ATRA对A549人肺腺癌细胞株增殖、细胞周期的影响及其机制研究

目的探讨全反式维甲酸（all-trans retinoic acid,ATRA）对A549人肺腺癌细胞株增殖、细胞周期的影响及其可能的分子机制。方法ATRA处理人肺腺癌细胞株A549,观察A549细胞生长情况并运用MTT法检测其生长抑制情况,流式细胞仪进行细胞周期分析,Western blot检测CDK4、Rb、p-ERK1/2蛋白的表达,荧光定量PCR法检测CyclinD1mRNA水平。结果ATRA具有抑制A549细胞增殖、使细胞周期阻滞于G0/G1期,并下调p-ERK1/2蛋白表达及CyclinD1mRNA水平的作用。结论ATRA可能通过下调A549细胞p-ERK1/2蛋白表达及CyclinD1mRNA水平,使细胞周期阻滞于G0/G1期,从而影响其DNA的合成,抑制其恶性增殖。     

鸦胆子油乳注射液体外抑制肺腺癌耐药株A549/DDP增殖作用的研究

目的 探讨鸦胆子油乳注射液对肺腺癌顺铂(cisplatin,DDP)耐药株(A549/DDP)体外增殖作用的影响.方法 体外培养A549/DDP细胞,MTT法检测鸦胆子油乳注射液对人A549/DDP细胞的抑制作用.流式细胞仪检测鸦胆子油乳注射液对A549/DDP细胞周期和凋亡率的影响.结果 MTT法表明鸦胆子油乳注射液对A549/DDP的细胞抑制率呈剂量依赖性.流式细胞仪证明鸦胆子油乳对其增殖,细胞周期及凋亡率有明显抑制效果.结论 鸦胆子油乳注射液能抑制A549/DDP耐药细胞株的增殖,引起细胞周期阻滞,诱导凋亡.     

大麻受体激动剂对肺癌A549细胞凋亡和增殖的影响

目的研究大麻受体激动剂(delta9-tetrahydrocannabinol,THC)对肺癌A549细胞凋亡和增殖的影响。方法 MTT法测定THC对A549细胞增殖的影响;苏木精-伊红染色、扫描电镜观察细胞的形态学变化;Western blot法分析大麻受体CB1、CB2的蛋白表达;DNA梯度电泳检测A549细胞凋亡;流式细胞仪分析细胞凋亡率变化。结果 THC预处理后,MTT检测表明THC对A549细胞增殖有明显抑制作用,随着药物浓度增大,抑制作用更加明显;苏木精-伊红染色、扫描电镜观察显示:肺癌A549细胞有典型的细胞凋亡形态;Western blot检测显示:A549细胞大麻受体CB1、CB2水平较正常气道上皮细胞株16HBE升高;DNA梯度电泳法及流式细胞仪检测显示:THC能抑制A549细胞生长,诱导其凋亡,并具有剂量依赖性。结论大麻受体激动剂THC能抑制肺癌细胞的增殖,并诱导肺癌细胞凋亡,此效应可能与大麻受体CB1、CB2作用有关。     

Torin2对人非小细胞肺癌A549细胞生长和迁移的影响

目的 观察Torin2对人非小细胞肺癌A549细胞生长和迁移的影响,初步探讨其作用机制.方法 实验分为空白对照组、阴性对照组和Torin2加药组,CCK-8检测Torin2对各组A549细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞的凋亡及周期;Transwell检测细胞的迁移;Western blot检测相关蛋白的表达.结果 Torin2对A549细胞的增殖具有显著抑制作用,且呈明显的剂量依赖性,IC50为214.96 nmol/L;流式细胞仪检测对照组、加药组200 nmol/L和400 nmol/L细胞凋亡率分别为(4.51±1.32)％、(9.56±2.34)％、(16.40 ±3.57)％;各加药组凋亡率明显高于对照组(P＜0.05),且加药组与对照组比较:G1期细胞比例显著增多(P＜0.05),S期显著减少(P＜0.05).Transwell实验结果显示加药组(200 nmol/L和400 nmol/L)的A549细胞迁移能力较对照组显著下降.Western blot结果显示A549细胞经Torin2加药处理后,p-Akt473、p-4EBP1、Cyclin D1蛋白表达明显降低,Caspase 9蛋白酶切片段表达显著增加.结论 Torin2可以抑制A549细胞增殖,引起细胞周期G1/S期阻滞,抑制细胞迁移,促进细胞凋亡,其机制可能与Torin2抑制了PI3K/Akt/mTOR信号通路以及周期相关蛋白Cyclin D1的表达有关.     

