大鼠嗅鞘细胞无血清上清液诱导脊髓神经干细胞分化的研究

[目的]观察大鼠嗅神经鞘细胞上清液对脊髓神经干细胞共培养发生的诱导分化作用。[方法]采用差速贴壁法获得较高纯度的嗅鞘细胞，分时段Mr丌法检测细胞活性，选取最佳状态细胞无血清培养后取上清液，与3代纯化后的神经干细胞共培养，观察分化过程，免疫荧光法鉴定诱导结果。[结果]MTT法分6个时段检测纯化后的嗅鞘细胞，发现9d及12d细胞活性最高。使用无血清嗅鞘细胞上清液与脊髓神经干细胞共培养发现诱导作用明显，向神经元样细胞及胶质细胞分化的比例分别达到53％和42％。[结论]嗅鞘细胞在体外培养的不同时间段活性不同，无血清的嗅鞘细胞上清有明显诱导神经干细胞向成熟神经元分化的作用。     

共培养条件下骨髓基质细胞与嗅鞘细胞的相互作用

[目的]研究骨髓基质细胞与嗅鞘细胞共培养条件下,两种细胞之间的相互作用,为进一步行细胞联合体内移植提供理论基础。[方法]取大鼠骨髓基质细胞和嗅鞘细胞进行分离培养纯化及鉴定,将纯化后的骨髓基质细胞和嗅鞘细胞共培养,对共培养细胞进行形态学观察,检测间充质干细胞标记物Vimentin、NGF受体标记物P75、神经干细胞标记物Nestin。[结果]共培养部分细胞形态上具有神经细胞特征;经免疫荧光观察一部分细胞呈p75阳性,另一部分细胞呈Vimentin阳性,它们呈条索状包绕p75阳性细胞,细胞簇中央的细胞呈Nestin阳性。[结论]骨髓基质细胞和嗅鞘细胞能在体外共同存活、生长,且通过细胞的相互作用,能激活BMSCs向神经元样细胞分化的潜力,提示借助于细胞间的相互作用,采取恰当的细胞联合移植干预有可能弥补单一细胞类型自身的不足,这为BMSCs和OECs体内联合移植的可行性提供了理论依据。     

骨髓基质细胞体外分化移植治疗大鼠脊髓损伤的初步研究

[目的]探讨大鼠骨髓基质细胞体外分化为神经干细胞后移植治疗大鼠脊髓损伤的可行性。[方法]骨髓基质细胞经培养及定向分化为神经干细胞，后者由5-溴脱氧尿嘧啶核苷法标记，制备大鼠脊髓损伤模型，伤后第9d移植神经干细胞，实验分组：细胞移植组、PBS填充组、正常对照组。应用组化法观察移植细胞是否存活，取材前24h显露坐骨神经，行辣根过氧化物酶逆行示踪法观察脊髓损伤处的修复重建。[结果]骨髓基质细胞在定向分化为神经干细胞后标记并移植于脊髓损伤区，标记的阳性细胞可在受体脊髓内检测到，辣根示踪技术显示细胞移植组较PBS填充组阳性细胞明显增多，差别有统计学意义。[结论]大鼠骨髓基质细胞在体外分化为神经干细胞后移植于脊髓损伤区，移植细胞可以存活，并参与脊髓损伤处神经传导通路的结构重建。     

