榆栀止血颗粒对子宫内膜异位症大鼠PI3K/Akt信号通路及异位内膜体积的影响

目的:探索榆栀止血颗粒对子宫内膜异位症大鼠磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路及异位内膜体积的影响。方法:构建子宫内膜异位症大鼠模型,随机分为模型组、榆栀止血颗粒低、中、高剂量组、孕三烯酮组,每组12只,另取12只设为假手术组,分组处理后处死大鼠,测定大鼠异位子宫内膜体积,以免疫组织化学染色检测大鼠异位子宫内膜组织中微血管密度(CD31阳性细胞表达),以免疫酶联吸附试验(ELISA)检测大鼠血清VEGF、MMP-9、IL-6、TNF-α水平;以蛋白免疫印迹法检测大鼠异位子宫内膜组织PI3K/Akt通路相关蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠CD31阳性细胞比例、血清VEGF、MMP-9、IL-6及TNF-α水平、异位子宫内膜组织p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt均升高(P0.05);与模型组比较,榆栀止血颗粒低、中、高剂量组及孕三烯酮大鼠异位子宫内膜体积、CD31阳性细胞比例、血清中VEGF、MMP-9、IL-6及TNF-α水平、异位子宫内膜组织p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt均降低(P0.05),且榆栀止血颗粒各组之间呈剂量依赖性(P0.05);榆栀止血颗粒高剂量组与孕三烯酮组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:榆栀止血颗粒可抑制子宫内膜异位症模型大鼠内膜血管生成,减轻炎性反应,进而减小其异位内膜体积,可能通过阻滞PI3K/Akt信号传导实现。     

基于PI3K/Akt/NF-κB途径探究补肾活血方治疗子宫内膜异位症的作用机制研究

目的 探究补肾活血方（BSHXR）治疗子宫内膜异位症（EMS）的作用机制。方法 采用自体子宫内膜移植术建立EMS大鼠模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、BSHXR高、中、低剂量组、LY294002（PI3K抑制剂）组,每组10只。给药28 d后,测定大鼠异位子宫内膜病灶体积,苏木精-伊红（HE）染色观察异位子宫内膜组织病理变化,酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）的水平,免疫组化染色检测异位子宫内膜组织血小板-内皮细胞黏附分子（CD31）表达,实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测异位子宫内膜组织血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）mRNA水平,Western blot法检测异位内膜组织磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/核因子κB（NF-κB）通路蛋白表达水平。结果 与假手术组比较,EMS大鼠异位子宫内膜病灶体积显著增加,血清炎症因子水平升高,CD31阳性细胞数量增加,VEGF、MMP-9 mRNA水平升高,PI3K/Akt/NF-κB信号通路被活化（P＜0.05）。与模型组比较,BSHXR可缩小大鼠异位子宫内膜病灶体积,降低血清炎症因子水平,减少CD31阳性细胞数量,降低VEGF、MMP-9 mRNA表达水平,抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路活化,其作用呈剂量依赖性（P＜0.05）。结论 BSHXR对大鼠EMS具有治疗作用,其作用机制与抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路活化有关。     

百合鸡子汤通过BDNF/TrkB介导的PI3K/Akt/mTOR信号通路对CUMS大鼠抗抑郁的影响

目的探究百合鸡子汤通过BDNF/TrkB介导的PI3K/Akt/mTOR信号通路对CUMS大鼠抗抑郁的影响。方法CUMS法复制大鼠抑郁模型,观察百合鸡子汤对大鼠抑郁行为学和前额叶皮质BDNF/TrkB介导的PI3K/Akt/mTOR信号通路关键蛋白表达的影响。结果抑郁行为学的强迫游泳实验中,CUMS组大鼠不动时间延长,而百合鸡子汤组、氟西汀组大鼠抑郁行为均得到改善(P<0.01)。Western blot检测发现,CUMS降低了大鼠前额叶皮质组织的BDNF、p?TrkB、p?PI3K、p?Akt、p?mTOR的表达,而百合鸡子汤干预能够上调这些蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。结论百合鸡子汤具有一定的抗抑郁作用,BDNF/TrkB及其下游的PI3K/Akt/mTOR信号通路可能为其作用机制。     

