脂多糖结合蛋白抑制肽对内毒素诱导的人单核巨噬细胞株表达CD14的影响

目的研究脂多糖结合蛋白(LBP)抑制肽对内毒素(LPS)诱导的人单核巨噬细胞株U937细胞表达CD14的影响。方法佛波脂(PMA)诱导U937成熟后分为5组:正常对照组、LPS组(100ng/mLLPS 100ng/mLrhLBP)、低剂量抑制肽组、中剂量抑制肽组及高剂量抑制肽组,后3组分别给予10、100和1000ng/mL抑制肽。用RTPCR和蛋白定量方法(Westernblot)测定CD14mRNA和蛋白的表达,ELISA测定培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNFα)的含量。结果LBP抑制肽显著抑制LPS刺激后U937细胞CD14的mRNA与蛋白表达,同时也抑制了TNFα的分泌,较LPS组有显著差异。结论LBP抑制肽通过抑制由CD14介导的LPS信号跨膜转导和TNFα的分泌,对LPS所致疾病如脓毒血症、急性肺损伤可能有潜在的治疗作用。     

内毒素对巨噬细胞膜CD14表达的影响及与膜脂微环境关系

目的 研究内毒素脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)刺激下巨噬细胞膜脂改变对CD14表达的影响。方法 LPS体外刺激巨噬细胞，用Western blot及RT-PCR检测随时问变化细胞膜CD14 mRNA及蛋白表达的变化；同时观察膜脂微环境变化对CD14表达的影响。结果 LPS刺激巨噬细胞1h CD14表达增加，5h达高峰，8h降至正常水平；而CD14 mRNA水平3h达高峰，5h降低。LPS刺激巨噬细胞5h后细胞膜脂成分降解，膜脂流动性降低，CD14表达增加；用脂质体预处理后膜脂含量增加，膜脂流动性增加，CD14表达降低。结论 LPS体外刺激能上调巨噬细胞膜CD14表达，且此调节作用可能至少发生在转录水平；LPS刺激巨噬细胞使主要膜脂成分降解，膜流动性降低，这可能是LPS上调CD14的重要原因。     

脂多糖对THP-1细胞CD14诱导表达的影响

目的探讨脂多糖(LPS)对THP-1细胞CD14诱导表达的影响。方法应用不同质量浓度(0.1~50 mg/L)的LPS刺激培养48 h的THP-1细胞,并测定其CD14mRNA、肿瘤坏死因子α(TNFα)和白细胞介素6(IL-6)表达的变化。结果正常培养条件下,THP-1细胞CD14表达量极低,而LPS对单核巨噬细胞THP-1具有显著的诱导激活作用,在较低质量浓度剂量刺激下即可被活化,表现为CD14mRNA表达量迅速增加,同时,LPS可诱导THP-1细胞产生TNF-α和IL-6,并在一定范围内呈剂量依赖关系。结论LPS可导致THP-1细胞活化,显著上调CD14mRNA的表达,并诱导产生炎症介质TNF-α和IL-6。     

烧伤血清对离体大鼠肺泡巨噬细胞CD14表达变化的影响

目的 :探讨烧伤血清对离体大鼠肺泡巨噬细胞 (AM )CD14的mRNA基因和膜蛋白 (mCD14 )表达变化及其对AM分泌细胞因子的影响。　方法 :分离并收集大鼠AM ,以烧伤血清及LPS刺激 ,再分别以抗CD14抗体作用后提取总RNA ,用RT PCR方法检测不同时相点CD14mRNA表达 ;用ELISA方法检测培养液中TNF α和IL 6浓度 ;免疫组化法检测AM膜CD14蛋白表达变化。　结果 :经烧伤血清和LPS刺激后 ,AM的CD14基因以及蛋白表达从 1h起就开始增加 ,2h达峰值 ,然后逐渐减弱。上述改变在伤后 12h内持续 ,细胞因子分泌相应增加 ;抗CD14抗体阻断CD14作用后 ,CD14的基因和蛋白表达显著降低 ,细胞因子分泌亦相应减少。　结论 :严重烧伤后可能随着LPS增加 ,通过激活内毒素信号传导通路 ,使AM分泌细胞因子增加。这种作用可以被抗CD14抗体所阻断 ,提示严重烧伤后可以通过调节CD14的作用而减少细胞因子的合成和分泌     

TLR4在内毒素导致组织损伤过程中的信号转导作用

已知内毒素（1ipopolysaccharide，LPS）诱导炎症反应时，脂多糖结合蛋白（LPS binding protein，LBP）可将LPS传递给CD14分子，由CD14介导LPS细胞内传导而使NF-κB激活，诱导促炎细胞因子TNF、白介素和粘附分子等的表达。但CD14分子是一种GPI膜锚定蛋白，缺乏跨膜区和胞内结构，不能直接向细胞内传导LPS信号，尚需其它分子起信号传导作用。研究发现TOLL样受体是LPS信号向细胞内传导的门户蛋白。     

