p73基因在人非小细胞肺癌组织中的表达

目的　研究人非小细胞肺癌中p73基因的mRNA表达状况 ,并探讨其表达水平与肿瘤各项临床病理指标间的相关性。方法　应用半定量RT PCR方法检测人非小细胞肺癌组织、相应癌旁肺组织及远癌肺组织中p73的mRNA表达。结果　p73基因的表达水平及表达阳性率在肺癌组织中为 87.5 % (2 8/32 )明显高于相应的癌旁肺组织和远癌肺组织 (P <0 .0 1) ;不同临床病理学类型、分化程度及TNM分期的肺癌组织间p73mRNA的表达差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　p73基因在人非小细胞肺癌组织中的表达显著上调。     

肺癌中细胞凋亡水平和p73基因的转录表达的研究

目的：通过观察肺癌癌组织,对应癌旁组织和远癌肺组织中细胞凋亡及p73基因转录表达水平的变化,探讨细胞凋亡及P73基因转录表达水平与肺癌发生,发展的关系。方法：采用TUNEL及RT－PCR技术检测32例非小细胞肺癌癌组织,癌旁组织和7例肺良性病变组织,以及对应正常肺组织细胞凋亡和P73 mRNA的表达水平,并结合临床病理学资料进行统计学分析,结果：（1）肺癌组织中的凋亡指数明显高于癌旁肺组织和远癌肺组织（P＜0．01）,细胞凋亡水平与肺癌组织学类型,分化程度和P－TNM分期无明显关系（P＞0．05）;（2）肺癌组织中p73 mRNA表达水平和表达率明显高于癌旁肺组织,远癌肺组织和肺良性病变组织（P＜0．01）;（3）组织中凋亡指数的升高和P73基因转录表达水平的增加呈显著的正相关（P＜0．01）。结论：肺癌组织中存在细胞凋亡水平的升高和P73基因的过度转录表达。     

miRNA-203a及其靶基因P63在银屑病不同时期的表达分析

目的探讨mi R-203a、p63亚基TAp63和ΔNp63m RNA及其蛋白在寻常型银屑病不同发展时期皮损组织中的表达情况。方法收集寻常型银屑病进行期、静止期和退行期皮损组织共30例、皮损旁组织15例和正常皮肤组织15例,通过Real time PCR技术检测mi R-203a、ΔNp63和TAp63 m RNA在银屑病不同发展时期皮损组织、皮损旁组织和对照组中的表达情况。免疫组化法检测ΔNp63蛋白在银屑病不同发展时期皮损组织、皮损旁组织和对照组中的表达情况。银屑病不同发展时期皮损组织中mi R-203a与p63m RNA相关性采用Pearson相关分析。结果 RT-PCR结果显示mi R-203a在不同发展时期的银屑病皮损及皮损旁正常组织中表达上调(P0.05)。ΔNp63m RNA在不同发展时期银屑病皮损组织表达上调(P0.05),TAp63 m RNA在银屑病不同发展时期皮损组织表达降低(P0.05)。免疫组化结果显示,ΔNp63蛋白在寻常型银屑病的进行期和退行期中表达上调(P0.05)。银屑病不同发展时期皮损中mi R-203a与ΔNp63m RNA表达呈正相关(r=0.30,P0.05),mi R-203a与TAp63 m RNA表达呈负相关(r=-0.37,P0.05)。结论 mi R-203a、p63及其亚基ΔNp63和TAp63在银屑病的发病机制可能发挥着重要的调节作用。     

ΔNp63上调3-羟-3-甲戊二酸单酰辅酶A还原酶表达促进食管鳞状细胞癌细胞增殖及迁移

目的 探讨N端转录活性域缺失的肿瘤蛋白p63(ΔNp63)调控食管鳞状细胞癌细胞增殖及迁移的分子机制.方法 以人食管鳞状细胞癌细胞ECA109为模型,通过慢病毒介导的转基因在细胞中过表达ΔNp63.通过定量PCR及蛋白质印迹法检测3-羟-3-甲戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)表达水平,通过染色质免疫沉淀(ChIP)和萤光素酶报告实验检测ΔNp63蛋白与HMGCR基因5'-非翻译区的结合;在细胞中过表达ΔNp63同时利用RNA干扰抑制HMGCR表达后,通过CCK-8检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell实验检测细胞迁移情况.结果 ECA109细胞中过表达ΔNp63后,HMGCR的mRNA和蛋白质表达水平均提高(P均<0.01).ChIP及萤光素酶报告实验结果提示,ΔNp63识别位点位于HMGCR启动子-728～-747 bp区域.过表达ΔNp63同时抑制HMGCR表达组24、48、72 h时细胞增殖能力均低于单纯过表达ΔNp63组(P均<0.05),细胞凋亡水平高于单纯过表达ΔNp63组[(26.9±1.9)％vs(16.6±1.5)％,P<0.01],细胞的迁移率低于单纯过表达ΔNp63组[(33.4±3.1)％vs(52.2±2.6)％,P<0.01].结论 ΔNp63通过上调HMGCR转录表达促进食管鳞状细胞癌细胞的增殖及迁移.     

