长链非编码RNA MAPKAPK5-AS1对肺癌细胞的侵袭和凋亡的影响

目的研究长链非编码RNA(long ncRNA, lncRNA)MAPKAPK5-AS1对肺癌细胞的侵袭和凋亡的影响。方法 real-time PCR法筛选MAPKAPK5-AS1高表达和低表达肺癌细胞系,将MAPKAPK5-AS1过表达载体转染低表达细胞系,MAPKAPK5-AS1小干扰RNA (small interference RNA,siRNA)转染高表达细胞系,Western blot分别检测宿主基因MAPKAPK5和凋亡蛋白表达,transwell实验分析细胞侵袭能力。结果 MAPKAPK5-AS1在肺癌H2291细胞株和A549细胞株中高表达,而在H441细胞株中低表达。在H441细胞中过表达MAPKAPK5-AS1后, MAPKAPK5表达明显下降,侵袭能力明显增强(F=319.5,P0.01),凋亡蛋白Cleaved caspase 9的表达下降;而在H2291细胞和A549细胞中分别干扰MAPKAPK5-AS1表达后,MAPKAPK5表达明显升高,侵袭能力明显下降(F值分别为417.1、530.2,P0.01),凋亡蛋白Cleaved caspase 9的表达升高。结论 MAPKAPK5-AS1可能作为原癌基因通过调控宿主基因MAPKAPK5表达而增强肺癌细胞侵袭能力,同时抑制细胞凋亡。     

非诺贝特对人肺腺癌A549细胞迁移侵袭能力的影响

目的探讨过氧化物酶体增殖因子激活受体α激动剂非诺贝特对人肺癌A549细胞生长、迁移侵袭能力的影响及其可能机制。方法体外培养人肺癌A549细胞,分别用0、12.5、25、50、75、100μmol/L非诺贝特处理细胞,阴性对照组为0μmol/L非诺贝特浓度组;MTT法检测不同药物浓度作用下肺癌A549细胞的生长抑制情况;细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测非诺贝特对肺癌A549细胞迁移及侵袭运动能力的影响,RT-PCR法检测A549细胞中PPARα(Peroxisome Proliferator-Activated Receptors alpha)、MMP-2(Matrix Metalloproteinase-2)、MMP-9、Timp-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1)、Timp-2m RNA的表达情况。结果非诺贝特能够抑制A549细胞生长,呈时间-剂量关系(P0.05);细胞划痕实验及Transwell侵袭实验结果显示非诺贝特能够降低A549细胞的迁移侵袭能力;RT-PCR结果提示非诺贝特能够上调PPARα、Timp-1、Timp-2m RAN表达,下调MMP-2、MMP-9 m RNA表达,差异有统计学意义(P0.05)。结论非诺贝特能够抑制肺癌A549细胞生长、迁移及侵袭能力,其机制可能与PPARα、MMPs、Timps有关。     

地塞米松对顺铂诱导卵巢癌细胞株凋亡的拮抗作用

目的:探讨地塞米松(DEX)对顺铂(DDP)诱导卵巢癌细胞株凋亡的影响。方法:应用MTT比色法检测细胞活性,利用免疫组织化学法检测凋亡相关基因bcl-xl和caspase3的表达。结果:0.001~1μM浓度范围内的地塞米松对顺铂诱导人卵巢癌细胞株HO-8910的凋亡有抑制作用(P<0.05),提高DDP浓度能拮抗该效应;并能上调抗凋亡蛋白bcl-xl的表达,降低caspase3的表达活性(P<0.05)。结论:顺铂治疗卵巢癌前用地塞米松进行预处理后可拮抗顺铂的抗肿瘤作用,bcl-xl抗凋亡通路参与该作用。     

