刺五加注射液中过敏性杂质的分析

 目的探索刺五加注射液中的过敏性杂质,建立相应的检查方法。方法针对刺五加注射液"水煮醇沉"工艺的特点提取刺五加抗原,采用豚鼠被动皮肤免疫(PCA)实验寻找刺五加注射液中的过敏性杂质,用间接ELISA法检测过敏性杂质。结果PCA实验证实,ELISA法阳性刺五加注射液可以引发刺五加抗原致敏豚鼠的速发型过敏反应;采用间接ELISA法检测刺五加注射液中的过敏性杂质,其灵敏度为0.5 mg·L^-1,线性范围为4～128 mg·L^-1(r²=0.9988),平均加样回收率为86.3%;对92批市场流通样品进行了测定,8批(8.7%)检出过敏性杂质;经超滤处理后,样品的ELISA实验呈阴性,而其UFLC分析显示,超滤前后药物中的HPLC图谱没有变化。结论本实验结果表明,药材中的植物蛋白等过敏性杂质可能会残留到注射液中导致过敏反应的发生,间接ELISA法可用于测定刺五加注射液中的过敏性杂质;超滤技术可以去除刺五加注射液中的过敏性杂质。     

双黄连注射液对致敏RBL-2H3细胞组胺释放的影响

目的：建立致敏RBL-2H3细胞模型,观察双黄连注射液对其组胺释放的影响,探讨该模型用于体外评价中药注射剂致敏性的可行性。方法：双黄连注射液联合弗氏佐剂免疫Wistar大鼠,收集致敏后大鼠血清,将其与体外培养RBL-2H3细胞孵育12h,建立致敏RBL-2H3细胞模型,双黄连注射液与致敏RBL-2H3细胞共培养1.5h,ELISA法检测培养上清中组胺含量。结果：双黄连注射液致敏大鼠血清IgE水平明显升高,与对照组相比P〈0.05,差异有统计学意义。组胺实验结果显示,双黄连注射液可显著引起致敏RBL-2H3细胞组胺释放,与对照组相比P〈0.05,差异有统计学意义。结论：双黄连注射液可促进致敏RBL-2H3细胞释放组胺,提示RBL-2H3细胞模型具有评价中药注射液所致过敏反应的潜在应用价值     

3种中药注射液的过敏性试验研究△

目的：观察热毒宁注射液（市售药品）、注射用活血通络（HXTL）和注射用芪红脉通（QHMT）是否具有过敏性反应;并观察HXTL和QHMT经过超滤处理前后的过敏阳性发生率j方法：按照《中药、天然药物免疫毒性（过敏性、光变态反应）研究的技术指导原则》的试验方法对3种中药注射液进行豚鼠全身过敏反应（ASA）和大鼠被动皮肤过敏（PCA）试验研究。结果：3种注射液ASA均呈阴性;热毒宁注射液PCA呈阴性;未超滤HXTL（110101）PCA为阳性,超滤HXTL（110602）PCA为阴性;未超滤QHMT（110301）PCA为阳性,超滤QHMT（110701）PCA为阴性。结论：热毒宁注射液过敏反应结果提示其安全可靠;HXTL和QHMT注射液经超滤处理后PCA的阳性发生率下降。     

常用中药注射剂致敏性研究

目的：研究中药注射剂的过敏反应,测定致敏动物血清免疫球蛋白（IgE）抗体含量,观察其与过敏反应是否具有相关性,为提高过敏反应实验预测的准确性提供实验依据。方法：选用多种中药注射剂进行被动皮肤过敏实验（PCA）实验和类过敏反应研究,用ELISA 法对致敏动物血清进行血清IgE 水平检测。结果：双黄连注射液（SHL）、清开灵注射液（QKL）、鱼腥草注射液（YXC）、血塞通注射液（XST）、葛根素注射液（GGS）、穿琥宁注射液（CHN）的PCA 实验结果均为阴性,刺五加注射液（CWJ）的PCA 实验结果为阳性。SHL、QKL、YXC、XST、GGS、CHN、CWJ 注射液组血清总IgE 水平与生理盐水组无明显差异;SHL、QKL、YXC、XST、GGS、CHN、CWJ 注射液均引起了豚鼠的类过敏症状。结论：SHL、QKL、YXC、XST、GGS、CHN、CWJ 均能引起豚鼠的类过敏反应,其过敏反应的发生与血清IgE 抗体水平无相关性。     

