丙型肝炎病毒抗体单片段检测与总抗体检测的比较研究

目的 通过对国产HCV抗体分片段酶联免疫检测试剂与进口第三代抗-HCV检测试剂检测丙型肝炎病毒抗体的研究来了解丙肝病毒抗体单片段检测的意义。方法 采用国产基因重组表达的丙型肝炎病毒不同区(C、NS3、NS4、NS5)特异性抗原分别包被酶标板，以间接EIA法检测75例丙肝患血清中不同区特异性抗体。并以Ab—bott公司第三代抗-HCV试剂进行总抗体检测，同时做HCV—RNA检测。结果 75例血清中HCV不同区抗原片段NS3、HCV～C、NS4、NS5的抗体检出率分别为93．3％(70／75)、92．0％(69／75)、70．7％(53／75)、64．0％(48／75)。含2个片段以上的抗体检出率为94．7％(71／75)；抗-HCV总抗体的检出率为98．7％(74／75)；HCV—RNA检出率为77．4％(58／75)。结论 HCV不同区抗原片段的抗体检出率有差别，NS3、HCV—C检出率较高，其次为NS4、NSS。两种试剂有较好的相关性，HCV抗体单片段试剂可作为检测丙型肝炎病毒抗体的补充试剂，单独片段抗体阳性具有一定意义，动态观察NS3、NS4抗体水平可预测IFN的治疗效果。     

3种国产丙型肝炎病毒核酸定量与罗氏试剂检测性能的初步评价

目的评价3种国产丙型肝炎病毒核酸（HCV RNA）定量试剂检测性能。方法应用已批准上市占国内市场50%以上的3种国产HCV RNA定量检测试剂,瑞士Roche公司COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Test定量试剂,分别检测经Ortho和DiaSorin公司抗-HCV EIA试剂,CHIRON公司RIBA HCV 3.0SIA及MP Biomedicals Asia Pacific Pte公司确证试剂检测判定的139份抗-HCV阳性及165份抗-HCV阴性血浆样本。采用SPSS 16.0统计学软件,用χ2检验对4种HCV RNA定量试剂阳性检出率进行分析。结果 304份临床样本检测中,3种（A、B、C）国产HCV RNA定量试剂的阳性检出率显著低于瑞士Roche公司的HCV RNA定量试剂阳性检出率（11.51%、12.83%、14.80%vs 26.97%,χ2值分别为23.38、19.08、13.63,P〈0.01）,国产A、B、C试剂的阳性检出率较为一致（χ2值为1.47,P〉0.05）。国产HCV RNA定量试剂漏检样本的HCV RNA载量小于50IU/ml。以罗氏试剂检测HCV RNA水平为依据,国产试剂检测抗-HCV阴性样本的检出与HCV RNA水平不相关（即高值和低值均有检出）。结论应提高国产HCV RNA定量试剂的灵敏度和线性检测范围。     

全自动多重检测试剂同时检测HBV DNA、HCV RNA和HIV-1 RNA

目的 寻找一种有效实用的全自动多重检测试剂同时检测HBV DNA，HCV RNA和HIV-1 RNA系统MPLC-COBAS。方法笔者采用ACR OMETRIX公司的NAC^TM HBV DNA。HCV RNA及HIV-1 RNA核酸对照品，卫生部临床检验中心的HBV DNA，HCV RNA质控对照品，检测该系统的灵敏度；同时采用我中心酶免法(ELISA)初筛检结果阳性，经中和实验确认HBsAg阳性标本10份，经RIBA确认抗-HCV阳性标本3份。经Western Blot确认抗-HIV阳性标本3份，检测该系统的阳性符合率；检测大量临床ELISA筛检结果为阴性的标本来检测其特异性，并且每次实验设立内对照，阴阳性对照以进行临床标本检测。结果该系统的检测灵敏度(95％可信限)为HBV病毒为24-60IU／mL，HCV病毒为78-125IU／mL，HIV-1 RNA病毒为45-67IU／mL。阳性符合率为100％，假阳性率为0.13％。结论全自动多重检测试剂同时检测HBV DNA。HCV RNA和HIV-1 RNA系统MPLC-COBAS用于检测临床标本是有效实用的，可进一步加大临床标本检测数量，将该系统更好地用于酶联阴性结果的大规模筛查。     

双探针实时荧光定量法检测HCV RNA抗原的临床意义

目的 建立双探针荧光定量HCV RNA检测方法,分析其定量检测HCV RNA的灵敏度和特异性以及HCV RNA含量与患者病情的相关性.方法 选取100例抗HCV抗体阳性样本,包括慢性肝炎患者45例、肝硬化患者30例、肝癌患者25例,并选取献血员50例为对照,用双探针荧光定量法和两种商品荧光定量试剂方法进行HCV RNA检测.结果 双探针荧光定量法阳性率为93%（93例）;两种商品荧光定量试剂方法阳性率分别为84%（84例）和79%（79例）.结论 双探针荧光定量提高HCV RNA检测的灵敏度和特异性,HCV RNA含量与丙型肝炎患者病情变化及严重程度相关.     

