湖北钉螺数量性状研究Ⅲ种群间形态性状变异及其空间相关分析

目的 探讨湖北钉螺种群间形态性状变异及其空间相关性。方法 采集10个省的27个现场螺点的钉螺种群标本,分别测量螺壳的形态学指标及钉螺采集点之间的地理距离,分析钉 螺种群间形态性状变异及其与地理距离的相关性。结果20个指名亚种（包括1个广西钉螺种群）钉螺种群间欧氏距离的中位数为3. 24（95% CI:2. 88～3.81）;不包括广西钉螺种群时,中位数为 3.15 (95% CI: 2.86～3.76)。6个滇川亚种钉螺种群间欧氏距离的中位数为1.69 (95% CI：1.33～ 2. 27)。无论指名亚种是否包括广西钉螺种群,滇川亚种钉螺种群间的欧氏距离均明显低于指 名亚种种群(P<;0.05)。16个肋壳钉螺种群间欧氏距离的中位数为2. 86(95% CI：2.56～3, 23);11 个光壳钉螺种群间欧氏距离的中位数为2. 24（95% CI：2.00～2.43）,明显低于肋壳钉螺种群间的 欧氏距离(P<0.05)。指名亚种包括广西钉螺种群时γ为0. 265 5 (P<0. 01),不包括时γ为0．256 7(P<0.01),肋壳钉螺种群的γ为0．312 1(P<0．01)。结论 湖北钉螺指名亚种种群间的形态性状变异大于滇川亚种,肋壳钉螺种群间的形态性状变异大于光壳钉螺。我国大陆分布的肋壳钉螺种群间的表型变异具有明显的空问结构。     

基于微卫星标记的不同壳型湖北钉螺小尺度景观群体遗传结构研究

目的 分析湖北松滋地区湖北钉螺小尺度景观群体的遗传结构。方法 选择T6-17、P101、D11、B14、T4-33和C22等6对微卫星位点对松滋地区10个生境的湖北钉螺群体进行基因扫描,计算各群体的等位基因数(Na)、有效等位基因数(Ne)、期望杂合度(He)、观察杂合度(Ho)、 多态信息含量(PIC)、群体间的遗传分化系数(FST)和遗传距离,根据遗传距离进行聚类分析,并进行分子变异方差分析(AMOVA)。结果 10个钉螺群体经鉴定螺壳分为光壳和肋壳(包括浅肋和深肋),10个群体共检测到141个等位基因,各位点20-34个不等,平均每个位点检测到23.5个;6个微卫星位点的平均有效等位基因数为1.575,各位点的有效等位基因数并不平衡,且数值差异较大,范围从0.445至3.060。群体的平均Ho范围为0.438-0.698,在光壳的团山村群体中最低,在深肋型的马木口村群体中最高;群体的平均He范围为0.589-0.892,在浅肋型的德胜村群体中最低,在深肋型的马木口村群体中最高;成对群体间的Fst为-0.01564-0.25247,各群体的PIC为0.528-0.857,显示出高度多态性;AMOVA 分析结果显示,变异主要存在于个体间,占总变异的88.4%;聚类分析结果显示,肋壳的马木口村、横堤村、义兴村三个群体与光壳的马狮子咀村、民主村、土桥村三个群体先聚为一支后,与浅肋的德胜村、木天河村两个群体与光壳的团山村、夹马槽村聚的一支合聚。结论 松滋地区不同景观环境下湖北钉螺呈现不同螺壳形态,尽管遗传多样性较为丰富,但遗传变异主要来自个体间,不同螺壳形态的湖北钉螺群体间并未体现出明显的遗传分化。     

湖北钉螺数量性状研究Ⅱ种群内螺壳形态数量性状变异的空间分布

目的探讨中国大陆钉螺种群内螺壳形态数量性状变异的空间分布特点.方法采集21个现场螺点的钉螺种群标本,分析形态多样性指数和钉螺种群内个体间的欧氏距离在空间上的分布.结果形态多样性指数和钉螺种群内个体间的欧氏距离均与经度明显相关,相关系数分别为0.719(P＜0.01)和0.662(P＜0.01),而与纬度均无明显相关性(P均＞0.05);当纬度＞29°时,这两个指标都随着经度的增加有逐渐增加的趋势,当经度为117°时达到高峰,以后又迅速下降.结论中国大陆钉螺种群内螺壳形态数量性状变异存在明显的空间分布特点.     

