氟化物对体外乳鼠颅盖骨分离细胞活力的影响

目的 :建立较成熟的体外成骨细胞培养鉴定技术 ,初步观察氟化物对体外乳鼠颅盖骨分离细胞活力的影响。方法 :采用颅盖骨分离细胞体外培养、传代、鉴定及 MTT比色法。结果 :染氟110 .5 mg/L时细胞活力明显降低 ;染氟 4 4 .2 mg/L、110 .5 mg/L 12 0 h对细胞活力有抑制作用 ,表明高剂量氟能抑制细胞增殖 ;而染氟 8.84 mg/L 12 0 h,氟刺激细胞活力增强。结论 :高剂量氟能抑制细胞增殖 ,表明培养时间较长时 ,方能显示低剂量对细胞增殖的促进作用。     

镉对体外培养成骨细胞增殖、凋亡、分化及矿化的影响

目的探讨镉对体外培养成骨细胞（osteoblast,OB）增殖、凋亡、分化及矿化的影响。方法用混合酶消化法分离大鼠颅盖骨成骨细胞,进行原代培养;成骨细胞与不同浓度的Cd2＋作用后,MTT法测定细胞增殖;AO/EB双染法进行凋亡形态学观察;PNPP法检测碱性磷酸酶活性;矿化结节计数和面积测量分析镉对成骨细胞矿化能力的影响。结果各剂量组氯化镉均可抑制成骨细胞增殖,其中2.0μmol/L以上剂量组与对照组相比差异有统计学显著意义（P〈0.01）;16.0μmol/L、32.0μmol/L剂量组OB可见较多凋亡细胞;各时点、各剂量组氯化镉均能抑制ALP活性,尤其是48h以上影响作用更明显（P〈0.01）;0.5μmol/L、1.0μmol/L浓度的氯化镉可明显抑制成骨细胞矿化能力。结论镉离子可以抑制成骨细胞增殖、分化及矿化能力,促进成骨细胞凋亡,对成骨细胞的骨形成能力有明显抑制作用。     

氟对体外培养的成骨细胞Ras蛋白表达的影响

目的:研究不同浓度的氟化物对体外培养的成骨细胞Ras蛋白表达的影响。方法:采用酶消化法分离乳鼠成骨细胞,经剂量分别为0、2.5、5.0、10.0和20.0mg/L的氟化钠(NaF)作用后,采用免疫组织化学法和Western blot法检测染氟后小鼠成骨细胞中Ras蛋白表达水平。结果:免疫组织化学法结果显示0、2.5及5.0mg/L实验组成骨细胞中Ras均有较强阳性表达,其余实验组的为弱阳性表达;各染氟组阳性表达细胞数与0mg/L比较差异有统计学意义(P<0.05)。小鼠细胞的Ras蛋白相对定量结果显示:2.5、5.0mg/L染氟组大于0mg/L,其它染氟组均小于0mg/L,染氟组的蛋白相对表达量有随着剂量增加而逐渐降低的趋势。结论:氟作用于成骨细胞后可以影响Ras蛋白的表达,表现为双向作用,即低剂量的氟促进Ras的蛋白表达,高剂量抑制Ras的蛋白表达。     

优化酶消化法分离培养及鉴定小鼠前体成骨细胞

目的优化小鼠前体成骨细胞体外分离培养方法,提高分离效率。方法用胶原酶A和分散酶消化出生72h以内的小鼠颅盖骨,分离获得的细胞通过光镜观察、碱性磷酸酶活性测定、Von Kossa染色和茜素红染色方法鉴定。结果获得的细胞活力高且具有典型的成骨特性。结论优化酶消化法是一种方便、高效分离小鼠前体成骨细胞的方法。     

