不同细胞培养基与血清对细胞因子诱导的杀伤细胞功能的影响

[摘要] 　目的：探讨不同细胞培养基及血清对细胞因子诱导的杀伤（CIK）细胞功能的影响。方法：采集6例肺癌患者外周血,分离获得单个核细胞,按照不同血清与培养基分为8组。采用CFSE染色法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测CIK细胞的功能。 结果：GT-T551培养基加入患者自体血清组的CIK细胞,其增殖指数显著高于其他培养条件组（P<0.05）。在细胞杀伤功能实验中检测CD3 CD56 NKT细胞显示,GT-T551培养基中加入患者自体血清组比加入健康人血清组更有利于增强CIK细胞的细胞毒活性（P<0.0001）;RPMI 1640培养基中加入患者自体血清组比加入健康人血清组更有利于增强CIK细胞的细胞毒活性（P=0.021）。 细胞内因子的检测结果显示,GT-T551培养基中加入患者自体血清组CD4 T细胞颗粒酶B的分泌水平高于加入健康人血清组（P<0.0001）,同样,RPMI 1640培养基中加入患者自体血清组要高于加入健康人血清组（P<0.0001）;而且GT-T551培养基中加入患者自体血清组CD8 T细胞分泌IFN-?的能力显著高于加入健康人血清组（P=0.007）。 结论：GT-T551培养基加入患者自体血清更有利于CIK细胞的增殖,及发挥杀伤功能,为优化CIK细胞培养体系提供实验依据。     

PersonGen TM 技术和CIK细胞培养方法对T细胞扩增与活化效果的比较

目的： 探讨基于第一/第二刺激信号原理联合IL-15的的T淋巴细胞扩增技术（PersonGen TM ）和细胞因子诱导的杀伤（cytokine-induced killer,CIK）细胞培养扩增方案对T细胞扩增和活化的效果。方法：分离8名健康人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,分别采用CIK细胞扩增技术（CIK组）、PersonGen TM 扩增技术（PersonGen TM 组）及两种技术的联合应用（C＋P组）刺激PBMC增殖,应用细胞计数法和流式细胞术比较T细胞的扩增效率及T细胞亚群比例,并以人白血病K562细胞及骨髓瘤RPMI 8226细胞为靶细胞检测扩增后T细胞的杀伤活性。结果：经过3周培养后,CIK、PersonGen TM 和C+P 3组T细胞扩增倍数分别为（254±56）、（863±218）和（793.3±395）倍。其中CD3 +细胞所占比例分别为（51.61±14.95）%、（99.21±0.79）%和（96.14±5.16）%; CD3 +CD4 +在CIK组细胞扩增了近5倍,C＋P组与PersonGen TM 组均扩增近160倍;CD3 +CD8 +细胞在CIK组扩增了近500倍,C＋P组和PersonGen TM 组扩增达千倍;CD3 +CD56 + NKT细胞在CIK组扩增700多倍,其他两组达千倍。杀伤实验结果显示,当E∶T为5∶1时,3组细胞对K562杀伤率为（45.53±19.16）%、（36.53±10.6）%和（53.17±5.83）%,对RPMI 8226杀伤率为（41.23±12.5）%、（38.83±4.3）%和（45.73±7.48）%。结论： Person Gen TM 扩增技术获得的T细胞数量多、纯度高,其中CD3 +CD8 +和CD3 +CD56 + NKT细胞比例较高,其对K562和RPMI 8226肿瘤细胞的杀伤效果相似于CIK细胞扩增方案获得的T细胞。     

