树突状细胞疫苗肿瘤抗原负载方式的临床转化研究进展

树突状细胞（dendritic cell, DC）是体内功能最强的抗原提呈细胞,能将肿瘤抗原提呈给T细胞,是抗肿瘤免疫的启动者。DC疫苗的肿瘤免疫治疗虽已取得丰硕成果,但在其临床转化过程中还有很多问题需要解决,选择何种抗原负载方式则是其中之一。目前临床试验中常用的有肿瘤细胞裂解物负载DC、重组肿瘤相关抗原负载DC及携带肿瘤相关抗原信息的mRNA转染DC三种方法。本文对此三种方法在临床试验中的应用做一综述,为树突状细胞疫苗的临床应用提供参考。     

DC-CIK细胞治疗局部晚期和晚期胰腺癌患者的临床疗效

目的： 探讨树突状细胞（dendritic cell,DC）联合细胞因子诱导的杀伤（cytokine-induced killer,CIK）细胞治疗局部晚期和晚期胰腺癌的安全性和有效性。 方法： 采集2011年7月至2012年5月在解放军第81医院生物治疗科治疗的24例Ⅲ～Ⅳ期胰腺癌患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,体外诱导培养DC和CIK细胞。DC经胰腺癌细胞株（PANC-1）裂解物致敏后与CIK细胞回输至胰腺癌患者,观察DC-CIK细胞治疗前后患者外周血淋巴细胞亚群、血清肿瘤标志物的改变以及临床疗效。 结果： DC-CIK细胞治疗3个月后,胰腺癌患者外周血CD3+T细胞、CD8+T细胞和CD4+CD25+Treg细胞比例均显著下降（均P<0.05）,CD4+/CD8+比值升高\[（1.1±0.7) vs (1.5±0.9),P<0.05\]。血清肿瘤标志物CA19-9在治疗后1个月\[（382.8±277.7) vs (213.8±214.6),P<0.05\]和治疗后3个月\[（213.8±214.6) vs (1540±118.2),P<001）持续下降。24例患者无1例完全缓解,其中3例部分缓解,4例疾病稳定,17例疾病进展;治疗有效率为125%,疾病控制率为29.2%;中位生存期为5.7个月,6个月生存率为33%,9个月生存率为27%。治疗期间所有患者均未出现 3～4级不良反应。 结论： DC-CIK细胞治疗局部晚期和晚期胰腺癌患者安全可行,可改善患者免疫功能并产生临床获益。     

外周血单个核细胞采集术对肿瘤患者淋巴细胞亚群影响的观察

目的:探讨血细胞分离机采集恶性肿瘤患者外周血单个核细胞(简称"单采")对机体淋巴细胞亚群的影响。方法:采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测105例恶性肿瘤患者(Ⅰ~Ⅲ期30例,Ⅳ期75例)单采前后和30名正常对照者外周血淋巴细胞亚群。结果:Ⅰ~Ⅲ期肿瘤患者CD4+细胞比例为(31.4±10.4)%,对照组为(39.6±6.3)%,差异有统计学意义,P=0.002;Ⅰ~Ⅲ期肿瘤患者CD3+CD56+细胞比例为(9.9±6.0)%,对照组为(13.4±5.7)%,差异有统计学意义,P=0.026;Ⅰ~Ⅲ期肿瘤患者CD4+/CD8+比值为1.2±0.7,对照组为1.6±0.4,差异有统计学意义,P=0.012。Ⅳ期肿瘤患者CD3+细胞比例为(64.0±9.3)%,CD4+为(28.4±9.2)%,CD4+/CD8+比值为1.1±0.6,与对照组比较均下降,P值均<0.001。Ⅰ~Ⅲ期肿瘤患者CD8+细胞比例为(30.5±11.6)%,Ⅳ期为(29.1±10.1)%,Ⅰ~Ⅲ期CD19+为(14.0±8.6)%,Ⅳ期为(17.4±8.3)%,Ⅰ~Ⅲ期CD4+CD25+为(3.8±1.6)%,Ⅳ期为(5.5±2.7)%,与对照组比较均上升,P值均<0.05。恶性肿瘤患者单采后第1天与单采前相比,淋巴细胞及单核细胞数下降,P值分别为0.048和0.035,血小板下降显著,P<0.001;单采后第3天与单采前相比,血常规各项指标无差异,淋巴细胞亚群中CD4+/CD8+比值略有下降,但差异无统计学意义,P=0.412;其余指标差异无统计学意义。结论:恶性肿瘤患者细胞免疫功能低下,随临床分期增加愈发明显;单采对恶性肿瘤患者血常规及细胞免疫影响是有限的。     