ΔNp73基因对不同p53基因状态肺癌细胞系体外生长的影响

目的探讨p73基因N末端转录活化区缺失的异构体ΔNp73转染对不同p53基因状态肺癌细胞系体外生长的影响.方法利用脂质体将ΔNp73α基因分别转染P53蛋白表达阴性与表达野生型P53蛋白的肺癌细胞系H1299和A549,筛选出稳定的表达株,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞生长情况,平板克隆形成率观察细胞增殖能力的变化,流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡率. 结果ΔNp73α基因转染使H1299和A549细胞生长明显增快,克隆形成率明显提高,细胞凋亡率明显降低但对细胞周期没有明显的影响.结论ΔNp73基因在肺癌的发生发展过程中发挥癌基因的功能,并且其作用不受p53基因状态的影响.     

非小细胞肺癌p16蛋白表达研究

目的:分析非小细胞肺癌(NSCLC)及癌周正常肺组织p16蛋白表达情况。方法:运用免疫组化方法检测40例肺癌标本及周围正常肺组织中p16蛋白的表达情况。结果:肺癌组织p16蛋白表达降低率(65％)与其周围正常肺组织(20％)有明显差异(P<0.01)。非小细胞肺癌各亚型之间p16蛋白表达降低率没有差异(P>0.01)。低分化鳞癌p16蛋白表达降低率(100％)明显高于高中分化鳞癌(63％,P<0.01),低分化腺癌p16蛋白表达降低率(100％)亦明显高于高中分化腺癌(33％,P<0.01)。结论:p16蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达明显低于正常肺组织。     

p16基因甲基化及蛋白表达在非小细胞肺癌发病中的研究

目的 探讨p16基因甲基化及蛋白在人非小细胞肺癌组织中的表达情况。方法 应用甲基化特异性PCR法(MS-PCR)及免疫组化SP法检测45例非小细胞肺癌组织, 21例肺良性疾病组织中p16基因甲基化及蛋白的表达情况。结果 肺良性疾病中p16基因甲基化阳性率低于癌组织,差异有显著性(P＝0.001),p16基因甲基化与非小细胞肺癌细胞分化程度及淋巴结转移情况有明显的相关性(P<0. 05);肺良性疾病中p16蛋白阳性率高于癌组织,差异有显著性(P＝0.007); p16蛋白表达与非小细胞肺癌临床分期、细胞分化程度及淋巴结转移情况有明显的相关性(P<0. 05)。p16甲基化和p16蛋白表达缺失存在相关性(P＝0.004)。结论 p16基因甲基化及蛋白的表达情况与非小细胞肺癌的发生、发展有关。     

p63在Castleman病及滤泡性淋巴瘤中的表达

目的：探讨p63蛋白和p63基因两种亚型（TAp63及ANp63）在Castleman病（CD）及滤泡性淋巴瘤（FL）中的表达情况。方法：应用免疫组织化学法检测26例CD及18例FL中p63蛋白的表达情况,同时用逆转录聚合酶链反应技术（RT—PCR）方法检测p63两种亚型（TAp63及ANp63）表达情况,20例反应性增生性淋巴结炎（RHL）作为对照。结果：4例CD（4／26,15．4％）和10例FL（10／18,55．6％）、2例RHL（2／20,10%）p63表达呈阳性。p63蛋白在FL中的阳性率要明显高于CD和RHL（P〈0．05）。而p63蛋白在CD和RHL中的阳性表达率无差别（P〉0．05）。RT—PCR结果显示阳性表达的均为TAp63,未见ANp63表达。结论：p63可能作为致癌基因参与了FL的发生,而在CD的发生中,p63基因可能并不起主要作用。     

