干细胞经脑脊液移植后在损伤脊髓的早期变化观察

目的观察神经干细胞经脑室注射后在损伤脊髓的早期动态变化.方法取转录有绿色荧光蛋白(GFP)基因的孕16天SD鼠胚脑海马组织,培养成神经干细胞球,注射到损伤脊髓鼠第四脑室(实验组),观察其在脊髓的存活、分化状况.结果移植细胞在脊髓表面形成细胞团,分布于损伤区头侧.细胞团的面积背侧小于腹侧;数目背侧多于腹侧.这种分布和增殖形式见于损伤脊髓正常部分和无损伤脊髓(对照组).1周时细胞侵入损伤区,GFAP表达呈阳性.2～3周时与宿主细胞良好整合.结论移植细胞通过脑脊液能广泛分布于脊髓表面,保持黏附、增殖和分化能力,并可迁移、整合到损伤脊髓组织中.     

脊髓源性神经干细胞在臂丛撕脱伤后相应前角内分化情况观察

目的观察移植脊髓源性神经干细胞在臂丛根性撕脱伤后相应脊髓前角的存活、迁移、分化情况。方法取新生鼠脊髓，分离获得脊髓源性神经干细胞，在体外培养、扩增，鉴定，并用5-溴2-脱氧尿苷（BrdU）标记。取SD大鼠20只，将右侧C5～C7神经根经后路撕脱，将标记后的神经干细胞移植于损伤侧C6脊髓前角。术后1、2、4、8、12周取脊髓标本利用免疫组化染色观察神经干细胞的分化情况。结果移植神经干细胞不仅能存活，并可向二端迁移达一个脊髓节段，分化为神经元及星型胶质细胞，其分化趋向呈时间相关性。结论脊髓源性神经干细胞在植入臂丛根性撕脱伤相应脊髓节段前角后不仅能存活和迁移，并能分化为神经元以及星型胶质细胞。     

神经干细胞静脉移植治疗脊髓损伤的实验研究

[目的]观察神经干细胞静脉移植对损伤大鼠脊髓功能的治疗作用。[方法]取孕14—16dSD胎鼠的脑室下区组织，体外培养后鉴定细胞。制作脊髓全切模型，伤后1周将Brdu标记好的神经干细胞通过尾静脉注射移植到大鼠体内，移植后及8周行皮层体感诱发电位（CSEP）检测和BBB功能评分，并留损伤脊髓处作病理切片及免疫组化染色。[结果]（1）移植后8周BBB评分损伤组、移植组都有所恢复，但都未达到正常水平，移植组恢复较好；（2）模型制作后，CSEP波均消失，细胞移植后8周移植组的波形有不同程度的恢复，但潜伏期延长；（3）移植组大鼠脊髓损伤处存在大量Brdu染色阳性细胞，表明移植的细胞在体内可到达损伤脊髓处并能存活；脊髓损伤部位NF-200及GFAP染色阳性的细胞表明移植的细胞可以分化为具有神经元和胶质细胞特性的细胞。[结论]静脉移植的神经干细胞能到达损伤区代替受损的神经元及神经胶质细胞，使损伤的脊髓功能得到一定程度的恢复。     

骨髓基质细胞体外分化移植治疗大鼠脊髓损伤的初步研究

[目的]探讨大鼠骨髓基质细胞体外分化为神经干细胞后移植治疗大鼠脊髓损伤的可行性。[方法]骨髓基质细胞经培养及定向分化为神经干细胞，后者由5-溴脱氧尿嘧啶核苷法标记，制备大鼠脊髓损伤模型，伤后第9d移植神经干细胞，实验分组：细胞移植组、PBS填充组、正常对照组。应用组化法观察移植细胞是否存活，取材前24h显露坐骨神经，行辣根过氧化物酶逆行示踪法观察脊髓损伤处的修复重建。[结果]骨髓基质细胞在定向分化为神经干细胞后标记并移植于脊髓损伤区，标记的阳性细胞可在受体脊髓内检测到，辣根示踪技术显示细胞移植组较PBS填充组阳性细胞明显增多，差别有统计学意义。[结论]大鼠骨髓基质细胞在体外分化为神经干细胞后移植于脊髓损伤区，移植细胞可以存活，并参与脊髓损伤处神经传导通路的结构重建。     