PTEN对耐顺铂的食管癌细胞的增殖及P-糖蛋白表达的影响

目的探讨PTEN对耐顺铂食管癌Ec9706/c DDP细胞增殖及P-gp表达的影响.方法采用顺铂浓度梯度增加的方法筛选食管癌耐药细胞株Ec9706/c DDP,采用流式细胞术检测PTEN转染后对Ec9706/c DDP细胞周期和凋亡的影响,采用Western blot检测PTEN转染后Ec9706/c DDP细胞P-gp表达改变。结果通过顺铂浓度梯度增加的方法成功诱导食管癌耐顺铂细胞株Ec9706/c DDP,与Ec9706/c DDP和Ec9706/c DDP+空载相比,转染野生型PTEN的Ec9706/c DDP细胞G1期细胞比例增加,S期细胞明显减少,差异有统计学意义(P0.05)。Ec9706/c DDP细胞株在野生型PTEN转染48 h后细胞凋亡率显著高于转染无活性G129E和C124S组,差异有统计学意义(P0.05)。Western blot结果显示:转染野生型PTEN的Ec9706/c DDP细胞P-gp蛋白的表达显著下调,而转染2种突变型的PTEN组没有明显改变。结论 PTEN在食管癌耐顺铂细胞株Ec9706/c DDP过表达能够显著抑制肿瘤细胞增殖,促进其凋亡,降低肿瘤耐药关键蛋白P-gp表达,从而逆转食管癌细胞的多药耐药。     

RNA干扰Grp78蛋白对肺癌细胞A549的作用研究

目的 探讨采用RNA干扰Grp78蛋白表达,观察对肺癌细胞A549的作用.方法 通过转染Grp78的siRNA质粒到肺癌细胞A549并进行表达,观察A549细胞的Grp78蛋白的表达及细胞的侵袭和转移能力的变化.结果 RNA干扰肺癌细胞A549的Grp78的表达,能够显著地抑制癌细胞的黏附、伸展,以及MMP-2,MMP-9蛋白的表达,甚至诱导细胞凋亡.结论 siRNA特异性下调Grp78蛋白,可以抑制肺癌细胞A549的侵袭和转移,甚至导致细胞凋亡.     

胶质瘤细胞HIF1α和VEGF高表达模型的建立

目的建立胶质瘤细胞HIF1α和VEGF高表达模型。方法通过MTT及荧光显微镜,观察缺氧(1%O2)对细胞增殖及凋亡的影响;应用免疫印迹观察缺氧对胶质瘤细胞HIF1α表达的影响;采用Real-timeRT-PCR和ELISA检测缺氧胶质瘤细胞VEGF的表达和分泌。结果缺氧24h或48h,细胞均不出现凋亡;缺氧24h仅轻微减少细胞增殖(下降3.23%,P<0.01),缺氧48h明显抑制细胞增殖(减少22.53%,P<0.001)。1%O2处理细胞2h或4h,HIF1α蛋白表达均显著增加(P<0.01)。与此一致,缺氧暴露10h,U87细胞VEGFmRNA水平升高4.24倍(P<0.01)。同时,缺氧24h诱导了VEGF蛋白的分泌(P<0.01)。结论 1%O2模拟了在体胶质瘤缺氧微环境,诱导了HIF1α和VEGF高表达。     

大豆异黄酮联合顺铂对A549细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨大豆异黄酮(ISF)联合顺铂(DDP)化疗对A549肺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)法观察ISF和DDP联用对A549肺癌细胞增殖的影响,并计算联合指数(Q值)判定联合用药的相互作用,同时采用TUNEL染色法检测二者对A549细胞凋亡的影响。结果 ISF和DDP单独使用均可时间和浓度依赖性地抑制肺癌A549细胞的增殖。DDP浓度在3 mg/L时,ISF和DDP联用后抗细胞增殖作用增强,二者有相加或协同作用,且在一定浓度范围内,联合用药对细胞生长的抑制作用呈量效关系。ISF单用或和DDP联用均可浓度依赖性地诱导肺癌细胞凋亡。结论 ISF可通过诱导A549细胞凋亡而发挥抗肺癌作用;ISF和DDP联用可增强对肺癌A549细胞增殖的抑制和凋亡的诱导,二者具有协同抗肿瘤作用。     