IL-6反义寡核苷酸对骨吸收的抑制作用

目的 :探讨IL -6反义寡核苷酸在体外对骨吸收的抑制作用及意义。方法 :分离培养新生小鼠颅盖骨 ,并分别用IL -6硫代反义寡核苷酸 (ASON )、无义寡核苷酸 (NSO )、IL -6或ASON与IL -6联合作用颅盖骨 ,未加药组为对照。培养一定时间后 ,测定培养上清液的钙含量 ,将实验组钙含量与对照组钙含量比值作骨吸收指数。结果 :ASON( 5.0m/L)分别作用 12、2 4、48h后 ,颅盖骨骨吸收指数呈时间依赖性降低。作用 48h后 ,ASON使颅盖骨骨吸收指数呈剂量依赖性降低 ;IL -6则使其呈剂量依赖性升高 ;ASON可轻度降低IL -6升高的骨吸收指数 ;ASON( 5μm /L)对有或无IL -6培养的颅盖骨骨吸收抑制率分别为 10 .8%、19.3 % ;NSO对骨吸收指数无影响。结论 :IL -6反义寡核苷酸对体外培养的颅盖骨骨吸收有一定的抑制作用     

青藤碱调节EC109细胞增殖与凋亡的COX-2信号通路研究

目的研究青藤碱对食管癌EC109细胞增殖和凋亡的影响及其潜在机制。方法以不同浓度青藤碱分别处理体外培养的食管癌EC109细胞,72h后用CCK8法检测细胞增殖,用AnnexinV/PI双染与流式细胞术检测细胞凋亡,用Westernblot检测COX-2和Survivin蛋白的表达。结果采用0.2、0.4mmol/L青藤碱处理EC109细胞72h后,细胞增殖显著被抑制;细胞凋亡检测结果显示,与对照组相比,中、高剂量组细胞凋亡率显著升高;Westernblot检测结果显示COX-2和Survivin蛋白在中、高剂量组中表达水平显著下降。结论青藤碱在体外能抑制EC109细胞增殖并促进凋亡,其机制可能与抑制COX-2和Survivin蛋白表达相关。     

玉米紫色植株色素对染氟MC3T3-E1成骨细胞增殖的影响

目的：观察不同浓度的玉米紫色植株色素（Maize Purple Plant Pigment,MPPP）对体外染氟的MC3T3-E1成骨细胞的增殖作用。方法：通过MTT法分别观察浓度范围均为10-10~10-2mol/L的MPPP和NaF对细胞增殖情况的影响,根据上述结果选择两者适宜浓度,再进行联合培养,最终观察MPPP对染氟的MC3T3-E1细胞增殖的影响。结果：氟对MC3T3-E1细胞增殖无促进作用,较高浓度的氟可抑制细胞增殖（P〈0.05）;培养48 h,终浓度为10-5mol/L的MPPP可促进染氟（10-3mol/L）MC3T3-E1细胞增殖（P〈0.05）。结论：MPPP可增强染氟MC3T3-E1细胞的增殖能力。     

三氧化二砷对体外培养大鼠软骨细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对体外培养大鼠软骨细胞活力、增殖和凋亡的影响.方法 采用细胞培养的方法,原代培养1～3天Wistar大鼠的关节软骨细胞,取第3代细胞进行实验,按染砷剂量不同分为0(对照)、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 μmol/L组.采用细胞增殖与毒性检测方法(CCK-8法),在染砷24、48、72 h测定细胞活力变化;流式细胞仪检测砷对软骨细胞周期及凋亡的影响.结果 与对照组相比,各浓度染砷大鼠软骨细胞(除0.5 μmol/L 24 h无统计学意义)活力均被抑制(P＜0.01);流式细胞仪分析结果显示,As2O3将大鼠软骨细胞周期阻滞于G2期(P＜0.05),使细胞凋亡率明显增加(P＜0.05).结论 As2O3可以抑制体外培养大鼠软骨细胞的增殖,促进细胞凋亡.     

晚期糖基化终产物对大鼠血管平滑肌细胞增殖影响的实验研究

目的：研究晚期糖基化终产物（Advanced Glycation end Products,AGEs）对体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞（Vascular Smooth Muscle Cells,VSMCs）增殖的影响。方法：组织贴块法培养大鼠VSMCs,给予不同浓度AGE-牛血清白蛋白（AGE-BSA）连续处理VSMCs 168 h（7 d）,每24 h采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖,绘制细胞生长曲线,计算细胞增殖促进率。结果：80 mg/L终浓度的AGE-BSA在培养72、961、20 h,10、20、40 mg/L终浓度的AGE-BSA在培养96、120、1441、68 h均可显著促进细胞增殖（P〈0.05） 40 mg/L终浓度的AGE-BSA在培养96 h时细胞增殖促进率最大（72.1%）。结论：AGEs具有促进VSMCs增殖作用,这一作用在一定范围内具有剂量依赖性。     

