非诺贝特对人肺腺癌A549细胞迁移侵袭能力的影响

目的探讨过氧化物酶体增殖因子激活受体α激动剂非诺贝特对人肺癌A549细胞生长、迁移侵袭能力的影响及其可能机制。方法体外培养人肺癌A549细胞,分别用0、12.5、25、50、75、100μmol/L非诺贝特处理细胞,阴性对照组为0μmol/L非诺贝特浓度组;MTT法检测不同药物浓度作用下肺癌A549细胞的生长抑制情况;细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测非诺贝特对肺癌A549细胞迁移及侵袭运动能力的影响,RT-PCR法检测A549细胞中PPARα(Peroxisome Proliferator-Activated Receptors alpha)、MMP-2(Matrix Metalloproteinase-2)、MMP-9、Timp-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1)、Timp-2m RNA的表达情况。结果非诺贝特能够抑制A549细胞生长,呈时间-剂量关系(P0.05);细胞划痕实验及Transwell侵袭实验结果显示非诺贝特能够降低A549细胞的迁移侵袭能力;RT-PCR结果提示非诺贝特能够上调PPARα、Timp-1、Timp-2m RAN表达,下调MMP-2、MMP-9 m RNA表达,差异有统计学意义(P0.05)。结论非诺贝特能够抑制肺癌A549细胞生长、迁移及侵袭能力,其机制可能与PPARα、MMPs、Timps有关。     

长链非编码RNA MAPKAPK5-AS1对肺癌细胞的侵袭和凋亡的影响

目的研究长链非编码RNA(long ncRNA, lncRNA)MAPKAPK5-AS1对肺癌细胞的侵袭和凋亡的影响。方法 real-time PCR法筛选MAPKAPK5-AS1高表达和低表达肺癌细胞系,将MAPKAPK5-AS1过表达载体转染低表达细胞系,MAPKAPK5-AS1小干扰RNA (small interference RNA,siRNA)转染高表达细胞系,Western blot分别检测宿主基因MAPKAPK5和凋亡蛋白表达,transwell实验分析细胞侵袭能力。结果 MAPKAPK5-AS1在肺癌H2291细胞株和A549细胞株中高表达,而在H441细胞株中低表达。在H441细胞中过表达MAPKAPK5-AS1后, MAPKAPK5表达明显下降,侵袭能力明显增强(F=319.5,P0.01),凋亡蛋白Cleaved caspase 9的表达下降;而在H2291细胞和A549细胞中分别干扰MAPKAPK5-AS1表达后,MAPKAPK5表达明显升高,侵袭能力明显下降(F值分别为417.1、530.2,P0.01),凋亡蛋白Cleaved caspase 9的表达升高。结论 MAPKAPK5-AS1可能作为原癌基因通过调控宿主基因MAPKAPK5表达而增强肺癌细胞侵袭能力,同时抑制细胞凋亡。     

女性非小细胞肺癌潜在相关基因的生物信息学分析及功能预测

  目的  通过对女性非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)相关基因的生物信息学分析和功能预测，探讨女性NSCLC的发病机制和预后生物标志物。  方法  从基因表达综合数据库(Gene Expression Omnibus, GEO)下载女性NSCLC患者的数据，使用limma包鉴定差异表达基因(differentially expressed genes, DEGs)。对DEGs进行基因本体(Gene Ontology, GO)和Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)分析和构建蛋白质相互作用(protein-protein interaction, PPI) 网络分析。利用igraph包筛选关键DEG，利用Oncomine数据库及NSCLC细胞系验证关键DEGs的表达情况，并采用Log-rank检验分析关键DEGs的表达水平与女性NSCLC患者预后的关联。  结果  共筛选出500个DEGs，GO富集分析表明，DEGs主要参与细胞增殖、细胞迁移和细胞外结构组成(均有P < 0.05)。KEGG富集分析表明，这些途径主要与细胞外基质(extracellular matrix, ECM)受体相互作用、蛋白质消化吸收和白细胞跨内皮迁移信号有关。通过PPI网络分析得到3个关键DEGs:白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)、表皮细胞生长因子(epidermal growth factor, EGF)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-9, MMP-9)。Oncomine数据库分析和NSCLC细胞系结果显示NSCLC组织和细胞系中IL-6的表达较低，而EGF和MMP-9的表达较高。Log-rank检验表明IL-6(χ2= 6.90，P=0.009)和EGF(χ2= 7.73，P=0.005)表达与女性NSCLC患者预后有关。  结论  在女性NSCLC患者中，IL-6和EGF可能是NSCLC发病与预后机制中的重要基因，是治疗的潜在靶点。     

