Met-RANTES 在 rd 小鼠遗传性视网膜变性中的作用

目的：研究CC趋化因子拮抗剂Met-RANTES对rd小鼠视网膜外核层形态的影响,探讨其在rd小鼠遗传性视网膜变性中的潜在治疗作用。方法以出生后7drd小鼠作为研究对象,随机分为5组,分别给予腹腔注射Met-RANTES、PBS和玻璃体腔注射不同浓度Met-RANTES、PBS,直到rd小鼠出生后14d,过量麻醉法处死后摘取眼球制作冰冻切片,HE染色后观察测量视网膜后极部外核层厚度。结果腹腔注射met-RANTES、玻璃体腔注射0．7μlMet-RANTESrd小鼠与对照小鼠视网膜外核层细胞层数无明显变化（P＞0．05）。玻璃体腔注射1．0μlMet-RANTES和1．5μlMet-RANTES眼球视网膜外核层比对照眼球视网膜外核层厚,有统计学差异（P＜0．05）。结论CC趋化因子拮抗剂Met-RANTES对rd小鼠遗传性视网膜变性可能存有潜在治疗作用。     

睫状神经营养因子对视网膜色素变性小鼠光感受器功能影响的ERG分析

目的 :探讨在小鼠玻璃体腔内注射睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)对视网膜色素变性(retinal degeneration,rd)小鼠视网膜光感受器的主要影响。方法 :将日龄为10d的12只rd小鼠随机分为CNTF治疗组、PBS(磷酸缓冲液)注射组及空白对照组。为CNTF治疗组小鼠在眼玻璃体腔内注射CNTF,为PBS注射组小鼠在眼玻璃体腔内注射磷酸缓冲液PBS,对空白对照组小鼠不进行任何干预,在三组小鼠日龄14d、18d、22d、30d时分别为其进行视网膜电图(ERG)检查。结果 :本研究观察了三组小鼠出生后14d、18d、22d获得暗适应后发生最大混合反应(Max-ERG)、获得明适应后发生ERG(Cone-ERG)及30Hz闪烁光ERG(Flick-ERG)的a波(图1)、b波(图2)的振幅,结果发现,与CNTF治疗组小鼠相比,PBS注射组小鼠在进行视网膜电图检查时上述振幅均较低,其潜伏期较长。在CNTF治疗组小鼠出生后第30d为其进行视网膜电图检查仍能记录到a波和b波。结论 :在rd小鼠玻璃体腔内注射CNTF能够有效延缓其光感受器细胞的凋亡,使其光感受器细胞功能得到显著的提高。     

N-Arg对RCS大鼠遗传性视网膜变性视细胞凋亡的影响

目的:研究一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)抑制剂对遗传性视网膜变性视细胞凋亡的影响.方法:测定出生后不同鼠龄RCS(Royal College of Surgeons)大鼠视网膜的诱生型一氧化氮合酶(inducible NOS,iNOS)活性;出生后第17天RCS大鼠玻璃体腔内注射NOS抑制剂Nω-硝基-L-精氨酸(Nω-nitro-L-arginine,N-Arg),并于出生后第22、27和32天重复注射,于出生后第38天以TUNEL法检测视网膜视细胞凋亡.结果:RCS大鼠出生后第25天,视网膜iNOS活性达高峰;注射N-Arg后,视网膜TUNEL阳性视细胞核相对面积显著降低,外核层明显增厚,杆锥层显著变薄.结论:一氧化氮合酶抑制剂对遗传性视网膜变性具有潜在的临床治疗价值.     

CNTF对视神经损伤后视网膜神经节细胞凋亡的影响

目的：研究睫状神经营养因子（CNTF）对视神经损伤后视网膜神经节细胞（RGCs）凋亡的影响。方法：采用中号显微血管夹建立视神经中度损伤模型后,取左眼作为治疗组,在即时、1、37、d时分别向玻璃体腔内注入2μl（1μg/μl）CNTF溶液;取右眼作为实验对照组,同治疗组在每个时间点向玻璃体腔内注入2μl双蒸水。于伤后1、3、71、4 d时分别做HE染色、原位末端标记法（TUNEL）检测。结果：光镜下观察治疗组细胞形态明显好于实验对照组。TUNEL显示凋亡RGCs数随视神经损伤时间延长而变化（P〈0.05）。伤后1 d,治疗组和实验对照组凋亡RGCs数两组间相比较无统计学意义（P〉0.05）。伤后3、7、14 d时治疗组的凋亡RGCs数明显比实验对照组少（P〈0.05）。结论：玻璃体腔内注射外源性CNTF可以减少RGCs的凋亡,对视神经中度损伤后RGCs具有明显保护作用。     

