奔豚汤对慢性束缚应激小鼠焦虑的影响

目的:实验观察奔豚汤对慢性束缚应激诱导小鼠焦虑模型的影响,从中枢神经递质角度阐述奔豚汤抗焦虑的可能机制。方法:72只小鼠随机分为6组,分别为正常组,模型组,奔豚汤低、中、高剂量组(3.51,10.53,31.59 g·kg~(-1))和阳性药地西泮组(4 mg·kg~(-1)),各组均采用灌胃给药30 d。通过慢性束缚应激建立小鼠焦虑模型;自主活动检测、旷场实验、明暗箱实验和高架十字迷宫实验从行为学分析奔豚汤对焦虑小鼠行为学的保护作用;高效液相结合荧光检测器检测海马谷氨酸(Glu)和γ-氨基丁酸(GABA)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马内γ-氨基丁酸受体(GABAa-Rα5),GABA转运体-1(GAT-1)和GAT-3蛋白表达。结果:与模型组比较,奔豚汤高剂量可以明显提高旷场中央区域的时间(P0.05),增加在高架十字迷宫开臂停留时间和进入次数(P0.05),提高海马内GABA水平(P0.05),降低Glu水平(P0.05),且能够明显降低GAT-1和GAT-3蛋白表达(P0.05)。结论:奔豚汤能够改善慢性束缚应激诱导小鼠焦虑行为,可能是通过下调海马区GAT-1和GAT-3蛋白表达,进而调节中枢神经系统氨基酸类神经递质的含量。     

黑逍遥散对APP/PS1双转基因小鼠海马和脑皮层CaMKⅡα蛋白及其磷酸化表达的影响

目的:观察黑逍遥散对阿尔茨海默症(AD)小鼠海马和脑皮层钙调蛋白依赖性激酶2α(CaMKⅡα)及其磷酸化表达水平的干预效应。方法:30只APP/PS1双转基因雄性小鼠称体质量并按随机原则分为模型组、盐酸多奈哌齐组、黑逍遥散组,每组10只。同月龄、同种系的野生型C57BL/6雄性小鼠10只为空白组。盐酸多奈哌齐组(6 g·kg~(-1))、黑逍遥散组(3. 25 mg·kg~(-1))分别连续给药90 d后,Morris水迷宫检测行为学变化,免疫组化和蛋白免疫印迹法检测小鼠海马区和脑皮层CaMKⅡα蛋白及其磷酸化的表达。结果:干预90 d后,与空白组比较,AD模型组小鼠,逃避潜伏期显著延长,跨原平台和有效区域次数显著减少(P 0. 01),小鼠海马区及脑皮层Ca MKⅡα蛋白表达显著减弱或降低,而p-CaMKⅡα蛋白表达显著升高(P 0. 05,P 0. 01);与模型组比较,盐酸多奈哌齐和黑逍遥散组小鼠的逃避潜伏期均显著缩短、跨原平台次数均显著增加(P 0. 01),小鼠海马区及脑皮层Ca MKⅡα蛋白显著增强或升高,p-CaMKⅡα蛋白表达显著降低(P 0. 05,P 0. 01)。结论:黑逍遥散通过调节AD小鼠不同脑区参与细胞记忆形成机制的关键蛋白Ca MKⅡα及其磷酸化表达,进而发挥改善AD小鼠的学习记忆能力。     