缺氧对肺癌细胞中lncRNA H19的表达及耐药机制的研究

目的 探索缺氧对非小细胞肺癌细胞株A549和H1650中长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA) H19表达的影响,并与顺铂耐药的关系。方法 在常氧和缺氧条件下对肺癌细胞A549和H1650采用qPCR检测lncRNA H19、HIF1-α、MRP1和HO-1 mRNA的表达;采用Western blot检测HIF1-α、MRP1、HO-1和P-gp的表达;并进行肿瘤细胞迁移和侵袭实验;采用Annexin V-APC和流式细胞仪检测顺铂诱导的细胞凋亡率。结果 在缺氧条件下非小细胞肺癌细胞株A549和H1650中lncRNA H19、HIF1-α、HO-1、MDR相关蛋白1和P-gp的表达水平升高。肿瘤细胞的侵袭和迁移能力增强,顺铂诱导的细胞凋亡减少。结论 缺氧增加非小细胞肺癌细胞株A549和H1650中lncRNA H19的表达水平,顺铂诱导的细胞凋亡减少,对顺铂产生耐药性。     

金属硫蛋白在肺癌细胞系中的表达及其临床意义

目的探讨肺鳞癌、腺癌中金属硫蛋白在肺癌细胞系中的表达。方法运用SP免疫组化方法检测检测肺癌细胞系的表达定位。结果 MT在肺癌细胞系A549、BE1表达,均为胞浆表达。在HBE为胞核表达。结论 MT在非小细胞肺癌转移起促进作用。     

沉默长链非编码RNA SPRY4-IT1对宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的探究长链非编码RNA SPRY4-IT1在宫颈癌中的表达水平及其对宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法 20对宫颈癌组织和癌旁组织取自2016年2月-2017年2月到该院就诊的20例宫颈癌患者,qRT-PCR检测长链非编码RNA SPRY4-IT1在宫颈癌组织和宫颈癌HeLa细胞中的表达水平;通过小RNA干扰技术检测沉默长链非编码RNA SPRY4-IT1,CCK-8实验检测沉默长链非编码RNA SPRY4-IT1对HeLa细胞增殖能力的影响;划痕愈合实验和Transwell迁移侵袭实验检测沉默长链非编码RNA SPRY4-IT1对HeLa细胞迁移及侵袭能力的影响。结果长链非编码RNA SPRY4-IT1的表达水平在宫颈癌组织和HeLa细胞中显著高于癌旁组织和人永生化表皮细胞HaCaT,差异有统计学意义(t=3.21,P0.01;t=4.58,P0.001)。HeLa细胞转染si-SPRY4-IT1 48 h后,HeLa细胞的增殖能力明显降低,差异有统计学意义(t=2.75,P0.01);迁移距离显著减少(t=4.19,P0.001);迁移和侵袭能力明显降低,差异有统计学意义(t=3.84,P0.001;t=3.96,P0.001)。结论长链非编码RNA SPRY4-IT1的表达水平在宫颈癌中显著上调,沉默长链非编码RNA SPRY4-IT1抑制HeLa细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

IL-1β诱导肺癌A549细胞CEA过表达对其浸润迁移的影响

目的 探讨IL-1β对肺腺癌A549细胞CEA表达的影响及IL-1β诱导的CEA对肺癌A549细胞迁移侵袭能力的影响. 方法 体外培养的A549细胞分别经IL-1β 50、100和200 ng/ml刺激24 h,Western-blot和免疫细胞化学方法检验CEA蛋白的表达;采用细胞Transwell实验和侵袭实验检测IL-1β诱导的CEA对肺癌A549细胞迁移和侵袭能力的影响. 结果 不同浓度的IL-1β (50、100、200 ng/ml)处理A549细胞后,CEA的表达量较空白对照组增高,且呈剂量依耐性(P＜0.05);Transwell试验中对照组、100 ng/ml IL-1β组和加兔抗人CEA多抗组穿过Transwell小室膜的细胞数分别为(52.8±5.5)、(117.2±12.2)和(83.6±5.2)个/视野,侵袭试验中对照组、100 ng/ml IL-1β组和加兔抗人CEA多抗组穿过Matrigel胶的细胞数分别为(37.4±6.1)、(92.6±6.7)和(47.8±6.4)个/视野,均为100ng/ml IL-1β组高于对照组(P＜0.05);加兔抗人CEA多抗组低于100 ng/ml IL-1β组(P＜0.05). 结论 IL-1β可能通过诱导CEA过表达,促进肺癌A549细胞的迁移和侵袭.     