三条脂多糖结合蛋白/CD14结合位点模拟肽体外抗内毒素活性的比较研究

目的 比较三条LBP/CD14结合位点模拟肽体外抑制内毒素性炎症反应的生物学活性.方法 采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测模拟肽与CD1l4的亲和力及与脂多糖结合蛋白(LBP)的竞争性抑制活性.将佛波脂(PMA)诱导成熟的U937细胞与内毒索共培养,并予以模拟肽干预,采用RT-PCR检测模拟肽对U937细胞TNF-α基因表达的影响.将大鼠肺泡巨噬细胞(AMs)与荧光标记内毒素(FITC-LPS)共培养,并予以模拟肽干预,采用荧光显微镜观测模拟肽对内毒素(LPS)与AMs结合的影响.结果 1号模拟肽(FHRWPTWPLPSP,10 μg/mL)与CD14的亲和力显著高于2号和3号模拟肽(20.3±4.1比11.8±2.4和13.7±3.3,P＜0.01或P＜0.05),1号模拟肽(10 μg/mL)对LBP的竞争性抑制活性也显著高于2号和3号模拟肽[(57.2±11.2)%比(39.4±9.7)%和(37.9±8.3)%,P均＜0.01].三条模拟肽(10μg/mL)均可从基因水平显著抑制LPS诱导U937细胞产生TNF-α(P＜0.01或P＜0.05),1号模拟肽的抑制作用显著强于2号和3号模拟肽(0.239±0.053比0.406±0.112和0.493±0.121,P＜0.01).1号模拟肽能显著抑制LPS与AMs结合(2 157±514比2 763±453,P＜0.01).结论 1号模拟肽(FHRWPTWPLPSP)有较高的CD14亲和力及LBP竞争性抑制活性,具有潜在的抗内毒素性炎症反应的作用.     

酒精性肝病大鼠Kupffer细胞CD14蛋白的表达及其在肝损害中的作用

目的:观察大鼠酒精性肝病时细胞()蛋白和基因的表达及其在肝损害中的作用。KupfferKCsCD14方法:随机将大鼠分为乙醇喂养组(剂量～)和葡萄糖对照组。周和周活杀分离,用流式细胞仪()测定细Wistar 512g/kg/24h48KCsFCM胞膜上蛋白的表达,同时用逆转录多聚酶联反应()测定中的表达;用酶联免疫法()CD14RT-PCRKCsCD14 mRNAELISA测定血浆中TNF-α和-浓度变化;测定血浆内毒素及血浆中转氨酶()水平变化,并观察肝脏形态学改变。IL6ALT结果: 乙醇组大鼠周时膜上已明显表达蛋白和　,周时其表达进一步增强,显著高于对照组4KCsCD14CD14mRNA8(P。乙醇<0.05)组周和周时血浆48TNF-α浓度、-浓度及内毒素浓度均明显高于对照组IL6 (P。乙醇组肝组织发生显著的病理变化,对<0.05)照组肝组织无明显病理变化。结论:乙醇能诱导大鼠肝脏膜蛋白和的表达显著增强,血浆中细胞因子KCsCD14CD14 mRNA-TNFα和-浓度增加,引起肝脏形态改变和功能损害。IL6     

单核细胞向巨噬细胞分化过程中CD44mRNA表达和黏附功能的变化

目的探讨单核细胞向巨噬细胞分化过程中CD44 mRNA表达和黏附功能的变化。方法应用豆蔻佛波醇乙酯(PMA)诱导单核细胞系U937向巨噬细胞分化;应用RT-PCR分析U937细胞CD44 mRNA表达变化,并以β-actin作为内参进行半定量评价,并对主要条带进行测序;应用荧光染料BCECF/AM作为探针,测定黏附于激活的内皮细胞上的U937细胞数目。结果与对照组比较,PMA诱导的U937细胞CD44 mRNA总体表达显著增加(P=0.01037),异构体/标准CD44比例显著上升(P=0.0005551),测序结果显示PMA刺激后显著增加的是947 bp(V8 V9 V10)和1208 bp(V7 V8 V9 V10)CD44异构体。同时,PMA刺激后U937细胞黏附功能显著增加(P=0.0029)。结论单核细胞向巨噬细胞分化过程中CD44 mRNA,特别是947bp(V8 V9 V10)和1208 bp(V7 V8 V9 V10)CD44异构体的表达显著增加,可能与细胞黏附功能的增强相关。     