湖北钉螺数量性状研究种群内螺壳形态数量性状变异的空间分布

目的探讨中国大陆钉螺种群内螺壳形态数量性状变异的空间分布特点.方法采集21个现场螺点的钉螺种群标本,分析形态多样性指数和钉螺种群内个体间的欧氏距离在空间上的分布.结果形态多样性指数和钉螺种群内个体间的欧氏距离均与经度明显相关,相关系数分别为0.719(P＜0.01)和0.662(P＜0.01),而与纬度均无明显相关性(P均＞0.05);当纬度＞29°时,这两个指标都随着经度的增加有逐渐增加的趋势,当经度为117°时达到高峰,以后又迅速下降.结论中国大陆钉螺种群内螺壳形态数量性状变异存在明显的空间分布特点.     

三峡库区上、下游湖北钉螺基因组DNAITS2遗传多态性研究

目的分析三峡库区上、下游湖北钉螺核糖体DNA第2转录间隔区（rDNA-ITS2）基因的遗传变异。方法采集三峡库区上游四川、云南及下游安徽、湖北4省8地（市）钉螺,提取其基因组DNA,PCR特异性扩增rDNA ITS2基因并测序,ClustalX（1.81）软件进行多序列比对,MEGA（3.1）软件Kimura2-parameter法计算遗传距离,非加权组平均法（UPGMA）和最小进化法（ME）构建系统发生树。结果上游与下游不同地域株钉螺间ITS2基因差异约为11%,下游地区的肋壳与光壳钉螺ITS2基因差异约为3.8%,上游螺群间的遗传距离为0.001～0.013,下游螺群间的遗传距离为0.004～0.017,上游与下游螺群间的遗传距离在0.033～0.041之间。2种方法构建的系统发生树其拓扑结构一致,分为2大支,上游的云南和四川地理株形成一支系,下游的湖北、安徽地理株形成另一支系,既有肋壳钉螺又有光壳钉螺。结论上、下游地理株湖北钉螺间ITS2基因遗传差异较显著,但下游肋壳和光壳钉螺ITS2基因遗传变异小,表明地域距离和生态环境对湖北钉螺的遗传变异影响较大,不能以钉螺纵肋表型的有无作为钉螺种株的判断标准。     

中国大陆不同地区光壳钉螺遗传多样性的RAPD分析

目的 用随机扩增多态性技术(RAPD)对中国大陆5省不同地区的光壳钉螺进行分析，研究光壳钉螺群问的遗传多样性。方法 提取钉螺头足部的基因组DNA，用随机引物进行扩增，扩增产物经8％的聚丙烯酰胺凝胶电泳，0．6％硝酸银染色，判别结果进行分析。结果 9个螺群的平均遗传相似性为0．7214，平均百分匹配数为0．6809，聚类结果表明可分为3个分类群，云南大理和四川普格的钉螺为第一分类群，福建福清和江苏东台的钉螺为第二分类群，安徽的4个螺群和江苏官兴的钉螺为第三分类群。结论 在我国各地的光壳钉螺螺群间存在一定的亲缘关系的同时，已发生了较大的遗传变异，聚类结果中螺群的聚类地位和其地理分布基本上一致，但江苏东台光壳螺群的聚类地位有待进一步分析和研究。     

三峡库区钉螺生长繁殖模拟试验

目的探讨三峡水库建成后是否适宜钉螺生长繁殖.方法选择库区江津和万州2点,模拟三峡成库后的灌溉区和淤积区类似条件,投放湖北肋壳钉螺和四川光壳钉螺,逐月观察1年钉螺的成活、交配、孵化幼螺情况,同时设立现时环境的对照区.结果两试验点淤积区和对照区,肋壳钉螺和光壳钉螺成活率仅少数月份在50%以下,多数月份在80%左右;各试验区发现钉螺交配数量以3～6月为多,同时发现活幼螺.结论三峡建坝后,库区适宜钉螺生长、发育、繁殖.     

