用不同的ELISA试剂盒检测抗-HCV弱阳性血清标本的结果分析

目的　了解目前国内用于抗 HCV检测的ELISA试剂盒现状。方法　使用四家国产和一家进口抗 HCVELISA试剂盒检测 ,结果不一致的样本再用CHRONRIBA3 .0SIA检测确认 ,并对RIBA测定阴性及不确定的样本用RT PCR方法测定HCVRNA。结果　对所选择的 2 8份抗 HCV弱阳性样本 ,五家ELISA试剂盒测定的假阴性率为 2 5 .0 %～82 .1%;不同试剂盒间的测定结果有较大程度的不一致性。随机两家试剂组合 ,测定的假阴性率降至 14 .3 %～ 46.4%。两家国产和一家进口试剂组合使用 ,可使测定的假阴性率降低至 3 .6%～ 14 .3 %(P <0 .0 1)。结论　目前国内使用的抗 HCVELISA试剂盒对弱阳性样本的检出率差异明显 ,因此对于抗 HCV初检阴性的献血员站应使用不同于初检试剂的国产或进口试剂盒进行复检 ,以降低HCV感染的经输血传播的可能性。     

不同抗囊尾蚴抗体检测试剂盒用于囊尾蚴病血清学诊断效果评价

目的　评价不同厂家生产的4种抗囊尾蚴IgG、IgG4和IgM抗体酶联免疫吸附试验（ELISA）检测试剂盒的诊断效果,为囊尾蚴病流行病学调查和临床检测提供参考。方法　采用A品牌3种抗囊尾蚴抗体（IgG、IgG4和IgM抗体）ELISA检测试剂盒以及B品牌抗囊尾蚴IgG抗体ELISA检测试剂盒,同时检测40份脑囊尾蚴病患者、100份健康人、30份斯氏并殖吸虫病患者、17份细粒棘球蚴病患者和19份皮下或脑裂头蚴病患者血清,比较不同试剂盒检测囊尾蚴病的敏感度、特异度和假阳性率。结果　A品牌抗囊尾蚴IgG、IgG4和IgM抗体ELISA试剂盒以及B品牌抗囊尾蚴IgG抗体ELISA试剂盒检测囊尾蚴病的敏感度分别为95.00%（38/40）、87.50%（35/40）、7.50%（3/40）和75.00%（30/40）,特异度分别为98.00%（98/100）、100.00%（100/100）、100.00%（100/100）和100.00%（100/100）;A品牌抗囊尾蚴IgG抗体ELISA试剂盒检测囊尾蚴病的敏感度高于B品牌（[χ2] = 6.28,P < 0.05）,两者特异度差异无统计学意义（[χ2] = 2.01,P > 0.05）。4种试剂盒检测并殖吸虫病、细粒棘球蚴病、裂头蚴病患者血清总假阳性率分别为37.88%（25/66）、22.73%（15/66）、62.12%（41/66）和15.15%（10/66）（[χ2] = 37.61,P < 0.05）;其中A品牌抗囊尾蚴IgM抗体ELISA试剂盒检测总假阳性率最高（[χ2] = 7.56,P' < 0.008）,A品牌抗囊尾蚴IgG抗体ELISA试剂盒检测总假阳性率高于B品牌（[χ2] = 8.75,P' < 0.008）。4种试剂盒检测并殖吸虫病患者血清假阳性率分别为40.00%（12/30）、16.67%（5/30）、76.67%（23/30）和13.33%（4/30）（[χ2] = 32.88,P < 0.05）,检测裂头蚴病患者血清假阳性率分别为21.05%（4/19）、26.32%（5/19）、73.68%（14/19）和15.79%（3/19）（[χ2] = 19.97,P < 0.05）,均以A品牌抗囊尾蚴IgM抗体ELISA试剂盒检测假阳性率最高（P' 均 < 0.008）。4种试剂盒检测细粒棘球蚴病患者血清假阳性率分别为52.94% （9/17）、29.41%（5/17）、23.53%（4/17）和17.65%（3/17）,差异无统计学意义（[χ2] = 8.24,P > 0.05）。A品牌抗囊尾蚴IgM抗体ELISA试剂盒检测并殖吸虫病、棘球蚴病和裂头蚴病患者血清假阳性率分别为76.67%（23/30）、23.53%（4/17）和73.68%（14/19）（[χ2] = 14.537,P < 0.05）,其中检测棘球蚴病患者血清假阳性率最低（[χ2] = 14.537,P' < 0.014）;其他3种试剂盒检测并殖吸虫病、棘球蚴病和裂头蚴病患者血清假阳性率差异均无统计学意义（P 均> 0.05）。 结论　不同囊尾蚴病免疫学诊断试剂各有优劣;A品牌抗囊尾蚴IgG抗体ELISA试剂盒敏感度较高,但需进一步解决与其他寄生虫病的交叉反应和稳定性问题。     

