血清游离β-HCG测定方法的建立及在先兆流产诊断中的初步应用

目的 :建立 EL ISA方法测定血清β- HCG及初步临床应用。方法 :以双抗体夹心 EL ISA方法测定血清β- HCG。结果 :β- HCG的线性范围为 :l～ 10μg/ L。参考值范围为 :1.5 2± 0 .5 1μg/ L。回收率为 :99.4± 3.4 %。批内变异为 :4 .8± 0 .7%。批间变异为 :6 .4± 0 .2 %。β- HCG与α- HCG的交叉反应小于 0 .7%。结论 :该方法准确性、特异性强 ,操作简便 ,适于临床常规应用。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对体外培养人外周血单核细胞增殖及肿瘤坏死因子-α分泌的影响

为探讨我国恶性肿瘤高发区居民饮食中的优势污染霉菌毒素 -脱氧雪腐镰刀菌烯醇 (DON)对人体免疫机能的影响 ,分别以流式细胞光度术 (FCM)、细胞计数、甲基噻唑基四唑 (MTT)比色、双抗体夹心EL ISA方法对 DON作用后人外周血单核细胞 (HPBM)增殖和肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)分泌情况进行了研究。FCM检测结果表明 ,HPBM经 PHA预刺激 48h后 ,低浓度 DON(5 0～ 5 0 0 ng/ ml)处理 6 h的细胞增殖指数 (PI)较对照组明显降低 (19.80 %～ 2 6 .0 1%∶ 37.84% ) ;而高浓度 DON (10 0 0～ 2 0 0 0 ng/ ml)处理 2 4h的细胞 PI值则显著高于对照组 (35 .74%～ 34.37%∶ 2 2 .85 % )。细胞计数和 MTT比色法结果显示 ,在 PHA存在的情况下 ,DON可抑制 HPBM的增殖。双抗体夹心 EL ISA法检测结果显示 ,5 0 0和 10 0 0 ng/ ml的 DON可明显降低 HPBM TNF- α分泌 (P<0 .0 1)。研究结果表明 ,根据作用时间和作用浓度不同及有无 PHA刺激 ,DON对 HPBM增殖的影响有所不同 ,但主要表现为对细胞增殖的抑制作用 ,并抑制 TNF- α的分泌 ,从而对机体免疫机能造成负面影响     

双抗原夹心法ELISA在肾综合征出血热诊断中的应用

目的建立一种敏感、特异的检测肾综合征出血热(HFRS)血清总抗体的双抗原夹心法ELISA。方法应用重组汉坦病毒(HV)NP抗原e1.3S作为包被抗原和e6-119-HRP作为酶标抗原建立双抗原夹心法ELISA,检测血清总抗体,并与间接免疫荧光法(IFA)相比较。结果共检测188份人血清和378份鼠血清标本,2种方法的总符合率为97.70%。以IFA为参照标准,双抗原夹心法ELISA的敏感性为97.54%,特异性为97.87%。结论双抗原夹心法ELISA检测HFRS血清总抗体具有很高的敏感性和特异性,适用于大规模的流行病学调查。     

重组结核分枝杆菌PPE17蛋白原核可溶性表达纯化和血清学诊断研究

目的利用原核系统可溶性表达结核分枝杆菌PPE17蛋白并进行纯化,研究其免疫学特性,并评价该重组蛋白在结核病血清学诊断方面的价值。方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中利用PCR扩增PPE17核酸序列然后克隆至融合表达载体pET-DsbC中,转入大肠埃希菌BL21(DE3)进行诱导、表达和纯化,用Western Blot和EL ISA方法进行抗原性初步评价。结果融合蛋白Ds-bC-PPE17在原核系统内经IPTG诱导表达后,主要以可溶性形式表达存在,经镍柱层析获得了纯的重组蛋白,纯度达95%以上。Western Blot和EL ISA方法结果证明重组DsbC-PPE17蛋白具有较强的抗原活性。用纯化的PPE17蛋白做抗原,临床诊断结核病人血清,阳性率达60%。结论融合蛋白DsbC-PPE17在大肠埃希菌中以可溶性表达形式存在,高纯度的重组融合蛋白有可能成为结核病的血清学诊断抗原。     

硒标快速法检测HIV1+2抗体效果及应用分析

目前 ,我国检测 HIV抗体最常见的是用 EL ISA法、颗粒凝集或其它快速检测方法初步检测血液中的 HIV抗体 ,再以免疫印迹 (WB)法进行确认 〔1〕。 EL ISA法因其敏感性高、特异性强 ,结果易保存等优点被广泛使用。为观察快速检测方法的实际使用效果 ,采用硒标快速检测试剂检测了 5     