ΔNp63上调羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶表达促进食管鳞癌细胞增殖及迁移

目的：探讨肿瘤蛋白p63的转录变体ΔNp63调控食管鳞癌细胞增殖及迁移的分子机制。方法：以ECA109细胞为模型,通过慢病毒介导的转基因（LV.ΔNp63）在细胞中过表达ΔNp63,通过定量PCR及Western blot检测羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（HMG-CoA reductase,HMGCR）表达水平,通过染色质免疫沉淀(ChIP)和荧光素酶活性报告实验检测ΔNp63蛋白与HMGCR基因5’-非翻译区的结合;细胞中过表达ΔNp63同时利用RNA干扰抑制HMGCR表达,通过细胞计数试剂-8（CCK-8）检测细胞增殖情况, Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡,Transwell小室培养实验检测细胞迁移。结果：ECA109细胞中过表达ΔNp63后,HMGCR的mRNA和蛋白表达水平分别提高了241%和81%;结合ChIP及荧光素酶活性报告实验结果提示ΔNp63识别位点位于HMGCR启动子-747至-728区域。过表达ΔNp63同时抑制HMGCR表达组细胞增殖能力显著低于单纯过表达ΔNp63组(24hr,P<0.05;48/72hr,P<0.01);细胞凋亡水平为16.5±1.5%,显著高于单纯过表达ΔNp63组细胞（26.9±1.9%,P<0.01）,同时细胞的迁移率显著低于单纯过表达ΔNp63组细胞( 52.2±2.6% vs. 33.4±3.1%,P<0.01)。结论：ΔNp63通过上调HMGCR转录表达促进食管鳞癌细胞增殖及迁移能力。     

p53基因在肺癌患者中的突变

目的　探讨肺癌组织中p5 3基因蛋白表达和肺癌患者血白细胞p5 3基因突变及其相互关系。方法　应用免疫组织化学S -P法检测肺癌组织中p5 3基因蛋白表达及聚合酶链反应 -单链构象多态性分析 (PCR -SSCP)检测其中肺癌患者血白细胞p5 3基因突变。结果　p5 3基因蛋白在 5 1例肺癌组织中的阳性表达率为 5 9% ,其中p5 3蛋白在鳞癌、腺鳞癌和腺癌的表达差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,但有淋巴结转移者 ( 77% )显著高于无淋巴结转移者 ( 4 5 % ,P <0 0 5 ) ,p5 3蛋白在肺癌癌旁正常肺组织及白细胞中均为阴性 ;5 1例肺癌患者中 2 8例血白细胞DNA均未见p5 3基因突变。结论　p5 3基因在肺癌患者血白细胞DNA未见突变 ,p5 3基因蛋白阳性的肺癌患者更易发生淋巴结转移     

抑癌基因Rb及p16在非小细胞肺癌中表达的相关性研究

目的 检测Ｒｂ及ｐ１６基因产物在非小细胞肺癌中的表达特征。方法 采用免疫组化和图象定量相关分析技术比较了ｒｂ与Ｐ１６的表达情况及相互关系。结果 １１例Ｒｂ表达阴性的肿瘤,Ｐ１６蛋白表达皆为强阳性,而３０例Ｒｂ表达阳性程度较高（＋＋）～（＋＋＋）的标本中,２３例显示Ｐ１６表达阴性或低水平表达,图像定量相关分析显示Ｒｂ失活与Ｐ１６表达之间存在负相关关系。结论 提示发生发展的分子遗传机制可能涉及Ｐ１６及     

变性梯度凝胶电泳和单链构象多态性分析检测肺癌p53基因8号外显子突变

目的：检测ｐ５３基因８号外显子突变。方法：分别采用变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）和单链构象多态性分析（ＳＳＣＰ），对３５例肺癌病人手术切除组织的ｐ５３基因８号外显子（Ｅｘｏｎ８）进行突变检测。结果：采用ＤＧＧＥ检测的突变率为２０％，而ＳＳＣＰ检测的突变率为１１％。ｐ５３基因Ｅｘｏｎ８的总突变率为２３％。结论：ＤＧＧＥ检测ｐ５３基因突变的敏感性高于ＳＳＣＰ。     