定向分化神经前体细胞移植治疗脊髓损伤

脊髓损伤（spinal cord injuries，SCI）导致神经细胞死亡、轴突断裂、神经传导功能障碍。中枢神经系统（central nervous system，CNS）内神经元属于分化成熟细胞，死亡后很难自行修复，目前尚无有效办法恢复损伤脊髓的神经功能。近来研究表明细胞移植在脊髓损伤治疗中有良好前景。干细胞具有多向分化潜能和无限增殖能力，因而干细胞移植在细胞移植策略中有着重要意义。     

神经干细胞和施万细胞共移植治疗大鼠脊髓损伤

目的 观察神经干细胞和和施万细胞共移植治疗脊髓损伤的可行性。方法 体外培养胚胎脊髓源神经干细胞和施万细胞，将两种细胞共同移植到大鼠脊髓损伤部位，免疫组织化学染色鉴定神经干细胞在脊髓内的分化情况并观察记录大鼠行为学功能的恢复程度。结果 神经干细胞体外培养血清诱导分化可见大量具有少突胶质细胞特征的分化细胞，与施万细胞共培养则可促进神经干细胞向神经元方向分化。两种细胞共移植至脊髓损伤部位后，施万细胞可以促进神经干细胞的分化和成熟；共移植可以促进脊髓功能的恢复。结论 神经干细胞在体内和体外都具有多向分化能力，且其分化方向和成熟程度可以被多种环境因子所调控。神经干细胞和施万细胞共移植可以促进脊髓功能恢复。     

神经干细胞经枕大池移植后在损伤脑组织中的表达及分化

目的本实验将神经干细胞经枕大池移植到创伤性脑损伤模型大鼠蛛网膜下腔中，观察其向损伤脑组织迁移、存活及分化能力，探讨神经干细胞更安全、便捷及经济的移植途径。方法体外培养的神经干细胞（NSCS）取自胎鼠皮层，并用5-溴脱氧尿嘧啶（Brdu）标记。采用Feeney＇s自由落体脑创伤模型制成大鼠脑损伤模型，伤后24h将神经干细胞经枕大池移植到蛛网膜下腔，分别于移植后第1、2周处死取脑，行免疫组织化学染色检测BrdU、微管相关蛋白2（MAP2）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）。结果免疫组织化学染色表明，BrdU（＋）神经干细胞迁移到脑内损伤灶，并分化成煳（＋）神经元或GFAP（＋）胶质细胞。结论神经干细胞具有从蛛网膜下腔迁移入脑内损伤组织、分化为神经元及神经胶质细胞。     

绿色荧光蛋白转基因大鼠骨髓间充质干细胞在急性脊髓损伤大鼠中的迁移和分化

目的观察绿色荧光蛋白转基因大鼠来源的骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)在急性脊髓损伤大鼠脊髓组织中的迁移和分化情况。方法全骨髓贴壁培养法培养BMSCs,Allen法制作脊髓损伤大鼠模型,共30只大鼠。于造模1周后进行干预,随机选取造模成功的24只大鼠并随机分为脊髓损伤组、假移植组(生理盐水注射)和细胞移植组(BMSCs注射),每组8只。于移植前、移植后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d及42 d进行BBB(Basso,BeattieBresnahan locomotor rating scale)评分。HE染色、免疫荧光观察脊髓损伤的组织修复和BMSCs的迁移分化情况。结果从第14天始,细胞移植组大鼠的BBB评分较脊髓损伤组和假移植组大鼠高,差异具有统计学意义(P0.05)。HE染色显示细胞移植组大鼠的脊髓结构相对完整,液化和囊泡区缩小,炎性细胞减少。免疫荧光显示BMSCs聚集于脊髓损伤处,且能分化为神经元、神经胶质细胞和神经前体细胞。结论 BMSCs能向脊髓损伤部位迁移和聚集,并分化为相应的神经细胞促进脊髓功能恢复。     