间接ELISA法检测流感病毒IgG抗体

流行性感冒 (简称流感 )是一种急性呼吸道传染病。在人群中易局部爆发或区域性流行 ,甚至引起世界性的大流行。而对流感病毒 (F1u Virus)保护性抗体 Ig G水平的监测 ,为评估人群对流感病毒是否有免疫能力提供依据。应用EL ISA法检测流感抗体 ,其敏感性高 ,特异性强 ,操作简便 ,肉眼可观察 ,便于大规模检测 ,因此我们研究了用间接EL ISA法检测流感病毒 Ig G的方法 ,并用此法对武汉市1999、2 0 0 2年采集的正常人群血清样品共 30 0份进行 Ig G抗体检测 ,现将结果报告如下。1　材料和方法1.1　备检血清　收集 1999年 10 0份、2 0 0 2年…     

女大学生风疹抗体水平调查

目的 :了解女大学生对风疹的免疫状态 ,探讨相关的免疫策略。方法 :利用改良的间接 EL ISA方法 ,快速检测健康女大学生血清中风疹病毒特异性抗体 Ig G和 Ig M。结果 :84.84%的女大学生对风疹具有免疫力 ,3 .96%的女大学生为原发感染 ,10 .11%为易感者 ,1.10 %的女大学生 Ig M和 Ig G均呈阳性。Ig G抗体的几何平均滴度(GMT)为 1∶ 3 62。研究生的 Ig G抗体阳性率和几何平均滴度 (GMT)明显高于本科生 ,差异有统计学意义。结论 :大学在校女学生的风疹抗体还存在一定的免疫空白 ,有必要对她们开展疫苗免疫 ,减少风疹病毒所致的危害     

诊断丙型肝炎病毒感染的3种ELISA的比较研究

将新建立的检测血清中抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）总抗体的双抗原夹心ＥＬＩＳＡ（夹心法）与普遍采用的检测抗ＨＣＶ－ＩｇＧ的间接ＥＬＩＳＡ（ＩｇＧ间接法）及检测抗ＨＣＶ－ＩｇＭ的间接ＥＬＩＳＡ（ＩｇＭ间接法）进行比较研究。检测１５份ＩｇＭ间接法阳性、ＩｇＧ间接法阴性（ＩｇＭ单阳）血清及２０份ＩｇＧ间接法阳性、ＩｇＭ间接法阴性（ＩｇＧ单阳）血清,夹心法均为阳性,这３５份血清经ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ均阳性。夹心法可同时检出ＩｇＧ和ＩｇＭ抗体,检出率高于后两者。检测２０份ＨＣＶＲＮＡ阴性血清,３种方法均阴性。用生物制品检定所检测ＨＣＶ－ＩｇＧ抗体的质控血清为标准品,夹心法和ＩｇＧ间接法均可达到检测标准     

双抗体夹心法检测血吸虫病患者血清中循环抗原

为探讨检测急性和慢性血吸虫病患者体内成虫的存活率的方法。采用双抗体夹心法检测血吸虫病患者血清中循环抗原，并与乳胶凝集试验（LAT）及间接血球凝集试验（IHA）进行比较，结果急性期和慢性期血吸虫病患者循环抗原阳性率分别为88.23％及27.39%。明显高于同期LAT及IHA法的检出率。结论，循环抗原具有较强的特异性和敏感性，双抗体夹心法弥补了LAT及IHA法不能区别血吸虫病患者体内是否存在活的成虫缺陷。     

儿童血清幽门螺杆菌抗体与消化道疾病关系的探索

目的 :探讨血清幽门螺杆菌 (简称 HP)抗体 Ig G和消化道疾病的关系。方法 :采用间接酶联免疫吸附试验(EL ISA )检测血清幽门螺杆菌抗体 Ig G。结果 :有消毒道症状儿童血清 HP- Ig G阳性率 45 .5 9%明显高于无症状者儿童 HP-Ig G阳性率 14.2 9%。结论 :(1) HP感染和儿童消化道疾病密切相关 ,其中腹痛及上消化道出血 HP- Ig G阳性率明显高于对照组 (P<0 .0 5 )。 (2 ) HP- Ig G检测可作为消化道疾病中有无 HP感染的初筛手段。     