重症肝炎患者HBV与HCV双重感染的血请学调查及其意义探讨

采用Ortho抗-HCV C100-3试剂检测了61例重症乙型肝炎,66例轻型慢性乙肝和22例多次受血治疗的非肝脏疾病患者血清中抗HCV C100-3抗体。重症肝炎中,抗-HCV检出率(36.07％)不仅明显高于轻型慢性乙肝组(4.55％),也高于受血治疗组(13.64％);对比分析重症肝炎HBV/HCV双重感染组与单纯HBV感染组的总胆红素、AST/ALT比值及病死率的结果,两组有显著性差异(P<0.05),提示重症肝炎患者由于多次受血治疗及肝脏本身的严重病变,因而对HCV的易感性较高;HBV/HCV双重感染可能加剧了肝脏的损害,加速了肝炎重症化的进程。     

丙型肝炎疾病人群中RIBA不确定结果的片段类型和出现概率

目的:调查丙型肝炎疾病人群中RIBA不确定结果的片段类型和出现概率。方法:检测对象为HCV感染者,选择486个HCV感染者标本,其血清标本分别用国内5种和国外2种抗-HCV EIA试剂进行筛查、复测,挑选出各厂家检测不一致或低值弱阳性样本,重新抽取新鲜标本进行抗-HCV确认试剂CHIRON?RIBA?HCV 3.0 SIA、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和HCV RNA PCR试剂检测,最后进行统计和分析。结果:共挑出29份不同厂家检测不一致或低值弱阳性样本,其HCV RNA和ALT均为阳性,抗-HCV确认试剂确认抗-Core、Ns3、Ns4、Ns5区抗体阳性检出率分别为86.21%、48.28%、44.83%、24.14%;仅出现单独抗-Core区阳性的标本有8份,还出现3份抗体确认结果为阴性RNA阳性的标本,没有出现单独抗-Ns3、Ns4和Ns5抗体阳性的样本。结论:标本经过CHIRON?RIBA?HCV 3.0 SIA确认试剂确认,单独抗-Core区阳性的标本有8份,所占比例为1.65%;出现3份抗体确认结果为阴性RNA阳性标本,没有出现抗-Ns3、抗-Ns4和抗-Ns5单独阳性的样本;经RIBA确认的29份样本其抗-Core、Ns3、Ns4、Ns5区抗体阳性检出率分别为86.21%、48.28%、44.83%、24.14%。     

RT-PCR对ELISA试剂检测抗-HCV灰带区血样的分析

目的　对ELISA试剂检测抗 HCV灰带区的血样 ,采用灵敏度更高的RT PCR技术进行确证。方法　用两厂家试剂 (ELISA法 )同时检测 85 4 3份献血者样本 ,并对其中的 86份灰带区样本用RT PCR技术来进行HCV RNA分析。结果　用RT PCR技术对 86份灰带区的血样进行检测 ,其阳性率为 9 35 % ,与阴性对照组相比具有显著性差异(P <0 0 1)。结论　采用灵敏度更高的RT PCR技术对灰带区血样进行检测能显著提高HCV的检出率     

荧光定量PCR在丙型肝炎病毒感染检测中的应用

目的　观察荧光定量聚合酶链反应 (FQ -PCR)在丙型肝炎病毒 (hepatitisCvirus ,HCV )感染检测中的临床应用情况。方法　用FQ PCR检测 3 15份怀疑HCV感染的临床血清标本 ,并同时采用酶联免疫吸附测定法 (ELISA)检测抗HCV ,用生化仪测定血清丙氨酸氨基转移酶 (ALT)水平 ,了解样本中HCV RNA含量与抗HCV及ALT的相关性。结果　 3 15份标本中有 2 2 5份HCV RNA含量高于 80拷贝·ml-1,2 5 0份抗HCV阳性 ,14 5例ALT异常 ,HCV RNA含量与抗HCV阳性率间有显著的相关性 (r =0 .682 ,P =0 .0 0 2 ) ;HCV RNA含量与ALT异常率间也有显著的相关性 (r =0 .92 3 ,P =0 .0 3 2 )。结论　FQ PCR技术检测HCV RNA特异性强 ,灵敏度高 ,具有良好的临床应用价值。     