姜黄素与卡铂联合用药对肺癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨姜黄素与卡铂联合用药对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响。方法通过Western blotting检测、细胞活性检测不同浓度姜黄素和卡铂对肺癌细胞的影响;划痕实验Transwell侵袭实验检测加入姜黄素和卡铂对肺癌细胞的侵袭能力的影响;Western blotting检测NF-k B信号通路受不同浓度姜黄素和卡铂的影响。结果 10 m M姜黄素和50、100 m M卡铂联用对肺癌A549细胞的影响效果最佳;加入姜黄素和卡铂后,肺癌细胞株A549的侵袭和增殖能力明显降低,且联合用药效果较好;加入姜黄素和卡铂后,NF-k B信号通路蛋白相应下调。结论姜黄素和卡铂联合用药可以通过NF-k B信号通路抑制肺癌A549细胞株的迁移和侵袭能力。     

对曲古抑菌素A敏感的人肺腺癌细胞株的初步筛选

目的初步筛选不同p53表达型肺癌细胞株对曲古抑菌素A（TSA）敏感性不同的影响因素。方法分别以体外药物敏感试验（MTT法）、流式细胞术观察TSA处理3种肺癌细胞株（H1299为p53缺失型,H322为p53变异型,A549为p53野生型）后,其生长抑制情况以及细胞周期、细胞凋亡等指标的变化;用Western blot法检测3种细胞的人类表皮生长因子受体2（HER2）表达水平。结果TSA对3种细胞均有抑制作用,在96h时对A549的IC50抑制作用明显低于对H1299和H322的IC50（P〈0.05）,A549细胞凋亡也明显多于H1299和H322的细胞凋亡（P〈0.05）。3种细胞株HER2蛋白表达水平由高到低依次为H322、A549和H1299,与TSA的IC50值之间无相关性。结论TSA对p53不同表达型人肺腺癌细胞株均有生长抑制作用,肺腺癌细胞株p53的不同表达型可能对TSA的敏感性产生影响,而HER2的表达强度不影响TSA的敏感性。     

对曲古抑菌素A敏感的人肺腺癌细胞株的初步筛选

目的初步筛选不同p53表达型肺癌细胞株对曲古抑菌素A（TSA）敏感性不同的影响因素。方法分别以体外药物敏感试验（MTT法）、流式细胞术观察TSA处理3种肺癌细胞株（H1299为p53缺失型,H322为p53变异型,A549为p53野生型）后,其生长抑制情况以及细胞周期、细胞凋亡等指标的变化;用Western blot法检测3种细胞的人类表皮生长因子受体2（HER2）表达水平。结果TSA对3种细胞均有抑制作用,在96h时对A549的IC50抑制作用明显低于对H1299和H322的IC50（P〈0.05）,A549细胞凋亡也明显多于H1299和H322的细胞凋亡（P〈0.05）。3种细胞株HER2蛋白表达水平由高到低依次为H322、A549和H1299,与TSA的IC50值之间无相关性。结论TSA对p53不同表达型人肺腺癌细胞株均有生长抑制作用,肺腺癌细胞株p53的不同表达型可能对TSA的敏感性产生影响,而HER2的表达强度不影响TSA的敏感性。     

顺铂作用下卵巢癌敏感细胞A2780与耐药细胞A2780/DDP凋亡与自噬水平的变化及意义

目的:通过分析自噬对卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响,探讨自噬与卵巢癌顺铂耐药性的关系,为卵巢癌治疗提供依据。方法:培养卵巢癌细胞株A2780和A2780/DDP,进行卵巢癌细胞系A2780及A2780/DDP顺铂敏感性的测定,流式细胞仪测定顺铂作用下A2780和A2780/DDP细胞的凋亡率;将10μM顺铂作用48h的A2780细胞和40μM顺铂作用48h的A2780/DDP细胞经处理,采用Western blot法检测Beclin1蛋白的表达;电镜下观察10μM顺铂作用48h的A2780细胞和40μM顺铂作用48h的A2780/DDP细胞经固定染色处理的自噬细胞活性。结果:顺铂主要通过诱导凋亡对卵巢癌耐药细胞A2780/DDP及敏感细胞A2780发挥细胞毒效应;顺铂作用下,耐药细胞的自噬活性明显增强,而敏感细胞自噬活性无明显增强。结论:顺铂诱导耐药卵巢癌细胞发生凋亡的能力较亲代敏感细胞降低,在其发生过程中,反应性自噬活性增强可能与其顺铂耐药性的形成有关,提示对肿瘤细胞的自噬水平进行监测及调控可能为逆转卵巢癌铂耐药提供新的思路。     