五味子醋镇静催眠抗焦虑作用及其作用机制

目的:观察五味子醋(Schisandrae Chinensis Fructus Vinegar,SV)的镇静催眠抗焦虑作用并初步探讨其作用机制。方法:将50只ICR雄性小鼠随机分为正常组、地西泮组(镇静实验剂量为2 mg·kg-1,催眠及抗焦虑实验剂量为4 mg·kg-1)和SV低、中、高剂量组(灌胃给予相应剂量SV)。各组连续灌胃给药7 d后,采用自主活动记录仪观察SV对小鼠自主活动的影响;通过阈下剂量戊巴比妥钠协同睡眠实验观察SV对小鼠睡眠只数、潜伏期及睡眠时间的影响。采用高架十字迷宫(elevated plus maze,EPM)检测SV的抗焦虑作用;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测SV对小鼠脑组织中γ-氨基丁酸(γ-aminobutyricacid,GABA)及谷氨酸(glutamate,Glu)含量的影响;应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测SV对小鼠脑组织中GABAAα1及GABAAγ2表达的影响。结果:与正常组比较,SV中、高剂量组小鼠自主活动次数明显减少(P0.05,P0.01),协同阈下剂量戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠只数增加;协同阈剂量戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠潜伏期明显缩短、睡眠时间显著延长(P0.05,P0.01),EPM模型小鼠开臂/在臂滞留时间率(OT)和开臂/在臂进入次数比率(OE%)明显增加(P0.05);SV高剂量组小鼠脑组织中GABA含量显著增加(P0.01),Glu含量显著减少(P0.01);SV中、高剂量组小鼠脑组织中GABAAα1和GABAAγ2蛋白表达明显增加(P0.05,P0.01)。结论:SV具有镇静、催眠及抗焦虑作用,该作用与其调节小鼠脑组织中GABA,Glu含量及GABAAα1,GABAAγ2蛋白表达有关。     

清毒通络法电针对脑出血大鼠海马组织GLU、GABA的含量影响

目的：研究清毒通络法电针对脑出血大鼠GLU、GABA的含量影响。方法：将32只WiStar大鼠随机分为正常组、生理盐水组、模型组及电针治疗组，每组8只。治疗方法为电针大鼠“水沟”、“内关”与“后三里”，3天后测定大鼠海马组织内GLU、GABA的含量。结果：模型组双侧海马组织Glu含量显著高于正常组、生理盐水组（P〈0．01），出血侧海马组织Glu含量高于对侧（P〈0．05）；双侧海马组织GABA含量显著低于正常组（P〈0．01），出血侧海马组织GABA含量低于对侧（P〈0．01）。经电针治疗后，双侧海马组织Glu含量显著低于模型组（P〈0．01），出血侧Glu含量高于对侧（P〈0．05）；双侧海马组织GABA含量显著高于模型组（P〈0．01或P〈0．05），但出血侧仍低于正常水平（P〈0．01），两侧之间有显著性差异（P〈0．01）。结论：清毒通络法电针水沟、内关、足三里穴抑制Glu、上调GABA含量是其减轻脑水肿含量、促进神经功能恢复的机制之一。     

补肾填精法对肾虚阿尔茨海默小鼠海马自噬的干预作用

目的:通过研究六味地黄丸对肾虚阿尔茨海默病(AD)小鼠海马神经元自噬水平的改善作用及部分机制,探讨补肾填精法对AD的部分治疗机制。方法:健康雄性C57-B6小鼠分为正常组,AD组,肾虚AD组,六味地黄丸组(1. 08 g·kg~(-1))。正常组与AD组每日皮下注射生理盐水(15 m L·kg~(-1)),肾虚AD组和六味地黄丸组每日皮下注射氢化可的松注射液(15 m L·kg~(-1)),连续注射20 d。第21天除正常组侧脑室注射无菌生理盐水外,其余3组侧脑室注射β淀粉样蛋白25-35(Aβ_(25-35)),6μg/只。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测各组小鼠血清皮质醇、睾酮水平;透射电镜观察海马神经元细胞形态变化;免疫荧光检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测选择性自噬接头蛋白(p62)的蛋白表达。结果:与正常组比较,AD组和肾虚AD组小鼠的血清皮质醇、睾酮水平显著降低(P 0. 01),小鼠海马LC3表达显著减少(P 0. 01),小鼠海马p62蛋白表达显著增加(P 0. 01);与AD组比较,肾虚AD组小鼠的血清皮质醇、睾酮水平明显降低(P 0. 05,P 0. 01),小鼠海马p62蛋白表达显著增加(P 0. 01);与AD组和肾虚AD组比较,六味地黄丸组小鼠的血清皮质醇、睾酮水平显著升高(P 0. 01),小鼠海马LC3表达显著增多(P 0. 01),p62蛋白表达显著减少(P 0. 01)。正常组和六味地黄丸组小鼠神经元细胞内可见自噬小体,AD组和肾虚AD组小鼠神经元细胞内自噬小体鲜见。结论:补肾填精法能保护海马神经元细胞,增加海马神经元中LC3表达,降低p62表达水平,提高海马神经元自噬水平,对肾虚阿尔茨海默病具有一定的治疗作用。     