经嗅鞘细胞条件培养液诱导的骨髓基质干细胞移植对脊髓损伤修复的影响

[目的]研究经嗅鞘细胞条件培养液诱导的骨髓基质干细胞(BMSCs)移植对脊髓损伤的治疗作用。[方法]采用脊髓挤压损伤方法,制造SD大鼠脊髓损伤动物模型(共24只),随机分成A、B、C三组(每组8只),立即分别将DMEM、BMSCs和经诱导的BMSCs移植入脊髓损伤部位,分别于移植4、8周后处死动物,均采用HE染色观察脊髓损伤处空洞面积改变情况;并采用抗神经丝(NF)抗体、生长相关蛋白-43(GAP-43)抗体和神经元特异性核蛋白(Neu N)抗体免疫组织化学荧光染色,观察移植的BMSCs存活和分化情况及损伤部位神经纤维再生情况。[结果]移植4、8周后,脊髓损伤区空洞为移植细胞充填,空洞面积明显减少,差异有统计学意义(P0.01),BBB评分结果 C组和A、B组之间存在统计学差异(P0.05)。B、C组均可见再生神经纤维形成,同时部分移植细胞呈Neu N染色阳性,在C组上述改变更加显著。[结论]经嗅鞘细胞条件培养液诱导的BMSCs可以在脊髓损伤区存活,能够显著减小脊髓损伤处空洞面积,并可以促进脊髓损伤区神经纤维的修复再生,促进大鼠双下肢运动功能的恢复。     

人骨髓基质细胞培养及向成骨细胞的诱导分化

目的研究人骨髓基质细胞体外培养及向成骨细胞诱导分化的实验方法。方法采用梯度离心法获得人骨髓基质细胞，细胞纯化后使用分化培养液将骨髓基质细胞向成骨细胞方向诱导分化。通过形态学观察、生化指标检测、细胞染色和矿化结节测定等方法，确定细胞的功能状态和分化程度。结果显微镜观察显示获得的人骨髓基质细胞生长状况良好，生化指标稳定；经分化培养液培养的细胞增殖速度明显减慢，生长状态平稳。细胞在分化培养过程中，上清液中碱性磷酸酶分泌量明显增加，细胞碱性磷酸酶染色明显浓染，随时间呈显著增强趋势；采用常规培养液培养的骨髓基质细胞，在汇合后不能形成明显的矿化结节。用分化培养液培养的人骨髓基质细胞，在14d时开始出现矿化结节，在21d时呈现密集的茜素红染色矿化结节。结论梯度离心法获得的人骨髓基质细胞生长情况良好，功能状态稳定；体外培养的人骨髓基质细胞在一定条件下可以向成骨细胞方向诱导分化，并具有良好的成骨细胞功能特征，可以满足进一步研究的需要。     

骨髓基质干细胞修复软骨缺损的实验研究

[目的]探寻体外诱导骨髓基质干细胞成软骨细胞的最佳细胞因子，寻求体内修复家兔软骨缺损的最为有效方案。[方法]rhFGF1、rhTGF-β1、rhIGF-1单独或联合应用对骨髓基质干细胞进行体外诱导培养，应用常规染色、MTT、免疫组织化学染色的方法筛选诱导骨髓基质干细胞成软骨细胞的最佳细胞因子，并将其与骨髓基质干细胞复合于纤维蛋白凝胶制成凝胶复合物，直接种植到兔膝关节实验性关节软骨缺损处，并与对照组相比较，观察软骨修复效果。[结果]常规形态学观察，rhTGF-β1和rhIGF-1联合应用诱导的细胞在形态上类似于软骨细胞，免疫组化染色提示诱导细胞具有软骨细胞表型。凝胶复合物直接种植在体内能诱导骨髓基质干细胞向软骨细胞分化，修复缺损的软骨，缺少细胞因子的对照组软骨缺损修复效果差。[结论]rhTGF-β1和rhIGF-1联合应用可作为诱导骨髓基质干细胞向软骨细胞分化的最佳组合，骨髓基质干细胞凝胶复合物能修复软骨缺损。     