葡萄糖调节蛋白78抵抗宫颈癌细胞衰老的相关机制研究

目的:探讨顺铂诱导宫颈癌细胞衰老过程中葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein,GRP78)的作用及相关机制。方法:用亚凋亡剂量顺铂诱导宫颈癌细胞衰老;β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况;GRP78诱导剂A23187诱导Hela细胞高表达GRP78;siRNA反义抑制GRP78表达;Western blot检测相关蛋白表达情况。结果:亚凋亡剂量顺铂诱导绝大多数宫颈癌细胞发生衰老;A23187上调GRP78表达后顺铂诱导Hela细胞衰老率降低,GRP78表达被反义抑制后顺铂可重新诱导Hela细胞衰老;P53表达被抑制及Cdc2表达增多与GRP78抗衰老作用有关。结论:GRP78蛋白高表达能够抵抗顺铂诱导宫颈癌细胞发生衰老,可作为逆转肿瘤细胞化疗耐药的新靶点。     

干扰KIF14基因对子宫内膜癌细胞顺铂耐药的影响

目的:探讨KIF14基因对子宫内膜癌顺铂耐药细胞增殖、凋亡及顺铂敏感性的影响。方法:RT-qPCR和western-blot检测子宫内膜癌细胞Ishikawa及子宫内膜癌顺铂耐药细胞株Ishikawa/DDP中KIF14水平;将siRNA-KIF14及siRNA-NC转染Ishikawa/DDP细胞作为si-KIF14组和si-NC组,耐药组细胞不做处理,通过克隆形成实验检测干扰KIF14后子宫内膜癌顺铂耐药细胞增殖情况;流式细胞仪检测干扰KIF14后子宫内膜癌顺铂耐药细胞凋亡情况,western-blot检测增殖、凋亡及耐药基因相关蛋白ki-67、Bax、cleaved-Caspase-3、MDR1、P-gp表达水平;取各组细胞加入系列浓度顺铂,MTT法检测干扰KIF14后子宫内膜癌顺铂耐药细胞对顺铂敏感性。结果:与子宫内膜癌细胞Ishikawa相比,KIF14在子宫内膜癌顺铂耐药细胞株Ishikawa/DDP中高表达(P0.001);与耐药组和si-NC组相比,干扰KIF14后si-KIF14组Ishikawa/DDP细胞克隆形成数目和ki-67蛋白水平下降,细胞凋亡率以及Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平升高,IC50值下降,多药耐药基因MDR1、P-gp蛋白水平下降(均P0.001)。结论:干扰KIF14表达能够抑制子宫内膜癌顺铂耐药细胞Ishikawa/DDP增殖,促进凋亡,增加对顺铂的敏感性。     