BAD慢病毒载体的构建及其对A549细胞增殖的影响

目的探讨促凋亡基因BAD(Bcl-2-associated death protein)重组慢病毒表达载体构建及其对肺癌A549细胞株增殖的影响。方法应用PCR法从含有目的基因的质粒pAV-MCMV-BAD-GFP中扩增BAD基因片段,克隆至慢病毒载体(pLVX-IRES-ZsGreen 1),应用PCR、酶切和测序鉴定正确后,经病毒包装,感染A549细胞,经流式细胞仪筛选稳定表达细胞株,Western blot鉴定重组慢病毒感染的A549细胞BAD的表达。采用CCK-8试剂盒定点检测细胞的光密度(OD)值,分析BAD蛋白过表达对A549细胞增殖能力的影响。结果酶切鉴定和基因测序证实长度为507bp的BAD基因成功克隆至慢病毒表达载体pLVX-IRES-ZsGreen1;重组慢病毒通过感染A549细胞株和流式细胞仪筛选出单克隆细胞株BAD-A549,Western blot检测结果显示,细胞培养BADA549细胞可稳定过表达BAD蛋白。体外增殖结果显示,细胞培养120~144h,BAD组的OD值均较对照组低(P<0.05)。结论成功构建了BAD重组慢病毒载体,获得稳定表达BAD的A549细胞株。BAD过表达能有效抑制A549细胞的增殖速度。     

瑞香狼毒总黄酮提取物对肺癌细胞增殖及细胞周期的影响

目的 研究瑞香狼毒总黄酮提取物对肺癌A549细胞的增殖抑制、细胞周期的影响.方法 采用超声波技术提取瑞香狼毒根中的总黄酮.四甲基偶氮唑盐法检测总黄酮提取物对A549细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪检测总黄酮提取物对A549细胞周期和凋亡的影响.结果 瑞香狼毒总黄酮提取物呈明显的时间-剂量依赖性抑制A549细胞的增殖,即随着时间的延长、总黄酮提取物浓度的增加,抑制作用增强;总黄酮提取物可诱导A549细胞凋亡,并将A549细胞阻滞在G1期.结论 瑞香狼毒总黄酮提取物具有抗肺癌的活性.     

全反式维甲酸联合三羟异黄酮对肺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid, ATRA)联合三羟异黄酮(Genistein)抑制肺癌细胞的增殖和促进其凋亡的作用.方法采用不同剂量ATRA、Genistein及两者联合处理人肺腺癌细胞株A549,观察A549 细胞生长情况并运用MTT法检测其生长抑制情况,流式细胞仪进行细胞周期分析及凋亡率检测.结果 A549 肺癌细胞经ATRA、Genistein及两者联合处理后,细胞增殖能力明显下降,更多的细胞被阻滞于G2/M 期,细胞凋亡明显增加,其中以两者联合用药最为显著.结论 ATRA联合Genistein能协同抑制肺癌A549 细胞的恶性增殖并促进其凋亡.     

蚓激酶抗肺癌细胞A549增殖作用及其机制

目的 研究蚓激酶对肺癌细胞A549的增殖及细胞周期的影响,初步探讨蚓激酶抗肺癌的作用机制.方法 通过MTT法检测不同浓度的蚓激酶作用于A549细胞24 h后对细胞增殖的影响;通过显微镜观察细胞形态变化;流式细胞仪检测蚓激酶对A549的细胞周期阻滞情况;RT-PCR检测蚓激酶对P53基因表达影响.结果 蚓激酶对A549有明显抑制作用,且抑制作用呈浓度依赖性,其半数抑制浓度(IC50)为(54.35 ±2.112) U/mL;A549经蚓激酶作用后形态变化显著,细胞边缘皱缩,漂浮细胞的数目随着药物浓度的增高而增大;蚓激酶阻滞A549细胞周期于S期;RT-PCR检测表明,蚓激酶能明显上调P53基因的表达.结论 蚓激酶在体外能明显抑制肺癌细胞A549的增殖,并阻滞细胞周期于S期,其机制可能与上调P53基因表达有关.     