“秩边透水道”针法对子宫内膜异位症大鼠 PI3K/AKT/mTOR信号通路及血清指标的影响

目的 ：观察“秩边透水道”针法对子宫内膜异位症（endometriosis,EMs）大鼠PI3K/AKT/mTOR信号通路及血清EMAb、CA125及VEGF的影响,探讨“秩边透水道”针法治疗子宫内膜异位症的作用机制。方法 ：将36只采用自体移植术造模成功的健康清洁级雌性SD大鼠随机分为四组,加假手术组,各9只。分别予以秩边透水道针法、秩边透水道针法加自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤、自噬激动剂雷帕霉素进行干预。ELISA法测定各组血清EMAb、CA125及VEGF的含量,Western blot法检测 PI3K/AKT/mTOR 通路蛋白含量。结果 ：与假手术组比较,模型组血清中EMAb、CA125、VEGF水平以及内膜组织中PI3K、AKT、mTOR 的蛋白水平表达量显著升高(P<0.01);与模型组比较,针刺组、激动剂组、针刺加抑制剂组血清中EMAb、CA125、VEGF水平以及内膜组织中PI3K、AKT、mTOR蛋白水平表达量显著降低(P＜0.01);与针刺组比较,激动剂组血清中VEGF含量、内膜组织中PI3K、AKT、mTOR 的蛋白水平升高(P＜0.05),EMAb、CA125含量显著升高(P＜0.01),针刺加抑制剂组血清中EMAb、CA125、VEGF含量以及PI3K、AKT、mTOR水平显著增加(P＜0.01)。且针刺组效果较好。结论 ：针刺组可能通过抑制 PI3K/Akt/mTOR 信号通路进而诱导自噬改善EMs症状。     

蠲痛饮对子宫内膜异位症大鼠ICAM-1的影响

目的:探讨蠲痛饮对子宫内膜异位症大鼠血清、腹腔液sICAM-1及异位病灶内膜ICAM-1表达的影响。方法:将SPF级雌性SD大鼠随机分成蠲痛饮低、中、高剂量组、孕三烯酮组、模型组及空白对照组,以观察蠲痛饮对子宫内膜异位症大鼠血清、腹腔液sICAM-1及异位病灶内膜ICAM-1表达的影响。结果:与模型组比较,蠲痛饮低、中、高剂量组和孕三烯酮组大鼠腹腔液sICAM-1水平均明显降低,并且蠲痛饮低、中、高剂量组大鼠腹腔液sICAM-1逐渐降低,呈量效关系;与模型组比较,蠲痛饮中、高剂量组和孕三烯酮组大鼠异位病灶内膜ICAM-1表达均明显下降,并且蠲痛饮中、高剂量组大鼠异位病灶内膜ICAM-1表达逐渐减弱,呈量效关系;与模型组比较,蠲痛饮低、中、高剂量组和孕三烯酮组大鼠血清sICAM-1水平无明显差异。结论:蠲痛饮能降低腹腔液sICAM-1水平及异位病灶内膜ICAM-1的表达,这可能是蠲痛饮治疗子宫内膜异位症的作用机制之一。     