黄芪多糖通过JAK2/STAT3通路调控人膝骨关节炎软骨细胞增殖与凋亡

目的 研究黄芪多糖(APS)对人膝骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡及JAK2/STAT3通路的影响.方法 无菌分离人膝骨关节炎软骨细胞,设空白对照组,APS低、中、高剂量(25、50、100mg/L)组和塞来昔布(20mg/L)组.药物干预48h后,MTT法检测细胞增殖活力,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋...     

白首乌C-21甾体苷体外抑制大鼠胶质瘤细胞生长的作用

目的:评价白首乌C-21甾体苷(CGB)体外抑制大鼠胶质瘤C6细胞生长的作用.方法:C6细胞在CGB处理24、48、72 h后,以MTT法检测细胞活性;AnnexinV/PI双染或用PI单染后,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期.结果:CGB 30、60、120 mg/L显著抑制C6细胞活性(P＜0.001),呈浓度、时间依赖性;CGB 60、120 mg/L显著提高细胞凋亡率(P ＜0.001),并能明显阻滞细胞周期,增加GO/G1期细胞比例(P＜0.05),降低S期细胞比例(P＜0.01).结论:CGB能显著抑制体外培养的大鼠胶质瘤细胞的生长,并能诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期.     

氟对体外培养的小鼠睾丸间质细胞增殖和细胞凋亡的影响

目的 观察不同浓度氟化钠对睾丸间质细胞增殖和细胞凋亡的影响,为氟中毒的机制研究提供依据.方法 取体外培养的睾丸间质细胞,胰酶消化后制成单细胞悬液,常规培养,待细胞融合率达80％,且未出现细胞分化时,将细胞分4组,加入不同浓度的氟化钠染毒(0,5,10,20 mg/L)睾丸间质细胞,分别干预0,24,48,72,96,120 h后采用MTT法检测各组细胞的增殖.干预48 h后采用流式细胞仪Annexin V-PI双染法检测细胞凋亡率.结果 ①氟作用24,48 h后,20 mg/L的氟化钠对睾丸间质细胞增殖率有明显抑制作用,而5 mg/L和10 mg/L组没有明显影响；作用72 h后,10 mg/L的氟化钠明显抑制睾丸间质细胞的增殖；各浓度氟作用96 h和120 h后均表现明显抑制作用.②不同浓度氟化钠对睾丸间质细胞作用48 h后,均可诱导小鼠睾丸间质细胞凋亡.氟化钠浓度为10 mg/L时,晚期凋亡率最高.氟化钠浓度为20 mg/L时,早期凋亡率最高.结论 氟对小鼠睾丸间质细胞的增殖有抑制作用,并诱导小鼠睾丸间质细胞凋亡.     

人参皂苷Rg3对培养人视网膜色素上皮细胞增生的抑制作用

目的 研究人参皂苷Rg3(Ginsenoside-Rg3)对体外培养视网膜色素上皮(RPE)细胞增生的直接抑制作用及可能机制。方法 通过活细胞计数法与MTT比色法分别检测不同浓度(10、20、50、80、100、150mg/L)Rg3和Rg3 80mg/L在不同作用时间(6-120h)对RPE细胞增生及代谢的影响。结果 Rg3组细胞增殖受到抑制并出现细胞脱落，Rg3 100mg/L具有最强的抑制效应，其明显抑制效应在6h即出现，96h达高峰。Rg3组A值明显低于对照组，RPE细胞生存率下降。结论 Rg3可能通过抑制钙内流促进钾外流改变细胞膜电位、干扰RPE细胞代谢，对RPE细胞增殖具有剂量依赖和时间依赖方式的抑制作用。     