脐血和合并乙型肝炎病毒感染肝癌患者来源CIK细胞的增殖及杀伤活性

目的：观察脐血和乙型肝炎病毒感染肝癌患者外周血诱导的CIK细胞的体外增殖能力及杀伤活性的特点。方法： 分别采集解放军第105医院妇产科住院的健康产妇剖宫产胎儿的脐带血5份（A组）、感染科住院的合并乙型肝炎病毒感染的原发性肝癌患者自体外周血15份（B组）、无乙型肝炎病毒感染的原发性肝癌患者自体外周血5份（C组）,采用Ficoll两步分离法分离出单个核细胞,细胞因子诱导培养成细胞因子诱导的杀伤(ClK)细胞,流式细胞仪检测CIK细胞的免疫表型CD3＼CD8＼CD16＼CD56,MIT法测定其对白血病K562细胞的杀伤活性。结果：体外培养15 d时, C组CIK细胞体外增殖倍数与A组相似\[（577.24±202.4）vs（600.93±249.1）倍, P >0.05\],该两组均显著高于B组\[（385.16±117.3）倍, P <0.05\];A组CIK细胞杀伤活性显著高于B组和C组\[（77.3±5.1）% vs （44.1±3.4）%、（54.5±3.7）%, P <0.01\]。结论： 脐血来源的CIK细胞体外增殖快、杀伤活性强;合并有乙型肝炎病毒感染的肝癌患者CIK细胞体外增殖能力和杀伤能力明显降低,不宜接受自体CIK细胞移植。     

自体和半相合异体细胞因子诱导的杀伤细胞联合化疗治疗非小细胞肺癌的临床疗效评价

 目的　评价自体和半相合异体细胞因子诱导的杀伤（CIK）细胞联合化疗治疗非小细胞肺癌（NSCLC）的临床疗效及安全性。方法　选择42例NSCLC患者为研究对象,按照成组匹配原则将病例分为3组：自体CIK细胞联合化疗组（自体CIK组）,半相合异体CIK细胞联合化疗组（异体CIK组）,单纯化疗组。观察自体和异体CIK细胞免疫治疗的安全性,流式细胞术（FCM）分析比较各治疗组治疗前后体内T细胞亚群变化,并对3组的临床近期疗效进行比较。结果　FCM检测结果显示,自体与异体CIK组CIK细胞输注后CD+3、CD+4／CD+8比值、NK细胞（CD-3 CD+56）和CIK细胞（CD+3 CD+56）比例较治疗前明显升高,自体CIK组治疗前分别为（47.2±10.1）%、1.0±0.1、（15.1±2.7）%、（0.7±0.2）%。治疗后分别为（58.8±12.3）%、1.3±0.2、（24.6±7.1）%、（3.8±2.2）%;异体CIK组治疗前为（49.4±11.4）%、0.9±0.2、（14.8±3.2）%、（0.9±0.3）%,治疗后为（57.3±9.2）%、1.4±0.3、（25.4±6.7）%、（4.3±2.6）%,差异有统计学意义（t值分别为22、20、19,均P＜0.05）,而单纯化疗组治疗前后T细胞亚群水平未见明显改变。临床近期疗效比较结果显示,自体及异体CIK细胞治疗组客观有效率和疾病控制率（分别为35.7 %、28.6 %和64.3 %、71.4 %）均稍高于单纯化疗组（21.4 %、57.1 %）,但差异无统计学意义（χ2＝38.85、χ2＝41.24,均P＞0.05）。结论　自体或半相合异体CIK细胞免疫治疗安全性好、毒副作用低,有一定的近期疗效,可有效延缓肿瘤复发,是一种值得在临床上推广的肿瘤辅助治疗模式。     