255例抗-HCV与HCV RNA定量检测结果比较分析

目的 探讨血清丙型肝炎病毒抗体和核糖核酸检测阳性结果的临床意义。方法 采用第三代试剂药盒ELISA法检测抗-HCV、荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测HCV RNA。结果 抗-HCV阳性／HCV RNA阴性135例(52．94％),抗-HCV／HCV RNA均阳性者99例(38．82％),而抗-HCV阴性／HCV RNA阳性者21例(8．24％)。结论 临床上疑诊丙型肝炎病毒感染的患者在检测抗-HCV的同时,应加做HCV RNA定量检测。     

抗-HCV与HCV-RNA检测结果不一致原因分析

目的 :探讨抗 HCV和HCV RNA结果不一致的原因。方法 :应用ELISA法和FQ PCR法同步检测 380例患者血清中抗 HCV和HCV RNA。结果 :在 2 80例抗 HCV阳性中有 10 6例HCV RNA为阴性 ,有 3例抗 HCV阴性患者HCV RNA却为阳性。结论 :同步检测抗 HCV和HCV RNA可提高肝病患者HCV感染的检出率 ,为其诊断和治疗提供指导。     

套式PCR法检测慢性丙肝患者PBMC及血清中HCV-RNA的意义

目的 探讨慢性丙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞（PBMC）内HCV－RNA与血清中HCV－RNA的相互关系及其在慢性丙肝发病机制中的作用。方法 用套式PCR（RT－nested-PCR)对124例抗－HCV（＋）慢性丙肝患者的PBMC及血清中HCV－RNA进行检测。结果 124例抗－HCV（＋）慢性丙肝患者中,PBMC及血清中HCV－RNA阳性率分别为53．23％（66／124）和64．52％（80／124）,经χ^2检验,两者差异无显著性（P＞0．05）。各慢肝组PBMC与血清HCV－RNA阳性率相比,差异均无显著性（P＞0．05）。结论 HCV可隐匿于患者PBMC中;PBMC中HCV－RNA与血清中HCV－RNA似有一致性倾向。PBMC中HCV－RNA检测不仅是对常规血清检测的重要补充,而且是HCV肝外感染的直接证据,是导致丙型病毒性肝炎患者易于慢性化的重要原因之一。     

Detection of hepatitis G virus RNA in hepatitis C patients and hepatitis C virus infected hemodialysis patients

AlthoughsensitiveandspecificimmunoassayandmolecularbiologicaltechniquesforthedetectionofthehepatitisA--Evirusesareavailable,theetiologyofasubstantialfractionofpost--transfusionandcommunity--acquiredhepatitiscasesremainsundefined[1],suggestingtheexistenceofadditionalcausativeagents.Anewhumanhepatitisviruswasisolatedbytwoindependentgroups.ThenewvirusisprovisionallydesignatedashepatitisGvirus(HGV)[ZJorGBvirusC(GBV~C)[3'4),whichwasthoughttobetheagentofpartofthenon--A--Ehepatitispatients.Fro…     

检测HCA-RNA的RT-PCR技术改进与应用

以台湾株丙型肝炎病毒的非结构区基因序列(HCV-T_3)设计内外五条呈巢式排列的引物,结合AGPC核酸一步抽提法,寡聚核苷酸探针5′末端标记法和Southern电泳转移杂交法,建立简捷特异检测HCV-RNA的逆转录一多聚酶链反应(RT-PCR)技术。应用这一技术对121例非甲非乙型肝炎患者和45例抗HCV阳性的慢性乙型肝炎患者进行了血浆HCV-RNA检测,结果阳性率分别为66.1％(80/121)和66.7％(30/45)。本文对这一技术的方法学、HCV-RNA与抗HCV的关系、血液暴露史对HCV感染的意义以及HBV与HCV的重叠感染进行了讨论。     

用高度保守区引物和套式PCR扩增丙型肝炎病毒

采用套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法，以具有高度保守性的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ５＇端非编码区引物对，扩增１０例输血后肝炎血清，８例（８０％）阳性。并将逆转录与第一轮ＰＣＲ结合连续进行，使操作简便有效。间接证明了ＨＣＶ上海株与世界若干地区ＨＣＶ株５＇端非编码区核酸序列具有高度同源性和保守性。     