三种类型HIV抗体检测技术的方法学评价

目的对不同原理的艾滋病病毒(HIV)抗体诊断方法进行评价,了解现有HIV抗体诊断试剂的敏感性、特异性等性能。方法应用6种血清盘[即基础血清盘、干扰样本血清盘、线性稀释系列血清盘、精密度血清盘、美国病理学家协会(CAP)能力验证血清盘以及商业阳转血清盘]对三种类型HIV抗体检测方法[HIV快速检测方法、HIV酶联免疫吸附试验(ELISA)、蛋白印迹试验(WB)]的诊断试剂的敏感性、特异性、分析灵敏度、分析特异性及精密度等指标进行评价。结果 1)A(国产抗体)、B(国产抗体)、C(国产抗原抗体)、D(进口抗原抗体)、E(国产胶体金法)、F(进口胶体硒法)6种试剂应用基础血清盘评估,敏感性均为100%(40/40),特异性均97.5%(39/40)。2)A-D ELISA检测试剂板内精密度值介于4.40%~24.98%之间。3)用商业阳转血清盘评价,A-F试剂阳性率分别为18.2%、16.7%、33.3%、37.9%、19.7%、18.2%,并且差异有统计学意义(P0.05);各试剂检测结果相比核酸检测的延长天数介于7~10.8天,D(进口抗原抗体)最短,WB试剂最长;重组免疫印迹试验(RIBA)与WB试剂检测结果进行配对差异有统计学意义(χ2检验,P0.05)。结论参与评价的ELISA诊断试剂与快速诊断试剂均有较高的敏感性和特异性,抗原抗体检测试剂敏感性相对较高,适合作为抗体筛查试剂。4种ELISA试剂板内精密度差别较大。作为抗体确证试剂,RIBA与WB相比敏感性较高,不确定率低,从而发现早期感染的检验效能较高,减少了由于不确定带来的随访率。     

HBsAg和抗-HCV酶联免疫检测与血液病毒核酸筛查技术之间的相关性分析

目的探讨HBsAg和抗-HCV酶联免疫检测方法与血液病毒核酸筛查技术之间的相关性。方法对我院血液科2011年12月到2013年12月血样标本12 300个,首先进行HBsAg和抗-HCV ELISA检测,再利用中和试验和重组免疫印迹试验(RIBA)进行确认检测,并对确认检测阳性和阴性样本行血液病毒核酸筛查,分析ELISA检测与血液病毒核酸筛查之间的相关性。结果经过HBsAg ELISA国产试剂和进口试剂检测血样标本12 300个,221个为阳性,占1.80%,国产和进口试剂检测一致率为99.72%,经过配对卡方检验,两种试剂间差异无统计学意义(P0.05);抗-HCV ELISA检测阳性112个,占0.91%,国产和进口试剂检测一致率为99.60%,两种试剂间差异无统计学意义(P0.05);HBsAg经过再次确认检测其中阳性201个,阴性20个,再次确认检测与国产和进口试剂检测一致率为90.95%;抗-HCV再次确认检测其中阳性55个、阴性43个、可疑14个,再次确认检测与国产和进口试剂检测一致率为61.61%;经过核酸检测技术(NAT)检测HBV DNA阳性和阴性分别为203个、18个,HCV RNA阳性和阴性分别为70个、42个。将两种因素合并计算,ELISA检测联合再次确认检测灵敏度为97.44%、特异度93.33%。结论 HBsAg和抗-HCV ELISA检测具有较高的灵敏度和特异度,但是由于使用ELISA试剂盒不同,常存在误检,而血液病毒核酸筛查技术可以减少这种误检,再次提高检出率。     