ELISA法检测儿童百日咳白喉和破伤风抗体的初步应用

我国自 1 982年正式实施计划免疫之后 ,儿童中百日咳、白喉和破伤风的发病率和临床病例大幅度降低。为检测儿童免疫后的效果 ,本文采用酶联免疫吸附试验 (EL ISA )分别检测百日咳、白喉和破伤风抗体 ,并与传统的微量凝集试验和间接血凝法比较 ,发现 EL ISA法检测具有灵敏度高、操作快速简便、仅需微量全血等优点。现将结果报道如下。1　材料和方法1 .1　标本来源　 2 0 0 3年 3～ 5月间 ,随机抽取本市某区 2 1 2名参加过精制百白破混合制剂 (DPT)全程计划免疫的儿童 ,年龄均在 1岁左右。分别采集手指血 (或耳垂血 ) 2 0 μl和静脉血 3…     

江苏省流脑流行前期人群抗体水平和带菌率调查

目的 :通过开展流脑流行前期人群抗体水平和带菌率的监测 ,评价我省流脑多糖菌苗的接种状况与工作质量。方法 :采用 EL ISA法测定人群流脑血清抗体。结果 :全省 7个年龄组共检测5 91人 ,流脑抗体阳性率 86.3 % ,几何平均滴度 1∶ 12 .2 ,流脑 A群带菌率 <1%。结论 :我省自然人群流脑抗体水平具有保护水平 ,目前可以控制流脑流行发生     

自然流产妇女弓形虫感染的调查研究

目的　探讨自然流产妇女与弓形虫 (Tox)感染的相关性。方法　采用酶联免疫吸附试验(EL ISA)对自然流产的 4 76例孕妇外周血进行了弓形虫循环抗原 (CAg)和特异性抗体 (Tox- Ig M,Tox- Ig G)的检测 ,并和正常妊娠妇女作比较 ;应用聚合酶链反应 (PCR)技术对经 EL ISA测定为阳性的 1 4例孕妇流产物进行 Tox- DNA检测。结果　流产组 CAg,Tox- Ig M,Tox- Ig G等阳性率分别为 5 .2 5 % ,6 .30 % ,1 1 .76 % ,其中 CAg及 Tox- Ig M阳性率与正常孕妇相比 ,差异有非常显著性 (P<0 .0 1 ) ;1 4例流产物中 Tox- DNA阳性 8例 ,阳性率为 5 7.1 4 %。结论　 Tox可通过胎盘传给胎儿 ,引起流产 ;孕妇急性感染与自然流产有相关性 ,CAg,Tox- Ig M,CAg+Tox- Ig M阳性率与发生流产次数呈正相关     

某区2002年人群麻疹抗体水平监测分析

目的 :了解本区人群麻疹抗体水平的现状及原因。方法 :选择本区人口为监测对象 ,分为 7个年龄组 ,男女比例 1.2∶ 1,采用酶联免疫吸附试验 (EL ISA)检测麻疹 Ig G抗体。结果 :共监测 4 2 2人 ,抗体阳性率为 97.9% ,抗体保护率为 80 .0 % ,几何平均滴度 (GMT)为 1∶ 10 4 0 .0。不同性别抗体阳性率和抗体保护率差异无显著性。不同年龄组抗体阳性率差异无显著性 ,但抗体保护率差异有显著性。结论 :该区仍需加大计划免疫力度 ,以达到控制麻疹的目的     

ELISA捕捉法与双抗体夹心法检测HFRSV—IgM抗体的比较

本文用ELISA双抗体夹心法和ELISA捕捉法同时检测HFRS患者血清250份,阴性对照血清57份。结果表明:两方法均无假阳性反应,捕捉法的变异系数为8％,双抗体夹心法为10.2％;捕捉法和双抗体夹心法的GMT分别为108800和22400,捕捉法是夹心法的48.6倍。     

夹心免疫PCR方法检测金葡菌肠毒素B

目的 建立双抗夹心免疫PCR的检测技术，用于检测极微量的抗原。方法 以亲和素作为连接分子，连接生物素化抗体和生物素化DNA，应用于免疫PCR中检测极微量金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)。结果 双抗夹心免疫PCR的检测技术，检测SEB的灵敏度达0．1ng／L，与夹心ELISA方法比较灵敏度高10^3倍。结论 双抗夹心免疫PCR系统灵敏度高，可用于各种微量抗原的检测。     