地黄饮子调节PERK/elF2α通路抑制能量代谢障碍AD小鼠脑内β淀粉样蛋白累积的作用机制

目的:以能量代谢障碍淀粉样前体蛋白(APP)/早老素基因1(PS1)转基因小鼠为阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型,探讨地黄饮子通过调控蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase r-like endoplasmic reticulum kinase,PERK),真核细胞起始因子2α(eukaryotic initiation factor 2α,eI F2α)通路抑制内质网应激导致的β-淀粉样蛋白(Aβ)累积的作用机制。方法:4月龄APP/PS1转基因小鼠随机分为正常组、模型组、阳性药(安理申)组、地黄饮子低、中、高剂量组。除正常组小鼠腹腔注射无菌生理盐水外,其余各组小鼠均腹腔注射100 mg·kg-13-硝基丙酸(3-nitropropionic acid,3-NP) 1次。小鼠造模后,立即给药。灌胃给药1周后,Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力,高效液相色谱法检测小鼠脑内三磷酸腺苷(ATP),二磷酸腺苷(ADP),一磷酸腺苷(AMP)含量,并计算脑能荷(energy charge,EC)。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠脑内PERK,eI F2α磷酸化水平,β-淀粉样前体蛋白水解酶1(BACE1)表达水平。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测BACE1 mRNA表达水平。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠脑内Aβ含量。结果:与正常组比较,Morris水迷宫实验结果显示,在定位巡航实验中,地黄饮子可以明显缩短模型小鼠的逃避潜伏期(P 0. 05,P 0. 01);空间探索实验中,地黄饮子可以增加模型小鼠穿越目标区域的次数(P 0. 05,P 0. 01)和在目标象限的停留时间(P 0. 01),减少相对象限的停留时间(P 0. 05,P 0. 01)。地黄饮子可以显著降低AMP水平,明显升高ATP,ADP水平,显著提高模型小鼠脑内EC水平(P 0. 05,P 0. 01),抑制PERK,eI F2α的磷酸化(P 0. 01)和BACE1的蛋白水平(P 0. 01),但对BACE1 mRNA转录没有显著影响。地黄饮子能够减少模型小鼠脑内Aβ的含量(P 0. 01)。结论:地黄饮子可以通过阻止能量代谢障碍导致的内质网应激通路PERK/eI F2α激活,抑制BACE1的翻译,从而减少能量代谢障碍APP/PS1小鼠脑内Aβ的累积。     

补阴益智汤配方颗粒对东莨菪碱所致小鼠学习记忆损伤的保护作用

目的:考察给予东莨菪碱造模后,补阴益智汤配方颗粒对小鼠学习记忆损伤的保护作用,并通过神经递质和突触可塑性相关蛋白考察其可能的机制。方法:雄性昆明种小鼠50只,通过腹腔注射东莨菪碱(3.0 mg·kg~(-1))建立小鼠学习记忆损伤模型。随机分为正常组、模型组和补阴益智汤高、中、低(18,6,2 g·kg~(-1)),造模后,连续给药2周,通过小鼠跳台实验,Morris水迷宫实验和新物体辨别实验,考察小鼠学习记忆的能力。采用高效液相色谱法测定小鼠前额叶皮层和海马内氨基酸类神经递质的水平,通过蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测小鼠海马区内突触核蛋白(Syn),突触后密度蛋白-95(PSD-95)和脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠跳台实验、水迷宫实验潜伏期显著缩短(P0.01),触电次数显著增加(P0.01),对新物体的探索时间显著缩短(P0.01),海马及前额叶皮层内γ-氨基丁酸(GABA)含量增多,而谷氨酸(Glu)含量均显著降低(P0.01),海马内Syn,PSD-95和BDNF蛋白表达量均明显增多(P0.05,P0.01);与模型组比较,中、高剂量给药组潜伏期明显延长(P0.05,P0.01),其中高剂量组触电次数明显减少(P0.05);对新物体的探索时间显著延长(P0.01),GABA含量明显降低(P0.05,P0.01),Glu含量以及Syn,PSD-95和BDNF蛋白表达量明显升高(P0.05,P0.01)。结论:补阴益智汤配方颗粒可以改善东莨菪碱所致的小鼠学习记忆损伤,其机制可能与改变海马及前额叶皮层内Glu/GABA以及调节小鼠海马脑区内Syn和PSD-95蛋白的表达有关。     