1,25二羟基维生素D_3对大鼠脾CD4~+CD25~+调节性T细胞及Foxp3基因表达的影响

目的:探究1,25二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]对大鼠脾CD4 CD25 调节性T细胞(Treg)及其特异性转录因子Foxp3基因表达的影响.方法:近交系雄性Lewis大鼠,随机分成对照组和3个剂量的VitD3组: 0.125 μg组,0.25 μg组和1 μg组,每组30只;灌胃给药,3次/周,共2周后对照组给予赋形剂;各组随机抽取20只大鼠,于第15 d腹腔注射脂多糖(LPS)(10 mg/kg),随机选择其中10只于6 h后切取脾,其余10只观察注射LPS后96 h大鼠的病死率,同时留取未注射LPS大鼠的脾;流式细胞仪检测脾CD4 CD25 Treg数量变化,RT-PCR检测脾Foxp3 mRNA表达.结果:1,25(OH)2D3明显上调大鼠脾CD4 CD25 Treg的数量及特异性转录因子Foxp3 mRNA的表达;1,25(OH)2D3能保护大鼠抵抗LPS的攻击.结论:1,25(OH)2D3对大鼠脾CD4 CD25 调节性T细胞及特异性转录因子Foxp3 mRNA的表达有显著影响.1,25(OH)2D3保护大鼠抵抗LPS攻击可能与其促进CD4 CD25 Treg的发育和功能有关.     

单核细胞向巨噬细胞分化过程中CD44 mRNA表达和黏附功能的变化

目的 探讨单核细胞向巨噬细胞分化过程中CD44 mRNA表达和黏附功能的变化.方法 应用豆蔻佛波醇乙酯(PMA)诱导单核细胞系U937向巨噬细胞分化;应用RT-PCR分析U937细胞CD44 mRNA表达变化,并以β-actin作为内参进行半定量评价,并对主要条带进行测序;应用荧光染料BCECF/AM作为探针,测定黏附于激活的内皮细胞上的U937细胞数目.结果 与对照组比较,PMA诱导的U937细胞CD44 mRNA总体表达显著增加(P=0.01037),异构体/标准CD44比例显著上升(P=0.0005551),测序结果显示PMA刺激后显著增加的是947 bp(V8+V9+V10)和1 208 bp(V7+V8+V9+V10)CD44异构体.同时.PMA刺激后U937细胞黏附功能显著增加(P=0.0029).结论 单核细胞向巨噬细胞分化过程中CD44 mRNA,特别是947bp(V8+V9+V10)和1 208 bp(V7+V8+V9+V10)CD44异构体的表达显著增加,可能与细胞黏附功能的增强相关.     

14—3—3蛋白

14-3-3是一个在真核生物中广泛表达的酸性蛋白家族，主要以同源／异源二聚体形式存在，通过磷酸化丝／苏氨酸作用与靶蛋白或靶蛋白的两个结构域结合。七种不同亚型的高度保守的14-3-3蛋白与人类细胞中多种不同的信号通路有着密切的关系。14-3-3通过调节靶蛋白间的相互作用在MAPK级联放大效应等信号转导途径中发挥调控作用。     

微卡（VACCAE）联合2H3R3Z3E3/4H3R3方案治疗初治涂阳肺结核的临床效果

目的应用微卡(VACCAE)联合常规抗结核药物2H3R3Z3E3/4H3R3治疗初治涂阳肺结核的临床疗效。方法选取100例初始涂阳肺结核患者,随机分为对照组50例和观察组50例,两组均采用"世界银行贷款+中国结核病控制项目"的2H3R3Z3E3/4H3R3方案治疗,观察组在上述常规化疗药基础上联用微卡22.50μg深部肌肉注射;观察两组的痰菌阴转率、病灶吸收率、空洞闭合率、临床症状改善情况、不良反应发生率。结果治疗1个月后,观察组临床症状完全消失率显著高于对照组(P<0.05)。观察组的痰菌转阴率、病灶吸收率、空洞闭合率均优于对照组(P<0.05)。微卡注射后无严重不良反应。结论微卡联合常规抗结核药物2H3R3Z3E3/4H3R3方案治疗初治涂阳肺结核能够快速缓解临床症状,且疗效显著不良反应小,具有临床应用价值。     

Hypoxia-induced MTA1 promotes MC3T3 osteoblast growth but suppresses MC3T3 osteoblast differentiation

Background

Bone fracture is one of the most common physical injuries in which gene expression and the microenvironment are reprogramed to facilitate the recovery process.

Methods

By specific siRNA transfection and MTT assay, we evaluated the effects of metastasis-associated gene 1 (MTA1) in osteoblast growth. To show the role of MTA1 in osteoblast under hypoxia conditions, by overexpressing and silencing MTA1 expression, we performed mineral deposition and alkaline phosphatase activity assay to observe the differentiation status of osteoblast cells. Real-time PCR and Western blot assays were adopted to detect the expression of certain target genes.