阳和化岩汤对HER-2高表达型乳腺癌细胞PI3K/Akt通路HER-2,PI3K,p-Akt表达的机制

目的:观察阳和化岩汤与磷脂酰肌醇-3羟基激酶(PI3K)抑制剂LY294002对乳腺癌细胞株SK-BR-3[人表皮生长因子受体-2(HER-2)高表达型]PI3K/蛋白激酶B(Akt)信号通路中HER-2,PI3K,磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达的影响,研究阳和化岩汤的干预机制。方法:制备阳和化岩汤肠吸收液,将乳腺癌细胞株SK-BR-3分为空白组,阳和化岩汤组,LY294002组,LY294002+阳和化岩汤组,阳和化岩汤(125 g·L-1),LY294002 (0. 05 g·L-1),阳和化岩汤+LY294002 (阳和化岩汤125 g·L-1,LY294002 0. 05 g·L-1),用药干预24 h后通过免疫组化、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HER-2,PI3K,p-Akt蛋白表达,通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测HER-2,PI3K,p-Akt mRNA表达。结果:与空白组比较,LY294002组,LY294002+阳和化岩汤组均能抑制乳腺癌细胞株HER-2,PI3K,p-Akt蛋白及mRNA表达(P 0. 05);阳和化岩汤组能抑制乳腺癌细胞株HER-2,p-Akt蛋白及mRNA表达(P 0. 05),但对PI3K的抑制作用不明显;联用LY294002较单用LY294002具有进一步抑制PI3K表达的作用(P 0. 05)。与阳和化岩汤组,LY294002组比较,LY294002+阳和化岩汤组能够明显抑制HER-2,PI3K,p-Akt蛋白及mRNA表达(P 0. 05)。结论:阳和化岩汤能够抑制乳腺癌脉管生成和侵袭,主要作用机制为通过干预PI3K/Akt通路,降低通路中HER-2,PI3K,p-Akt表达。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨炙甘草汤抗大鼠MIRI致室速和室颤的作用机制

目的:通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路,探讨炙甘草汤干预心肌缺血再灌注损伤(MIRI)致心律失常(室速和室颤)的作用及其机制。方法:将72只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,炙甘草汤低、中、高剂量组(11.43,22.86,45.72 g·kg~(-1)),稳心颗粒组(2.43 g·kg~(-1)),连续给药干预10 d。末次给药2 h,采用结扎冠状动脉左前降支法制备大鼠MIRI模型,记录心电图的变化。造模成功后采集血液及心脏组织,检测血清中肌酸肌酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)及丙氨酸氨基转移酶(AST)的含量;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测心肌肌钙蛋白(CtnI)的含量;免疫组化法检测心肌PI3K,Akt,mTOR的表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC-3),自噬标志物Beclin1和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达及磷酸化p-PI3K,p-Akt,p-mTOR的水平。结果:模型组大鼠100%发生室速,91.67%发生室颤;与假手术组比较,模型组大鼠血清CK,LDH,AST以及CtnI的含量显著升高(P0.01),心肌组织中PI3K,Akt,mTOR表达显著升高(P0.01),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ与Beclin1的相对表达量显著升高(P0.01),p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt,p-mTOR/mTOR显著降低(P0.01);与模型组比较,炙甘草汤高剂量组室速、室颤发生率显著降低(P0.01),较其他给药组持续时间短(P0.01);炙甘草汤高剂量组CK,LDH,AST水平及CtnI含量显著降低(P0.01);炙甘草汤给药组的PI3K,Akt,mTOR的表达随剂量的增加而显著降低(P0.01);LC-3,Beclin1的表达随炙甘草汤各剂量组的增加有不同程度地下降(P0.01),而PI3K/Akt/mTOR相关蛋白表达比值明显升高(P0.05,P0.01)。结论:炙甘草汤预处理能使异常升高的心肌酶CK,LDH,AST,CtnI降低,抑制细胞的过度自噬,上调PI3K,Akt和mTOR的表达,说明炙甘草汤抗MIRI致心律失常的作用可能与PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

麻防犀角地黄汤通过调控microRNA-491-5p影响PI3K/Akt/mTOR通路治疗银屑病的机制

目的 观察麻防犀角地黄汤对银屑病小鼠模型的影响,探讨麻防犀角地黄汤治疗银屑病的作用机制。方法 构建咪喹莫特银屑病小鼠模型,灌胃给药麻防犀角地黄汤,观察模型外观及组织病理学改变,Real time PCR检测皮损组织中microRNA-491-5p、PI3K、Akt、mTOR mRNA的表达,Western blot检测皮损组织中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白的表达。结果 麻防犀角地黄汤能改善小鼠皮损、PASI评分、耳廓外缘厚度、组织病理、体质量等指标,上调microRNA-491-5p mRNA的表达,下调PI3K、Akt、mTOR mRNA的表达量,抑制p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的蛋白表达,并表现出部分量效相关性。结论 麻防犀角地黄汤可能通过调控microRNA-491-5p影响PI3K/Akt/mTOR信号通路在银屑病的治疗中发挥作用。     