阿霉素对体外培养的猪毛囊真皮鞘细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨阿霉素对体外培养的猪毛囊真皮鞘细胞增殖和凋亡的影响。方法 用MTT法通过比色分析测定吸光度值，检测不同浓液(0、5、10、20mg／L)阿霉素作用24h和10mg/L阿霉素作用不同时间(4、8、12、24、48h)对猪毛囊真皮鞘细胞增殖的影响；用流式细胞仪检测不同剂量的阿霉素作用24h后猪毛囊真皮鞘细胞的凋亡率。结果 阿霉素抑制了体外培养的猪毛囊真皮鞘细胞的增殖，其抑制效应随阿霉素浓度的增大和作用时间的延长而增强；细胞凋亡率随阿霉素浓度增大而升高，阿霉素浓度为10mg/L时细胞凋亡率最高。结论 阿霉素抑制体外培养的猪毛囊真皮鞘细胞增殖，诱导细胞凋亡，其效应与阿霉素的浓度和作用时间相关。     

丹参单体对视网膜色素上皮细胞增殖抑制的实验研究

目的 研究丹参单体(IH764-3)对体外培养的兔视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞增殖的抑制作用.方法 将传代培养的RPE细胞分别加入含丹参单体1、2、3、4、5 mg/L培养液培养24、48、72、96、120h,应用噻唑蓝比色法检测不同浓度丹参单体对RPE细胞的抑制作用.结果 丹参单体对RPE细胞的增殖有明显抑制作用,24、48h时4mg/L组与5mg/L组抑制率相比差异无统计学意义(P>0.05),其余时间点时各组之间抑制率相比差异有统计学意义(P均<0.01),5mg/L组72h与96h及96h与120h时抑制率差异无统计学意义(P>0.05),其余各组各时间点之间抑制率相比差异有统计学意义(P均<0.01),丹参单体120h时的IC50剂量为2 4mg/L.结论 丹参单体对RPE细胞的增殖有抑制作用,呈时间依赖性及剂量依赖性,可能是一种有价值的防治增殖性玻璃体视网膜病变的药物.     

淫羊藿提取液与雌二醇联合用药对大鼠成骨细胞的作用

目的 观察淫羊藿提取液（Epimedium Extract, EE）和雌二醇（17β- Estradiol, E2）联合使用对体外培养大鼠成骨细胞增殖和分化的影响。方法 用酶消化法分离新生SD大鼠颅盖骨成骨细胞。用基础培养基培养3d后获得未分化成骨细胞（undifferenciation osteoblast,udOB）,继续用条件培养基培养3d定向诱导分化为成骨细胞（differenciation osteoblast, dOB）,分别以低剂量（1mg/L）、中剂量5mg/L）及高剂量（10mg/L）EE与10μM E2联合干预48h,检测细胞增殖率、碱性磷酸酶（Alkline phosphatase,AKP）比活性及骨连接素（osteonectin,ON）基因mRNA水平。结果 对udOB,高剂量联用组的增殖率及各联用组的AKP活性显著高于其它组,但ON的mRNA水平没有显著性差异;对dOB,高剂量联用组的增殖率也明显高于其它组,但各联用组的AKP活性较对照组降低,而ON的mRNA水平上调。结论 EE和E2联合使用,较低剂量EE即有协同促进成骨细胞增殖作用,但高剂量EE的协同促增殖效应更强,而协同促分化作用主要表现在成骨细胞的分化早期,对分化成熟的成骨细胞有促成骨作用。     

5味中药对体外培养原代人外阴皮肤成纤维细胞增殖的影响

目的 利用原代培养的人外阴正常皮肤成纤维细胞,观察中药对人外阴皮肤成纤维细胞增殖的影响.方法 胰蛋白酶消化、分离及培养人外阴皮肤成纤维细胞;倒置显微镜下观察成纤维细胞生长状态;HE染色观察细胞爬片下的形态及着色;免疫组织化学染色观察成纤维细胞中间丝波形蛋白;测定细胞生长曲线;MTT法测定莪术、黄芪、丹参、川穹及当归5种中药作用后细胞增殖能力.结果 生长曲线测定结果显示:传6代内以及传6代内复苏人外阴皮肤成纤维细胞增殖能力均很强.MTT检测结果显示:5种药物在特定浓度范围内均能抑制人外阴皮肤成纤维细胞的增殖.分别作用于人外阴皮肤成纤维细胞72 h后,莪术5、10、100 mg/L浓度组,黄芪500、1 000 mg/L浓度组,丹参1 000 mg/L浓度组,川穹500、1 000 mg/L浓度组,当归100、500、1 000 mg/L浓度组均显示抑制增殖作用,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),其中莪术和川穹的抑制强度呈剂量依赖性.结论 成功建立了体外人外阴皮肤成纤维细胞原代培养及鉴定方法;特定浓度范围内的莪术、黄芪、丹参、川穹和当归能够抑制人外阴皮肤成纤维细胞的体外增殖.     