胃癌免疫治疗联合化疗的临床研究进展胃癌免疫治疗联合化疗的临床研究进展

胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一，虽然近年来其发病率及死亡率有所下降，但仍对我国居民健康存在严重威胁。一直以来胃癌的治疗方法以手术治疗、化疗为主，虽可使晚期胃癌患者的生存得到一定程度的改善，但其临床疗效仍有一定的局限性。肿瘤免疫治疗是通过人工干预，激发和调动自身的免疫机制，从而清除与杀伤体内的肿瘤细胞。虽然该治疗方式仍处于探索阶段，但已取得的积极成果让免疫治疗在胃癌治疗的应用中获得了一定的地位。寻找合理有效的免疫治疗方法是未来胃癌治疗的主要研究方向。本文就胃癌的免疫治疗以及免疫治疗联合化疗的临床研究进展展开综述。     

HER-2多肽负载自体树突状细胞治疗HER-2阳性乳腺癌的初步研究

目的 探讨HER-2多肽负载自体树突状细胞治疗HER-2阳性乳腺癌的安全性和有效性.方法 15例HER-2阳性及HLA-A2阳性的乳腺癌患者（Ⅱ～Ⅲ期）经标准治疗后行HER-2多肽负载自体树突状细胞治疗.检测治疗前后患者外周血淋巴细胞亚群、Th1型和Th2型细胞因子水平,以及IFN-γ分泌型CD8＋T淋巴细胞比例,观察治疗相关毒副反应及近期临床疗效.结果 治疗后外周血CD3＋比例、CD3＋CD4＋比例和CD4＋/CD8＋比值较治疗前明显升高（P〈0.05）,治疗后血清中IL-2、TNF-α、IFN-γ较治疗前明显上升（P〈0.05）,IL-4、IL-10、IL-12无明显变化（P＞0.05）,IL-10/TNF-α比值较治疗前显著下降（P〈0.05）.IFN-γ分泌型CD8＋T淋巴细胞比例较治疗前也显著上升（P〈0.05）.在治疗结束后的随访时间内,15例患者取得了13例病情稳定,2例病情进展的近期临床疗效.所有治疗患者均未出现3～4级不良反应.结论 HER-2阳性乳腺癌行HER-2多肽负载自体树突状细胞治疗是安全可行的,可改善患者细胞免疫功能并提高Th1型细胞因子水平,促进特异性抗肿瘤细胞免疫应答并产生一定临床获益.     

DC-CIK细胞治疗晚期转移性鼻咽癌的疗效

目的：评价DC-CIK细胞治疗晚期转移性鼻咽癌患者的疗效。方法：回顾性分析2011年8月至2015年6月解放军第八一医院肿瘤生物治疗科行DC-CIK细胞治疗的29例晚期转移性鼻咽癌患者。观察DC-CIK细胞治疗前后患者的疗效、安全性及EB病毒VCA-IgA抗体水平和淋巴细胞亚群的变化。结果：29例鼻咽癌患者经DC-CIK细胞治疗后客观缓解率为0,疾病控制率为65.5%,中位生存时间为42个月,1~4年生存率都为68.0%,无严重不良反应。治疗后29例患者的外周血EB病毒VCA-IgA抗体显著低于治疗前\[（30.88±3.91）U/ml vs (49.86±5.02) U/ml, P<0.05）\]。经细胞治疗后CD8+ T细胞显著上升（P<0.05）、CD4+/ CD8+ T细胞比值显著下降（P<0.05）。结论：DC-CIK细胞治疗转移性鼻咽癌安全、可行,能产生一定的临床获益。     