胚胎源脊髓组织诱导骨髓基质干细胞向神经元样细胞的分化

目的体外诱导大鼠骨髓基质干细胞（BMSC）分化为神经元样细胞。方法采用Percoll（密度：1．073g／ml）梯度分离液，离心分离鼠BMSC，体外培养，提取大鼠胚胎脊髓组织匀浆诱导BMSC分化为神经元样细胞。形态学观察及免疫组织化学鉴定神经元烯醇化酶（NSE）、神经丝蛋白（NF-200）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。结果大鼠骨髓基质干细胞在诱导后细胞形态变化，突起交织；免疫组织化学发现分化细胞NSE、NF-200表达阳性率分别为（68．0±1．7）％，（76．2±2．9）％，少数GFAP阳性。结论胚胎脊髓组织匀浆可诱导骨髓基质干细胞分化为神经元样细胞。     

同种异体共培养大鼠骨髓间充质干细胞的神经分化诱导鉴定

目的：探讨同种异体大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）在体外的共培养方法，并行神经分化诱导。方法：分别通过全骨髓直接培养法及密度梯度法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞，各传至第3代后。取等量细胞混合后共培养，共培养的细胞再次传代后进行神经方向诱导，并行Nestin、NSE、GFAP免疫细胞化学染色鉴定。结果：共培养的大鼠骨髓间充质干细胞经诱导分化后出现神经元和胶质细胞形态，经Nestin、NSE、GFAP免疫细胞化学染色证实为神经细胞。结论：同种异体共培养的骨髓间充质干细胞可在体外定向诱导为神经元和胶质细胞等神经细胞。     

异体和自体骨髓源神经干细胞周围神经移植实验研究

[目的]研究异体和自体骨髓源性神经十细胞移植于周围神经后神经修复情况，以及所移植神经干细胞能否以分化神经元的形式存活。[方法]取新西兰人白兔骨髓基质细胞(BMSCS)体外培养及诱导分化为神经干细胞，采用Brdu标记细胞和免疫细胞化学SABC法检测观察培养细胞：随机选择同种异体BMSCS移植、自体BMSCS移植和未移植组。[结果]异体和处自体移植区生K的神经纤维均显波纹状排列，神经纤维密度比正常神经低但形态近似，可见有髓神经纤维的郎飞氏结，可见到神经纤维间隙的黏液基质及少量成纤维细胞，但均未见分化神经元样的细胞存在；未移植侧生K的神经纤维稀疏，可见到比较多的断裂和不连续，基质黏液变明显；异体移植组神经纤维生K的走行序列比自体移植组神经纤维紊乱，可见到反应性增生。[结论]异体和白体骨髓源性神经干细胞周围神经缺损区移植均有利于神经纤维的修复，异体比自体移植后神经纤生长较差但差别较小；本方法神经干细胞朱见以分化神经元的形式存活。     

骨髓间充质干细胞与嗅鞘细胞联合移植治疗脊髓损伤的早期观察

[目的]探讨自体骨髓间充质细胞和异体嗅鞘细胞共培养及其联合移植修复脊髓损伤的可行性，为临床治疗提供一种新方法。[方法]无菌条件下采集自体骨髓间充质细胞和胎龄4～6个月的引产胎儿的嗅鞘细胞，分别培养至传代后再共培养，将共培养的混合细胞通过手术直视下移植至脊髓损伤部位。[结果]8例脊髓损伤患者接受自体骨髓间充质细胞和异体嗅鞘细胞联合移植，并获得1～6个月的随访，所有接受细胞移植的8例患者术后均无不良反应，其中1例术后1个月开始出现双下肢深浅感觉恢复，其余7例比细胞移植前无明显改善。[结论]自体骨髓间充质细胞和异体嗅鞘细胞共培养两者之间无相互抑制现象，近期观察二者联合移植修复脊髓损伤是安全的。     

间充质干细胞及其作用的研究新进展

间充质干细胞(MSCs)可以成功地从所有哺乳动物组织细胞内分离出来,它的多向分化潜能在再生医学中有很大应用潜力.随着对MSCs的生物学特征、MSCs与其周围内环境之间的相互作用、MSCs归巢的分子调节机制及多向分化能力的深入研究,MSCs将作为细胞修复或外源性基因转染和表达的载体在临床试验中发挥重要作用.     

