热诱导培养角朊细胞表达HSP70

0　引言　热休克蛋白 (HSP)是一类当细胞受到各种有害因素刺激时合成增多的蛋白质 ,在细胞内蛋白的加工过程中具有重要作用 .我们对体外培养的角朊细胞进行热处理 ,然后观察细胞中 HSP70的表达情况 ,并对其意义进行初步探讨 .1　材料和方法1 .1　材料　角朊细胞无血清培养基 (KC- SFM) (GibcoBRL) ,鼠抗人 HSP70单克隆抗体 (Santa Cruz公司 ) ,生物素化羊抗鼠 Ig G及 SABC试剂盒 (武汉博士德生物工程有限公司 ) ,HSP70寡核苷酸探针 (上海生命技术公司合成 ) .1 .2　方法　取手术包皮 (本校西京医院门诊手术室提供 ) ,用2 .5 g·…     

热休克蛋白70反义寡核苷酸对肝癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨热休克蛋白70反义寡核苷酸(HSP70 ASODN)对肝癌细胞增殖、凋亡的影响及其可能机制.方法 合成特异性靶向HSP70 ASODN,并将其转染SMMC-7721细胞;四甲基噻唑蓝(MTT)法检测HSP70 ASODN对SMMC-7721细胞增殖的影响,计算生长抑制率;荧光显微镜观察细胞凋亡形态;流式细胞仪分析细胞周期分布,计算细胞增殖指数;免疫细胞化学观察细胞内HSP70、Bcl-2、Bax的表达.结果 ASODN组细胞生长抑制率明显高于正义寡核苷酸(NSODN)组、转染试剂对照组及空白对照组(P＜0.05);形态学观察到典型瘤细胞凋亡特征;流式细胞仪分析证实HSP70 ASODN主要阻止瘤细胞进入S期,细胞增殖指数下降,出现明显的凋亡峰;免疫细胞化学显示可降低细胞内HSP70、Bcl-2水平(P＜0.05),提升Bax水平(P＜0.05).结论 HSP70 ASODN可抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,诱导细胞的凋亡,可能机制为中和了HSP70和细胞周期调节蛋白间的相互作用,导致细胞周期阻滞,打破了肿瘤细胞逃逸凋亡平衡,促使细胞发生凋亡.     

高温与电离辐射联合对鼠胎脑热休克蛋白及蛋白质的影响

目的　探讨高温与电离辐射联合对鼠胎脑热休克蛋白 (HSP70 )和蛋白质的影响。方法　孕d1 0的小鼠给予 4 2℃和 1 .0Gy( 6 0 Co)处理 ,取胎鼠全脑 ,用Westerndotblot和Lowrey方法测量HSP70和蛋白质含量。结果　 1 .0Gy照射组、照射联合高温 ( 42℃ )组与对照组比较胎脑蛋白质明显减少 ,并诱导HSP70合成。高温 ( 42℃ )联合照射组与 4 2℃组相比胎脑蛋白质含量没有显著性变化 ,但二组诱导HSP70合成能力强。结论　高温诱导合成HSP70能力较辐射强 ,辐射引起胎脑蛋白质含量减少 ,预先高温处理孕鼠 ,然后再给电离辐射 ,胎鼠表现出交叉适应性反应     

三氧化二砷对肝癌细胞株SMMC-7721、HepG2抑制作用的研究

目的 :研究三氧化二砷 (As2 O3)对肝癌细胞株的抑制作用。方法 :用不同浓度的 As2 O3处理人肝癌细胞株 SMMC- 772 1、Hep G2及正常人肝细胞株 L- 0 2 ,应用四甲基偶氮唑盐比色法 (MTT法 )观察 As2 O3对细胞生长的影响 ,并与 3种常用抗癌药羟基喜树碱 (HCPT)、顺铂 (DDP)及 5 -氟脲嘧啶 (5 - Fu)的抑制率进行比较。结果 :低浓度的 As2 O3、HCPT、DDP及 5 - Fu对 SMMC- 772 1、Hep G2两种肝癌细胞株的抑制率分别是 86 .3% ,4 3.2 % ;4 .2 % ,4 2 .1%和 76 .7% ,4 5 .6 % ;19.8% ,18.6 % ,As2 O3的抑瘤作用最强 (P<0 .0 5 ) ,而对正常人肝细胞株的抑制较弱。浓度≥ 2 .0 μm ol/ L 的 As2 O3对 SMMC- 772 1和 Hep G2的抑制作用差异均无显著性 (P>0 .0 5 )。结论 :As2 O3体外试验能有效抑制肝癌细胞株的生长 ,且在一定浓度范围内 ,抑制率具有一定的浓度和时间依赖性     

全反式维甲酸和苯乙酸钠联合对人肝癌细胞的诱导分化作用

目的　探讨全反式维甲酸 (ATRA)和苯乙酸钠 (Na-PA)两者对人肝癌细胞联合作用 .方法　应用台盼蓝染色、MTT法、流式细胞仪、甲胎蛋白测定等方法检测 ATRA和Na PA两者联合对人肝癌细胞的诱导分化作用 .结果　 10μmol· L- 1 ATRA,2 .5 mmol· L- 1 Na PA及两者联合作用 ,可抑制人肝癌细胞株 SMMC- 772 1细胞的生长 ,使细胞恶性表型向正常转化 ,其联合作用组 7d抑制率达 6 6 .5 % ,并能明显降低甲胎蛋白的分泌量 4 9.2 % ,使细胞周期 G0 / G1 期延长5 8.7% ,S期下降 35 .8% (P<0 .0 5 ) ,影响 DNA合成 ,最终产生抑制增殖诱导细胞分化的作用 .结论　 ATRA,Na PA及两者联合应用均可抑制 SMMC- 772 1细胞生长 ,诱导细胞分化 ,ATRA和 Na PA联合对人肝癌细胞的诱导分化有协同作用 .     