Results

Here, we reported that hypoxia-induced MTA1 expression through hypoxia-induced factor 1 alpha (HIF-1α) and stimulated the growth of osteoblast MC3T3 cells. Silencing of MTA1 through specific siRNA suppressed MC3T3 cell growth and elicited cell differentiation and induced alkaline phosphatase activation and the upregulation of bone morphogenetic protein-2 and osteocalcin.

Conclusions

We found that MTA1 was regulated by HIF-1α in hypoxia circumstance to suppress osteoblast differentiation. These findings provide new insights for bone fracture healing and new strategies to develop potential targets to promote fracture healing.

Electronic supplementary material

The online version of this article (doi:10.1186/s40001-015-0084-x) contains supplementary material, which is available to authorized users.     

稳定表达神经营养素-3的NIH3T3细胞建立及鉴定

目的：建立稳定表达NT3的NIH3T3细胞株，通过体外共培养实验观察其对耳蜗螺旋神经节细胞生长的影响．方法：以阳离子脂质体作为载体，将携带有外源性基因NT3的重组真核表达载体pIRES2-EGFP-NT3转染小鼠成纤维细胞，进行RT-PCR，Western-blot分析及免疫组化鉴定，并与耳蜗螺旋神经节细胞进行共培养实验．结果：得到抗G-418的阳性细胞克隆；RT-PCR的产物约为744 bp；Western-blot可见一清晰的蛋白条带，与NT3的蛋白分子量相符合．NT3免疫组化染色结果显示转染NT3-cDNA的NIH3T3细胞胞质呈棕黄色着色．NT3转染组细胞与耳蜗螺旋神经节细胞共培养2wk后，与对照组相比，耳蜗螺旋神经节细胞无明显减少．结论：成功建立了稳定表达NT3的NIH3T3细胞株；该细胞对耳蜗螺旋神经节细胞有很好的营养支持作用．     

新生儿脐血血清rT_3及T_3/rT_3值的测定

测定300例新生儿脐血血清T_4、T_3、rT_3及T_3/rT_3值。其平均值±标准差依次为98.65±27.6ug/L,0.49±0.19ug/L,3.06±0.25ug/L;T_3/rT_3值平均为0.16。脐血T_4、rT_3值高于正常成人,而T_3及T_3/rT_3值明显低于正常成人。     

EB病毒核抗原3C提高Gemin3基因的表达

  目的 探讨EB病毒核抗原(EBNA)3C对Gemin3基因表达的影响。方法 共转染EBNA3C和Gemin3基因至HEK293细胞。依靠慢病毒载体介导发卡RNA干涉敲减EBNA3C基因的表达,并经嘌呤霉素筛选获得稳定的EBNA3C低表达细胞系,采用Western blot检测EBNA3C对Gemin3蛋白表达的影响。结果 Gemin3基因的表达随着EBNA3C表达量的增加而增加,呈剂量依赖性,在EBNA3C基因敲减细胞中Gemin3的表达减少。结论EBNA3C可提高Gemin3基因表达水平。     

血小板生长因子在NIH3T3成纤维细胞和MT3转化细胞应答中的作用

血小板生长因子(PDGF)通过促进细胞外Ca~(2 )内流,增加细胞内Ca~(2 )浓度,但在亲代NIH3T3成纤维细胞和转化的MT3细胞中,却表现出不同的作用。在亲代NIH3T3成纤维细胞中,PDGF能够抑制舒缓激肤介导的细胞内Ca~(2 )浓度增加,未能见到细胞内Ca~(2 )波动现象;而在转化的MT3细胞中,PDGF丧失了对舒缓激肽介导的细胞内Ca~(2 )浓度增加的抑制作用,常常引起细胞内Ca~(2 )波动现象。对于DNA的合成,PDGF在两种细胞中,也表现出有时程的差异。     

SRSV/3T3和NIH/3T3细胞膜的分离和蛋白质组分的初步比较

应用甘油低渗两相分配法分离了SRSV/3T3细胞质膜(SM)和NIH/3T3细胞质膜(NM)。经Na~+、K~+-ATP酶和葡萄糖-6-磷酸酶等标志酶活性鉴定,表明SM和NM纯度较高。经SDS-PAGE分析比较,发现SM和NM的蛋白质组分有较明显差异。SM有7种独特的组分,分子量分别为2.29×10~(-22)、2.18×10~(-22)、9.79×10~(-23)、9.60×10~(-23)、8.63×10~(-23)、5.49×10~(-23)和4.78×10~(-23)kg。NM有两种特有的组分(1.15×10~(-22)和4.17×10~(-23)kg)。在彼此共有的蛋白质组分中,也有许多组分在含量和电泳迁移速度上存在着程度不同的区别。