微波消融联合树突状细胞瘤内注射对荷瘤小鼠T淋巴细胞亚群的影响

目的 观察微波消融联合树突状细胞(DC)瘤内注射对荷瘤小鼠T淋巴细胞亚群的影响.方法 建立BALB/C小鼠皮下骨髓瘤模型,分为对照组、微波消融组、微波消融联合不成熟DC组、微波消融联合成熟DC组,分别于微波消融后第1、3、5、7、9及11天采用流式细胞仪检测各组小鼠外周血T淋巴细胞亚群.结果 对照组小鼠的CD3~+、CD4~+及CD4~+/CD8~+值逐渐下降(P<0.05);微波消融组小鼠的CD3~+、CD4~+及CD4~+/CD8~+无明显改变(P>0.05);微波消融联合不成熟DC组小鼠的CD3~+、CD4~+及CD4~+/CD8~+在术后第3、5、7天明显减低(P<0.05),第9、11天恢复;微波消融联合成熟DC组小鼠CD3~+、CD4~+及CD4~+/CD8~+则在术后第3、5、7天明显增高(P<0.05),第9、11天下降.结论 微波消融联合成熟DC在一定时间内(约1周)能够增强实验小鼠的抗肿瘤免疫反应.     

热损伤与碱性成纤维细胞生长因子联合处理诱导表皮细胞去分化的实验研究

目的：体外建立表皮细胞去分化模型,为深入阐明表皮细胞去分化过程奠定基础。方法：离体条件下选择热损伤与碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）作为联合诱导因素处理成熟表皮细胞。通过Giemsa染色和电镜观察细胞形态的改变;通过细胞培养和滋养层培养体系观察细胞的增殖能力,包括克隆形成和复层生长情况;采用器官培养体系体外构建三维皮肤,观察细胞再分化形成表皮情况;应用基因芯片技术观察细胞基因表达的改变。结果：经联合诱导后,细胞形态发生改变,表现为体积减小,细胞器数目减少,核浆比增大。增殖和再分化能力的改变体现在诱导后的表皮细胞能形成克隆,在滋养层培养条件下可以形成复层生长,并能够在体外构建出包括基底层和基底上层在内的表皮结构。基因水平的改变表现为与角质化相关基因下调和与有丝分裂相关基因上调。结论：在热损伤与bFGF联合诱导下,已分化的表皮细胞会发生形态、功能和基因表达的改变,表现为干细胞的特性。     

肿瘤干细胞与肝癌干细胞

肿瘤起源于干细胞的假说正在各种人类肿瘤中得到证实,肿瘤不单是一种基因病,而且是一种干细胞病,基因突变作用于干细胞,干细胞突变成为肿瘤干细胞,这是肿瘤发生、再生、转移和复发的关键。肝细胞癌是最常见的恶性肿瘤之一,其中是否存在“肝癌干细胞”的问题一直倍受人们关注。该文介绍肿瘤干细胞与肝癌干细胞的研究情况。     

Characterization of Two Monoclonal Antibodies Raised Against Human Testicular Cells/Charakterisierung von zwei monoklonalen Antikörpern gegen menschliche Hodenzellen

Summary: Human testicular cells isolated from biopsy tissue were used for generation of monoclonal antibodies. Two hybridoma supernatants C3 and D4 were selected according to their reaction with sperm-precursor cells (immature sperms) in an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). C3 reacted with testicular but no other tissue. D4 did not reveal any pattern of testicular staining in spite of its similarity to C3 in binding to sperm-precursor cells in ELISA and microcytotoxicity test.
Zusammenfassung: Für die Bildung von monoklonalen Antikörpern wurden menschliche Keimzellen verwendet, die aus dem Gewebe von Hodenbiopsien stammten. Zwei Hybridom-Überstand-Lösungen, C3 und D4, wurden hinsichtlich ihrer Reaktion mit Spermatozoen-Precursorzellen (unreife Spermatozoen) in einem ELISA-Test selektiert. C3 reagierte mit Hoden-, aber nicht mit anderem Gewebe. D4 deckte keine weiteren Muster in der Hodenfärbung auf, ungeachtet der Ähnlichkeit zu C3 hinsichtlich der Bindung der Spermatozoen-Precursorzellen an ELISA und an den Mikrocytotoxizitätstest.     