红景天提取物对Lewis肺癌小鼠移植瘤中CD4+CD25+Treg的抑制作用

目的： 观察红景天提取物（sachalin rhodiola rhizome extract,SRR）对Lewis肺癌小鼠移植瘤中CD4+CD25+调节性T细胞（regulatory T cell,Treg）的抑制作用,初步探讨其抑制肿瘤生长的机制。 方法： 建立小鼠Lewis肺癌移植瘤模型,随机分为3组：SRR组,紫杉醇（paclitaxel,PTX）阳性对照组和PBS组,记录各组小鼠移植瘤体积变化,计算抑瘤率并观察小鼠生存期。流式细胞术检测移植瘤组织中CD4+CD25+Foxp3+Treg的比例,荧光定量PCR 检测移植瘤组织中 Foxp3 和TGF-β mRNA的表达水平。 结果： 在建模第20天,SRR组小鼠移植瘤体积明显小于PBS组\[（719.6±2.4） vs （1030.5±3.1）mm3,P<005\],但与阳性对照PTX组无显著差异（P>0.05）。SRR组小鼠生存期较PBS组显著延长\[（36.0±1.0） vs （22.0± 2.0）d,P<0.01\],而与PTX组无显著差异（P>0.05）。SRR治疗组小鼠移植瘤组织中CD4+CD25+Foxp3+Treg占CD4+T细胞的比例显著低于PBS组\[（8.5±0.3）% vs （11.2±0.2）%,P<0.01\],但与PTX组无显著差异（P>0.05）。SRR组小鼠移植瘤组织中 Foxp3 mRNA \[（1.2±0.2) vs (2.1±0.2),P<0.05\]、TGF-β mRNA \[（1.2±0.1) vs (2.1±0.2),P<0.05\]表达均明显低于PBS组,而与PTX组无显著差异（P>0.05）。 结论： SRR可能通过下调肿瘤组织中CD4+CD25+Treg比例、 Foxp3 和TGF-β mRNA的表达,增强机体的抗肿瘤免疫应答。     

DC-CIK细胞治疗局部晚期和晚期胰腺癌患者的临床疗效

目的： 探讨树突状细胞（dendritic cell,DC）联合细胞因子诱导的杀伤（cytokine-induced killer,CIK）细胞治疗局部晚期和晚期胰腺癌的安全性和有效性。 方法： 采集2011年7月至2012年5月在解放军第81医院生物治疗科治疗的24例Ⅲ～Ⅳ期胰腺癌患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,体外诱导培养DC和CIK细胞。DC经胰腺癌细胞株（PANC-1）裂解物致敏后与CIK细胞回输至胰腺癌患者,观察DC-CIK细胞治疗前后患者外周血淋巴细胞亚群、血清肿瘤标志物的改变以及临床疗效。 结果： DC-CIK细胞治疗3个月后,胰腺癌患者外周血CD3+T细胞、CD8+T细胞和CD4+CD25+Treg细胞比例均显著下降（均P<0.05）,CD4+/CD8+比值升高\[（1.1±0.7) vs (1.5±0.9),P<0.05\]。血清肿瘤标志物CA19-9在治疗后1个月\[（382.8±277.7) vs (213.8±214.6),P<0.05\]和治疗后3个月\[（213.8±214.6) vs (1540±118.2),P<001）持续下降。24例患者无1例完全缓解,其中3例部分缓解,4例疾病稳定,17例疾病进展;治疗有效率为125%,疾病控制率为29.2%;中位生存期为5.7个月,6个月生存率为33%,9个月生存率为27%。治疗期间所有患者均未出现 3～4级不良反应。 结论： DC-CIK细胞治疗局部晚期和晚期胰腺癌患者安全可行,可改善患者免疫功能并产生临床获益。     