实验性光损伤大鼠视网膜光感受器细胞凋亡的研究

目的：观察较强可见光所致大鼠视网膜光感受器细胞凋亡现象，探讨视网膜光化学损伤发病机制。方法：取健康成年SD大鼠50只，随机分成正常对照组（CON）、光损伤后1天（D1）、3天（D3）、5天（D5）、7天（D7）组，每组10只。各组大鼠在12h明12h暗环境中饲养7天，然后暗适应36h。D1、D3、D5、D7组大鼠采用4178Lux照度的可见光进行12h间歇光照射，连续3天，总计36h，然后在正常环境中分别饲养1天、3天、5天、7天。10％水合氯醛麻醉大鼠，摘取眼球，制备视网膜石蜡切片及超薄切片，行HE染色、TUNEL法标记及重金属染色，光镜、透射电镜观察，MIAS-1000图像分析系统检测。结果：正常大鼠视网膜组织结构层次清楚，外核层排列规则，染色质电子密度均匀。TUNEL法染色阴性。光照后1天，外核层开始变薄，其厚度减少11.88％。核染色质开始固缩。可见少量TUNEL法标记的阳性细胞核，染色质向核膜下聚集，呈现典型的凋亡细胞表现。光照后3天，外核层厚度减少26.80％。电镜下核染色质向中心聚集。TUNEL法标记的凋亡细胞增加。光照后5天，外核层厚度减少39.76％。TUNEL法标记的凋亡细胞更。光照后7天，外核层厚度和TUNEL法标记的凋亡细胞数与光照后5天基本相似。视网膜色素上皮细胞、节细胞及内核层均无明显变化。也未了现炎症细胞。结论：实验性光损伤导致大鼠光感受器丧失，光感受器丧失的性质为细胞凋亡。实验结果初步证实光感受器细胞凋亡是实验性大鼠视网膜光损伤的重要机制。     

碱性成纤维细胞生长因子在挫伤性视网膜病变大鼠中的治疗作用

目的:观察玻璃体腔内注射碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对挫伤性视网膜病变大鼠的治疗作用。方法:自由落体法制作视网膜挫伤模型。将SD大鼠随机分为正常组、挫伤组及治疗组。挫伤后即刻,挫伤组大鼠玻璃体腔内注入10 lμ生理盐水,治疗组注入bFGF 10 lμ(含bFGF 2μg),行HE染色观察各组大鼠视网膜组织的病变情况;测量视网膜内外层厚度;采用末端脱氧核酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记(TUNEL)法检测感光细胞凋亡情况,并计算凋亡指数。结果:视网膜挫伤早期,治疗组大鼠视网膜水肿较挫伤组轻,后期各时间段治疗组大鼠视网膜外核层厚度均比挫伤组厚。TUNEL染色显示挫伤组于3 d时视网膜可见较多凋亡阳性表达的细胞,分布在外核层,余各组未测到阳性着色细胞。与挫伤组比较,bFGF治疗组在挫伤3 d时凋亡的感光细胞明显减少。结论:玻璃体腔内注射bFGF能抑制挫伤性视网膜病变大鼠感光细胞的凋亡,从而对其有治疗作用。     

RCS大鼠感光细胞凋亡与Bcl-2蛋白表达的关系

①目的 探讨遗传性视网膜色素变性中感光细胞凋亡及其可能的基因调控机制。②方法 对：RCS大鼠及对照SD大鼠的视网膜组织结构进行光镜观察、细胞凋亡及Bcl-2蛋白免疫组织化学检测。③结果 RCS大鼠生后15d视网膜的感光细胞视杆层及外节增厚，视杆层的厚度在25d达到高峰。感光细胞的数目在25d时有所下降，到出生后60d，仅少许感光细胞存留。出生后25～40d，RCS大鼠视网膜可见外核层TUNEL，染色阳性的感光细胞，阳性细胞数35d最多。30～40d内核层和节细胞层可见Bcl-2蛋白免疫组化阳性表达，35d时内核层阳性表达细胞数最多，外核层一直未见明显Bcl-2蛋白阳性表达。④结论 RCS大鼠视网膜变性过程中，感光细胞发生了凋亡。Bcl-2原癌基因可能不参与感光细胞的保护机制。     