长期培养人胚神经干细胞对兔脊髓损伤的修复作用

[目的]观察长期培养人胚神经干细胞（hNSCs）的体外生长特性与转染EGFP基因后移植治疗兔脊髓横切损伤模型在体内的生物学活性及对神经结构修复和功能恢复的影响。[方法]体外分离、培养并鉴定hNSCs，用逆转录病毒介导的增强绿色荧光蛋白基因（EGFP）进行转染；制备兔T9全横断脊髓损伤模型；观察hNSCs移植对脊髓损伤后神经结构修复和功能恢复的影响。[结果]从胎龄10～20周的新鲜人胚脑皮层中成功分离出神经干细胞，该细胞具有连续克隆传代能力，诱导分化后表达分化细胞的特异抗原。本实验室已成功连续培养10个月（17代），转染EGFP基因后，仍保持未分化状态，能够自我更新形成新的神经球；移植入兔SCI模型后，hNSCs能在体内存活、迁移、分化并增殖。与对照组相比，hNSCs移植组明显促进了脊髓神经的再生、结构的修复和下肢运动功能的恢复。[结论]hNSCs移植促进了脊髓损伤后神经结构的修复和功能的恢复，是治疗急性脊髓损伤的一种有效方法。     

绿色荧光蛋白转基因大鼠神经干细胞体外分化与体内移植的实验研究

目的 探讨绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）转基因大鼠胚胎脊髓神经干细胞（neural stem cells，NSC）体外增殖、分化的生物学活性以及植入体内后存活、分化和迁移的情况。方法 对GFP转基因大鼠的胚胎脊髓NSC进行体外分离、培养和诱导分化，并应用特异性抗体分别对神经干细胞、神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞进行免疫荧光染色鉴定。建立F344大鼠胫神经切断的动物模型，将体外稳定传代的GFP-NSC单细胞悬液移植于胫神经远侧段。移植12周后取材，应用激光共聚焦显微镜和普通荧光显微镜观察神经干细胞体内的存活、分化和迁移情况，并对胫神经冰冻切片行神经元特异性免疫荧光染色鉴定。结果 通过体外分离培养的方法获得了稳定传代的GFP-NSC，体外诱导分化形成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。GFP-NSC体内移植后，部分分化为神经元，并发出轴突样的结构向远端生长。结论 GFP-NSC具有良好的生物学活性，体内移植后可以分化为神经元，为进一步研究其体内移植防治骨骼肌失神经萎缩及治疗其他神经元损伤性疾病提供了实验依据。     

臂丛损伤神经干细胞脊髓前角移植后分化情况及对运动神经元的保护作用

目的观察臂丛根性撕脱伤后将脊髓源性神经干细胞(neuralstemcell,NSC)移植于脊髓前角后的存活、分化情况及对脊髓前角受损运动神经元的保护作用。方法取新生鼠脊髓,分离获得脊髓源性神经干细胞,体外培养、扩增、鉴定、5溴2-脱氧尿苷(BrdU)标记。取SD大鼠60只,随机分成实验组、对照组和单纯组。从后路制备C5~C7臂丛神经根性撕脱伤动物模型。实验组移植神经干细胞于C6脊髓前角,对照组移植灭活神经干细胞,单纯组不作移植。术后1、2、4、8、12周取脊髓标本进行组织学与免疫组化染色观察。结果神经干细胞移植入脊髓后能存活、分化;臂丛根性撕脱伤后脊髓前角运动神经元数目明显减少;实验组神经干细胞移植后2、4、8、12周各个时间点运动神经元的存活率均高于对照组和单纯组。结论臂丛根性撕脱伤脊髓前角神经干细胞移植后能存活并分化为神经元及星型胶质细胞,脊髓源性神经干细胞移植能明显减少前角运动神经元的继发性死亡,对脊髓前角受损运动神经元有保护作用。     

神经干细胞移植对大鼠损伤脊髓轴浆运输功能的修复作用

目的:观察神经干细胞移植后对脊髓损伤大鼠轴浆运输功能的作用。方法:30只Wistar大鼠,分为半切洞损伤组、D-Hanks液对照组和神经干细胞移植治疗组。于伤后2、4、8周行损伤上段脊髓HRP逆行示踪并记数及伤侧腓肠肌胆碱酯酶染色。结果:移植组在4、8周时HRP阳性神经元的个数较损伤明显增多。运动终板的形态基本正常。而两损伤组则严重退变,甚至消失。结论:神经干细胞移植到损伤脊髓组织后能较好地恢复其轴浆运输功能并对下肢运动终板有一定的保护作用。     