5种市售弓形虫抗体检测试剂盒的评价

目的　评价国内公司研制的 5种弓形虫抗体检测试剂盒。方法　以敏感性、特异性、符合率和Youden指数作分析指标 ,比较 5种试剂盒对国外进口的 2种弓形虫抗体试剂盒筛选出的弓形虫IgG或IgM阳性血清和正常人血清的检测结果。结果　A、B、C 3种IgM试剂盒的检测敏感性和特异性分别为 0和 92 1%、6 7%和 10 0 %、以及 13 3%和 85 7% ,Youden指数分别为 - 0 0 8、0 0 7和 - 0 0 1,基本无诊断价值。A’、B’ 2种IgG试剂盒的检测敏感性分别为 96 4 %和 32 1% ,特异性为 98 4 %和 96 8% ,Youden指数为 0 95和 0 2 9。A’试剂盒与进口IgG试剂盒的符合率达到 97 8% ,诊断价值较大 ,而B’试剂盒与进口试剂盒的符合率仅为 76 9% ,A’、B’ 2种试剂盒之间的符合率也只有 76 9%。结论　国内研制的市售弓形虫试剂盒的检测效果与质量存在一定的问题 ,尤以IgM试剂盒为甚。     

一种检测弓形虫IgM抗体试剂盒的评价

目的 评价一种新近研发的国产弓形虫IgM抗体检测试剂盒的应用价值.方法 以进口弓形虫IgM试剂盒检测结果为标准,评价国产试剂盒的敏感性、特异性、符合率和约登指数,分析Kappa值和变异系数.结果 检测血样531份,国产试剂盒的敏感性为93.55%,特异性为100.0%,与进口试剂盒符合率为98.87%,约登指数为0.936,Kappa值为0.84,变异系数为1.67%.结论 国产试剂盒各项指标均较理想,检测效果达到国外同类试剂盒水平,其重现性和精密性极好,具有临床应用价值.     

弓形虫IgG亲和力诊断方法的验证与评价

目的 对弓形虫IgG亲和力诊断试剂盒进行考核和验证. 方法 采用化学发光微粒子免疫检测法,用10份弓形虫IgG阳性血清及弓形虫IgG抗体检测血清国家参考品对三批弓形虫IgG亲和力测定试剂盒及质控品进行考核,计算符合率、精密度及加速稳定性等. 结果 试剂盒的符合率为100％,精密度变异系数(coefficient variation,CV)值均≤14％;经温度加速稳定性试验,其符合率与精密度无变化. 结论 经由化学发光微粒子免疫检测法制备的弓形虫IgG亲和力诊断试剂盒具有良好的符合率、精密度及稳定性,可用于临床检测.     

人体囊虫病诊断试剂盒的效果评价

目的评价囊虫IgG抗体检测试剂盒的诊断效果,为临床应用提供参考。方法按照囊虫IgG抗体检测试剂盒说明书,采用ELISA法检测囊虫病、包虫病、带绦虫病及健康人血清。结果在30例活动期脑囊虫病病人中,28例呈囊虫IgG抗体阳性,敏感性为93.33%。100份健康人血清均无阳性反应。在42例带绦虫感染者,2例囊虫抗体阳性,阳性率为4.76%。在60份包虫病血清中,阳性41份,该试剂盒与包虫病的交叉反应率为68.33%。结论所评价试剂盒敏感性较好,但特异性差,与包虫病的交叉反应率高。以上提示国内囊虫病免疫学诊断试剂的质量有待提高。     

日本血吸虫IgG抗体检测试剂盒的现场应用评价及质控分析

目的评价日本血吸虫IgG抗体检测试剂盒在血吸虫病流行区的应用效果。方法在云南省洱源县2个血吸虫病流行村选择505例常住居民作为检测对象,采用尼龙绢集卵孵化法进行血吸虫病病原法检测。采用Levey-Jennings(L-J)质控图法对整个试验过程进行质量控制。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对调查对象进行日本血吸虫IgG抗体检测,并对检测结果进行分析。结果505名检测对象中,ELISA法查出IgG抗体阳性者290例,阳性率为57.43%;质控血清A和质控血清B检测结果均在L J质控图可控范围内,ELISA检测结果可信。尼龙绢集卵孵化法查出虫卵阳性者20例,阳性率为3.96%。ELISA与粪检的阳性符合率为90.00%。结论日本血吸虫IgG抗体检测试剂盒有较好的稳定性、可靠性,适于现场血吸虫病人的筛查。     

