后,以MTT法检测细胞存活率;Hochest染色观察细胞凋亡情况;以测定超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮合酶（NOS）和一氧化氮（NO）的含量评价药物对血管内皮细胞氧化应激的影响。结果: 常春卫矛乙醇、乙酸乙酯和正丁醇提取物在25～400 μg·ml^-1 浓度范围内,对ECV 304细胞均无细胞毒作用,其中乙酸乙酯提取物在400 μg·ml^-1浓度下,对细胞有一定增殖作用（P<0.05）;常春卫矛乙酸乙酯（浓度50～400 μg·ml^-1）、正丁醇（浓度100～400 μg·ml^-1）提取物对氧化损伤ECV 304细胞存活率有显著提高,OD值与模型组比较,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。常春卫矛乙醇、乙酸乙酯和正丁醇提取物能明显提高氧化损伤ECV 304细胞分泌SOD、NO水平（P<0.05或P<0.01）,对NOS水平无影响;常春卫矛乙醇、乙酸乙酯、正丁醇提取物均能抑制氧化损伤细胞凋亡,细胞核形态改善,凋亡率与模型组比较差异有统计学意义（P<0.01）。结论:常春卫矛提取物对H2O2诱导血管内皮细胞氧化损伤有一定保护作用。     

猪十二指肠类肝素对动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的　研究类肝素对平滑肌细胞增殖的影响及其机制。方法　分别以结晶紫和MTT染色、透射电镜及流式细胞仪等方法,观察类肝素对平滑肌细胞增殖,细胞形态,细胞内α-肌动蛋白含量及原癌基因c-myc,c-fos表达的影响。结果　类肝素0.2,0.4及0.8 mg.mL^-1可以抑制10%小牛血清所致平滑肌细胞增殖,类肝素0.8 mg.mL^-1可以使细胞维持类似收缩型的形态学表现,使细胞内α-actin含量增加,c-myc, c-fos原癌基因表达减少。结论　类肝素可以抑制平滑肌细胞增殖,其机制可能与抑制细胞表型转化,抑制细胞内原癌基因表达有关。     

选择性钠-氢交换抑制剂HOE642抑制血管平滑肌细胞增殖

采用家兔主动脉贴块培养法培养血管平滑肌细胞 (VSMC) .用 15 %小牛血清刺激VSMC增殖 .运用双盲法细胞计数和 [3H]TdR参入法检测平滑肌细胞的增殖 ,观察选择性钠 氢交换蛋白 (NHE 1)抑制剂HOE 6 4 2 (3 甲磺酰基苯甲酰胍 4 甲磺酸异丙酯 )对VSMC增殖作用的影响 .结果显示 ,选择性钠 氢交换抑制剂HOE 6 4 2能显著抑制 15 %小牛血清刺激的VSMC的增殖 ,2 0 μmol·L- 1HOE 6 4 2抑制VSMC增殖程度达 6 0 % .其抑制作用呈剂量依赖性     

扇贝裙边糖胺聚糖对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响(英文)

目的　研究扇贝 (Placopectamagellanicus)裙边中提取的糖胺聚糖 (SS GAG)是否如肝素一样抑制血管平滑肌细胞 (VSMC)的增殖。方法　采用胎牛血清和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)所诱导的大鼠胸、腹主动脉VSMC增殖模型 ,通过细胞计数、结晶紫染色及MTT比色法观察SS GAG对VSMC增殖的影响 ,并运用免疫组织化学技术和计算机图像分析系统检测SS GAG对VSMC的增殖细胞核抗原(PCNA)和血小板衍化生长因子 (PDGF)表达的影响。结果　SS GAG 5 0 ,10 0和 2 0 0mg·L- 1对 2 0 %胎牛血清和 5 0 μg·L- 1bFGF所诱导的VSMC增殖均有明显抑制作用 ,并能抑制VSMC增殖时PCNA和PDGF的表达。结论　SS GAG能抑制VSMC的增殖 ,该作用可能是通过抑制PDGF和PCNA的表达而实现的。     

甘糖酯对培养的牛脑微血管平滑肌细胞增殖的影响

应用牛脑微血管平滑肌细胞(BCMSMCs)体外培养技术,观察了酸性多糖药物甘糖酯(PGMS)对10％小牛血清(FCS)、白细胞介素1(IL-1)致BCMSMCs过度增殖的影响。将培养的5～8代细胞接种于96孔板,正常组加入含10％FCS的MEM培养液(或含有50u/ml IL-1的0.4％FCS培养液),给药组分别加入含有PGMS0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6mg/ml浓度的10％FCS培养液(或50u/ml IL-1的0.4％FCS培养液),以结晶紫染色,MTT比色,测定72h后细胞生长情况。结果显示,与10％FCS组和IL-1组比较,PGMS组BCMSMCs的增殖受到明显抑制(P<0.01),提示PGMS对10％FCS和IL-1引起的BCMSMCs异常增殖具有明显的抑制作用。     

Antiproliferative effects of A02011-1, an adenylyl cyclase activator, in cultured vascular smooth muscle cells of rat.