白细胞介素-27促进CIK细胞的增殖及其对淋巴瘤细胞的杀伤能力

目的： 初步探讨重组人白介素-27（interleukin-27, IL-27）体外对人外周血来源的细胞因子诱导的杀伤（cytokine induced killer,CIK）细胞增殖及其对肿瘤细胞的杀伤能力的影响。 方法:无菌条件下分离健康志愿者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,第0天加入IFN-γ、CD3单抗,之后根据加入不同细胞因子剂量随机分为六组进行CIK细胞培养：A组（IL-2：1 000 U/ml,正常对照组）, B组（IL-2：1 000 U/ml,IL-27：20 ng/ml）, C组（IL-2：1 000 U/ml,IL-27：10 ng/ml）, D组（IL-2：500 U/ml,IL-27：10 ng/ml）,E组（IL-2：1 000 U/ml,IL-27：5 ng/ml）, F组（IL-2：1 000 U/ml,IL-27：40 ng/ml）。倒置相差显微镜下观察各组CIK细胞生长情况,流式细胞术检测各组CIK细胞CD3 +CD56 +T、CD8 +T细胞的表达,自动细胞计数仪计数各组CIK细胞增殖情况,MTS方法测定各组CIK细胞对淋巴瘤K562细胞的杀伤活性。 结果： 培养第11天,D组与A、B、C组比较,CIK细胞中CD3 +CD56 +T细胞的表达\[（6657±244）% vs（6003±175）%,（5551±003）%,（5607±083）%;均P<005\]、CD8 +T细胞的表达\[（8167±197）%  vs（7030±267）%,（7492±247）%,（7443±190）%;均P<005\]都明显增强;D组CIK细胞培养的扩增倍数明显高于A、B、C组\[（4 81187±2307)  vs  (3 25773±9197), (379092±6449), (4 00985±4308)倍;均P<005\];效靶比40 ∶1时; D组CIK细胞培养第11天时杀伤力为（7671±221）%,显著高于其他各组（均P<005）。 结论： 细胞因子IL-27体外可显著提高CIK细胞的增殖能力和杀伤能力,最佳培养周期为11 d。     

小白菊内酯体内杀伤小鼠乳腺癌肿瘤干细胞

目的： 探讨小白菊内酯（parthenolide,PTL）对小鼠乳腺癌肿瘤干细胞（cancer stem cell,CSC）的杀伤作用,为临床应用PTL治疗乳腺癌提供实验依据。 方法： 采用5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil, 5-FU）化疗法制备富含CSC的小鼠4T1细胞乳腺癌模型,随机分为对照组、5-FU组、PTL组。4周后脱颈处死小鼠,检测各组小鼠肿瘤的体积和重量,流式细胞术检测小鼠肿瘤组织中CD44+CD24-/low细胞比例,Hoechst33342染色法检测侧群（side population,SP）细胞的比例,免疫组化法检测CD55和乙醛脱氢酶1（aldehyde dehydrogenase1,ALDH1）蛋白的表达,倒置显微镜观察乳腺癌细胞微球体的形成。 结果： 成功制备富含CSC的小鼠乳腺癌细胞移植瘤模型,PTL可下调小鼠肿瘤组织中CD44+CD24-/low细胞的比例\[（42.5±3.7）% vs （68.7±32）%,P<0.05\],有效降低荷瘤小鼠肿瘤组织中SP细胞的比例\[（39.2±1.8）% vs （61.3±2.6）%,P<0.05\],下调小鼠移植瘤组织中CD55和ALDH1蛋白的表达\[（18.9±1.5）% vs （30.1±1.3）%,（8.1±2.3）% vs （18.0±1.4）%;均P<0.05\],抑制小鼠肿瘤细胞在无血清培养条件下形成微球体,并可抑制小鼠移植瘤的体积和重量\[（0.625±0.159）cm3 vs （1.715±0184）cm3,（1.467±0.373）g vs （3.367±0.398）g;均P<0.05\]。 结论： PTL在荷瘤小鼠体内可以明显降低肿瘤组织CSC含量,提示PTL可用来靶向杀伤乳腺癌CSC。     

