紫杉醇联合顺铂对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖抑制作用及其机制

目的:研究紫杉醇联合顺铂对人乳腺癌细胞MCF-7增殖抑制作用,探讨药物作用过程中与MAPK通路?Bcl-2基因家族关系及相关机制?方法:采用CCK-8试剂盒检测不同浓度紫杉醇?顺铂单独或联合作用MCF-7细胞48 h后对细胞增殖的50%抑制浓度(IC50),以及紫杉醇?顺铂分别联合ERK通路阻断剂(U0126)?JNK通路阻断剂(sp600125)对细胞增殖的抑制率;采用流式细胞仪检测紫杉醇?顺铂作用细胞48 h后的细胞周期分布情况;应用Western blot分别检测紫杉醇?顺铂及两药联合作用MCF-7细胞48 h后MAPK通路蛋白及Bcl-2?Bax蛋白表达?结果:紫杉醇(0.025~0.400 μmol/L)?顺铂(1~16 μmol/L)联合作用细胞时呈协同作用(CI < 0.95)?sp600125对MCF-7细胞增殖具有明显的抑制作用,sp600125联合紫杉醇?顺铂的抑制作用强于紫杉醇?顺铂单独作用细胞时的抑制作用?两药联合时处于G2期的细胞较紫杉醇单独作用时减少,较顺铂单独作用增加?紫杉醇?顺铂联合作用细胞48 h后p-ERK?Bcl-2蛋白表达较两药单独作用时降低,p-JNK/SAPK?p-p38蛋白表达较对照组明显增加?结论:紫杉醇联合顺铂作用MCF-7细胞时具有协同作用,两药与JNK通路阻断剂联用时对细胞的抑制作用强于单独用药时?紫杉醇联合顺铂时可以减少细胞在G2/M期的积聚,同时可以激活JNK?p38通路,抑制ERK通路的激活?     

法卡林二醇和替吉奥单药或联合用药对人乳腺癌细胞MCF7的体外增殖和凋亡的影响

目的:探讨法卡林二醇(FAD)和替吉奥(S-1)单药或联合用药对乳腺癌细胞MCF7的增殖抑制和促凋亡作用。方法:将不同浓度的FAD和S-1单药或联合加入对数生长期的人乳腺癌细胞MCF7和正常乳腺细胞MCF-10A,以不加药同期培养的细胞作为对照组。采用MTT检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2表达。结果:FAD和S-1单药或联合用药均有抑制乳腺癌细胞MCF7细胞增殖作用,呈浓度依赖性,联合用药抑制率高于单药作用。正常乳腺细胞MCF10A在≤20μmol/L的各FAD浓度作用下细胞增殖抑制率无差异(P>0.05),在S-1浓度小于20μmol/L时,随着药物浓度增高细胞增殖抑制率也逐步增高,呈浓度依赖性(P<0.05)。与对照组比较,FAD和S-1单药或联合用药均可显著增加MCF7细胞凋亡比例,且联合用药组凋亡细胞比例明显高于单药组(P<0.05)。5μmol/L的FAD或S-1均可显著降低Bcl-2表达(P<0.05),联合用药Bcl-2表达明显低于单药作用(P<0.05)。结论:FAD和S-1单药或联合用药可抑制MCF7细胞增殖并促进其凋亡,联合用药效果优于单药作用,诱导细胞凋亡的机制可能与Bcl-2表达降低有关。     