BN大鼠用于评价中药注射液速发型过敏反应模型的建立及适用性评价

以清开灵注射液、双黄连注射液、黄芩苷、绿原酸为受试样本,以豚鼠为对照,通过观察BN大鼠(brown norway rats)过敏反应的特异性来建立中药注射液速发型过敏反应的动物模型,并对两者在评价中药注射液过敏反应中的适用性进行比较.本研究以中药注射液为致敏原,直接对BN大鼠进行致敏和攻击后,通过观察过敏症状、过敏反应率、过敏反应程度、组胺释放量、靶器官病变率和病变程度的变化,来评价BN大鼠过敏反应动物模型.结果显示中药注射剂致敏后,BN大鼠出现明显的过敏症状、血清和组织中组胺含量明显增加,肺组织和气管出现明显的病理改变,同时以青霉素和天花粉蛋白为阳性对照,也出现速发型过敏反应的表现;BN大鼠的过敏反应发生率、过敏反应程度、靶器官病变率和病变程度均显著高于豚鼠.试验结果说明BN大鼠为评价中药注射液过敏反应的适宜动物模型,且其敏感性高于豚鼠.     

仙蓟化斑胶囊对肥大细胞脱颗粒及组胺释放影响的研究

[目的]研究仙蓟化斑胶囊抗变态反应的作用机制,为后期实验及其临床治疗过敏性紫癜提供依据。[方法]制备致敏的大鼠及抗卵蛋白血清,给予不同浓度药物,采用大鼠被动皮肤过敏反应(PCA)实验,测定大鼠皮肤蓝斑直径,同时采用大鼠颅骨骨膜肥大细胞脱颗粒实验、大鼠肥大细胞释放组胺实验,测定脱颗粒百分率和组胺释放水平。[结果]仙蓟化斑胶囊可使蓝斑直径变小、可降低肥大细胞脱颗粒百分率、降低其组胺释放,并呈明显的剂量依赖关系。[结论]仙蓟化斑胶囊有抗变态反应的作用,明显抑制PCA、肥大细胞脱颗粒及组胺的释放。     

若干药物的大鼠皮肤类过敏试验

目的考察和评价10种造影剂、中药注射剂和化学合成药的大鼠皮肤类过敏试验方法的适用性。方法大鼠皮内注射受试药物后立即尾静脉注射0.5%伊文思蓝染液,15 min后处死,测量蓝斑直径。设定蓝斑直径>0.5 cm为类过敏反应阳性。结果临床剂量下,碘海醇、复方泛影葡胺注射液、双黄连、生脉、脉络宁和喜炎平注射液出现类过敏反应阳性,而碘普罗胺注射液、清开灵和金纳多注射液呈类过敏反应阴性;高于临床剂量时,上述受试药物除清开灵外,均为类过敏反应阳性。盐酸川芎嗪在临床剂量和临床2倍剂量下类过敏反应均为阴性。结论蓝斑直径与给药剂量有关,大鼠皮肤类过敏试验方法可作为初步评价注射类药物临床前类过敏性的一种简便、快速的检测方法。     

绿原酸致过敏反应的实验研究

目的研究绿原酸的致敏性。方法将实验动物分为阴性对照组、阳性对照组（卵清蛋白）、绿原酸组,通过大鼠皮肤被动过敏反应（PCA）试验和豚鼠主动全身过敏反应（ASA）试验对绿原酸的致敏性进行研究。结果PCA试验为阴性,ASA试验为阳性。结论绿原酸为潜在的过敏原。     