ATG-F培养体系制备CIK细胞的表型特点及其对K562细胞的杀伤作用

目的：探讨抗人T细胞兔免疫球蛋白-费森尤斯（anti-human T lymphocyte rabbit immunoglobulin-Fresenius,ATG-F）和IFN-γ、IL-2 组成的培养体系诱导细胞因子诱导的杀伤（cytokine induced killer,CIK）细胞的性能并用于临床细胞治疗的可行性。方法:采集分离健康供者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),依照激活抗体的不同分组分别培养CIK细胞,在第7 和14 天计数总细胞数量。流式细胞术检测ATG-F组、CD3 组和TG（抗人胸腺细胞兔免疫球蛋白,Thymoglobulin）组CIK细胞组成及细胞表面活化性、抑制性受体分子的比例,还检测第14 天时ATG-F高剂量组、CD3 组和TG组CIK细胞对K562 靶细胞的杀伤性能。结果：使用ATG-F、IFN-γ、IL-2 培养体系成功诱导出CIK细胞。第14 天时高剂量ATG-F（F-H）组增殖倍数明显高于TG组（27.25±1.25 vs 16.60±1.72,P<0.01）;其CD3+CD56+细胞比例与CD3 组无统计学差异(P<0.05）,但CD3-CD56+的NK细胞显著高于TG 组及CD3 组[ （11.19±2.60）% vs（5.66±1.00）%、（1.42±0.51）,P<0.01]、CD4+T 细胞比例显著低于CD3、TG 组[（4.35±1.47）% vs（26.88±5.01）%、（14.52±6.22）%,P<0.01]、CD56+CD94+ 、CD56+CD158a+ 、CD56+CD158b 细胞比例均明显高于CD3 组（ 均P<0.01）;F-H 组在靶效比为1∶10 时对K562 的杀伤效力显著高于CD3 组[ （60.52±2.05）% vs（30.02±6.67）%,P<0.01]。结论：ATG-F培养体系制备的CIK 细胞比常规培养体系所得CIK 细胞具有更高的NK细胞比例,其活化受体对K562细胞更强的细胞毒性。     

自体CIK细胞治疗对恶性肿瘤患者免疫功能和生活质量的影响

目的：探讨自体细胞因子诱导的杀伤（cytokine-induced killer,CIK）细胞对恶性肿瘤患者免疫功能和生活质量的影响。 方法： 回顾性分析在我院经过CIK细胞治疗的58例恶性肿瘤患者临床资料,流式细胞仪检测患者治疗前后外周血CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3-CD16+ CD 56+和CD3+CD16+ CD 56+细胞的表达水平;42例患者治疗前后采用世界卫生组织生活质量测定简表(WHOQOL-BREF)分别进行问卷调查;治疗过程中监测相关的不良反应。 结果： 患者CIK细胞培养液体取样标本中CD3+总T淋巴细胞、CD3+CD4+T辅助淋巴细胞以及CD3+CD8+T抑制淋巴细胞的亚群水平分别为（8279±11.98）%、（30.32±11.23）%和（49.10±11.65）%,CD4+/CD8+的比值为0.67±0.34,而CD3-CD16+CD56+NK细胞和CD3+CD16+CD56+CIK细胞亚群水平分别为（16.58±11.83）%和（13.74±8.66）%。与治疗前相比,治疗后的患者外周血中CD3+总T淋巴细胞亚群、CD3+CD4+T辅助淋巴细胞亚群、CD3+CD8+T抑制淋巴细胞亚群和CD3+CD16+ CD 56+CIK细胞亚群水平均明显升高(P<0.05),CD3-CD16+ CD 56+NK细胞亚群水平较治疗前下降(P<0.05)。经过CIK细胞治疗后,患者的生理、心理、社会关系和环境关系均得到很好的改善(P<0.05)。自体CIK细胞治疗过程中不良反应发生率低,均可控制。 结论： 自体CIK细胞治疗增强了患者的免疫功能,改善了患者的生活质量,且不良反应较轻。     

阿糖胞苷和泰素在不同靶细胞生长状态下具有不同细胞周期特异性

Objective： To investigate the cell-cycle specificities of cytarabine and paclitaxel in different growing status of target cell. Methods： Using flow cytometry, we tested the cell-cycle specificities of cytarabine and paclitaxel on acute lymphocyte leukemia cell line Molt-4 in different growing status and on clinical acute lymphocyte leukemia specimens in vitro as well as in leukemia patients in vivo. Results： Cytarabine induced S phase specific cebcyde blockage and apoptosis in exponentially growing Molt-4, but showed G0/G1 phase specificity in high-density cultured Molt-4 and in clinical specimens. Paclitaxel induced G2/M phase specific cell-cycle blockage and apoptosis in exponential Molt-4, but showed G0/G1 phase specificity in high-density cultured Molt-4 and S phase specificity in clinical specimens. In the first day of clinical chemotherapy, cytarabine induced G0/G1 with a little S phase apoptosis in leukemia cells of acute lymphocyte leukemia patient in vivo. Cytarabine plus paclitaxel together had almost the same effect in the second day. Conclusion： The cell-cycle effects of cytarabine and paditaxel were different in different target cell growing status. It should be noted that the in vivo effect of these agents may be different from people usually anticipated during clinical chemotherapy. So the combined chemotherapeutic regimens may need to be redesigned.     