蠲痛饮对子宫内膜异位症大鼠ICAM-1的影响

目的 探讨蠲痛饮对子宫内膜异位症(EMS)大鼠血清、腹腔液、异位内膜细胞间粘附因子(ICAM-1)的影响来阐述蠲痛饮的作用机理.方法 采用自体子宫内膜移植法建立EMS大鼠模型,将60只大鼠随机分为蠲痛饮高、中、低剂量组、丹那唑组、模型组、空白组等6组,给药实验组分别给予蠲痛饮高、中、低剂量和丹那唑灌胃,模型组及空白组给予生理盐水灌胃,观察蠲痛饮高、中、低剂量和丹那唑对EMS大鼠ICAM-1的影响.结果 丹那唑组和不同剂量蠲痛饮对大鼠异位组织体积大小和腹腔液ICAM-1的影响,与模型组比较有显著性差异( P＜0.05).丹那唑和蠲痛饮高、中剂量降低EMS大鼠异位病灶ICAM-1的水平,与模型组比较有显著性差异( P＜0.05).结论 蠲痛饮可通过降低EMS大鼠腹腔液及异位内膜ICAM-1的水平,抑制异位组织的粘附而抑制异位子宫内膜的发展,从而达到治疗子宫内膜异位症的目的.     

乌丹丸对寒凝血瘀子宫内膜异位大鼠PI3K/Akt/m TOR自噬信号轴及相关分子表达的影响

目的 探讨乌丹丸对寒凝血瘀型子宫内膜异位症（endometriosis,EMs）大鼠自噬信号轴磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B,PKB又称Akt）/雷帕霉素靶分子（mammalian target of rapamycin,mTOR）及相关分子表达的影响。方法 随机将49只雌性SD大鼠分为假手术组、模型组、乌丹丸高、中、低剂量组、散结镇痛胶囊组、地诺孕素组,每组7只,采用冰水浴联合自体子宫内膜移植法建立寒凝血瘀EMs大鼠模型。假手术组及模型组每天给予10 m L/kg生理盐水灌胃,乌丹丸高、中、低剂量组分别给予2.4 g/kg、1.2 g/kg、0.6 g/kg灌胃,散结镇痛胶囊组每天给予0.48 g/kg灌胃,地诺孕素组每天给予0.2 mg/kg灌胃,各组持续用药28日。应用蛋白免疫印迹法和免疫组化法检测异位内膜组织自噬信号轴PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白以及相关自噬分子LC3、Beclin-1蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠异位内膜组织PI3K/Akt/m T...     

加味丹参饮通过PTEN/PI3K/Akt信号通路抑制IRI作用的研究

目的:探讨加味丹参饮预处理通过抑瘤基因/磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PTEN/PI3K/Akt)信号通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤(IRI)的保护作用及机制。方法:将75只雄性远交群(SD)大鼠随机分为5组:假手术组、模型组、加味丹参饮组、加味丹参饮+PI3K/Akt通路抑制剂(LY294002)组、LY294002组,采用结扎大鼠冠状动脉左前降支30min后再灌注60min的方法制备IRI模型。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组大鼠心肌肌钙蛋白I(c Tn I)表达;取心肌梗死边缘区心肌组织,采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌凋亡指数,采用免疫组化法检测各组大鼠心肌组织Akt、PTEN的表达。结果:与假手术组比较,模型组c Tn I水平显著升高,大鼠心肌凋亡指数增加,PTEN、Akt表达均显著升高(P<0.05);与模型组比较,加味丹参饮组c Tn I水平均显著降低,Akt表达升高,心肌凋亡指数和PETN表达降低(P<0.05);与加味丹参饮组比较,加入抑制剂后,c Tn I水平均明显降低,Akt表达降低,PTEN表达升高(P<0.05)。结论:大鼠心肌缺血再灌注时,加味丹参饮可以通过降低PTEN表达,激活PI3K/Akt信号通路,抑制大鼠心肌细胞的凋亡,从而减轻心肌损伤,保护心肌。     