鼻咽癌细胞热疗后HSP70/HSP90的表达规律

目的探讨鼻咽癌细胞系HNE1热疗后HSP70/HSP90的表达规律。方法对体外培养的鼻咽癌细胞HNE1,恒温水浴42℃热休克2小时,采用western-blot检测HSP70/HSP90蛋白表达量的变化。结果 42℃热疗后鼻咽癌细胞HSP70/HSP90表达在蛋白水平上有明显升高,4h达到高峰,8h后开始回落,24小时接近正常。结论选择恒温水浴42℃热休克2小时,对鼻咽癌细胞具有热疗作用,HSP70/HSP90的表达规律为热疗后HSP70/HSP90的表达均明显升高,在4h达到高峰,8h开始下降,24h基本降至正常。     

人肝癌SMMC-7721细胞热休克反应条件的确立

热休克反应在生物界广泛存在 ,热休克时细胞变化的机制是当前研究的一个重要领域。本实验在热休克反应时糖皮质激素受体 (glucocorticoid receptor,GR)减少机制的研究中 ,确立了人肝癌 SMMC- 772 1细胞的热休克反应条件。1　材料和方法1.1　材料　人肝癌 SMMC- 772 1细胞由本校病理学教研室建株 ,人骨肉瘤细胞 HOS- 86 0 3由本校病理生理学教研室提供。RPMI16 4 0培养基 (Promega公司 )。抗 Hsp70和 β- actin抗体 (博士德公司 )。抗 GR多克隆抗体 (Santa Cruz公司 )。[3H]地塞米松 ([3H]- Dex,1.7× 10 1 2 Bq/ mmol) ,英国放免…     

高温和香烟对鼠早期胚胎脑HSP70及蛋白质的影响

目的　探讨高温、香烟及其联合对鼠胎脑热休克蛋白 70 (HSP 70 )及蛋白质合成的影响。方法　孕d 10的大鼠给予高温 (4 0～ 42℃ )和香烟烟雾水溶物 (0～ 2支 /只鼠 )处理 ,取胎鼠全脑 ,用Westerndotblot和Lowrey方法测量HSP 70和蛋白质含量。结果　高温 (4 0～ 41℃ )、高浓度的香烟烟雾 (1.5支 /只鼠和 2 .0支 /只鼠 )及其联合与对照组比较胎脑蛋白质明显减少 ,与温度、温度持续时间及香烟浓度明显相关 ,并且高温与香烟具有联合作用 ;结果还显示高温和高浓度香烟均使胎脑HSP 70明显升高 ,高温与香烟联合其胎脑HSP70合成量与单独高温组相比HSP 70变化不明显。结论　高温、香烟烟雾及其联合可引起胎脑蛋白质含量减少 ,并诱导胎脑HSP 70合成 ,但香烟的诱导作用较高温弱 ,与高温联合胎脑HSP70的合成表现出交叉适应性反应。     

不同条件对大鼠脑胶质瘤C6细胞HSP70表达的诱导

目的　探索和建立 SD大鼠胶质瘤细胞 (C6 ) HSP70蛋白表达最佳诱导条件。　方法　用 MTT法观察不同热休克条件和 /或药物诱导下 C6细胞生存率 ;用 FCM法检测 C6细胞膜 HSP70蛋白的表达。　结果　 (1) C6细胞在 4 2 ,4 3℃热休克 0～ 12 h的过程中 ,其生存率无明显影响。各种实验用药物 ,只要加上热休克 4 3℃ 2 h,对C6细胞的生存率的影响较单种药物同浓度要明显。 (2 ) C6细胞经 4 3℃热休克 1,2 ,4 ,6 ,8,10 ,12 ,14 ,16 ,2 0 ,2 4 h后 ,其胞膜 HSP70蛋白表达率均较对照组 (平均 4 .72 % )显著增高 (P<0 .0 5 ) ,其中 12 h表达率 (89.15 % )为最高 ,榄香烯 +热休克组又较其他各组高。　结论　一定条件下的热休克及某些药物可诱导 C6细胞膜 HSP70蛋白的表达 ,其中单因素以 4 3℃热休克 12 h表达率为最高 ,多因素以榄香烯 +43℃热休克 2 h表达率为最高     

肝细胞肝癌单克隆抗体的导向定位研究

作者用新鲜肝癌标本制备细胞悬液为抗原和用培养肝癌细胞(SMMC-7721)为抗原,制备6株与多数肝癌组织反应(63.1％～91.1％)而与正常肝细胞不反应的鼠单克隆抗体,并用胶体金标记抗体,在SMMC-7721细胞培养中,抗体能导向细胞,并进入细胞浆内,用放射性碘标抗体及其F(ab’)_2 片可在荷人肝癌裸鼠及