清开灵注射液的过敏性研究

目的:研究清开灵注射液在皮肤被动过敏试验(PCA)中是否有过敏反应。方法:按照《中药、天然药物免疫毒性(过敏性、光变态反应)研究的技术指导原则》的试验方法对清开灵注射液进行皮肤被动过敏试验。结果:清开灵注射液高剂量组均出现过敏反应;低剂量组中1∶2出现过敏反应,1∶8未出现过敏反应。结论:清开灵注射液大鼠皮肤被动过敏性试验研究结果与临床实际使用有较好的相关性。     

大鼠主动全身过敏试验方法的探讨

目的建立大鼠主动全身过敏试验模型,评价中药注射剂过敏反应。方法选用豚鼠和BN、F344、SD、Wistar4种品系大鼠,以卵白蛋白(OVA)、天花粉蛋白(TCS)、清开灵注射液、注射用灯盏花素为受试物,分别隔日腹腔注射致敏,共3次,于末次致敏后第14天静脉注射2倍致敏剂量激发。同时设生理盐水对照组。观察各组动物的过敏反应发生率及过敏反应症状。结果阳性药卵白蛋白和天花粉蛋白可引起豚鼠和大鼠发生过敏反应,发生率均为100%,豚鼠发生的过敏反应症状程度略高于大鼠。清开灵注射液可引起豚鼠和BN大鼠发生过敏反应,发生率分别为50%和100%。注射用灯盏花素导致F344、BN和SD大鼠发生过敏反应,发生率分别为100%、100%、83.33%,且F344大鼠呈现强阳性反应,而豚鼠则呈现阴性反应。结论大鼠可推荐作为主动全身过敏试验的动物模型之一,对致敏原的敏感性在动物不同品系间可能存在差异。     

刺五加与五味子合用对小鼠镇静催眠作用的研究

目的:研究刺五加与五味子合用后对小鼠的镇静催眠作用。方法:采用阈上和阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠法,对刺五加和五味子单用及合用的镇静催眠作用进行比较研究。应用戊巴比妥钠所致小鼠睡眠的方法,研究刺五加和五味子改善睡眠作用的量效关系。结果:刺五加可以延长睡眠时间(P<0.01),起效剂量为16g/kg,起效范围为16～128g/kg,其中剂量为64g/kg时效果最为显著。五味子可以缩短睡眠潜伏期(P<0.05),起效剂量为3g/kg,起效范围为3～12g/kg,其中剂量为12g/kg时效果最为显著。与空白组相比,刺五加与五味子合用组可显著缩短戊巴比妥钠小鼠的入睡潜伏期(P<0.01)并能延长其睡眠时间(P<0.01),能明显增加阈下剂量戊巴比妥钠小鼠的入睡率(P<0.05)。其作用优于单用刺五加组和单用五味子组。结论:刺五加与五味子合用具有镇静催眠的作用。     

基于UPLC-MS的代谢谱区分生长在中国东北地区植物刺五加多样性的研究(英文)

刺五加主要分布于中国东北地区,在临床和制药行业具有广泛应用。由于受到野生资源量的限制,必须加快刺五加的品系繁育和人工栽培。本研究采用主成分分析、偏最小二乘-判别分析和正交偏最小二乘-判别分析及代谢标识物鉴别相结合的最新研究技术,对不同性别类型的中药刺五加进行区分,力求解决中药材刺五加遗传背景复杂、不同性别类型药材的鉴别困难的问题。结果发现11个次生代谢产物贡献于两个不同性别类型的刺五加,可视为区分刺五加性别类型的生物标记物。这些生物标记物主要包括黄酮、香豆素、萜类和有机酸类,它们均是与刺五加治疗作用相关的主要活性成分。在这些有重要价值的次生代谢物中,黄酮、蒽醌和有机酸在短花丝类型刺五加中高表达,而香豆素、萜类在长花丝类型中高表达。因此,通过监测这些高表达的代谢物,可选择性地栽培具有较高药用相关成分的刺五加。     