更年汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞PI3K/Akt/m TOR通路的影响

目的研究更年汤对围绝经期模型大鼠颗粒细胞磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素蛋白(m TOR)信号通路的影响。方法 10～14月龄雌性SD大鼠150只,筛选出围绝经期模型大鼠,随机分为模型组、替勃龙组(0.22 mg/kg)和更年汤低、中、高剂量(1.0、2.0、4.0 g/kg)组,连续ig给药15 d,1次/d,第15天后采血,制备大鼠含药血清;3～4月龄雌性SD大鼠120只,筛选出动情前期老鼠,剔出卵巢行体外颗粒细胞原代培养,分别用各组含药血清培养液培养颗粒细胞,72～120h后用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测颗粒细胞中PI3K、Akt、m TOR、生长分化因子9(GDF9)、翼状螺旋转录因子2(FOXL2)mRNA表达水平;Western blotting法检测PI3K、Akt、mTOR、GDF9、FOXL2蛋白表达。结果与模型组比较,替勃龙组和更年汤各剂量组卵巢颗粒细胞中PI3K、m TORm RNA和蛋白表达水平均显著升高(P0.05、0.01),Akt mRNA和蛋白表达水平显著降低(P0.05、0.01),GDF9、FOXL2 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P0.01)。结论更年汤含药血清在临床剂量上可提高卵巢颗粒细胞PI3K、mTOR的表达,抑制Akt及其下游的GDF9、FOXL2表达,从而推测更年汤可调节卵泡的生长发育,抑制卵泡闭锁、改善卵巢功能。     

老鼠簕生物碱A对肝纤维化大鼠PI3K/Akt/m TOR/p70S6K信号通路的影响

目的观察老鼠簕生物碱A(HBOA)对四氯化碳(CCl4)致肝纤维化大鼠磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)/p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)信号通路的影响,探讨HBOA抗肝纤维化的作用机制。方法大鼠随机分成对照组、模型组及HBOA高、中、低剂量(100、50、25 mg/kg)组和秋水仙碱(0.4 mg/kg)组。除对照组外,其余各组ig给予50%CCl4橄榄油溶液,每周2次,连续12周,诱导肝纤维化大鼠模型。于造模第9周起,给药组分别ig相应的受试药物,每天1次,给药4周。实验结束后,计算各组大鼠体质量变化、肝脏指数;检测各组大鼠肝匀浆中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)活性;蛋白免疫印迹法(Western blotting)法检测肝组织P-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p-p70S6K蛋白的表达。结果与模型组比较,各给药组大鼠体质量增加量显著升高,均能降低肝脏指数及肝组织中ALT、AST活性;此外,HBOA高、中剂量组均能显著抑制p-PI3K、p-Akt、p-m TOR、p-p70S6K蛋白的表达。结论 HBOA对肝纤维化大鼠具有一定的保护作用,其机制可能与抑制PI3K/Akt/m TOR/p70S6K信号通路有关。     