Functional recovery after human umbilical cord blood cells transplantation with brain-derived neutrophic factor into the spinal cord injured rat

Summary There have been many efforts to recover neuronal function from spinal cord injuries, but there are some limitations in the treatment of spinal cord injuries.The neural stem cell has been noted for its pluripotency to differentiate into various neural cell types. The human umbilical cord blood cells (HUCBs) are more pluripotent and genetically flexible than bone marrow neural stem cells. The HUCBs could be more frequently used for spinal cord injury treatment in the future.Moderate degree spinal cord injured rats were classified into 3 subgroups, group A: media was injected into the cord injury site, group B: HUCBs were transplanted into the cord injury site, and group C: HUCBs with BDNF (Brain-derived neutrophic factor) were transplanted into the cord injury site. We checked the BBB scores to evaluate the functional recovery in each group at 8 weeks after transplantation. We then, finally checked the neural cell differentiation with double immunofluorescence staining, and we also analyzed the axonal regeneration with retrograde labelling of brain stem neurons by using fluorogold. The HUCBs transplanted group improved, more than the control group at every week after transplantation, and also, the BDNF enabled an improvement of the BBB locomotion scores since the 1 week after its application (P<0.05). 8 weeks after transplantation, the HUCBs with BDNF transplanted group had more greatly improved BBB scores, than the other groups (P<0.001). The transplanted HUCBs were differentiated into various neural cells, which were confirmed by double immunoflorescence staining of BrdU and GFAP & MAP-2 staining. The HUCBs and BDNF each have individual positive effects on axonal regeneration. The HUCBs can differentiate into neural cells and induce motor function improvement in the cord injured rat models. Especially, the BDNF has effectiveness for neurological function improvement due to axonal regeneration in the early cord injury stage. Thus the HUCBs and BDNF have recovery effects of a moderate degree for cord injured rats.     

神经干细胞对脊髓前角运动神经元保护作用的实验研究

目的观察臂丛根性撕脱伤后神经干细胞脊髓内移植对前角运动神经元的保护作用。方法取孕龄15～18d胎鼠脑组织，分离获得神经干细胞，在体外培养、扩增，并用5溴-2脱氧尿苷(BrdU)标记。取Wistar大鼠72只，随机分成实验组与对照组。先将C5～T1神经根撕脱，实验组把体外培养的神经干细胞移植于C5～T1脊髓节段前角附近，而对照组则用缓冲液替代神经干细胞。术后1、2、4、6、8、12周取脊髓标本进行组织学与免疫组化染色观察。结果臂丛根性撕脱伤后脊髓前角运动神经元数目明显减少，到术后12周时，对照组运动神经元减少达80．3％，实验组达63．7％。并且，各时间点实验组运动神经元的存活率均高于对照组。实验组脊髓前角内可见散在但仍保持未分化特征的神经干细胞。结论神经干细胞在植入臂丛根性撕脱伤的脊髓后能存活，并能明显减少前角运动神经元的继发性死亡。     

Cotransplantation of mouse neural stem cells (mNSCs) with adipose tissue-derived mesenchymal stem cells improves mNSC survival in a rat spinal cord injury model

The low survival rate of graft stem cells after transplantation into recipient tissue is a major obstacle for successful stem cell therapy. After transplantation into the site of spinal cord injury, the stem cells face not only hypoxia due to low oxygen conditions, but also a lack of nutrients caused by damaged tissues and poor vascular supply. To improve the survival of therapeutic stem cells after grafting into the injured spinal cord, we examined the effects of cotransplanting mouse neural stem cells (mNSCs) and adipose tissue-derived mesenchymal stem cells (AT-MSCs) on mNSC viability. The viability of mNSCs in coculture with AT-MSCs was significantly increased compared to mNSCs alone in an in vitro injury model using serum deprivation (SD), hydrogen peroxide (H(2)O(2)), and combined (SD + H(2)O(2)) injury mimicking the ischemic environment of the injured spinal cord. We demonstrated that AT-MSCs inhibited the apoptosis of mNSCs in SD, H(2)O(2), and combined injury models. Consistent with these in vitro results, mNSCs transplanted into rat spinal cords with AT-MSCs showed better survival rates than mNSCs transplanted alone. These findings suggest that cotransplantation of mNSCs with AT-MSCs may be a more effective transplantation protocol to improve the survival of cells transplanted into the injured spinal cord.     