钉螺齿舌的光学显微镜与扫描电镜的观察

采集云南、四川、广西、福建、浙江5个省、自治区的光壳钉螺和湖南、湖北、江西、安徽、江苏、上海等6个省、市的肋壳钉螺。从每个地区钉螺的优势群中抽样解剖5～10个钉螺,结果表明,光壳钉螺齿舌带的长、宽度均略小于肋壳钉螺,而齿片的横列数却多于肋壳钉螺。各地钉螺或同一钉螺的齿舌公式虽有差异,但有一定的规律性,即具有常见的齿舌公式。例如肋壳钉螺的中央齿公式以(1-1-1)/(3-3)为主,占66.7％,而在光壳钉螺中,(1-1-1)/(3-3)和(2-1-2)/(3-3)各占40％。这些观察结果可作为钉螺分类的参考。     

我国湖北钉螺各地域株外形数据库的建立及其分类的初步应用

目的建立湖北钉螺外形地域分布数据库并探讨其应用价值，为钉螺分类的进一步研究奠定基础。方法利用1950年代及1998年以后收集的钉螺标本，测量其螺层、壳高、壳宽、次螺层体长及外唇；观察螺壳表面纵肋有无及粗细程度，螺顶为粉红色及螺顶磨损情况，并按照地区以县为单位归类，建立外形地域分布数据库。对该数据库进行钉螺外形特征分类，并进行部分区域的钉螺50年前后外形对比；检索与姚氏钉螺相关具红色螺顶特征的钉螺分布区域；检索与湖北大口钉螺相关具螺顶磨损特征的钉螺分布区域。结果建立了湖北钉螺外形地域分布数据库和50年前后外形对比数据库；具螺顶磨损特征的钉螺除湖北大口外尚有其他2个分布区域；螺顶泛红的湖北钉螺除广西宾阳及其周边的两个县（市）外尚有其他9个分布区域。结论根据钉螺纵肋形态可分为4类：光壳、细肋、肋壳、粗肋；钉螺外形在50年内未发生明显变异。大口钉螺螺顶磨损现象罕见。螺顶泛红是广西宾阳、武鸣、忻城三地钉螺极重要的特征，但并非惟该地区所拥有。     

湖北钉螺种群内AFLP分子标记遗传变异分析

目的 探讨湖北钉螺种群内的遗传变异及其程度。方法 采用扩增片段长度多态性(AFLP)分子标记技术对9省(云南、四川、广西、福建、湖南、湖北、江西、安徽、江苏)13种群湖北钉螺基因组DNA进行扩增,分析钉螺种群内的遗传变异。结果湖北钉螺13种群AFLP扩增片段位点数为403~472,江西星子钉螺种群内遗传多样性较高,多态位点频率、Nei’s基因多样性指数和Shannon’s信息指数分别为93.2%、0.345和0.510,而广西宜州钉螺种群内遗传多样性较低,以上3指标分别为55.8%、0.191和0.287;广西宜州钉螺种群内的相似性较大,相似系数(中位数)为0.904,而江苏丹徒钉螺种群内的相似性较低,相似系数(中位数)为0.748;13种群内的遗传变异差异显著(P<0.01)。结论 我国广泛分布的湖北钉螺,种群内存在一定程度的遗传变异。不同地区湖北钉螺种群内遗传变异程度不同,有的相差较大。     

钉螺在巢湖生存繁殖的现场研究

目的了解钉螺能否在巢湖生存繁殖.方法选择巢湖湖区的马尾河口和巢湖闸两处为实验区,巢湖东岸高林山区为对照区,投放无为县江外滩的肋壳钉螺和巢湖东岸高林山区的光壳钉螺,观察钉螺在放养不同时间后的生存繁殖情况.结果1年后,实验区和对照区均有相当数量存活的肋壳钉螺和光壳钉螺成螺;研究期间在实验区和对照区均检获了一定数量的光壳钉螺和肋壳钉螺幼螺;产卵期间实验区和对照区肋壳钉螺存活率差异无显著性(P＞0.05),而光壳钉螺存活率差异具有显著性(P＜0.05);产卵期间无论是光壳钉螺还是肋壳钉螺,各实验区雌螺卵巢中所含螺卵数与同一月份对照区同类雌螺卵巢中所含螺卵数的差异均无显著性(P均＞0.05).结论肋壳钉螺、光壳钉螺均能够在巢湖生存繁殖,但光壳钉螺在巢湖的生存状况不及其在高林山区的生存状况理想.     