红花多糖通过阻断PI3K/Akt/mTOR通路诱导人乳腺癌MDA-MB-435细胞凋亡的机制研究

目的研究红花多糖通过阻断PI3K/Akt/mTOR通路诱导人乳腺癌MDA-MB-435细胞凋亡的作用及其作用机制。方法将MDA-MB-435细胞分为对照组和红花多糖0.5、1.0 mg/mL组。MTT法及流式检测仪分别检测不同质量浓度红花多糖对MDA-MB-435细胞生长及凋亡的影响;RT-PCR及Western blotting法分别检测不同质量浓度红花多糖对MDA-MB-435细胞PI3K、Akt、mTOR mRNA和蛋白表达的影响。结果与对照组比较,红花多糖0.5 mg/mL组MDA-MB-435细胞抑制率为(21.52±2.43)%,红花多糖1.0 mg/mL组细胞抑制率为(27.73±3.75)%,显著高于红花多糖0.5 mg/m L组(P0.05);与对照组比较,红花多糖能够显著提高MDA-MB-435细胞凋亡率(P0.01),且呈剂量依赖性。RT-PCR及Western blotting实验结果显示,与对照组比较,红花多糖能够使MDA-MB-435细胞中PI3K、Akt、mTOR mRNA和蛋白表达显著降低(P0.05、0.01)。结论红花多糖能有效抑制MDA-MB-435细胞的生长,促进其凋亡,作用可能是通过对PI3K/Akt/mTOR通路的阻断实现的。     

磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号转导通路与针刺保护癫痫继发海马神经元损伤的关系

目的:观察针刺对戊四唑(PTZ)诱发癫痫大鼠海马神经元损伤的保护作用及该保护作用与磷脂酰肌醇-3-激酶(PI 3K)/蛋白激酶B(Akt)信号转导通路的关系。方法:SD大鼠120只随机分为5组:正常组、PTZ组、LY 294002组、针刺+LY 294002组、针刺组,每组24只。针刺组、针刺+LY 294002组针刺"百会"大椎"30min,共治疗5次。正常组、PTZ组、针刺组先侧脑室注射二甲基亚砜5μL,LY 294002组、针刺+LY 294002组侧脑室注射LY 294002(5μL),30min后正常组腹腔注射生理盐水2mL,其余各组腹腔注射PTZ(50mg/kg),于注射后4h与24h取脑组织。分别用HE染色法于光镜下观察海马结构改变,用电镜观察海马超微结构。结果:癫痫发作后4h光镜、电镜均可见大鼠海马神经元损伤,24h后损伤进一步加重。LY 294002组大鼠海马神经元损伤明显加重。针刺+LY 294002组大鼠海马神经元损伤明显,与LY294002组比较未见明显好转。针刺组大鼠海马神经元损伤明显减轻。结论:针刺具有明显保护癫痫继发脑神经元损伤作用,其保护作用与细胞内PI 3K/Akt信号转导通路有关。     

针刺对戊四唑诱发癫痫大鼠海马PI3K、Akt蛋白表达的影响

目的:观察针刺对戊四唑诱发癫痫大鼠海马神经元PI3K、Akt蛋白表达的影响。方法:SD大鼠60只随机分为5组(n=12):癫痫模型组、LY294002组、针刺治疗组、针刺+LY294002组、正常对照组。各组分别于癫痫发作后4h与24h两个时间段左心灌注固定取脑组织,免疫组化法测PI3K、Akt蛋白表达。结果:针刺+LY294002组和LY294002组两个时间段均未见明显PI3K和Akt蛋白表达;癫痫模型组可见PI3K和Akt蛋白阳性表达,其中癫痫发作4h表达较24h明显(P0.01);针刺组PI3K和Akt蛋白阳性表达量明显增多,其中4h时间点蛋白阳性表达量增加更为明显(与24h时间点比较,P0.05)。结论:针刺具有明显调节PI3K和Akt蛋白表达,其作用与细胞内PI3K/Akt信号转导通路有关。     