Morphometric and stereological study of the glandular epithelium of the lateral prostate of the intact and castrated guinea pig

The glandular epithelium of the lateral prostate of the guinea pig was described within the framework of a morphometric model in terms of relative densities and absolute dimensions. A combination of direct measurement and point and intersection counting techniques was used. The quantitative data generated in the intact animals were compared with those of castrated controls. Castration was accompanied by a significant decrease in height of the glandular epithelium and in sizes of secretory and basal cells and their corresponding nuclei. On a per cell basis, significant decreases in total volume and surface area of granular endoplasmic reticulum were detected after castration. This was accompanied by a significant reduction in the total volume of Golgi cisternae. The total volume, surface area, and number of highly electron-dense and clear granules decreased significantly compared with the intact control animals. However, no significant changes in these parameters of low electron-dense granules were found. Significant reductions in the total volume and surface area of condensing granules, lysosomes, and mitochondria, but not their number, were detected. The average sizes of condensing granules, secretory granules, lysosomes, and mitochondria were decreased significantly after castration. The present study showed that the alterations in the secretory function of the secretory cells of the lateral prostate was reflected by the quantitative changes in granular endoplasmic reticulum, Golgi complexes, and secretory granules on a per cell basis. The data generated in the present study will serve as a baseline for further studies of the lateral prostate of the guinea pig.     

肿瘤干细胞对恶性肿瘤诊治的意义

恶性肿瘤严重地威胁着人类的健康.多药耐药现象增加了其治疗难度,局部复发和远处转移最终导致了治疗失败,然而遗憾的是机制尚不清楚.研究发现在肿瘤组织中有一个具有自我更新及分化潜能的的细胞亚群,是复发及转移的根源.这部分细胞被称为肿瘤干细胞.随后,人们相继从血液系统肿瘤及多种实体瘤中分离、鉴定了肿瘤干细胞.随着肿瘤干细胞学说的提出及确认,人们对肿瘤的复发、转移及多药耐药现象有了新的认识,从而为恶性肿瘤的治疗及复发转移的预防提供了一个全新的线索.本文就此进行综述.     

Stem cells: novel players in the treatment of erectile dysfunction

Stem cells are defined by their capacity for both self-renewal and directed differentiation; thus, they represent great promise for regenerative medicine. Historically, stem cells have been categorized as either embryonic stem cells (ESCs) or adult stem cells (ASCs). It was previously believed that only ESCs hold the ability to differentiate into any cell type, whereas ASCs have the capacity to give rise only to cells of a given germ layer. More recently, however, numerous studies demonstrated the ability of ASCs to differentiate into cell types beyond their tissue origin. The aim of this review was to summarize contemporary evidence regarding stem cell availability, differentiation, and more specifically, the potential of these cells in the diagnosis and treatment of erectile dysfunction (ED) in both animal models and human research. We performed a search on PubMed for articles related to definition, localisation and circulation of stem cells as well as the application of stem cells in both diagnosis and treatment of ED. Strong evidence supports the concept that stem cell therapy is potentially the next therapeutic approach for ED. To date, a large spectrum of stem cells, including bone marrow mesenchymal stem cells, adipose tissue-derived stem cells and muscle-derived stem cells, have been investigated for neural, vascular, endothelial or smooth muscle regeneration in animal models for ED. In addition, several subtypes of ASCs are localized in the penis, and circulating endogenous stem cells can be employed to predict the outcome of ED and ED-related cardiovascular diseases.