曲霉抗原双抗体夹心ELISA法特异性检测

目的 用2组曲霉单克隆抗体(mAbs)建立特异性识别不同种类曲霉抗原的检测方法.方法 采用天然烟曲霉抗原免疫,获得广谱针对曲霉抗原的单克隆抗体;采用重组烟曲霉抗原获得特异性针对烟曲霉抗原的单克隆抗体,用间接免疫荧光鉴定,并分别建立2种双抗体夹心ELISA法,对19种常见的环境和临床分离曲霉株、马尔尼菲氏青霉菌及念珠菌培养液进行检测.结果 间接免疫荧光显示,用天然烟曲霉抗原免疫获得的单克隆抗体(mAbs-1)可广谱识别多种曲霉分离株,而重组烟曲霉抗原获得的单克降抗体(mAbS-2)仅能特异性结合临床和环境分离的烟曲霉抗原.用mAbs-1建立的双抗体夹心ELISA法可检测19种常见曲霉株培养液;用特异性针对烟曲霉抗原单克降抗体(mAbs-2)建立的双抗体夹心ELISA法可特异性检测临床和环境分离株烟曲霉培养液;与其他曲霉株无交叉反应;2种双抗体夹心ELISA法与马尔尼菲氏青霉菌及念珠菌培养液均无交叉反应.结论 2种曲霉单克降抗体双抗体夹心ELISA法,除可广谱检测环境和临床分离曲霉株,还可以区分烟曲霉与其他曲霉,可作为监测环境、农产品、食品中的曲霉污染和早期诊断曲霉病的新技术手段.     

庐江县新型布尼亚病毒及人粒细胞无形体疫源地调查

目的通过人群、家畜发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒（severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV）及人粒细胞无形体病（human granulocytic anaplasmosis,HGA）感染状况调查,阐明庐江县是否存在SFTSV和HGA自然疫源地,为科学防治工作提供依据。方法收集分析2009-2013年SFTS和HGA病例流行病学资料。在全县选取1个有病例的镇,采用多阶段随机抽样方法 ,随机抽取病例附近2个村庄,采集自然人群血清100份,15只家畜血块和血清各1份。对血清标本采用双抗体夹心法检测SFTSV抗体和间接荧光法检测人粒细胞无形体病抗体免疫球蛋白G,对动物标本采用巢式聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）检测人粒细胞无形体16SrRNA基因和荧光定量反转录PCR检测SFTSV核酸。结果 2009-2013年,共报告9例SFTS和1例HGA,以中老年为主,女性多于男性,夏秋季为发病高峰。人HGA阳性率24%,SFTSV抗体阳性率0%。15份动物标本SFTSV抗体阳性...     

抗副溶血弧菌TLH蛋白多克隆抗体的制备及其ELISA双抗体夹心检测法的研究

目的分别制备抗副溶血弧菌及其不耐热溶血毒素(thermolabile hemolysin,TLH)的多克隆抗体,建立检测副溶血弧菌TLH的酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗体夹心法。方法以副溶血弧菌及其TLH分别免疫健康雄性新西兰大白兔和雌性BALB/C小鼠,制备兔抗副溶血弧菌多克隆抗体及小鼠抗TLH多克隆抗体,以间接ELISA法检测两种抗体效价,并以棋盘法筛选两种多克隆抗体用于夹心检测TLH的效价。结果兔抗副溶血弧菌多克隆抗体效价达1∶6400,鼠抗TLH多克隆抗体效价为1∶102 400,经筛选确定以1∶800稀释的兔抗副溶血弧菌多克隆抗体包被酶标板,与1∶1600稀释的鼠抗TLH抗体建立了ELISA双抗体夹心法。结论兔抗副溶血弧菌多克隆抗体可与TLH呈特异性反应,以此建立的双抗体夹心法检测副溶血弧菌TLH可获较满意结果,此实验可为进一步建立简便、快速的副溶血弧菌检测方法奠定基础。     

漳州市2001年健康人群麻疹抗体水平调查

为了解漳州市健康人群麻疹抗体水平 ,根据《福建省麻疹监测方案》、《福建省加速控制麻疹规划》的要求 ,在各有关部门的大力配合下 ,于 2 0 0 1年 9～ 11月对芗城区、漳浦县健康人群麻疹抗体 Ig G(MV Ig G)进行调查。结果如下 :1　对象与方法1.1　对象　按方案随机选择健康人群血清标本 5 4 7人份。1.2　方法　采用 EL ISA间接法 ,检测血清抗体 Ig G滴度 ,抗体滴度≥ 1∶ 2 0 0为阳性。试剂由中国预防医学科学院病毒所中心诊断室提供 ,有效期内使用。2　结果2 .1　新生儿麻疹免疫前和免疫后抗体 Ig G水平　 91名新生儿中 ,2名新生儿麻…