衣霉素联合顺铂对人鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨糖基化抑制剂衣霉素联合顺铂对人鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响及其相关的分子机制。方法 MTT法检测药物对细胞增殖抑制的影响;集落克隆形成法检测药物对细胞集落克隆形成的影响;碘化丙啶单染流式细胞仪检测药物作用前后细胞凋亡率的变化;caspase-3活性检测试剂盒检测药物作用后24 h caspase-3的活性变化;Western blot检测Bax、Bcl-2蛋白的表达及葡萄糖调节蛋白78的表达。结果不同浓度衣霉素和/或顺铂对人鼻咽癌CNE-1、CNE-2细胞具有显著的增殖抑制作用,3μmol/L衣霉素处理人鼻咽癌细胞的24、36、48 h后细胞的存活率分别为72.13%、51.97%、37.56%和85.61%、56.95%、43.66%,3μmol/L衣霉素与6μmol/L顺铂对人鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2 24、36、48 h的存活率低于单用衣霉素、顺铂组,分别为67.97%、47.76%、34.68%和56.89%、37.05%、29.30%。0.3μmol/L衣霉素可增强0.6μmol/L顺铂抑制人鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2的集落克隆形成的作用。3μmol/L衣霉素诱导CNE-1、CNE-2细胞48 h的凋亡率分别为8.89%、8.67%。3μmol/L衣霉素与6μmol/L顺铂联合刺激人鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2 48 h的凋亡率分别为37.02%、32.25%,分别高于顺铂本身诱导的凋亡率7.25%、6.36%。促进凋亡蛋白Bax的表达联合用药组高于单独用药组,抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达联合用药组低于单独用药组。衣霉素上调GRP-78的表达以及增强联合用药组caspase-3的活性。结论衣霉素增强顺铂对人鼻咽癌细胞的增殖抑制作用,衣霉素增强顺铂诱导人鼻咽癌细胞的凋亡作用,其机制可能是通过引起过度的内质网应激反应以及增加caspase-3的活性。     

胡桃醌联合顺铂对宫颈癌HeLa细胞的促凋亡作用及其机制

目的：探讨胡桃醌与顺铂联合应用对宫颈癌HeLa细胞促凋亡作用的机制,阐明其对相关信号转导通路的作用。方法：选取处于对数生长期的HeLa细胞,将其分为对照组、胡桃醌组、顺铂组和胡桃醌＋顺铂组（联合用药组）。采用MTT法观察不同时间点HeLa细胞的增殖抑制率;Hoechst 33258染色法荧光显微镜下观察细胞凋亡形态;Westernblotting法检测各组细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和caspase-3及PI3K/AKt通路中AKt和pAKt表达水平。结果：MTT法,各用药组HeLa细胞增殖于24、48和72h均可被抑制,与对照组比较,胡桃醌组及顺铂组对细胞的抑制较明显,而联合用药组抑制更加显著;与单用药组比较,联合用药组对细胞的抑制更显著。Hoechst 33258染色,胡桃醌组和顺铂组在处理细胞12 h后,出现明显的凋亡细胞形态,联合用药组该现象更明显。Western blotting检测,与对照组比较,12 h后胡桃醌组和顺铂组HeLa细胞中Bcl-2和pAKt蛋白表达水平明显降低,而Bax、Cleave-caspase-3和AKt蛋白表达水平明显升高,联合用药组上述变化更加明显。结论：胡桃醌和顺铂联合应用可通过抑制PI3K/AKt通路,进而促进HeLa细胞凋亡。     

白英提取物诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其对凋亡相关基因表达的影响

目的探讨白英提取物(Solanum lyratum Thunb extract,STE)对乳腺癌MCF-7细胞凋亡及凋亡相关基因survivin和caspase-3表达的影响。方法体外培养MCF-7细胞,以2.5、5、10 mg/L STE处理MCF-7细胞48小时,并以2.5 mg/L顺铂(DDP)作为阳性对照。用MTT法检测细胞抑制率,TUNEL法检测凋亡率,半定量RT-PCR检测survivin和caspase-3 mRNA表达。结果与正常对照组比较,STE各浓度组细胞抑制率显著上升(P<0.001),细胞凋亡率明显升高(P<0.001),caspase-3 mR-NA表达显著上升(P<0.001),survivin mRNA表达明显下降(P<0.05或P<0.01)。结论STE具有诱导MCF-7细胞凋亡作用,其分子机制可能与上调caspase-3及下调survivin基因表达有关。     