不同细胞因子对DC成熟的影响及细胞穿膜肽的穿膜效率比较

目的 通过比较不同因子促进树突状细胞(Dendritic cells,DC)成熟的差别,探讨如何提高DC成熟度。进一步研究多种细胞穿膜肽(Cell penetrating peptide,CPP)的入胞效率,寻找高效的CPP负载肿瘤抗原,以提高DC靶向治疗肿瘤的效果。方法 针对体外培养的DC细胞,应用不同种类、不同浓度的DC培养因子和成熟因子分别诱导DC成熟,通过倒置显微镜观察成熟DC细胞数量、形态;流式检测成熟DC细胞表达CD80、CD83、CD86、HLA-DR的水平。免疫荧光染色观察TAT、SecPen、PanPro和Pan四种细胞穿膜肽穿膜效率的异同。结果 常量及倍量GM-CSF诱导成熟DC的数量无统计学差异(P＞0.05),CD80、CD83、CD86、HLA-DR的表达无统计学差异;应用改良方案培养的成熟DC数量明显高于采用传统IL-4+GM-CSF及IFN-γ诱导的成熟DC数量,差异具有统计学意义(P＜0.05),但是,成熟DC细胞CD80、CD83、CD86、HLA-DR等表面标记表达无统计学差异;SecPen的穿膜效率(83.3±3.0%)明显高于其他三种穿膜肽,具有统计学意义(P＜0.05)。结论 改变GM-CSF的浓度并不能提高成熟DC的数量和比例;相比传统方法,改良方法诱导的DC成熟能力比传统方法有优越性;穿膜肽可以有效进入DC细胞,但不同穿膜肽穿透细胞膜的能力有显著差异,在DC肿瘤疫苗的靶向治疗中需要谨慎选择。     

不同浓度洋地黄对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究不同浓度洋地黄对体外培养的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖和凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法:取对数生长的细胞,不同浓度洋地黄处理,MTT法观察洋地黄对MDA-MB-231细胞活性、增殖的影响;Hoechst 33342染色观察洋地黄促细胞凋亡作用,细胞色素C含量及caspase 9活性变化检测线粒体损伤程度;生长曲线法观测洋地黄对细胞增殖的影响,Western blot检测细胞周期蛋白表达。结果:高浓度的洋地黄（≥100nmol/L）引起MDA-MB-231细胞凋亡,促进细胞色素C释放,增加caspase 9活性。低浓度洋地黄（30nmol/L）不引起肿瘤细胞凋亡,但是抑制细胞增殖,抑制细胞周期素D1和细胞增殖抗原PCNA的表达,增强p21cip1蛋白的表达。结论:高浓度洋地黄通过线粒体损伤通路促进乳腺癌细胞凋亡,低浓度洋地黄通过干扰细胞周期抑制乳腺癌细胞的生长。     