刺五加果实及种子内源萌发抑制物质活性的研究

目的 :通过对刺五加果实及种子内源萌发抑制物质的研究 ,探讨了刺五加种子休眠的原因。方法 :制备刺五加果实的各部分及种子的粗提物 ,并测定其活性 ;制备刺五加中果皮的乙醚提取液并进行纸层析 ,然后测定各区段的活性。结果和结论 :首次证明了刺五加果实及其外果皮、中果皮、种子中均含有一定活性的内源抑制物质。外果皮、中果皮、种子中所含的内源抑制物质对白菜种子萌发的抑制活性高于对白菜幼根生长抑制活性 ,刺五加中果皮乙醚提取物纸层析在Rf 0.l区段对白菜种子萌发和白菜幼根生长有最强抑制 ,刺五加果实粗提物能抑制小麦种子萌发过程中α-淀粉酶活性 ,且在一定浓度范围内对小麦种子萌发及幼苗生长也有明显抑制作用 ,随粗提物浓度增大抑制活性明显增强。刺五加果实和种子中活性较高的内源抑制物质与刺五加种子的深沉休眠特性密切相关。     

氮、磷、钾和微量元素对栽培刺五加药材质量影响的研究

目的探讨植物生长营养元素对刺五加药材质量的影响。方法生长季节叶面喷施大量元素N、P、K及微量元素Fe2+、Mn2+、Cu2+、Zn2+和B,采用高效液相色谱法测定营养元素对刺五加根和茎中刺五加苷B、刺五加苷E、绿原酸、异秦皮啶含量。结果磷元素有增加刺五加苷B的趋势;磷、钾、铁、铜和硼可提高刺五加根中苷E的含量,且又随用量增加有提高的趋势,但对刺五加茎的影响较小。结论本研究可为刺五加GAP规范化种植和栽培提供参考。     

刺五加中紫丁香苷的制备及其含量测定

目的:首先对刺五加中有效成分紫丁香苷进行了提取分离和结构鉴定,自制定量用的紫丁香苷标准品。方法:建立了刺五加中紫丁香苷的反相高效液相色谱定量法:以甲醇-乙腈-水-冰醋酸(14∶1∶85∶1,v∶v∶v∶v)为流动相,检测波长270nm。结果:紫丁香苷在1.24~31.0μg/mL质量浓度内线性关系良好(r=0.9997),平均回收率为100.1%(RSD 2.2%)。结论:该法简便快速,结果准确可靠。该方法可作为刺五加质量控制的手段之一。     

不同产地种质和环境对刺五加药材质量影响的研究

目的：探讨种质和产地环境对刺五加药材质量的影响。方法：将我国东北11个不同产区种质种植在同一产地、同一产地种质种植11个不同产地,采用高效液相色谱法以刺五加苷B和刺五加苷E的含量为指标评价不同刺五加药材质量。结果：同产地不同种群的种质对刺五加药材质量的影响较大,而不同产地种质对药材质量影响较小;刺五加质量受环境影响较大,存在适宜产地的边缘效应。结论：在黑龙江省北部和辽宁省南部山区种植刺五加在某种程度上可提高药材质量。     

刺五加经发酵炮制后对小鼠抗应激作用的对比研究

目的:探讨刺五加经发酵炮制后对小鼠抗应激作用。方法:采用常压耐缺氧试验、低温冷冻试验、负重游泳试验及耐高温试验等实验方法,以小鼠存活时间为指标,开展刺五加经发酵炮制后对小鼠在冷、热、疲劳、缺氧等应激环境下的生存影响的实验研究。结果:与刺五加组比较刺五加发酵组可延长缺氧存活时间、低温存活时间、高温存活时间及游泳持续时间,其中延长游泳持续时间具有极显著性差异(P0.01)、缺氧存活时间、低温存活时间具有显著性差异(P0.05),高温存活时间虽有延长但无统计意义。结论:刺五加经发酵炮制后可延长小鼠在冷、热、疲劳、缺氧等应激环境下的生存时间。     

Protective effect of Acanthopanax senticosus extract against endotoxic shock in mice