二甲双胍抑制Fo xp 3的表达诱导乳腺癌细胞凋亡

目的：研究二甲双胍对于人乳腺癌细胞 MCF-7增殖与调亡的效应,并探讨 Foxp3在其中的作用。方法分别以二甲双胍（5 mmol/L、10 mmol/L、20 mmol/L）干预人乳腺癌细胞 MCF-748 h 后,采用 MTT 法检测细胞增殖抑制率;Hoechst 33258染色和流式细胞仪分析细胞凋亡;实时（real-time）PCR检测 Foxp3和 caspase-3 mRNA 表达水平;Western blot 法检测Foxp3蛋白的表达。结果与对照组（未经二甲双胍处理）相比,二甲双胍作用 MCF-7细胞48 h后,对细胞增殖有明显抑制作用（P＜0．05）;并可明显诱导 MCF-7细胞凋亡,早期凋亡率分别为3．76％、8．96％和18．67％;经二甲双胍处理后,MCF-7细胞中caspase-3 mRNA表达水平显著上调（P＜0．05）,而 Foxp3 mRNA和 Foxp3蛋白表达水平降低（P＜0．05）。结论二甲双胍有抑制 MCF-7增殖并诱导其凋亡的作用,其机制可能与 Foxp3表达下调有关。     

桃儿七提取物对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的作用

目的:研究桃儿七对人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制和促进凋亡的作用,探讨其抗癌作用的机制.方法:应用MTT法检测桃儿七提取物对人乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用,倒置显微镜、HE染色及电镜观察细胞形态学改变,FCM分析细胞周期及凋亡率,免疫细胞化学法检测细胞增殖凋亡调控相关蛋白的表达.结果:桃儿七提取物可明显抑制MCF-7细胞的增殖,1,2,3 mg/L桃儿七作用72 h后,细胞生长抑制率分别为43.0%,54.9%,78.5%,抑制作用呈时间及浓度依赖性.形态学观察到用药后凋亡细胞典型的形态学特征,伴有多核细胞形成.FCM分析发现桃儿七阻断MCF-7细胞生长于细胞周期的G2/M期,凋亡诱导作用呈时间及浓度依赖性.免疫细胞化学结果显示,2 mg/L桃儿七作用48 h后,PCNA,Bcl-2蛋白表达分别由154.78±0.16,85.56±0.09降至78.46±0.15,40.43±0.07,P＜0.01;而p21WAF1/CIP1和c-Myc蛋白由92.32±0.12,114.48±0.14增至125.54±0.09,156.52±0.08,P＜0.01.结论:桃儿七提取物对人乳腺癌MCF-7细胞的生长有明显的呈时间及浓度依赖性的抑制作用,G2/M期阻滞并诱导凋亡.该作用与p21WAF1/CIP1表达增加及PCNA表达降低有关,通过下调Bcl-2和上调c-Myc表达诱导乳腺癌细胞凋亡.     

抑制hIAP-2在MCF-7乳腺癌细胞中的表达增强抗肿瘤药物的抑癌作用

目的探讨抑制hIAP-2在MCF-7乳腺癌细胞中的表达增强对肿瘤化疗药物抑癌作用的影响。方法采用MTT法检测mU6/hIAP-2质粒与多种常规肿瘤化疗药物对乳腺癌MCF-7细胞增殖的联合作用。结果比较单纯化疗药物作用组的各相应浓度点,siRNA表达质粒mU6/hIAP-2与化疗药物顺铂、环磷酰胺或5-氟尿嘧啶合用组对乳腺癌细胞MCF-7的细胞增殖抑制率均明显提高,差异有统计学意义(P<0.01),但与秋水仙碱合用组对乳腺癌细胞MCF-7的细胞增殖抑制率明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);对靶向DNA药物如顺铂、环磷酰胺和5-氟尿嘧啶的抗癌性能具有协同增强作用(二者合用效应Q值均≥1),但对靶向微管的药物秋水仙碱具有拮抗作用(Q值<1)。结论在敲除乳腺癌细胞中人凋亡抑制蛋白-2功能的基础上进行药物化疗,可能是乳腺癌治疗的一个新的可行方向。     