狂犬病毒核蛋白时间分辨免疫荧光分析试剂盒研制

目的 研制狂犬病毒（RV）核蛋白（NP）时间分辨免疫荧光分析（TRFIA）试剂盒。方法 采用双抗体夹心法建立RV NP TRFIA 试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价。结果 试剂盒准确度好,线性范围为5～2 500 mEU/mL,灵敏度为1.018 mEU/mL,精密度良好,分析内精密度为2.7%～9.3%,分析间精密度为3.5%～12.2%。将15份疫苗样品用本法与国内常用ELISA检测试剂盒同时检测,其相关系数r为 0.85,稳定性试验表明试剂可以在4 ℃稳定半年,37 ℃稳定7d。结论 试剂盒各项已检测指标达到临床检验要求,有望替代同类产品进一步作临床检测试验。     

三种ELISA试剂盒检测猪流行性乙型脑炎病毒血清IgG抗体比较

目的 比较国内常用商品化ELISA试剂盒检测猪流行性乙型脑炎病毒血清IgG抗体的诊断效果。方法 选用3种猪乙脑病毒血清IgG抗体ELISA检测试剂盒(Keqian,Lvshiyuan,Tianchen),以微量中和试验为金标准,对90份猪血清进行检测分析。结果 中和试验的阳性检出率为34.4%(31/90),Keqian,Lvshiyuan和Tianchen阳性检出率分别为50.0%(45/90), 47.8%(43/90)和 38.9%(35/90)。灵敏度最高的是Keqian,为90.32%,但其特异度只有71.19%;Tianchen的灵敏度和特异度分别为83.87%和79.66%;Lvshiyuan的灵敏度和特异度分别仅为41.94%和16.95%。与中和试验比较,Tianchen试剂盒的κ系数最高为0.63,其次是Keqian为0.57,Lvshiyuan仅为0.04。显示3种试剂盒具稳定性。结论 目前国内商品化猪乙脑病毒血清IgG抗体ELISA检测试剂盒诊断结果差异较大,与中和试验相比存在较高的假阴性,质量有待提高。     

三种肾综合征出血热诊断方法的比较

目的探索一种更为敏感而特异的肾综合征出血热特异性抗体的检测方法。方法采用免疫-PCR、ELISA和IFAT三种方法检测130份HFRS患者血清中抗HFRS-IgG抗体。结果免疫-PCR方法的灵敏度为78．5％，特异性为100％；ELISA法和IFAT法的灵敏度分别为47．7％和49．2％。结论免疫-PCR方法的敏感性高于ELISA法和IFAT法．是适用于肾综合征出血热特异性抗体检测的好方法。     

7种单纯疱疹病毒Ⅱ型IgG抗体检测试剂盒的比较

目的比较7种单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)特异性IgG抗体检测试剂盒的优劣。方法对来自体检和性病门诊的生殖器疱疹可疑者的189份血清,同时用3种进口试剂盒(A、B、C)和4种国产试剂盒(D、E、F、G)进行检测。结果以"扩大金标准"为判断标准,7种检测试剂盒的敏感性:A、B、C分别为94.6%、100%、100%,D、E、F、G分别为98.5%、93.9%、96.9%、30.8%;特异性:A～G分别为98.2%、96.4%、96.4%、9.1%、43.6%、18.2%、100%;受试者工作特性曲线(ROC)下面积:A～G分别为0.964(0.933～0.995)、0.982(0.953～1.011)、0.982(0.953～1.011)、0.529(0.434～0.623)、0.664(0.567～0.761)、0.517(0.416～0.618)、0.654(0.576～0.732)。结论三种进口试剂盒检测结果可信度高,可用于临床实验室的辅助诊断、流行病学调查等。     