湖北钉螺与中华圆田螺体内酚氧化酶活力比较

目的 比较湖北钉螺及中华圆田螺体内酚氧化酶活力差异。方法 以螺软体组织制备粗制酶液,以邻苯二酚为底物,测定肋壳钉螺、光壳钉螺和中华圆田螺体内酚氧化酶活力。结果 光壳钉螺、肋壳钉螺、中华圆田螺体内酚氧化酶活力值分别为（25.72 ± 2.27）、（14.56 ± 1.24） U/mL和（13.72 ± 1.06） U/mL,光壳钉螺体内酚氧化酶活力值高于肋壳钉螺（q = 21.46,P < 0.05）及中华圆田螺（q = 12.00,P < 0.05）,中华圆田螺与肋壳钉螺体内酚氧化酶活力值差异无统计学意义（q = 1.62,P > 0.05）。结论 湖北钉螺及中华圆田螺体内酚氧化酶活力存在差异,可能与螺的生活环境有关。     

模拟三峡建坝后生态环境条件下钉螺生长繁殖情况

目的了解在三峡建库后的生态环境下钉螺生长发育情况.方法模拟建坝后的生态环境(淤积洲滩、灌溉沟渠),观察钉螺生长繁殖情况1年.结果肋壳钉螺和光壳钉螺在上述两种环境下均能较好地生长繁殖.年均存活率,肋壳钉螺为74.10%～79.71%,光壳钉螺为82.63%～83.85%;并检出肋壳、光壳幼螺.结论三峡建坝后形成的淤积洲滩和移民点灌溉沟渠,适合光壳、肋壳钉螺生长、发育、繁殖.     

湖北与云南两省钉螺酯酶同工酶酶谱的比较研究

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳，对湖北阳新、江陵两地的肋壳钉螺和云南大理，楚雄、丽江三地的光壳钉螺进行了酯酶同工酶的比较研究。五地钉螺共分离出１２条酶带，其中湖北两地的肋壳钉螺共分离出９条酶带，而云南三地的光壳钉螺共分离出１１条酶带。两省钉螺的酶谱间存在较大的差异，表现为７条酶带的性质不同和１条酶带的染色深浅不同。云南省三地的光壳钉螺的酶谱间仅略有不同，而湖北省两地的肋壳钉螺的酶谱则基本相同。因此认为，钉螺酯酶同工酶酶谱的特征能较好地反映钉螺属内的亲缘关系。该研究结果对今后研究钉螺的遗传距离，从而定量分析钉螺属内的亲缘关系，并为钉螺的分类提供了参考资料。     

湖南省3地区钉螺对岳阳日本血吸虫分离株的易感性

目的了解湖南省3地区钉螺对日本血吸虫毛蚴的易感性。方法采集赫山光壳、宁乡光壳和南县肋壳未感染钉螺,在23.5～25.0℃室温和日光灯照射下,以20只钉螺为1感染单位（小群感染）,用岳阳地区日本血吸虫毛蚴进行人工感染。赫山钉螺分4组,分别按钉螺/毛蚴比为1∶20、1∶20感染3次、1∶40、1∶80进行感染;宁乡钉螺分3组,分别按1∶20感染3次、1∶40、1∶80感染;南县钉螺按1∶20感染;各组每次感染时间均为4 h。另以500只钉螺为一感染单位（大群感染）,用同样的方法,按1∶40感染赫山和宁乡光壳钉螺、按1∶20感染南县肋壳钉螺各1组。感染后,将所有大群感染组和1∶40小群感染组、1∶20南县小群感染1组,进行室外模拟现场饲养,其余各组室内饲养。感染45 d后抽样检测,每15 d抽样1次至4个月,观察各组钉螺感染率。结果室内饲养下,南县肋壳钉螺感染率为92.92%,赫山光壳钉螺（1∶20感染3次组）和宁乡光壳钉螺（1∶80组）感染率分别为0.67%和0.71%,其余各组未发现感染螺。室外饲养环境下,南县肋壳钉螺小群感染和大群感染的感染率分别为96.07%和92.08%,宁乡光壳钉螺小群感染和大群感染的感染率分别为0.33%和0.39%,赫山光壳钉螺未发现感染螺。结论赫山和宁乡光壳钉螺对岳阳地区日本血吸虫毛蚴均具有感染性,但感染率明显低于南县肋壳钉螺。     