TLR8激动剂对胃癌患者树突细胞表型及功能的调节作用

目的研究TLR8激动剂对胃癌患者树突细胞体外培养的影响。方法应用血细胞分离机无菌采集肿瘤患者外周血,实验室分离诱导为树突细胞和T细胞,加入TLR8激动剂处理未成熟的树突细胞刺激成熟。Western blotting检测树突细胞中pNF-κB的表达水平,流式检测树突细胞表面标记分子表达,ELISA检测对照组和激动剂组IL-12、TNF-α的表达水平,树突细胞与自体T淋巴细胞共培养后流式检测T细胞表面标记分子表达。结果 TLR8激动剂刺激后树突细胞中pNF-κB表达增加,树突细胞表面标记HLR-DR、CD11c、CD54、CD80、CD83、CD86分子水平上调,激动剂组IL-12、TNF-α的表达水平升高,共培养后T细胞表面标记CD3、CD28分子无明显变化。结论 TLR8激动剂体外刺激促进胃癌患者的树突细胞成熟,为TLR8激动剂作为树突细胞疫苗佐剂提供证据。     

DC-CIK细胞治疗晚期结直肠癌的临床疗效

目的：评价自体树突状细胞 (dendritic cell, DC) 联合细胞因子诱导的杀伤(cytokine-induced killer, CIK) 细胞治疗晚期结直肠癌患者的临床疗效和安全性。方法： 采集2011年7月至2015年3月解放军第81医院肿瘤生物治疗科收治的142例Ⅲ~Ⅳ期结直肠癌患者的外周血单个核细胞 (peripheral blood mononuclear cell, PBMC),经实验室体外诱导培养DC和CIK细胞。DC细胞通过结肠癌细胞株COLO 320或直肠癌细胞株HCT-116裂解物致敏后与CIK细胞回输至结直肠癌患者,观察DC-CIK细胞治疗的临床疗效和安全性。结果： 142例晚期结直肠癌患者经DC-CIK细胞免疫治疗后,客观缓解率为162%,疾病控制率为60.6%;1年生存率为47%,2年生存率为31%,3年生存率为31%;经细胞治疗后外周血CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD3+CD56+ NK细胞、CD4+CD25+ Treg细胞比例、CD4+/CD8+比值及癌胚抗原(carcinoembryonic antigen, CEA) 水平均无显著变化;单因素分析显示,TNM分期 (P=0.015)、治疗次数 (P=0.037) 及治疗前CEA值的正常与否为DC-CIK治疗结直肠癌的预后影响因素;多因素分析显示,治疗次数 (P=0.024) 和年龄 (P=0.015) 与DC-CIK治疗结直肠癌的预后密切相关。结论： DC-CIK细胞免疫治疗可能改善晚期结直肠癌患者远期生存率,可产生临床获益,无明显不良反应,安全可行。     

NK细胞治疗卵巢癌腹腔积液的近期疗效

目的：探讨自然杀伤细胞（natural killer，NK细胞）腹腔灌注治疗卵巢癌腹腔积液的近期临床效果和安全性。方法： 分析2016年11月至2019年1月在东部战区总医院秦淮医疗区15例接受NK细胞腹腔灌注治疗的卵巢癌腹腔积液患者的临床资 料，采集患者外周血、分离外周血单个核细胞，经培养后收获NK细胞、腹腔内灌注NK细胞悬液（不低于2×109个细胞/次）。检测 治疗前后患者腹腔积液量、血清肿瘤标志物CA-125水平、血清细胞因子IL-2、INF-γ和TNF-α水平，以及外周血淋巴细胞亚群的 变化，观察其临床疗效和不良反应。结果：NK细胞腹腔灌注治疗后，有效率为66.7%，未出现明显的治疗相关不良反应。与治 疗前比较， 治疗 2 周后患者血清肿瘤标志物 CA-125 水平显著下降（P<0.05），IL-15、IFN-γ和TNF-α水平明显升高（P<0.05或 P<0.01），而外周血淋巴细胞亚群无明显变化（均P>0.05）。结论：NK细胞腹腔灌注治疗卵巢癌腹腔积液近期临床效果较好， 不 良反应小，是一种有前景的治疗癌性腹腔积液的方法。     

对肿瘤细胞免疫治疗临床及科研规范化管理的思考

生物治疗是继手术、放疗、化疗后的第4种肿瘤治疗模式,细胞免疫治疗是肿瘤生物治疗的重要方法。常用的细胞免疫治疗包括细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)、树突状细胞(DC)、自然杀伤细胞(NK)等。近年来,肿瘤的细胞免疫治疗取得了重要进展,如前列腺癌