6种艾滋病病毒抗体初筛试剂质量评估

目的评估国内现行使用的部分HIV抗体ELISA试剂质量.方法 5种国产HIV-1/2 ELISA试剂用200份血清样品(其中已知结果血清和未知结果血清各100份)、进口试剂Vironostika(R)HIV Uni-FormⅡ plusO用其中未知结果的100份血清分别进行对比测试,初筛阳性和可疑血清用蛋白印迹(WB)确认.结果 6种试剂的敏感性、功效率和NPV值范围为90.14%～100%、96.5%～100%和94.85%～100%;其中4种试剂的特异性和PPV值均为100%,测试中未发现假阳性;另2种试剂特异性均为97.67%,假阳性率均为2.33%,PPV值分别为95.89 %和95.71%;除进口试剂Vironostika外,5种国产试剂均存在不同程度的HIV抗体阳性漏检,其漏检率分别为9.86%、4.23%、1.41%、7.04%、5.63%.结论 6种被评估试剂中,试剂Vironostika质量居第一,试剂B次之,余4种再次之.     

五种乙型肝炎病毒核酸荧光定量检测试剂盒的比较

目的 比较5种国内外HBV DNA定量检测试剂盒的灵敏度、特异度和符合率.方法 分别应用A、B、C、D 4种国产和德国Roche公司生产的荧光定量试剂盒检测国家HBV DNA标准品、7份灵敏度稀释血浆(15.6～1 000 IU/mL)、15份健康献血者和45份慢性乙型肝炎患者血浆.统计学分析采用平行性检验.结果 5种试剂盒对9份阳性和8份阴性国家标准品均能正确检出,并能准确定量标准品中的灵敏度样本;对灵敏度稀释血浆,Roche试剂盒和国产试剂盒C、D均能检出最高稀释度样本(15.6 IU/mL),而试剂盒A和B检测限分别为125 IU/mL和500 IU/mL,Roche试剂盒及C试剂盒的定量检测结果与理论值的符合率高,两者检测结果经平行性检验存在线性相关(r>0.98);检测15份健康献血者血浆,试剂盒D有2份假阳性;检测慢性乙型肝炎患者血浆,Roche试剂盒对1×102～1×108 IU/mL范围的样本检测的变异系数均<15%,而国产试剂盒变异系数较大.4种国产试剂盒与Roche试剂盒的符合率为50%～96 %,其中A为61%,B为50%,C为96%,D为83%,试剂盒C符合率显著高于试剂盒D、A和B(X2=5.62,P<0.05;X2=28.93,P<0.01;X2=44.31,P<0.01).各种试剂盒符合率最高的区段均在1×104～1×108 IU/mL.结论 国产HBV DNA定量试剂盒质量差异较大,试剂盒c与Roche试剂盒定量检测HBV DNA的符合率最高,国产试剂盒质量有待进一步提高.     

五种布鲁氏菌核酸检测试剂盒检测性能的评价北大核心CSCD

目的比较5种布鲁氏菌核酸实时荧光PCR检测试剂盒的一致性和检出能力,为临床实验室选择检测方法和布鲁氏菌的诊断提供参考依据。方法选用经病原学检测确定为布鲁氏菌阳性的血液样本38份,健康人的血液样本24份,潘氏变形杆菌、溶藻弧菌、河弧菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌DNA各1份,使用5种试剂盒(编号A-E)分别进行核酸检测,比较5种试剂盒临床样本检测的一致性;选择1份阳性样本核酸用无RNA酶水梯度稀释得到5个浓度(浓度1:4453.13 fg/μL,浓度2:1113.28 fg/μL,浓度3:278.32 fg/μL,浓度4:69.58 fg/μL,浓度5:17.40 fg/μL),每个浓度使用5种试剂盒(编号A-E)分别进行3次检测,比较5种试剂盒的阳性检出率及批内重复性。结果5种试剂盒检测67份DNA样品的符合率稍有不同,试剂盒ABDE的符合率均为100%,试剂盒C的符合率为98.51%。批内重复性显示5种试剂盒在浓度1、浓度2、浓度3水平重复检测DNA的Ct值变异系数均<5%;在浓度1与浓度4梯度区间,试剂盒的阳性检出能力比较显示试剂盒A、B、D较高,为11/12,试剂盒C和E较低,为8/12。结论5种试剂盒的真实性和可靠性较好,灵敏度和符合率稍有差别,特异度均为100%;重复性较好,检测性能良好。部分试剂盒对弱阳性样本的检出能力不强,该类样本可使用多种试剂盒复核,以保障结果的准确性。     