抗菌肽merecidin通过ERK/mTOR 信号通路对肺癌A549细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 探讨抗菌肽merecidin通过ERK/mTOR 信号通路对肺癌A549细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法 实验分为对照组Control、抗菌肽Merecidin干预组和雷帕霉素Rapamycin干预组。通过CCK-8 法检测A549细胞的增殖能力,通过流式细胞术检测A549细胞凋亡和周期,通过平板划痕试验和Transwell检测A549细胞的迁移和侵袭能力,通过 Western blot 法检测A549细胞中MAPK1、MEK2、mTOR、PRAS40、EIF4EBP1 磷酸化蛋白的表达量。结果 抗菌肽merecidin能够明显抑制A549的增殖能力,处理24 h后的 IC50值为10.01 μmol /L(P<0.05)。与control组比较,抗菌肽merecidin处理后促进细胞凋亡(P<0.05),阻滞细胞周期于S期(P<0.05),细胞的迁移及侵袭能力均降低(P<0.05)。同时抗菌肽merecidin可抑制p-MAPK1和p-MEK2蛋白的表达,并且降低了mTOR、PRAS40和EIF4EBP1 的磷酸化水平(P<0.05)。结论 抗菌肽merecidin可抑制肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡,阻滞细胞周期于S期,该作用可能与其抑制ERK/mTOR通路有关。     

人乳铁蛋白提高H460细胞放射敏感性的初步研究

目的 观察hLF对于人非小细胞肺癌H460细胞辐射敏感性的影响。方法 用pBC1-hLF载体转染H460细胞,同时以hLF标准品处理为参照,细胞活力实验、克隆形成试验和流式检测细胞凋亡来观察hLF基因高表达对H460细胞生长特性和辐射敏感性的影响。结果 hLF基因高表达可以显著抑制H460的生长(P<0.01),提高其对射线的敏感性,hLF处理组与pBC1-hLF转染组辐射增敏率分别为1.29和1.59。hLF可促进H460细胞自发和受照后的凋亡,降低克隆形成能力(P<0.01)。结论 hLF基因高表达可以体外显著抑制人非小细胞肺癌H460细胞的生长,提高其辐射敏感性。     

Smac对子宫内膜癌细胞增殖及侵袭能力的影响

目的 研究Smac高表达对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。方法 选择Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-A细胞(低分化腺癌细胞、雌激素受体阴性),应用脂质体法将Smac的过表达质粒pcDNA3.1-Smac转染HEC-1-A细胞,实验分为Smac过表达组、空载体组和空白对照组。应用qRT-PCR和Western blot法检测转染后Smac mRNA及蛋白表达情况。CCK-8法检测过表达Smac对细胞增殖能力的影响。Transwell小室侵袭及迁移实验观察细胞侵袭及迁移能力的变化。结果 Smac过表达组Smac mRNA及蛋白表达比空载体组和空白对照组明显增加(F=172.065,P=0.001;F=697.953,P=0.001)。过表达Smac后,HEC-1-A细胞增殖能力明显减弱(P<0.05)。侵袭及迁移实验结果显示,与空载体组比较,Smac过表达组穿膜细胞数均明显减少(t=9.082,P=0.016;t=6.241,P=0.013)。结论 过表达Smac可明显抑制HEC-1-A细胞的增殖,并显著减弱细胞的侵袭及迁移能力,Smac可为Ⅱ型子宫内膜癌的靶向治疗提供新的研究方向。     

水通道蛋白1及水通道蛋白4在人肺腺癌细胞株中的表达及意义

目的 探讨水通道蛋白(AQP)1及AQP4在人肺腺癌H1299细胞株中的表达及其临床意义.方法 采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot技术检测AQP1及AQP4在人肺腺癌H1299细胞株(肺腺癌组)中的表达,进一步通过Matrigel invasion assay观察肿瘤细胞的迁移情况.取癌周正常肺组织(距癌缘＞3 cm,病理证实无肿瘤细胞)作为对照组.结果 RT-PCR结果显示,对照组中的AQP1、AQP4 mRNA相对表达量分别为1.030±0.070和1.140±0.190;而肺腺癌组中的AQP1、AQP4 mRNA相对表达量分别为2.021±0.250和2.180±0.180.与对照组比较,肺腺癌组中的AQP1、AQP4表达均明显增强(P＜0.05).Western blot结果显示,对照组中的AQP1和AQP4 mRNA仅有极低表达,而在肺腺癌组中有较强表达(P＜ 0.05);Matrigel invasion assay显示肺腺癌细胞迁移能力与AQP1及AQP4的表达呈正相关(r=0.351,P＜0.05).结论 AQP1及AQP4在人肺腺癌H1299细胞株中有较明显的增强表达;AQP1及AQP4在肺腺癌细胞迁移中均起着重要的促进作用.     