Effect of human neural progenitor cells on injured spinal cord

Human central nervous system ( CNS) has verylimited regenerative potentials. Patients withsevere injuries in the CNS such as spinal cordinjury (SCI) frequently endure lifelong disability. Avariety of methods have been tried to prevent spinalcord from further injury and foster regeneration afterSCI. Despite these efforts, an effective treatment forthis disease is still lacking. Since neural progenitorcells have already committed to become neural cells inthe CNS, they appear to be a good c…     

自组装peptide胶对神经干细胞在大鼠急性损伤脊髓中细胞分化的影响

目的 观察自组装peptide胶对神经干细胞(NSCs)在大鼠急性期损伤脊髓中的细胞分化的影响.方法 分离、培养和鉴定大鼠NSCs与自组装peptide胶共培养;SD大鼠25只采用NYU-Ⅱ型脊髓打击器制作T10脊髓损伤模型;急性期于损伤脊髓区分别行注射移植,其中联合细胞移植组(n=10)、单纯细胞移植组(n=10)及对照组(n=5).术后第2、4、8周取损伤部位脊髓,免疫组织化学染色检测移植细胞的分化.结果 成功建立大鼠NSCs的体外培养体系;移植的NSCs在大鼠脊髓内存活超过8周,单纯移植组、细胞分化比例较低,分化的NSCs主要为表达胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗原细胞,未见NSCs分化为表达微管相关蛋白(MAP2)标志抗原细胞;联合移植组,细胞分化比例较高;NSCs可分化为表达MAP2、Oligo、GFAP标志抗原细胞.结论 自组装peptide胶能够提高神经干细胞在大鼠急性期损伤脊髓中的分化比率,并有部分细胞可分化为表达神经元特异抗原的细胞.     

成年脊髓损伤大鼠脊髓神经干细胞的体外培养及分化研究

目的 探讨大鼠脊髓损伤后脊髓神经干细胞的分离培养方法及分化情况.方法 采用Allen法制作大鼠脊髓损伤模型,利用无血清培养和单细胞克隆技术在成年脊髓损伤7 d大鼠脊髓中分离具有单细胞克隆能力的神经干细胞,并进行培养鉴定.结果 从成年脊髓损伤7 d大鼠脊髓中成功分离出神经干细胞,该细胞具有连续克隆能力,可传代培养,表达神经巢蛋白抗原.分化后的细胞表达神经元细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞的特异性抗原.结论 致伤7 d的成年大鼠脊髓组织体外町培养出神经十细胞,并分化为神经无细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞,有可能参与脊髓损伤的修复过程.     

Endothelial progenitor cells promote astrogliosis following spinal cord injury through Jagged1-dependent Notch signaling

Interactions between endothelial and neural stem cells are believed to play a critical role in the kinetics of neural stem cells in the central nervous system. Here we demonstrate that endothelial progenitor cells promote the repair of injured spinal cord through the induction of Notch-dependent astrogliosis and vascular regulation. The transplantation of Jagged1(+/+) endothelial progenitor cells, but not Jagged1(-/-) endothelial progenitor cells, increased the number of reactive astrocytes during the acute phase, and improved functional recovery following spinal cord injury. Expression of the Notch effector Hes5 was upregulated in the injured spinal cord after Jagged1(+/+) endothelial progenitor cell transplantation. Furthermore, we found that the Notch ligand Delta-like-1 was highly expressed in Jagged1(-/-) endothelial progenitor cells. Transplantation of Delta-like-1, as well as Jagged1-overexpressing 3T3 cells, revealed that only Jagged1-overexpressing 3T3 stromal cells enhanced astrogliosis following spinal cord injury. In addition, Jagged1(+/+) endothelial progenitor cells exhibited not only dramatic pro-angiogenic effects, but also morphologically abnormal vessel stabilization, compared with Jagged1(-/-)endothelial progenitor cells in injured spinal cord. Thus, transplanted endothelial progenitor cells promote astrogliosis, vascular regulation, and spinal cord regeneration through activation of Jagged1-Notch signaling.