人肺腺癌细胞系GLC-82中p21WAF1和p53基因的过表达

目的 探讨p21^WAF1和p53基因过表达对人肺腺癌细胞生长和细胞凋亡的影响。方法 用带有p21cDNA的真核表达载体pCEP和带有p53的腺病毒表达载体pAdCMV,分别通过基因转染和腺病毒感染,使其在人肺腺癌细胞系(GLC—82)中过表达;通过流式细胞仪、透射电镜和原位末端分析(TUNEL)观察细胞的生长和凋亡情况。结果 p21过表达的细胞系G1期细胞增加,细胞生长抑制,克隆形成率下降,电镜下未见特征性凋亡小体,原位细胞凋亡分析未见凋亡信号;p53腺病毒感染的肿瘤细胞增殖明显抑制并出现死亡,原值细胞凋亡检测到凋亡信号。结论 P21和p53基因的过表达能够抑制人肺腺癌细胞的生长,其中p53能够诱发细胞凋亡,因此这两种基因在肿瘤基因治疗上有着广泛的应用前景。     

胸水细胞p16和K-ras基因突变对于肺癌的诊断价值

目的:探讨p16和K-ras基因在良恶性胸水细胞中的突变情况及对肺癌的诊断作用。方法:研究组为54例伴有恶性胸水的肺癌患者,对照组为28例出现胸水的结核性胸膜炎和其他炎性胸膜炎患者。常规抽取胸水,提取胸水细胞DNA,采用PCR-SSCP方法,分别对p16基因和K-ras基因第1、2外显子进行突变分析。结果:研究组p16基因突变率为33.2%,而对照组只有7.1%,明显低于肺癌患者(P<0.05);研究组K-ras基因突变率(31.5%)也明显高于对照组(3.7%)(P<0.05)。联合应用p16和K-ras基因突变检测可将胸水细胞中肺癌阳性检出率提高至57.4%。结论:p16和K-ras基因突变对良恶性胸水鉴别诊断具有重要价值。     

p15 mRNA在肺癌组织中的表达及其意义

目的 研究抑癌基因p15 mRNA在肺癌组织中的表达，揭过p15基因的失活与肺癌的发生和其组织类型的相关性。方法 对病理确诊的93（非小细胞肺癌65，小细胞肺癌28）例肺癌病理组织切片，采用p15 cDNA探针以原位杂交组织化学方法检测p15 mRNA在肺癌组织中的表达水平。结果 p15 mRNA阳性表达于肺癌组织细胞质或细胞核中，在细胞质中可到较多的棕黄色颗粒，而细胞核内棕黄色颗粒相对少见。p15 mRNA的阳性表达率：非小细胞肺癌为46％（30／65），其中鳞癌46％（23／50），腺癌47％（7／15）。小细胞肺癌20％（5／25）。非小细胞肺癌p15 mRNA阳性表达率高于小细胞肺癌；高分化的鳞、腺癌阳性表达率高于同组中的低分化的鳞、腺癌（P＜0．05）。结论 p15基因的失活与肺癌的发生密切相关，而且其失活程度与肺癌组织类型的恶性程度呈负相关。     

野生型p53基因转染对人肺腺癌细胞系A549 VEGF表达和肿瘤生长的影响

目的:研究外源性野生型p53(wtp53)基因对人肺腺癌细胞系A549血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响. 方法:将含有wtp53基因的pcDNA3.1-wtp53和空载体pcDNA3.1-neo质粒,通过阳离子脂质体转染A549细胞,应用半定量RT-PCR和ELISA技术检测其对VEGF表达情况的影响;将A549,A549/pcDNA3.1-neo和A549/ pcDNA3.1-wtp53细胞分别接种至裸鼠皮下,观察成瘤时间及瘤块大小;免疫组化法计数VEGF阳性细胞百分数并进行半定量分级. 结果:pcDNA3.1-wtp53转染组VEGF mRNA和蛋白表达均明显低于其他2组. pcDNA3.1-wtp53转染后裸鼠成瘤时间延长,瘤块生长缓慢. 结论:wtp53基因转染可抑制VEGF表达和肿瘤的生长.     

p73基因转染抑制肺腺癌细胞系H1299和A549体外生长的研究

目的探讨p73基因转染对肺腺癌细胞体外生长的抑制作用及p73基因治疗肺腺癌的可能性. 方法利用脂质体将p73β基因转导入两株分别对p53基因治疗敏感和耐受的肺腺癌细胞系H1299(p53-null)和A549(wtp53)中,对p73蛋白过表达的细胞进行细胞生长曲线、克隆形成率分析,并用流式细胞术分析p73β基因对肺腺癌细胞周期的影响和细胞增殖的抑制作用. 结果导入p73β基因能使H1299和A549细胞发生G1期阻滞,生长速度明显减慢,克隆形成率下降.结论外源性p73β基因转染可以抑制肺腺癌细胞体外生长,且这种抑制作用与p53基因无关.因此该基因在肿瘤基因治疗上有广泛的应用前景.