不同氟浓度对培养血管内皮细胞损伤的研究

目的：观察体外不同氟浓度对人脐静脉血管内皮细胞的损伤作用。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞株HUVEC 304,在培养液中加入不同浓度的氟化钠,共分9组,分别为正常对照组及加氟组（120、240、360、 480、600、720、840、960?μmol/L）,连续培养24?h后,细胞计数并观察细胞形态,MTT比色法检测细胞活性,并检测培养液中NO、SOD、MDA的含量。结果：①氟的浓度为120、240?μmol/L时细胞数目明显增多,从600?μmol/L开始,内皮细胞数量明显下降,细胞形态呈损伤改变;②氟的浓度在120、240?μmol/L时,MTT测定细胞活性明显高于正常对照组,以240?μmol/L浓度时最高;浓度在600以上时细胞活力明显低于正常对照组,差异均有统计学意义（P＜0.01）;③培养液中NO从240?μmol/L时开始降低,和正常对照组差异显著,SOD从240?μmol/L时开始下降,差异均有统计学意义（P＜0.05）,MDA的含量逐渐升高。结论：低浓度的氟对脐静脉血管内皮细胞有促进增生作用;高浓度有损伤作用,且随剂量的增高而增重。     

紫杉醇抑制原代培养人视网膜色素上皮细胞增殖的实验研究

目的研究紫杉醇（Taxol）对体外原代培养人视网膜色素上皮（human Retinal Pigment Epithelium,hRPE）细胞增殖的抑制作用及机制。方法体外分离、原代培养hRPE细胞,采用免疫细胞化学方法对其进行鉴定。不同浓度紫杉醇（0、0.005、0.05、0.5、5mg/L）处理hRPE细胞一定时间,采用形态学观察、细胞生长曲线及MTT法检测药物对hRPE细胞的生长抑制效应,流式细胞术检测药物对hRPE细胞的细胞周期阻滞作用及凋亡诱导作用。结果原代培养的hRPE细胞胞浆富含色素,随传代次数增加,黑色素颗粒逐渐减少直至消失。用抗人细胞角蛋白抗体进行免疫细胞化学鉴定hRPE细胞呈特异的阳性反应。细胞生长曲线及MTT法显示：紫杉醇作用于hRPE细胞24h和72h,其抑制细胞生长增殖的IC50值分别为5.24和3.24mg/L。流式细胞分析术检测结果显示：0.5mg/L紫衫醇作用细胞48h即可显著延迟hRPE细胞G2/M期进展并诱导凋亡（P〈0.05）。透射电镜观察显示：0.5mg/L紫杉醇作用后细胞表面微绒毛减少,电子密度增加,细胞器减少,异染色质聚集成团、边聚等。结论紫杉醇通过阻滞G2/M期进展和诱导凋亡显著抑制hRPE细胞生长增殖。     

体外培养大鼠成骨细胞实验模型的建立

建立大鼠成骨细胞(osteoblast)体外培养模型，并研究其生长规律。方法：本实验用新生24h内大鼠颅盖骨，采用多次胶原酶消化法进行细胞体外培养。观察细胞形态，对其进行鉴定，测定细胞生长曲线，钙化结节染色。结果：新生大鼠成骨细胞体外培养模型建立成功，证实所培养细胞具有体内成骨细胞的多种生物学特性。生长曲线研究发现，成骨细胞培养前7天处于缓慢增长期，第8天开始进入对数增长期，第15天进入稳定期，第21天进入抑制期。结论：体外培养大鼠成骨细胞实验方法切实可行，可用于体外实验研究。