AIM OF THE STUDY: In this study, we evaluated protective effect of Acanthopanax senticosus extract (ASE) and a possible signaling pathway involved during endotoxic shock induced by intraperitoneal injection lipopolysaccharide (LPS) and D-galactosamine (D-GalN) in BALB/c mice. MATERIALS AND METHODS: Mice were intraperitoneal administrated with ASE (100, 200 or 400mg/kg) prior to injection of 50 microg/kg LPS and 1g/kg D-GalN. The levels of tumor necrosis-alpha (TNF-alpha) and interleukin-10 (IL-10) in serum and liver. Nitric oxide (NO) production in serum and inducible nitric oxide synthase (iNOS) protein level were investigated. Nuclear factor-kappa B (NF-kappaB) activation in liver was determined. Furthermore, we evaluated the effect of ASE pretreatment on infiltration of inflammatory cells into the heart, liver and lung of mice. RESULTS: Treatment of mice with ASE prior to LPS/D-GalN injection significantly improved the survival rate. ASE pretreatment inhibited the elevation of TNF-alpha in serum and liver. ASE also decreased iNOS level in liver and the overproduction of nitric oxide (NO) in serum. In addition, IL-10 levels in serum and liver were markedly enhanced. ASE pretreatment inhibited NF-kappaB activation in liver of mice. Moreover, infiltration of inflammatory cells into the heart, liver and lung of mice was also attenuated by ASE pretreatment. CONCLUSIONS: These results suggested that ASE protected mice against LPS/D-GalN-induced endotoxic shock involving inhibition of NF-kappaB activation, which caused down-regulation of TNF-alpha and involved up-regulation of IL-10. Acanthopanax senticosus may thus prove beneficial in the prevention of endotoxic shock.     

刺五加水煎液合并DA受体拮抗剂改善小鼠睡眠作用的实验研究

目的:探讨刺五加水煎液改善小鼠睡眠作用的机制。方法:采用酶联免疫吸附法,观察刺五加水煎液(32g.kg-1)对小鼠脑内多巴胺(DA)含量的影响。应用戊巴比妥钠致小鼠睡眠的实验方法,观察小鼠给予阈下剂量刺五加水煎液合并多巴胺D1受体拮抗剂SCH23390,以及刺五加水煎液合并多巴胺D2受体拮抗剂氟哌啶醇(Haloperidol)后小鼠睡眠潜伏期和睡眠时间。结果:刺五加水煎液对小鼠全脑DA的含量与空白组相比无显著性差异(P0.05)。与空白组比较,给予阈下剂量刺五加水煎液(8g.kg-1)合并阈下剂量SCH23390(7μg.kg-1)可显著性延长小鼠的睡眠时间(P0.01)和缩短睡眠潜伏期(P0.01);给予阈下剂量刺五加水煎液(8g.kg-1)合并阈下剂量Haloperidol(0.7mg.kg-1)也可显著性延长小鼠的睡眠时间(P0.01)和缩短入睡潜伏期(P0.01)。结论:刺五加水煎液改善睡眠的作用可能是通过与多巴胺D1和D2受体拮抗剂的协同作用而产生的。     

Effect of Acanthopanax senticosus on 5-hydroxytryptamine synthesis and tryptophan hydroxylase expression in the dorsal raphe of exercised rats

Acanthopanax senticosus Harms (AS) is classified into the family of Araliaceae. The plant has been used as an analeptic aid, which improves weakened physical status and strength. Serotonin (5-hydroxytryptamine, 5-HT) is an important neurotransmitter and tryptophan hydroxylase (TPH) catalyzes the rate-f the raphe nuclei. These are associated with "central fatigue hypotheses" in the brain. In the present study, the effects of Acanthopanax senticosus on the time to exhaustion by treadmill exercise and on 5-HT synthesis and TPH expression in the dorsal raphe were investigated by immunohistochemistry. In the present results, Acanthopanax senticosus increased the time to exhaustion by treadmill running and it suppressed the exercise-induced increase of 5-HT synthesis and TPH expression. Acanthopanax senticosus was effective as caffeine for increasing the exhaustion time in treadmill running and for reducing the exercise-induced increase of 5-HT synthesis and TPH expression in the dorsal raphe. The present study shows that Acanthopanax senticosus reduces fatigue during exercise by the inhibition of exercise-induced 5-HT synthesis and TPH expression in the dorsal raphe.