丙泊酚联合卡铂对乳腺癌细胞凋亡及JAK/STAT通路的影响

目的 探究丙泊酚联合卡铂对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其与酪氨酸激酶JAK/转录因子STAT（JAK/STAT）信号通路的关系,以期为疾病的临床治疗提供新思路。方法 在含有100?μmol丙泊酚、20?μmol/L 卡铂、100?μmol丙泊酚+20?μmol/L卡铂培养基中分别培养MCF-7细胞,CCK-8法检测细胞抑制情况;Hoechst33342染色法观察各组细胞形态变化;平板细胞克隆实验检测菌落形成情况;PI/Annexin V-FITC双染法检测细胞凋亡情况;Western blotting检测p-JAK2、p-STAT3、Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达情况。结果 与对照组比较,丙泊酚组、卡铂组细胞抑制率升高,菌落数量均降低,细胞凋亡率升高（P?<0.05）;与丙泊酚组、卡铂组比较,联合组细胞抑制率升高,菌落数量均降低,细胞凋亡率升高（P?<0.05）。与正常乳腺上皮细胞MCF-10A比较,MCF-7细胞p-JAK2、p-STAT3蛋白表达均升高（P?<0.05）。与对照组比较,丙泊酚组、卡铂组Cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达均升高（P?<0.05）,p-JAK2、p-STAT3、Bcl-2蛋白表达均降低（P?<0.05）。与丙泊酚组、卡铂组比较,联合组Cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达均升高,p-JAK2、p-STAT3、Bcl-2蛋白表达均降低（P?<0.05）。结论 丙泊酚联合卡铂可抑制乳腺癌细胞增殖,诱导其凋亡,其机制可能与抑制JAK/STAT活性,上调凋亡蛋白表达有关。     

多西紫杉醇和顺铂联合用药对人乳腺癌MCF-7细胞hTERT及C-myc基因表达的影响

目的研究多西紫杉醇和顺铂联合应用对人乳腺癌MCF-7细胞的作用及其机制。方法MCF-7细胞传代培养后分组加药：第1组加入多西紫杉醇（多西紫杉醇组）；第2组加入顺铂（顺铂组）；第3组加入多西紫杉醇和顺铂（联合用药组）；对照组为未加药的MCF-7细胞。加药24、48、72 h后收集细胞，MTT法检测各组细胞生长抑制率，PCR-ELISA法检测各组细胞端粒酶活性，RT-PCR法检测端粒酶逆转录酶hTERT mRNA的表达，Western blot技术检测C-myc蛋白的表达。结果联合用药组人乳腺癌MCF-7细胞的生长和增殖受到明显抑制，多西紫杉醇联合顺铂对端粒酶活性、hTERT mRNA及转录调控基因C-myc表达的抑制呈明显的时效和效量相关性。结论多西紫杉醇和顺铂联合应用对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制具有协同加强作用，其机制可能是对MCF-7细胞的端粒酶活性及其端粒酶转录调控基因C-myc有较强的抑制作用。     

手术前谈话律师见证的实践与思考

目的：探讨重大手术术前谈话、签字进行律师见证的作用。方法：对本院2001年4月至2007年12月1303例重大手术的术前谈话、签字所进行的律师见证进行回顾分析。结果：患者及其亲属和医务人员对这种手术签字形式予以肯定,未发生因告知不足导致的医疗纠纷。结论：手术前谈话律师见证,有利于保障患者的知情同意权,和谐医患关系,保护医患双方的合法权益,促进医学发展。     