原花青素对小鼠视网膜光化学损伤的保护作用

目的观察原花青素对视网膜光化学损伤后感光细胞的保护作用。方法24只昆明小鼠随机分为3组：A组为正常对照组;B组为光化学损伤模型对照组;C组为原花青素给药组。C组在造模前三天开始灌胃给原花青素混悬液（400mg/kg/d）,B和C组先暗适应12小时,然后在自制的光损伤箱内光照12小时,连续光照3天。在造模后第7天,将每组的8只小鼠进行光镜观察视网膜形态学,并采用计算机图像分析技术,对各实验组小鼠视网膜厚度及视网膜外核层厚度进行定量测量。结果光照第7天后,三组视网膜厚度和视网膜外核层厚度相比均具有显著性差异（p〈0.01）。结论原花青素对视网膜光化学损伤具有一定的保护作用。     

RCS大鼠感光细胞凋亡与Bcl-2蛋白的表达

目的 探讨遗传性视网膜色素变性中感光细胞凋亡及其可能的基因调控机制。方法 对RCS大鼠及对照SD大鼠的视网膜组织结构进行光镜观察、细胞凋亡及Bcl-2蛋白免疫组织化学检测。结果 RCS大鼠生后15d视网膜的感光细胞视杆层及外节增厚，视杆层的厚度在25d达到高峰。感光细胞的数目在25d时有所下降，到出生后60d，仅少许感光细胞存留。出生后25～40d，RCS大鼠视网膜可见外核层TUNEL染色阳性的感光细胞，阳性细胞数35d最多。30-40d内核层和节细胞层可见Bcl-2蛋白免疫组化阳性表达细胞，35d时内核层阳性表达细胞数最多。外核层一直未见明显Bcl-2蛋白阳性表达细胞。结论 RCS大鼠视网膜变性过程中。感光细胞发生了凋亡。Bcl-2原癌基因可能不参与感光细胞的保护机制。     

EGB761对视网膜光损伤的作用

摘要：目的：探讨通过口服银杏叶提取物（Ginkgo biloba extract Egb761）对视网膜光损伤后感光细胞的保护作用。方法：80只封闭群的昆明小鼠随机：正常对照组（A组）光损伤模型组(B组)、生理盐水对照组（C组）、药物治疗组(D组),每组20只;药物治疗组和生理盐水组分别在在造模前一周每日灌胃Egb761（150mg/kg/d）和相同体积的生理盐水,造模后继续灌胃给药直到造模后7天、14天及30天处死动物做光镜、电镜组织病理学检查和视网膜原位凋亡细胞检测。结果：除正常对照组外其他各组均出现凋亡的感光细胞,单纯光损伤模型组光照后7天感光细胞内外节可见轻度水肿、排列紊乱,外核层中出现深染皱缩的凋亡细胞,核层变薄仅留7-8层;14天时损伤最重,感光细胞层内外节几乎全部消失且可见凋亡细胞,外核层仅留1-3层,平均厚度为（37.988±1.207）µm,小鼠视网膜厚度平均为（126.32±2.31）µm。但是药物治疗组感光细胞层和外核层损伤均明显低于生理盐水组,（t=21.993,p<0.001）,说明EGB761能对小鼠视网膜光损伤起到一定的保护作用。14天时最明显。结论：通过口服EGB761能部分抑制感光细胞的凋亡,最终挽救了部分感光细胞的存活。     

不同日龄视网膜变性大鼠眼底组织结构学观察

目的 探究转基因视网膜退行性变性S334ter-line-3大鼠在出生后不同日龄视网膜组织结构学变化.方法 选择出生后1,9,11,18,30,59 d的S334ter-line-3大鼠,断颈或腹腔注射过量麻药后处死大鼠,摘除双眼球,置入眼球混合固定液及福尔马林液中,左眼行常规石腊包埋,右眼行Histocryl plastic包埋,HE染色,光学显微镜下观察不同时点视网膜组织学结构.结果 出生后第1天,S334ter-line-3大鼠视网膜是一种未发育完善的胚胎型组织,仅有RPE细胞层、祖细胞层,短的内丛状层和神经节细胞层;第9天时其视网膜发育才较完善.第11天时视网膜感光细胞层即开始发生退行性变性,其外核层内可见深染皱缩的凋亡细胞核;第18天时感光细胞层内外节几乎完全消失,外核层变薄,胞核数仅为正常1/2;第30天时,S334ter-line-3大鼠视网膜外层退行性变性已基本完成,仅残留1排感光细胞核层,其外接RPE细胞层,内接视网膜内核层;第59天视网膜结构与第30天基本相同.结论 S334ter-line-3大鼠在出生后随年龄的增长,视网膜外层逐渐发生退行性变性,至出生后第30 d时这种退行性变性基本完成,故出生后30 d的大鼠适合作为视网膜移植中的移植受体.     