肿瘤细胞对不同分化阶段树突状细胞脂含量和蛋白质二级结构的影响

目的:利用傅里叶变换红外光谱(Fourier transformed infrared spectrum,FT-IR)技术探讨肿瘤细胞共培养对不同分化阶段树突状细胞(dendritic cells,DCs)的脂含量和蛋白质二级结构的影响,为深入理解肿瘤的免疫逃逸机制寻找线索。方法:免疫磁珠法分离人CD14+单核细胞,以经典方法将其诱导为未成熟DCs(immature DCs,imDCs)和成熟DCs(mature DCs,mDCs),分别将imDCs和mDCs与肝癌细胞株BEL7402、红白血病细胞株K562以及人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelialcells,HUVECs)共培养48 h,正常培养的DCs作为对照。采用FT-IR技术研究不同肿瘤细胞对不同分化阶段DCs的脂含量和蛋白质二级结构的影响。结果:与正常培养的DCs相比,与肿瘤细胞BEL7402和K562共培养后imDCs和mDCs的膜磷脂成分减少(2.718±0.296,3.124±0.361vs4.855±0.324,P<0.05;2.964±0.136,3.522±0.173vs4.217±0.206,P<0.05),而总的脂含量增加(3.768±0.185,3.591±0.197vs2.487±0.212,P<0.05;4.288±0.156,4.155±0.167vs3.233±0.206,P<0.05);蛋白质α-螺旋含量减少(1.863±0.192,1.754±0.169vs2.364±0.188,P<0.05;1.124±0.133,1.016±0.107vs1.392±0.113,P<0.05),β-折叠(3.397±0.225,3.433±0.236vs2.486±0.198,P<0.05;2.646±0.209,2.591±0.216vs1.558±0.159,P<0.05)和转角含量(4.366±0.284,4.322±0.266vs3.127±0.272,P<0.05;2.675±0.221,2.627±0.235vs1.773±0.181,P<0.05)增加;并且mDCs比imDCs更容易受到肿瘤来源因素的影响。结论:与肿瘤细胞共培养能够导致mDCs和imDCs的脂含量和蛋白质二级结构发生改变,可能是肿瘤导致DCs功能损伤的结构基础。     

赫赛汀与泰索帝序贯联合应用对乳腺癌细胞抑制作用的研究

目的探讨赫赛汀与泰索帝联合作用于乳腺癌时,抑制作用最强的序贯方式;赫赛汀对于泰索帝作用的影响及其机制。方法利用MTT法及流式细胞技术测定单纯赫赛汀组、单纯化疗组以及不同序贯方式赫赛汀结合化疗组对人乳腺癌细胞(MDA-MB543)的抑制率及细胞周期的影响。结果赫赛汀作用18h后应用泰索帝,两药联合作用对乳腺癌细胞的抑制率最强(53.12%),优于单纯化疗组(41.55%)及其他序贯方式作用组,特别是化疗后应用赫赛汀组(P<0.01);此时泰索帝抑制率最高为(46.15%)。此种序贯方式与其他序贯方式相比可更有效地将细胞阻滞在G0/G1和G2/M期。结论赫赛汀应用18h后应用泰索帝,可最大程度增强泰索帝的抑制作用,优于单药及其他序贯方式,且此时两药联合对于肿瘤细胞的抑制作用最强。较其它序贯方式可更有效地将细胞阻滞在G0/G1和G2/M期,影响细胞的生长及凋亡,而发挥协同作用。     

EGFR FISH versus mutation: different tests, different end-points

Epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitors (EGFR-TKIs) demonstrated to significantly improve survival of non-small cell lung cancer patients (NSCLC) previously exposed to chemotherapy. Although clinical features, particularly smoking history, help physicians for identifying the sensitive population, a proper patient selection should not preclude to drug target assessment. EGFR mutations or increased EGFR gene copy number assessed by fluorescence in situ hybridization (FISH) identify NSCLC with the highest chance to respond to the therapy. Although indirect comparisons suggest that mutation analysis is the best available technique for identification of responders, survival improvement is not confined to individuals with tumor shrinkage. For patients with metastatic NSCLC, where definitive cure in not achievable, response is probably not the best end-point, since survival improvement observed with TKI included also patients with stable or progressive disease. Data from large randomized studies indicated that FISH technology is probably the best method for patient selection when the main end-point is survival. FISH was the only EGFR test significantly associated with prolonged survival in large randomized trials with a control arm of placebo, the only studies able to discriminate between predictive and prognostic value of such biomarkers. Moreover, in absence of any convincing data on the prognostic role of EGFR FISH or EGFR mutations, results from large phase III trials suggest that patients with clinical or biological predictors for TKI sensitivity survive longer when exposed to standard chemotherapy, a relevant aspect that should be considered in designing clinical trials.     