湖北省庙河地区钉螺细胞色素C氧化酶1基因差异的研究

目的　比较湖北省庙河沿岸地区钉螺CO1基因序列的差异 ,探讨光壳螺与肋壳螺差异的原因。方法　在该地区选 7个点 (上游 4个点 ,下游 3个点 )采集钉螺 ,用CTAB法提取钉螺基因组DNA ,PCR方法扩增CO1基因 ,纯化后测序 ,运用ESEE软件排序并比较变异位点 ,观察各点钉螺的CO1基因单倍体型 ,运用PHYLIP软件计算遗传距离 ,绘制基因进化树。结果　获得CO1基因大小为 638bp ,上游和下游累积变异位点数分别为 2 9和 46,两者差异具有显著性 ;各采集点内钉螺按变异位点多少可分为两组 ;各采集点间存在有相同的基因单倍体型 ;上游和下游螺群之间的遗传距离为 0 0 2 2 1± 0 0 10 5 ;在FITCH绘制的基因进化树上 ,上游和下游地区钉螺交错分布在同一亚种不同的两个分支中。结论　在不同的生态环境下 ,下游地区钉螺CO1基因的变异强度比上游大 ;庙河各采集点螺群间存在一定的基因流动 ;庙河地区螺群属湖北钉螺湖北亚种 (O h hupensis) ,可能存在着两种不同进化速率的螺群。     

日本血吸虫中间宿主钉螺的种群遗传变异研究

以采自中国湖北、江苏、四川省三地现场钉螺和饲养在泰国玛希伦大学实验室的菲律宾钉螺为研究种群,用水平淀粉凝胶电泳方法研究各种群间的遗传变异.实验共观察7个酶中的14个等位点,并以杂合子、多态位点百分比和每位点平均等位基因数衡量遗传变异,结果表明中国大陆钉螺种群的变异程度较高.湖北省钉螺与菲律宾钉螺间的遗传距离最大,为0.44,湖北省与江苏省钉螺间遗传距离最小,为0.03.以UPGMA相似性聚类分析而构建的分校图谱显示中国大陆钉螺存在多亚种.     

湖北肋壳钉螺与云南大理光壳钉螺逸出的尾蚴的致病力实验研究

湖北肋壳钉螺与云南大理光壳钉螺的外形有显著差异,交互感染实验结果也有差异。郭源华等(1963)认为它们分别属于不同的组。刘月英等(1974)将它们列为“湖北钉螺”与“光钉螺”两个独立的种,1979年又改为“钉螺指名亚种”与“钉螺滇川亚种”。本文用从它们逸出的尾蚴对实验感染小鼠的致病力及虫体在鼠体内发育的情况。进行了比较研究。     

浙江钉螺对不同地区血吸虫毛蚴感染性的研究

本文报告浙江省山丘型地区的光壳钉螺对外省及本省异地虫株均不敏感,感染率为0%—2.1%.微肋钉螺对外省湖沼型及本省平原水网型地区嘉善县虫株感染率为1.0%—30.6%;对本省开化县虫株则极为敏感,感染率达22.7%—64.0%.浙江省平原水网型地区嘉兴和嘉善县光壳和肋壳钉螺对外省及本省异地虫株均极敏感,感染率达24.0%—64.6%.浙江省山丘地区钉螺较多,而对外地虫株感染性较低,对外地输入传染源的检测和治疗,可望有较高的防止血吸虫病传播的效率、平原水网地区钉螺少,而对外地虫株极易感,检测和消灭残存钉螺是防止血吸虫病重新流行的最有效的手段.     

1999-2000年湖南省新发现有螺区成因分析及对策思考

目的：分析新发现血吸虫病流行区的成因及探讨防治对策。方法：根据1999－2000年螺情、病情调查资料，分析钉螺的地理分布、螺种、密度、钉螺来源、传染源输入及疫区的形成。结果：2年新发现有螺区20处，累面积622．73hm^3，其中，光壳钉螺6处，肋壳钉螺14处。活螺平均密度最高83．00只／框，最低0．01只／框，另有5处发现感染性钉螺。钉螺来源有漏查、查漏以及顺水流和人为扩散。结论：有适于钉螺的孳 生环境，加上人、畜传染源进入有螺地带而形成血吸虫病流行区。