硫酸镁对兔视网膜缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨硫酸镁对实验性兔视网膜缺血再灌注损伤后的保护作用及其机制。方法用眼内灌注法制成视网膜缺血再灌注模型。32只健康成年新西兰大白兔随机分为对照组、模型组、硫酸镁治疗A组和硫酸镁治疗B组。硫酸镁治疗A组于缺血后立即按140 mg.kg-1耳缘静脉推注2 mol.L-1硫酸镁,随后腹腔内补充注射1 g;硫酸镁治疗B组于缺血后,按600 mg.kg-1腹腔内注射2 mol.L-1硫酸镁。各组分别于再灌注6 h后空气栓塞法处死兔,经光镜、电镜观察视网膜的改变。结果再灌注6 h后,光镜下模型组视网膜神经节细胞层、内核层变薄,电镜下出现核固缩,线粒体空泡化。经硫酸镁治疗后视网膜神经节细胞层、内核层的形态学明显改善,且硫酸镁治疗A组视网膜神经节细胞层和内核层损害较硫酸镁治疗B组明显减轻。结论硫酸镁可能在治疗视网膜缺血性疾病中有一定应用价值。     

N-甲基-D-天门冬氨酸对大鼠视网膜损伤的形态学观察

目的： 研究N-甲基-D-天门冬氨酸（NMDA）兴奋毒性对大鼠视网膜及视神经所致的形态学变化。 方法： 32只大鼠随机均分为4组,正常对照组（A组）,实验组24只右眼注射NMDA 2 μl,依注射剂量10 nmol,20 nmol,40 nmol随机等分为B组、C组、D组,7 d后处死大鼠摘除眼球。每组取6只大鼠眼球作石蜡包埋,测量距视乳头边缘1～1.5 mm间的视网膜内丛状层厚度,用以评价NMDA对视网膜的神经毒性。各组其余2只大鼠取视神经作半薄切片,光镜下观察是否有轴索退行性变,电镜观察同一眼视网膜神经元的超微结构改变。结果： 不同剂量NMDA干预后7 d视网膜内丛状层的厚度均明显降低,各组间差异有统计学意义（P＜0.05)。视神经半薄切片光镜下可见轴索退行性变,其程度与NMDA浓度相关。在各浓度组切片均可见视网膜神经节细胞（RGC）及双极细胞出现核固缩,染色质边聚等具有凋亡特征的改变。 结论： NMDA导致的视网膜内丛状层厚度变薄及视神经轴突变性程度与NMDA剂量相关。凋亡可能是NMDA介导的视网膜神经节细胞（RGC）死亡的主要形式,NMDA损伤模型与青光眼性损伤有相似性。     

NADPH 氧化酶在 rd 小鼠遗传性视网膜变性中的活化作用

目的：研究NADPH氧化酶在rd小鼠遗传性视网膜变性早期的活化表达及其氧化产物活性氧的生成,探讨其在遗传性视网膜变性早期的致病作用。方法以出生后8,10,12,14,16,18d的rd小鼠及对照鼠视网膜作为研究对象。 Real-time PCR测定在rd小鼠感光细胞凋亡过程中视网膜NADPH氧化酶亚单位P22 phox mRNA的定量表达。二氢乙锭（ DHE）染色法测定NADPH氧化酶活化产物ROS的生成变化。结果与对照组相比,P22phox mRNA在rd小鼠出生后第12天表达明显升高,第14天达高峰。 ROS在rd小鼠出生后第8天于视网膜外核层少量产生,第14天生成量达到高峰。结论在rd小鼠视网膜变性过程中NADPH氧化酶表达明显升高,ROS生成显著增加,皆早于或与感光细胞凋亡平行,提示NADPH氧化酶活化生成ROS可能在视网膜变性早期致病过程中发挥重要作用。     

川芎嗪对rd和rds小鼠视网膜光感受器细胞干预作用的光镜观察

目的通过rd和rds小鼠视网膜光感受器细胞的病理变化探讨盐酸川芎嗪对遗传性视网膜色素变性小鼠可能的治疗作用。方法rd和rds新生鼠各84只,随机分为两组,实验组和对照组,每组42只小鼠。实验组小鼠从出生当天开始,ip盐酸川芎嗪80mg/kg,每日2次,至出生后35d;对照组ip等量生理盐水。分别于0d和注射后3、7、14、21、28、35d取眼球,立即经10%中性甲醛固定,光学显微镜下观察水平视网膜近赤道部位光感受器细胞的厚度。结果病理结果显示,经盐酸川芎嗪治疗后14、21、28、35d,与未用药的对照组相比较,rd和rds小鼠光感受器细胞层数明显增加(P<0.01)。结论川芎嗪可延缓rd和rds小鼠视网膜光感受器细胞的破坏。