Differential Effect of Grape Seed Extract against Human Non-small-Cell Lung Cancer Cells: The Role of Reactive Oxygen Species and Apoptosis Induction

The present study examines grape seed extract (GSE) efficacy against a series of non-small-cell lung cancer (NSCLC) cell lines that differ in their Kras and p53 status to establish GSE potential as a cytotoxic agent against a wide range of lung cancer cells. GSE suppressed growth and induced apoptotic death in NSCLC cells irrespective of their k-Ras status, with more sensitivity toward H460 and H322 (wt k-Ras) than A549 and H1299 cells (mutated k-Ras). Mechanistic studies in A549 and H460 cells, selected, based on comparative efficacy of GSE at higher and lower doses, respectively, showed that apoptotic death involves cytochrome c release associated caspases 9 and 3 activation, and poly (ADP-ribosyl) polymerase cleavage, strong phosphorylation of ERK1/2 and JNK1/2, downregulation of cell survival proteins, and upregulated proapoptotic Bak expression. Importantly, GSE treatment caused a strong superoxide radical-associated oxidative stress, significantly decreased intracellular reduced glutathione levels, suggesting, for the first time, the involvement of GSE-caused oxidative stress in its apoptotic inducing activity in these cells. Because GSE is a widely-consumed dietary agent with no known untoward effects, our results support future studies to establish GSE efficacy and usefulness against NSCLC control.     

血管细胞粘附分子1在分化型甲状腺癌中的表达及临床意义

目的:检测血管细胞粘附分子1(VCAM1)在分化型甲状腺癌(DTC)中的表达情况,观察过表达VCAM1甲状腺细胞的侵袭和迁移能力。方法:收集医院收治的60例DTC患者临床资料,按照VCAM1蛋白表达情况将其分为阳性组(39例)和阴性组(21例)。对两组患者DTC组织及癌旁甲状腺组织分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法、蛋白免疫印迹和免疫组织化学法检测DTC组织及癌旁甲状腺组织VCAM1mRNA和蛋白表达情况,对比DTC组织中不同病理分级、肿瘤大小及预后的蛋白表达阳性及阴性表达情况。采用慢病毒转染法建立过表达甲状腺细胞系FTC-133-VCAM1、空载细胞系FTC-133-control,采用Transwell小室及划痕试验检测并对比FTC-133、FTC-133-VCAM1及FTC-133-control细胞系的穿膜细胞数及迁移率。结果:DTC组织与癌旁甲状腺组织比较,VCAM1mRNA和蛋白相对表达量较高,差异均有统计学意义(t=43.724,t=44.423;P<0.05);DTC组织VCAM1阳性表达构成比为65.00%,高于癌旁甲状腺组织(13.33%),差异有统计学意义(χ²=33.611,P<0.05);阳性组存在淋巴结转移、复发及死亡患者占比分别为33.33%、17.95%和15.38%,显著高于阴性组,差异均有统计学意义(χ²=4.127,χ²=4.065,χ²=3.867;P<0.05);FTC-133-VCAM1细胞与FTC-133、FTC-133-control细胞相比,穿膜细胞数及迁移率较高,差异均有统计学意义(t_{穿膜细胞数}=5.107,t=5.440;t_迁移率=14.108,t=13.387;P<0.05)。结论:VCAM1在DTC中异常高表达,且与淋巴结转移及预后关系密切,推测与VCAM1高表达增强癌细胞侵袭及迁移能力有关。     

GP73表达调控的肝癌细胞模型的筛选和构建

目的筛选合适的细胞株构建干扰和过表达GP73的肝癌细胞模型,为进一步深入研究GP73调控肝癌的机制提供合适的细胞模型。方法挑选8株肝癌细胞:Huh-7、Hep3B、MHCCLM3、MHCC97-L、MHCC97-H、SNU-449、SNU-398、SNU-182,采用qPCR和Western Blot验证GP73的表达,根据结果确定一株肝癌细胞进行干扰和过表达GP73的研究。Transwell实验观察过表达GP73对选取的细胞株迁移、侵袭能力的影响。结果选用Hep3B细胞株进行干扰和过表达GP73,qPCR和Western Blot结果表明干扰组和过表达组的GP73表达和对照组比较均有显著差异(P<0.05);Transwell实验显示,过表达GP73能够明显促进Hep3B细胞的迁移和侵袭(P<0.05)。结论干扰和过表达GP73的Hep3B细胞模型构建成功,为GP73调控肝癌的机制研究提供了可靠的研究模型,为后续研究提供了研究基础。     