五种艾滋病病毒抗体诊断试剂临床质量比较

目的 为掌握中国市售艾滋病病毒(HIV)抗体诊断试剂的实际应用状况。方法 对4种国产HIV抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)诊断试剂(其中3种为国产双抗原夹心法试剂)和美国Abbott HIV快速法诊断试剂用200份血清盘样品进行了统一测试。200份血清盘标本包括100份经过确认的HIV抗体阳性、弱阳性、阴性标本和100份高危人群的血清标本。初筛阳性和可疑样品再用蛋白印迹法(WB)做确认对比分析。结果 5种试剂的敏感性为90.7％～98.9％,特异性为93.0％～99.1％,假阳性率为0.9％～7.0％,假阴性率为1.2％～9.3％,总符合率为94.5％～97.5％,约登指数为89.5％～95.4％,阳性预示值(PPV)为91.2％～98.7％,阴性预示值(NPV)为93.4％～99.1％。结论 随着中国双抗原ELISA试剂的研制和市场投放使用,HIV抗体诊断试剂内在质量指标虽有所提高,但其漏检率仍需进一步改进。     

严重急性呼吸综合征患者冠状病毒总抗体及N和S蛋白抗体的随访研究

目的了解SARS冠状病毒（SARS—CoV）感染者血清中特异性IgM、IgG抗体和两个结构蛋白抗体的持续时间及相互关系。方法对146例SARS临床确诊且血清抗-SARS—CoV阳性病例,随访采集发病当13至发病后660d期间的血液标本共362份。以ELISA法分别检测抗-SARS—CoVIgM和IgG抗体、SARS—CoVN蛋白和S蛋白IgG抗体。结果抗-SARS—CoV IgM阳性率在发病20d内为46．5％（20／43）,21—40d阳性率最高（80．6％,25／31）,尔后逐渐下降,至发病后500d左右仅为8．2％（6／73）。IgG总抗体在发病20d内阳性率（34．9％,15／43）低于IgM抗体,在发病21～40d迅速达到100％,至发病后600—660d,其阳性率仍高达98．6％（70／71）。N—IgG抗体在发病40d后阳性率（92．5％,37／40）高于S-IgG（67．5％,27／40）,在61～90d、450—510d和600—660d3个时间点检测阳性率均高于S-IgG抗体;但两种结构蛋白抗体阳性率随时间延长均逐渐下降,两者于不同时间点的阳性率均低于抗-SARS—CoV总IgG。结论临床与病原学确诊的SARS患者,SARS—CoV特异性抗体阳性率在21—40d达高峰,IgG抗体阳性率100％。IgM抗体91．8％在感染500d以内消失;感染后两年IgG总抗体阳性率仍高达98．6％,推测可持续阳性3—5年。N—IgG和S-IgG抗体持续时间可能较短。     

ELISA检测华支睾吸虫病患者血清特异性IgG_4的诊断价值

目的　探讨用ELISA检测华支睾吸虫病患者血清中特异性IgG4 的诊断价值。　方法　用华支睾吸虫成虫可溶性抗原进行ELISA分别检测华支睾吸虫病患者 (76例 )血清中的特异性IgG和IgG4 抗体及日本血吸虫病、并殖吸虫病、囊尾蚴病患者 (分别为 63、3 5、41例 )和健康者 (65人 )血清中的交叉抗体。　结果　检测 76例华支睾吸虫病患者血清中IgG4 的检出率为 93 .42 % ,检测 65例健康者血清中的IgG4 均为阴性 ,分别与检测IgG结果比较差异均无显著性意义 (P均 >0 .0 5 ) ;与其它寄生虫病的交叉反应率 ,IgG4 显著低于IgG ;诊断效率及阳性、阴性预告值分别为 96.45 %、10 0 %和 92 .85 %。　结论　用ELISA检测华支睾吸虫病患者血清中特异性IgG4 具有较高的诊断应用价值。