RNA沉默HMGN5基因对肺癌A549细胞增殖的影响及意义

目的 通过RNA干扰技术(RNAi)沉默HMGN5基因,探讨其对肺癌A549细胞增殖的影响.方法 培养人肺癌A549细胞株,HMGN5基因合成慢病毒载体感染A549细胞,RT-PCR和Western blot检测A549细胞中HMGN5沉默率;设阴性对照组及RNA干扰组,MTT法检测A549细胞的增殖能力;Brdu法检测沉默HMGN5的表达;流式细胞仪检测其细胞周期.结果 与对照组比较,RNA干扰组HMGN5基因的mRNA及蛋白表达均降低,差异有统计学意义(P＜0.05);A549细胞的增殖能力明显下降,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);细胞增殖率为29.70％,较对照组降低,差异有统计学意义(P＜0.05);G1期细胞为53.50±0.30,高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 采用RNAi能够沉默HMGN5基因,人肺癌A549细胞增殖能力显著降低,HMGN5基因可能参与肺癌的发生、发展、增殖过程.     

奥曲肽对人肺癌细胞株A549的增殖抑制作用

目的:探讨奥曲肽对于人肺癌细胞株A549生长的抑制作用.方法:以体外培养的人肺癌细胞株A549为靶细胞,运用四氮唑盐法(MTT法)观察奥曲肽作用48 h后对于人肺癌细胞株生长的影响.以流式细胞仪分析其对细胞周期的影响.结果:MTT法结果显示奥曲肽作用48 h可抑制A549的生长, 并呈剂量依赖性, IC50=1.62 mg/L.流式细胞仪测定结果显示:G0/G1期细胞比例增加,G2/M期细胞比例减少,且奥曲肽质量浓度增高到1.60 mg/L以上时,G2/M期比例均降为0,细胞周期直接阻滞在G0/G1期,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:奥曲肽可抑制体外培养的人肺癌细胞株A549增殖,机制可能是将肺癌细胞阻滞于G0/G1期.     

胃癌组织中PTEN基因突变的研究

目的:研究抑癌基因PTEN突变高发区外显子5穴exon5雪和外显子8穴exon8雪在胃癌组织中的突变频率,探讨其突变与胃癌病理组织学分级和临床病理分期的关系。方法:应用聚合酶链反应鄄单链构像多态性分析(PCR鄄SSCP)方法检测胃癌组织和相应癌旁正常组织中PTEN基因的突变,并对突变样本的PCR产物进行测序分析。结果:42例胃癌组织中检测到PTEN基因突变3例,其中exon5突变1例,exon8突变2例,突变率为7.14%(3/42);42例相应癌旁正常组织未检测到突变,二者差异无统计学意义(P>0.05)。对42例胃癌进行组织学分级,低分化腺癌突变率为12.00%(3/25),中、高分化腺癌突变率为0(0/17),二者差异无统计学意义(P>0.05)。对42例胃癌临床病理分期,Ⅰ、Ⅱ期突变率为5.88%(1/17)熏Ⅲ、Ⅳ期突变率为8.00%(2/25),二者差异无统计学意义(P>0.05)。结论:胃癌组织中存在PTEN基因突变;主要发生在低分化腺癌中;而PTEN基因突变与胃癌病理组织学分级和临床病理分期之间无明显相关性。     

无毛基因及其突变后引起的免疫学改变

无毛小鼠(hairless mice)是一种皮肤毛发结构表型性状发生遗传突变的小鼠,表现为被毛缺失或逐渐消失,包括有不同基因突变引起的多种类型,最早于1924年在伦敦的一家饲养场中偶然发现,当时认为是由野生型的Musmusculus突变所致。无毛小鼠不同于课鼠(nude mice,指一种先天性无胸腺无毛的裸体     

非霍奇金淋巴瘤中p53基因突变情况研究

目的探讨非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin′s Lymphoma,NHL)中p53基因第5~8外显子突变情况。方法采用PCR-SSCP法对47例NHL进行p53基因第5~8外显子的点突变研究。结果p53基因第5~8外显子总突变率为48.94%(23/47)。其中第6外显子的突变率最高为17.02%,其次为第8外显子,突变率为12.87%;高度恶性组和低度恶性组突变率分别为50.00%(12/24)、34.78%(8/23)(P>0.05);T细胞和B细胞突变率分别为39.29%(11/28)、47.37%(9/19)(P>0.05)。结论NHL中存在较高p53基因突变率,提示其突变可能参与了NHL的发生发展。高度恶性组p53基因突变倾向于高发。     

非霍奇金淋巴瘤中p16基因突变情况研究

目的探讨非霍奇金淋巴瘤（Non-Hodgkin’s Lymphoma，NHL）中p16基因外显子1、2突变情况。方法采用PCR-SSCP法对40例NHL进行p16基因第1、2外显子的点突变研究。结果p16基因第1、2外显子总突变率为32．5％（13／40）。其中第2外显子的突变率最高为25％（10／40），其次为第1外显子的突变率为7．5％（3／40）；其中惰性、侵袭性组、高侵袭组突变率分别为25．0％（1／4）、31．25％（10／32）和50．0％（2／4）（P〉0．05）；T/NK细胞和B细胞突变率分别为38．46％（5／13）和29．63％（8／27）（P〉0．05）。结论NHL中存在较高p16基因突变率，提示其突变可能参与了NHL的发生发展。侵袭组、高侵袭组p16基因突变倾向于高发。     