长链非编码RNA SFTA1P在非小细胞肺癌组织中的表达和细胞功能研究

  目的   研究长链非编码RNA SFTA1P在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)中的表达情况, 以及对NSCLC细胞系生物学功能的影响。   方法   运用定量即时聚合酶链锁反应(quantitative real time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测SFTA1P在18对非小细胞肺癌组织及癌旁组织中的表达情况; 用qRT-PCR检测5株NSCLC细胞系(A549、SPCA1、H1975、H460和H1299)和1株肺正常上皮细胞系(human bronchial epithelial, HBE)中SFTA1P的表达情况; 构建SFTA1P的过表达载体, 通过转染构建过表达细胞模型; 运用CCK-8、Transwell等实验方法检测SFTA1P过表达对NSCLC细胞增殖、侵袭、迁移的影响。   结果   SFTA1P在非小细胞肺癌组织中的表达低于癌旁组织(t=2.158, P=0.043);与HBE细胞相比较, SFTA1P在A549和H460细胞系中相对低表达(t=5.769, P=0.004; t=5.772, P=0.004), 在H1299和H1975细胞系中相对高表达(t=22.248, P < 0.001; t=11.814, P < 0.001);SFTA1P过表达质粒转染A549和H460细胞系后, 与空质粒的对照组比较, SFTA1P的表达均升高, 且有统计学差异(均有P < 0.05);过表达SFTA1P可以抑制非小细胞肺癌细胞H460、A549的增殖、侵袭、迁移, 差异有统计学意义(均有P < 0.05)。   结论   SFTA1P基因能够抑制NSCLC细胞的增殖、迁移、侵袭等生物学功能, SFTA1P在肿瘤发生和发展中可能起着抑癌基因的作用。     

灵芝多糖联合顺铂对肺癌A549细胞增殖抑制作用的研究

目的 研究顺铂及联合灵芝多糖(Ganoderma Lucidum Polysaccharides,GLP)对人肺癌A549细胞TGF-β1及Smad4表达的影响,探讨二者联合应用治疗肺癌的效果及可能的分子机制。 方法 选取处于对数生长期肺癌细胞株A549分别用顺铂及顺铂与不同浓度的灵芝多糖联合组干预,并设立对照组,采用MTT检测细胞增殖并计算细胞增殖抑制率;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清中TGF-β1的含量;Western blot法检测细胞中TGF-β1及Smad4蛋白的表达水平。 结果 MTT实验显示,对照组、顺铂组、顺铂联合不同浓度GLP组细胞增殖抑制率分别为0%,(28.2±5.7)%,(30.2±2.7)%,(59.4±3.2)%,(74.8±5.4)%,联合组显著高于顺铂组,并呈现一定的剂量依赖性。ELISA及Western blot法显示:与对照组比较,各用药组均能降低TGF-β1表达,提高Smad4蛋白表达,且二者联合效果更加明显,且呈剂量依赖性。 结论 顺铂联合灵芝多糖对A549细胞增殖抑制作用更强,其作用可能与激活TGF-β/Smad信号通路,降低TGF-β1蛋白表达,增加Smad4蛋白表达有关。     

NDRG2与卵巢癌细胞增殖及化疗耐药的相关性研究

目的研究负载人NDRG2 2种亚型(长短2种亚型分别命名为NDRG2L、NDRG2S)基因对HO-8910细胞裸鼠皮下成瘤的作用;探讨NDRG2对顺铂(DDP)诱导卵巢癌HO-8910细胞凋亡的作用。方法实验组与空载体组卵巢癌HO-8910细胞接种裸鼠皮下,观察裸鼠成瘤情况;DDP处理携带人NDRG2基因的卵巢癌细胞株HO-8910,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 NDRG2促进HO-8910细胞裸鼠皮下成瘤;NDRG2促进HO-8910细胞株抗顺铂(DDP)诱导的细胞凋亡。结论通过检测负载NDRG2的HO-8910细胞裸鼠体内荷瘤试验,进一步证实NDRG2可以明显促进卵巢癌HO-8910细胞的增殖;通过检测转染NDRG2及空载体组卵巢癌细胞在DDP作用下的细胞凋亡情况,提示NDRG2基因可能通过减少DDP诱导的细胞凋亡而诱发化疗耐药。     