不同病理亚型肾细胞癌的磁共振成像表现

目的 探讨不同病理亚型肾细胞癌(RCC)的磁共振成像(MRI)表现.方法 回顾性分析术前行MRI检查、术后经病理证实的79例患者的81个RCC病灶的影像学表现,比较不同病理亚型RCC在MRI平扫和增强扫描不同时期肿瘤的强化程度与方式、肿瘤侵犯程度以及与手术和病理结果 的对照.绘制MRI增强扫描不同时期区分透明细胞癌与非透明细胞癌的操作者特征性曲线,确定用于两者区分的肿瘤实质标准信号噪声比(SNR)值的最佳临界点,进行诊断效价检验.评价不同病理亚型RCC的肾外侵犯程度.结果 81个RCC病灶中,透明细胞癌58个,嫌色细胞癌10个,乳头状细胞癌8个,未分类癌5个.T1WI和T2WI序列平扫时,嫌色细胞癌的均质度较高,信号均匀;透明细胞癌的信号不均匀,多为混杂信号.增强扫描时,透明细胞癌主要表现为不均匀强化,嫌色细胞癌主要表现为均匀强化.在增强扫描的皮髓交界期、肾实质期和排泄期,区分透明细胞癌与非透明细胞癌的最佳临界标准SNR值为616、579.和278.综合比较,增强扫描肾实质期更利于区分透明细胞癌与非透明细胞癌,其敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度分别为62.1%、91.3%、94.7%、48.8%和70.3%.RCC的病理分型与肾外侵犯情况无关.结论 不同病理亚型RCC的MRI表现存在差异;MRI检查可以为临床选择个体化的治疗方案及预测疗效提供一定的帮助.     

波形蛋白在不同病理亚型肾癌组织中的表达及其临床意义

目的:检测波形蛋白(vimentin)在不同病理类型肾细胞癌(RCC)组织中的表达并探讨其临床意义.方法:采用免疫组化PV-6000法检测152例手术切除的RCC组织和12例癌旁肾组织中波形蛋白(vimentin)的表达,分析vimentin表达与RCC临床病理特征的相关性.结果:vimentin在正常肾组织的阳性表达率为8.3%,在RCC组织的阳性表达率为76.3%,组间差异有统计学意义(P<0.05).vimentin在透明性肾细胞癌(ccRCC)、乳头状肾细胞癌(PRCC)和嫌色性肾细胞癌(CRCC)组织中阳性表达率分别为88.6%(101/114)、72.2%(13/18)和11.8%(2/17),其在ccRCC和PRCC的阳性表达均高于CRCC,组间差异均具有统计学意义(P<0.05).vimentin阳性表达与ccRCC的组织学分级和临床分期无明显相关性(P>0.05).结论:波形蛋白的表达与肾癌病理类型关系密切,提示vimentin可辅助RCC的病理分型鉴别诊断.波形蛋白在透明性肾细胞癌普遍高表达,提示其在ccRCC的诊断上有一定意义,但尚不足以评估ccRCC的恶性程度.     

不同亚型囊肿相关性肾细胞癌的临床特点

目的:研究不同病理亚型囊肿相关性肾细胞癌临床特点,总结诊治经验。方法:回顾性分析1991~2000年我院经手术治疗的39例囊肿相关性肾细胞癌的临床资料,根据不同的病理类型归纳其特征。结果:多囊肾基础上发生的肾细胞癌2例,囊肿内肾细胞癌20例,囊性肾细胞癌17例。3例行肾部分切除术,36例行肾癌根治术。RobsonⅠ期16例,Ⅱ期23例。透明细胞癌38例,嫌色细胞癌1例。随访5~14年,1、3、5年存活率分别为100%、100%、94.8%(37/39)。结论:囊肿病例需定期复查。囊肿相关性肾细胞癌多为低期透明细胞癌。增强CT扫描和肾动脉造影是术前确立临床诊断的主要方法。手术治疗远期效果好。