老鹳草素对D-氨基半乳糖诱导的肝损伤小鼠的保护作用及机制

目的:研究老鹳草素对D-氨基半乳糖(D-GalN)致急性肝损伤小鼠的保护作用及机制。方法:60只小鼠随机分为正常组,模型组,水飞蓟素组(180 mg·kg~(-1)),老鹳草素低,中,高剂量组(50,100,200 mg·kg~(-1)),灌胃给药每天1次,正常组及模型组小鼠灌胃生理盐水连续10 d。末次给药2 h后,除正常组外,其余各组腹腔注射D-GalN(500 mg·kg~(-1)),建立D-GalN致小鼠急性肝损伤模型。16 h后,收集血清和肝组织。生化法测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),碱性磷酸酶(ALP),总胆红素(TBIL)和肝脏中丙二醛(MDA),总超氧化物歧化酶(T-SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性或含量;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6)和γ-干扰素(IFN-γ)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)分析肝组织中Toll样受体-4(TLR-4)和核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达情况;苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理学变化。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清中ALT,AST,ALP,TBIL和肝脏MDA水平显著升高(P 0. 01),与模型组比较,老鹳草素各给药组能够明显降低肝损伤小鼠血清中ALT,AST,ALP,TBIL和肝脏MDA(P 0. 05,P 0. 01),且增强肝脏T-SOD和GSH-Px活性(P 0. 05,P 0. 01),同时抑制血清中TNF-α,IL-1β,IL-6和IFN-γ含量的升高和TLR-4,NF-κB的蛋白表达(P 0. 05,P 0. 01); HE染色结果显示其对肝组织损伤程度有明显改善作用。结论:综上所述,老鹳草素对D-GalN诱导的急性肝损伤小鼠具有显著的保护作用,其保肝作用机制可能与抑制氧化应激、炎症反应以及TLR-4/NF-κB信号通路有关。     

赤灵芝对小鼠镇静催眠作用的研究及机制分析

目的研究赤灵芝的中枢镇静催眠作用,并初步探讨其作用机制。方法通过给予阈下剂量和阈剂量的戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠(腹腔注射),记录其入睡情况、睡眠潜伏期和睡眠持续时间,用酶联反应法测定小鼠脑匀浆液中GABA、Glu、Gln、5-HT和5-HIAA含量。结果与蒸馏水组比较,阈下剂量的戊巴比妥钠可使赤灵芝组小鼠入睡率增加(P0.05)。赤灵芝组小鼠脑内GABA、5-HT含量显著上升(P0.01),Glu、Gln含量显著下降(P0.01)。结论赤灵芝可能通过增加小鼠脑内GABA、5-HT含量,降低Glu、Gln含量,来发挥一定的镇静、催眠作用。     

清心神安方对失眠大鼠脑组织神经递质含量的影响

目的观察清心神安方对失眠大鼠脑组织神经递质的影响。方法雄性SD大鼠随机取10只为空白组,其余为对氯苯丙氨酸(PCPA,300 mg·kg~(-1))造模组,造模2 d后随机分为模型组,清心神安方高、中、低(32,16,8 g·kg~(-1))剂量组和安定组(0.5 mg·kg~(-1)),连续灌胃给药10 d。使用高效液相色谱法检测海马组织谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)含量;免疫组化法检测海马组织5-羟色胺(5-HT)含量;ELISA法检测下丘脑胆囊收缩素-8(CCK-8)含量。结果与空白组比较,模型组大鼠海马组织中Glu含量显著升高(P0.01),GABA含量显著降低(P0.01),5-HT的阳性表达率显著降低(P0.01),下丘脑组织中CCK-8的含量显著降低(P0.01)。与模型组比较,清心神安方高、中剂量组Glu含量显著下降(P0.01),GABA含量显著升高(P0.01);清心神安方高、中、低剂量组均能显著提高海马组织中5-HT阳性表达率(P0.01),提高失眠大鼠下丘脑组织中CCK-8的含量(P0.01)。结论清心神安方具有降低失眠大鼠脑组织Glu含量,提高GABA、5-HT、CCK-8含量的作用。