1. The effects of A02011-1, a pyrazole derivative, on the proliferation of rat vascular smooth muscle cells (VSMCs) were examined. 2. A02011-1 (1-100 microM) concentration-dependently inhibited [3H]-thymidine incorporation into DNA in rat VSMCs that were synchronized by 48 h serum depletion and then re-stimulated by addition of foetal calf serum (FCS, 10%), platelet-derived growth factor (PDGF, 10 ng ml-1), 5-hydroxytryptamine (10 microM) or ADP (10 microM). The inhibitory effect of A02011-1 was fully reversible. However, FCS-induced [3H]-thymidine incorporation into rat endothelial cells was unaffected by A02011-1. 3. The concentration of A02011-1 necessary for inhibition of the FCS-induced proliferation was similar to that necessary for adenosine 3':5'-cyclic monophosphate (cyclic AMP) formation. Adenylyl cyclase activity was increased in A02011-1-treated VSMCs, whereas cyclic AMP-specific phosphodiesterase activity was unchanged. 4. A02011-1 was equipotent with forskolin but was more potent than 8-bromo-cyclic AMP against FCS (10%)-induced proliferation. 5. The antiproliferative action of A02011-1 was mimicked by 8-bromo-cyclic AMP, a membrane-permeable cyclic AMP analogue and was antagonized by 2',5'-dideoxyadenosine, an adenylyl cyclase inhibitor and by Rp-cyclic AMPS, a competitive inhibitor of cyclic AMP-dependent protein kinase (PKA) type I and II. 3-Isobutyl-1-methylxanthine (IBMX) caused significant potentiation of the antiproliferative activity of A02011-1. However, Rp-8-bromo-cyclic GMPS and staurosporine did not affect the antiproliferative activity of A02011-1.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)     

肝素十二糖对血管平滑肌细胞增殖作用的研究

目的:研究肝素十二糖(dp12)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖作用的影响,并分析其分子水平的作用机制。方法:通过以10%新生牛血清诱导牛胸主动脉血管平滑肌细胞增殖建立模型,然后考察实验室精制的不同浓度的肝素寡糖对血管平滑肌细胞增殖作用的影响;四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测dp12对VSMCs增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期分布;RT-PCR法检测ERK1/2转录变化情况;Western Blotting法检测ERK1/2和p-ERK1/2的表达。结果:MTT结果显示不同浓度的dp12可以明显抑制由10%新生牛血清诱导的血管平滑肌细胞的增殖;细胞周期实验揭示dp12抑制血清诱导的VSMCs从G1期进入S期,影响细胞周期;dp12通过下调ERK基因的转录进而下调ERK1/2的表达,此外dp12抑制ERK1/2的磷酸化进而影响细胞增殖。结论:dp12使VSMCs在G1期/S期阻滞,通过抑制ERK基因的转录和ERK蛋白的磷酸化抑制VSMCs增殖,可能是dp12抗VSMCs增殖的机制之一。     

Osteopontin is required for angiotensin II-induced migration of vascular smooth muscle cells

Migration and proliferation of vascular smooth muscle cells (VSMCs) play a prominent role in the development of atherosclerotic plaques and restenosis lesions. Angiotensin II (Ang-II) is typically associated with excessive proliferation and migration of VSMCs and vascular remodeling. High levels of osteopontin (OPN) mRNA and protein were reported in human atherosclerotic plaque from the aorta, carotid and coronary arteries. However whether OPN plays a role in VSMCs migration induced by Ang-II is unknown. Here we show that, in primary cultured rat VSMCs, Ang-II exhibits chemotactic effect on cultured VSMCs and induces OPN expression dose-dependently. With a lentiviral shRNA specifically targeting OPN and transwell migration assay, we find that blockade of OPN with shRNA inhibits Ang-II-induced MMP9 upregulation and VSMCs migration. Our results demonstrated that OPN is required for Ang-II to induce VSMCs migration and suggested OPN as a potential target in preventing atherosclerotic development.     

叶酸抑制同型半胱氨酸诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的研究

目的探讨叶酸抑制同型半胱氨酸致大鼠血管平滑肌细胞增殖的研究。方法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC),流式细胞仪检测VSMC周期,[3H]TdR参入测定VSMC的DNA合成。结果同型半胱氨酸以剂量依赖关系使VSMC周期中的G0/G1期细胞比例明显减少,S期细胞比例显著增多,增加VSMC的[3H]TdR参入。叶酸可明显抑制同型半胱氨酸诱导的作用。结论同型半胱氨酸能诱导VSMC增殖,叶酸能抑制同型半胱氨酸诱导的VSMC增殖。     

C-reactive protein directly inhibits nitric oxide production by cytokine-stimulated vascular smooth muscle cells

C-reactive protein (CRP) is an important risk factor for atherosclerosis and coronary artery disease. The authors investigated the effects of CRP on nitric oxide (NO) synthesis in vascular smooth muscle cells (VSMCs). Production of nitrite, a stable metabolite of NO, was measured, as was the expression of inducible NO synthase (iNOS) messenger RNA and protein in cultured rat VSMCs. Incubation of cultures with interleukin (IL)-1beta (10 ng/mL) caused a significant increase in nitrite production. C-reactive protein significantly decreased the IL-1beta-induced nitrite production by VSMCs in a dose-dependent manner (10-100 microg/mL). Incubation with IL-1beta induced expression of iNOS mRNA and protein in VSMCs, whereas CRP showed a suppressive effect on their expression. Addition of IL-1beta activated nuclear factor-kappaB (NFkappaB) in VSMCs, whereas CRP did not affect IL-1beta-induced NFkappaB activation. In conclusion, CRP acts on VSMCs and inhibits NO synthesis, which might contribute to the development of atherosclerosis and vascular events.