湖州地区1814例新生儿耳聋基因筛查及突变位点分析

目的 了解湖州地区新生儿耳聋基因的携带率及突变类型。方法应用飞行时间质谱技术,对1814例新生儿进行GJB2、SLC26A4、GJB3、线粒体12SrRNA4个常见耳聋基因20个热点突变位点的检测。结果1814例新生儿中检测出GJB2基因突变54例（2.98%）,SLC26A4基因突变24例（1.32%）,GJB3基因突变12例（0.66%）,线粒体12SrRNA基因突变2例（0.11%）。结论在湖州地区无耳聋家族史的新生儿中,GJB2和SLC26A4基因突变率较高,GJB3基因和线粒体12SrRNA基因突变较为少见。     

bcl 10 gene mutation in hepatocellular carcinoma

Objective To detect the mutation frequency of the bcl 10 gene in the early and advanced st ages of hepatocellular carcinoma (HCC).Methods Genome DNA samples were extracted from 46 cases of fresh HCC tumor tissues and t heir non-tumor adjacent tissues. Polymerase chain reaction-single strand conf ormation polymorphism method was used to detect point mutations of t he three exons of the bcl 10 gene. For each individual exon, six random samples from those showing abnormal DNA bands were sequenced to verify those mutations . The relationship between serum alpha-fetoprotein (AFP) level and bcl 10 muta tion, between the tumor size and bcl 10 mutation was also analyzed.Results Among the 46 samples, 26 cases (56.5%) were found to have mutations in exon 1, 5 out of the 6 cases were shown to have 5744 C→G mutation by sequencing; 25 cas es (54.3%) were found to have mutations in exon 2, 4 out of the 6 cases were sh own to have 11 311 T deletion mutation by sequencing. Twenty-one cases (4 5.7%) were found to have mutations in exon 3, all of the 6 cases selected for sequenc ing were shown to have 14 116 C→T mutation. Statistical analysis showed t hat ne ither serum alpha-fetoprotein level nor the size of hepatocellular carcino ma has a significant relationship with bcl 10 mutation.Conclusion The bcl 10 gene has a high mutation frequency in liver cancer.     

面向精准医学的基因突变数据分类与融合研究

目的：通过调研现有的基因突变数据标准,包括分类标准、命名标准以及组织标准,制定一套整合式的基因突变数据分类体系以 融合多来源异构的突变数据。方法：从ClinVar和COSMIC突变数据库中获取基因突变数据,根据数据特征对基因突变数据进行标准化融合。通过与已制定的分类体系进行映射,对融合后的基因突变数据进行标准化分类注释。结果：构建的基因突变分类体系包括术语34条,突变数据库包括突变概念746 504个,突变术语1 083 397个。结论：基因突变数据分类体系可提供一种有效的基因突变数据分类和突变数据整合方案,对推动突变数据的融合、标准化与共享和疾病的精准治疗具有重要意义。     

胰腺癌组织中K－ras基因点突变的研究

应用Ｔａｑ酶直接测序技术对９例胰腺癌标本及１例恶性胰岛细胞瘤标本进行了Ｋ－ｒａｓ基因１２位点突变的检测。结果显示：９例胰腺癌中含Ｋ－ｒａｓ基因突变者５例。表现出２种突变类型，即ＣＣＡ→ＣＧＡ型４例；ＣＣＡ→ＣＡＡ型１例。相应氨基酸改变分别为：甘氨酸→丙氨酸；甘氨酸→缬氨酸。分析了在突变率及突变内容，上与国外学者不同的原因，探讨了检测Ｋ－ｒａｓ基因１２位点突变的意义。     

乙型肝炎病毒基因变异及其临床意义

乙型肝炎病毒（hepatitis Bvirus，HBV）属于嗜肝DNA病毒科，由于HBV复制过程中HBVDNA聚合酶缺乏校正功能，导致HBV容易发生突变。HBV基因组中四个开放读码区均可发生变异，其中某些关键位点的变异可能与疫苗接种失败、肝炎的慢性化、重型肝炎、肝癌的发生有一定关系，并可能影响肝炎的治疗。本文综述了HBV基因关键位点变异及其临床意义。