Hepatitis C virus infection in different groups of children in Wuhan area

Summary To investigate the incidence of child’s HCV infection in our area, 637 children with different background, including 65 posttransfusion cases, 419 hepatitis patients (250 cases of acute hepatitis A, 156 cases of chronic hepatitis B and 13 cases of non-A, non-B hepatitis), 50 infantile hepatitis syndrome (1HS) infants and 103 healthy day-cared children were tested for serum anti-HCV antibody (EIA) and HCV RNA (nested PCR). It was found that posttransfusion children had significantly higher anti-HCV positive rate (30. 8%) and HCV infection incidence (43.1%) than hepatitis patients (4.3% and 5.3%), IHS infants (6.0% and 8.0%) and daycared children (2.9% and 2.9%). 25 of 33 cases with posttransfusion hepatitis (PTH) developed hepatitis C, which was the leading cause of PTH (75.8%) and NANB PTH (25/30, 83.3%). The incidence of HCV infection in NANBH patients was 23.1% (3/13) which was apparently higher than that in day-cared children (P <0. 02) and lower than that in PTH patients (P<0. 001), but not statistically different from that in AHA and CHB patients (P>0. 05). Mother-infant paired study in IHS group showed that 4 pairs of mother-infant had HCV infection, one boy aged 8 months and his mother were anti-HCV positive, and another 3 pairs possessed HCV RNA in sera. 3 of 103 healthy day-cared children were found to have inapparent HCV infection, who were anti-HCV and HCV RNA positive.     

两种HCV RNA荧光定量试剂盒检测丙型肝炎病毒的比较分析

目的 比较分析两种丙型肝炎病毒（HCV）核酸定量检测试剂盒的临床性能.方法 随机抽取63例临床血清样本进行平行检测,分别采用HCV磁珠法试剂和对照试剂检测血清中RNA水平.结果 对照试剂检测63例临床样本中有22例阳性,41例阴性;磁珠法试剂检测63例样本中有27例阳性,36例阴性,两种试剂的阳性样本具较好的一致性（P=0.000）,磁珠法试剂与对照试剂的定量检测结果具有线性相关性（r=0.935,P＜0.05）.结论 两种试剂都可以应用于HCV临床检测,磁珠法试剂具有更高的灵敏度,是一种比较理想的HCV RNA定量检测试剂.     

徐州地区部分人群庚型肝炎病毒感染的检测及分析

目的 了解徐州地区部分人群中庚型肝炎病毒感染状况。方法 以逆转录套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎｅｓｔｅｅｅｄ ＰＣＲ）对血清ＨＧＶ ＲＮＡ进行检测。结果 ＨＧＶ ＲＮＡ阳性率在血液透析患者及丙型肝炎病人中分别为５．５Ａ％（１１／３１）,１９．０％（１９／１００）,显著高于自然人群１．３％（１／８０）及职业献血员５．８０％。     

多重PCR检测HBV和HCV方法的建立

目的:建立可同时检测血清HBVDNA和HCVRNA的多重PCR。方法:利用已知的基因序列设计了对于不同亚型HBV保守的C基因区的一对引物HBV-P623及对于不同亚型HCV高度保守的位于5’端非编码区(5’-NCR)的两对引物HCV-P289和HCV-P174,扩增经基因释放剂(Genereleaser)处理的HBV和HCV阳性血清。结果:多重引物、逆转录套式PCR反应体系可同时扩增HBV DNA和HCV RNA,分别在623bp和174bp处出现特异DNA扩增带。该反应体系具有较高的特异和敏感性,受检血清中仅含有10fgHBV DNA和5CID HCV RNA即可检出。血清标本不需要提取核酸,可直接进行PCR。用此体系检测30例输血后病人血清,其中15例为HBV感染,8例为HCV感染,7例为阴性。结论:多重PCR检测HBV及HCV的方法具有简便性和实用性。     

丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞HCV-RNA检测

目的 :了解丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞 (PBMC)中HCV RNA存在情况及其意义。方法 :采用套式PCR检测 38例急性丙型肝炎和 36例慢性丙型肝炎患者血清和外周血PBMC中HCV RNA。结果 :74例丙型肝炎患者血清HCV RNA阳性 6 8例 ,PBMC阳性 44例 ;急性丙型肝炎患者PBMC中HCV RNA阳性 15例 (39.5 % ) ,慢性丙型肝炎患者PBMC中阳性 2 9例 (80 .6 % )。慢性丙型肝炎患者PBMC中HCV RNA检出率显著高于急性丙型肝炎患者 (P <0 .0 1)。 3例血清HCV RNA阴性 ,而PBMC中HCV RNA均阳性 ;8例患者血清抗 HCV阴性 ,而血清HCV RNA均阳性。结论 :PBMC可能为HCV肝外贮存和复制场所 ,PBMC中的HCV感染在丙型肝炎慢性化和慢性肝损害中可能起一定作用 ;血清HCV RNA检测有助于抗 HCV阴性丙型肝炎的诊断。