加味四君子汤含药血清对肝癌Hep-G2细胞的影响

目的:探讨加味四君子汤含药血清对肝癌Hep-G2细胞增殖、凋亡、周期的影响及其作用机制。方法:不同浓度加味四君子汤含药血清处理Hep-G2细胞后,采用细胞活性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖;Annexin V/碘化丙啶(PI)流式细胞术检测细胞凋亡率和周期;hoechst33342荧光染色观察细胞凋亡形态;免疫印迹法(Western blot)检测细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(m TOR)信号通路相关蛋白表达水平。结果:加味四君子汤含药血清呈浓度依赖性抑制肝癌Hep-G2细胞的增殖,诱导Hep-G2细胞凋亡,阻滞细胞于G0/G1期。hoechst33342染色后,随着含药血清浓度的增加,Hep-G2细胞核显著呈碎块状致密浓染。同时,加味四君子汤含药血清能够抑制Hep-G2细胞Akt,m TOR,核糖体S6蛋白激酶(S6),真核翻译起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)的磷酸化,从而上调Bcl-2相关X蛋白(Bax)和下调细胞周期蛋白(Cyclin D1),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达。加味四君子汤含药血清与300 nmol·L-1的PI3K/m TOR双重抑制剂VS-5584联合使用具有协同作用,含药血清能增强PI3K/m TOR双重抑制剂VS-5584对Hep-G2细胞中PI3K/Akt/m TOR信号通路靶点Akt和m TOR磷酸化的抑制作用。结论:加味四君子汤含药血清能抑制Hep-G2细胞的增殖,诱导其凋亡,阻滞其于G0/G1期,其机制可能通过阻断PI3K/Akt/m TOR信号通路而实现。     

化瘀消癥复方对PI3 K/Akt/mTOR信号通路及输卵管妊娠滋养细胞的作用机制研究

目的探讨化瘀消癥复方对输卵管妊娠滋养细胞的凋亡、侵袭影响及PI3K/Akt/mTOR信号通路的调控机制。方法以不同浓度的化瘀消癥复方水提液干预输卵管妊娠滋养细胞,设立空白组、甲氨蝶呤作为西药组、胞磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)抑制剂LY294002与雷帕霉素靶蛋白(mammalian taget of rapamycin,mTOR)抑制剂雷帕霉素作为对照组,采用流式细胞术检测干预72小时后的细胞凋亡率,采用Transwell法检测细胞侵袭能力,采用蛋白免疫印迹法检测PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白的表达情况。结果各给药组均能上调细胞凋亡率,随着中药浓度的增加,细胞凋亡率上升,中药高剂量组较西药组对凋亡的促进作用更加明显(P<0.05);各给药组均能下调细胞过膜数,随着中药浓度的增加,穿过Transwell侵袭小室的细胞数减少,侵袭减弱,中药高剂量组与西药组对细胞侵袭力影响的对比,差异无统计学意义(P>0.05);中药各组细胞中的p-Akt、p-mTOR蛋白的表达水平随着浓度增加而降低(P<0.05),与上下游通路抑制剂对比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论化瘀消癥复方能够促进输卵管妊娠滋养细胞凋亡,抑制侵袭,且呈浓度依赖性,可能与其负调控细胞中PI3K/Akt/mTOR信号通路的活性有关。     

补肾活血方含药血清通过PI3K/Akt信号通路促进成骨细胞增殖分化研究

目的：观察补肾活血方含药血清对人成骨细胞增殖分化以及PI3K/Akt信号通路的影响,探讨补肾活血方防治骨质疏松症的作用机制。方法：通过新西兰大白兔制备补肾活血方含药血清,将人成骨细胞株分为空白组（Control组）、补肾活血方组（Z组）、补肾活血方含药血清＋10%μmol/L的抑制剂LY294002组（Z＋LY组）,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测各组成骨细胞的增殖情况,生化方法检测成骨细胞的碱性磷酸酶（ALP）活性,Western blot法检测AKT的活化情况。结果：补肾活血方含药血清能促进成骨细胞的增殖,并使之分化增强,且较Control组差异有统计学意义（P〈0.01）;阻断PI3K/AKT信号通路后,Z＋LY组对成骨细胞增殖分化的抑制较Z组差异有统计学意义（P〈0.05）,且对成骨细胞的分化功能有显著抑制作用（P〈0.01）;Western blot结果显示,补肾活血方含药血清能促进磷酸化AKT（p-AKT）的表达,用LY294002阻断PI3K/Akt信号通路后,p-AKT表达含量明显减少（P〈0.01）。结论：补肾活血方可能通过PI3K/Akt信号通路促进成骨细胞的增殖,并促进成骨细胞分化功能,这可能是补肾活血方防治骨质疏松症的机制之一。