姜黄素通过上调miR-637抑制肾癌786-O细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨姜黄素对肾癌786-O细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其可能的分子机制。方法 体外培养人正常肾小管上皮细胞HK-2和肾癌786-O细胞,将786-O细胞分为对照组、低剂量姜黄素组、中剂量姜黄素组、高剂量姜黄素组、miR-NC组、miR-637组、高剂量姜黄素+anti-miR-NC组、高剂量姜黄素+anti-miR-637组。分别进行实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、MTT、Transwell和蛋白质印迹（Western blot）实验来检测各组的miR-637表达量、细胞活力、迁移侵袭能力和相关蛋白表达水平。结果 与人正常肾小管上皮细胞HK-2比较,肾癌786-O细胞中miR-637的表达水平降低（P<0.05）。与对照组比较,中、高剂量姜黄素组786-O细胞的活力、迁移和侵袭细胞数、CyclinD1、MMP-2及MMP-9表达水平均显著降低,p21表达显著升高,miR-637的表达水平均显著升高（均P<0.05）。与miR-NC组比较, miR-637组的miR-637表达水平提高,miR-637组的细胞活力、迁移和侵袭细胞数、CyclinD1、MMP-2和MMP-9表达均显著降低,p21表达升高（均P<0.001）。与高剂量姜黄素+anti-miR-NC组比较,高剂量姜黄素+anti-miR-637组的miR-637表达水平降低,786-O细胞的活力、迁移和侵袭细胞数、CyclinD1、MMP-2和MMP-9表达均升高,p21表达降低（均P<0.05）。结论 姜黄素可能通过上调miR-637发挥肾癌抑制作用。     

NRP-1在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探讨nueropilin-1（NRP-1）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及临床意义。方法应用免疫组化SP法检测68例NSCLC及癌旁组织中NRP-1的表达,分析其表达与NSCLC临床病理参数之间的关系。结果 NSCLC组织中NRP-1阳性表达率明显高于癌旁组织（P〈0.05）。NRP-1在NSCLC组织中的表达与肿瘤直径、P-TNM分期及淋巴结转移密切相关（P〈0.05）。结论 NRP-1过度表达在NSCLC发生、发展过程中起重要作用,可能与NSCLC发生侵袭和转移密切相关。     

趋化因子CXCL12对卵巢癌细胞侵袭和转移的作用及机制研究

目的 研究趋化因子CXCL12对卵巢癌细胞侵袭和转移的作用及机制.方法 采用RT-PCR检测20例上皮性卵巢癌组织、卵巢癌细胞株CAOV3、血管内皮细胞株HUVEC和20例正常卵巢组织中CXCL12的mRNA表达及卵巢癌腹膜后淋巴组织和输卵管平滑肌组织中CXCL12的表达,ELISA法检测20例卵巢癌患者腹水中趋化因子CXCL12表达水平,比较不同浓度CXCL12对CAOV3及HUVEC细胞迁移能力及其表面相关黏附分子表达水平的影响.结果 20例卵巢癌组织、卵巢细胞CAOV3、内皮细胞HUVEC、转移的淋巴组织中CXCL12mRNA相对表达量分别为2.41±1.05、1.92±1.17、1.73±1.12、1.68±1.13,而正常组未检出,各组比较有显著性差异(F=2.907,P=0.032).20例卵巢癌患者腹水中有19例检测到趋化因子CXCL12,检出率95.0%,CXCL12水平为(6 552.7±476.5)pg/mL.与对照组相比,CAOV3细胞经CXCL12处理后,与细胞外基质的粘附能力相对粘附率由(22.65±2.3)%上升至(51.47±2.7)%(t=4.696,P<0.05).卵巢癌细胞株CAOV3与内皮细胞HUVEC中,加入CXCL12处理后,经Tramswell法检测,结果显示细胞数显著增加(t值分别为3.326、3.897、3.215、3.168,均P<0.05),提示细胞的侵袭与迁移能力明显增强,其中浓度为100ng/mL的趋化活性最高,CAOV3 与HUVEC细胞趋化指数分别为4.0±1.5、4.3±1.7,对照组趋化指数分别为1.1±0.5、1.2±0.6,比较差异有统计学意义(t值分别为2.687、2.938,均P<0.05).结论 趋化因子CXCL12通过调控卵巢癌细胞的黏附、侵袭和转移能力,进而提高CAOV3、HUVEC细胞活性,参与卵巢癌细胞的侵袭和转移.