课堂教学质量多元综合评价与反馈方式的研究与实践

课堂教学质量评价的多元综合性关系到整体教学质量的提高.多元综合性评价体系包括教师授课质量、教学课件质量、学生对教学效果满意度、学生学习状态及教学环境等方面.课堂教学的反馈包括教学督导对授课质量反馈、对学生及教学环境的反馈,也包括学生对教师授课效果的反馈.通过对一学年100次评课实践结果进行总结和分析,证实多元综合评价和反馈体系具有全面性和准确性的特点,是促进教学质量提高的有效措施.     

网上评教结果及分析

本学期，我院首次进行了网上评教尝试。发现：公共课教师的评教分数低于专业课（P〈0．01）和基础医学课（P〈0．01）教师．基础医学课教师低于专业课教师（P〈0．05）；一年级组低于二、三年级组（P〈0．01）。外聘教师低于本校教师（P〈0．01）。认为学生对公共课和基础医学课与自己未来就业及职业的意义不明确；公共课和基础医学课不如专业课直观、具体、实用．难以激起学生的学习兴趣；不同年级、不同层次学生认知能力和学习态度的差异等是主要原因。     

吗啡和芬太尼用于术后镇痛效应与不良反应的临床观察

目的 观察吗啡、芬太尼用于患者自控硬膜外镇痛（PCEA）的镇痛效应及不良反应。方法 择期手术患者110例,ASAⅠ～Ⅱ级,随机分为两组,Ⅰ组（n=55例）选用吗啡10mg（1ml）加2％利多卡因和0．75％布比卡因各20ml加生理盐水59ml;Ⅱ组（n=55例）选用芬太尼0．5mg（10ml）（代替Ⅰ组配方中的吗啡）加生理盐水50ml。以LCP模式（负荷剂量5ml加持续剂量2ml／h加PCA每次0．5ml）进行镇痛。结果 Ⅰ组与Ⅱ组镇痛效果差异无统计学意义（P〉0．05）;Ⅰ组出现恶心、呕吐、尿潴留、皮肤瘙痒等不良反应发生率较Ⅱ组高（P〈0．01）。结论 吗啡较芬太尼的不良反应更多,应谨慎选用。     

从气血论脱发

脱发是皮肤科的常见病,临床诊断较易,但辨证复杂。气和血均是构成人体的物质基础,毛发的生长和濡养有赖于气血的充盈和条达,气血的异常改变可导致毛发的脱落。主要从气血两方面论脱发。     

葛根素对高血压性头颈痛疗效观察

目的：观察葛根素对高血压性头颈痛治疗效果。方法：对76例高血压头颈痛病例,随机分为治疗组34例（葛根素治疗）、对照组42例（β体阻滞剂治疗）。结果：5天内总的症状消失率治疗组82．4％,对照组57．1％,两组比较有显著性差异（P＜0．01）;总的停药反跳率分别为8．8％和42．9％,二者有显著性差异（P＜0．05）;不良反应峡谷组也有显著性差异（P＜0．01）。结论葛根素对高血压性头颈痛疗效优于β受体阻滞剂而且稳定,无不良反应。     

苦参碱对白血病细胞诱导分化作用和机理研究

为了解苦参碱对人粒系白血病细胞系HL－60细胞的诱导分化作用并探讨其机制,采用MTT法,光镜观察、S－AP免疫组织化学法、硝基蓝四氮唑（NBT）还原试验,流式细胞仪检测,逆转录酶／多聚酶链反应（RT－PCR）检测,观察苦参碱对HL－60细胞的增殖抑制作用,分化诱导作用及其对细胞周期移行和癌基因表达的影响,结果表明：苦参碱明显地抑制HL－60细胞的增殖,并诱导其向成熟粒系分化;苦参对HL－60细胞的诱导分化作用与其下调c-myc基因表达,阻滞细胞在G1期有关。