缺氧诱导因子-1对缺氧诱导肺泡上皮细胞凋亡的调控作用

[目的]探讨细胞凋亡在缺氧肺损伤的作用及缺氧诱导因子-lα（hypoxia inducible factor-lα, HIF-lα）对细胞凋亡的调控作用。[方法]体外培养大鼠肺泡上皮细胞加入氯化钴（cobalt chloride, COC12 ）制作细胞缺氧模型，将小分子干扰缺氧诱导因子-l（ HIF-lαsmall interference RNA, HIF-lαsiRNA）有效的转染至细胞内，检测常氧、缺氧4、24h、小分子干扰后缺氧4、24h后HIF—lαmRNA的表达水平变化，同时应用荧光显微镜以及流式细胞术检测非转染以及转染组不同缺氧时间细胞凋亡率的变化。[结果]常氧下HIF-lαmRNA表达水平较低，随缺氧时间增加HIF-lαmRNA的表达水平明显升高（P〈0．05）；HIF-lαsiRNA可有效沉默HIF-lα，下调率为56％、57％（P〈0．01）。细胞凋亡率随着缺氧时间延长而增加（P〈0．05），48h细胞开始出现坏死现象；通过HIF—lα预处理细胞后，可降低缺氧诱导的细胞凋亡的发生率（P〈0．05）。[结论]缺氧引起肺泡上皮细胞的凋亡，随缺氧时间增加凋亡增加，HIF-lα在缺氧诱导细胞凋亡中起着重要的作用，HIF-lαsiRNA可以减少肺泡上皮细胞凋亡的发生。     

黄连素与顺铂联合用药对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨黄连素与顺铂联合用药对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响。方法免疫荧光检测不同卵巢癌细胞株对黄连素和顺铂的敏感性;Western blotting检测对不同浓度黄连素和顺铂对抗凋亡蛋白BAG-3的影响;Transwell侵袭实验检测黄连素、顺铂对卵巢癌细胞SKOV3的侵袭能力的影响;平板克隆实验检测黄连素、顺铂对卵巢癌细胞SKOV3的侵袭能力的影响。结果相比A2780细胞株,SKOVE3受黄连素影响明显,25 ng/l浓度的黄连素对SKOV3细胞中BAG-3蛋白的抑制水平最佳;加入黄连素后卵巢癌细胞株SKOV3的侵袭和增殖能力明显降低。结论黄连素与顺铂联合用药可以抑制卵巢癌SKOV3细胞株的增殖和侵袭。     

信号转导和转录激活因子3及小凹蛋白1在X射线诱导肺腺癌A549细胞早衰中的调控关系研究

目的:探讨信号转导和转录激活因子3(STAT3)和小凹蛋白1(Cav-1)在X射线诱导A549细胞早衰过程中的调控关系,完善X射线诱导A549细胞早衰的分子机制。方法:利用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测不同肿瘤细胞A875、BGC-823、A549细胞和正常细胞株Hacat细胞中STAT3和Cav-1蛋白表达水平,并检测X射线照射和STAT3过表达及抑制剂处理后A549细胞中p53蛋白、Cav-1蛋白表达水平。结果:肿瘤细胞A875、BGC-823、A549细胞及正常细胞Hacat细胞中STAT3、Cav-1蛋白呈现阳性表达;X射线照射A549细胞后p53蛋白表达增加,STAT3过表达及活化可引起p53蛋白表达水平升高,同时抑制Cav-1蛋白的表达。结论:X射线诱导的A549细胞p53蛋白早衰通路部分依赖于STAT3激活,STAT3负向调控Cav-1蛋白表达。     

阿托伐他汀对人非小细胞肺癌A549细胞化疗敏感性的影响

目的 探讨阿托伐他汀对人非小细胞肺癌A549细胞化疗敏感性的影响.方法 人非小细胞肺癌A549细胞预先暴露于浓度为O、20、40 nmol/L阿托伐他汀的培养液中(对照组、20 nmol/L组、40 nmol/L组),实验重复3次,磺酰罗丹明B(SRB)法研究常用化疗药物紫杉醇、吉西他滨和顺铂对肿瘤细胞增殖的影响.结果 顺铂40 nmol/L组的半抑制浓度(IC50)显著低于对照组和20 nmol/L组[(1.37±0.10) mg/L比(1.89±0.06)、(1.81±0.04)mg/L,P＜0.01].紫杉醇和吉西他滨不同组间IC50比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 阿托伐他汀体外能增加人非小细胞肺癌A549细胞对顺铂的敏感性,合用有助于降低化疗的不良反应.