应用FITC系统建立非均衡竞争总甲状腺素(TT4)化学发光法

目的 建立可广泛应用于总甲状腺素(TT4)检测的方法.方法 制备辣根过氧化物酶(HRP)标记兔抗人甲状腺素(T4)多克隆抗体及异硫氰酸荧光素(FITC)标记T4类似物.以抗FITC抗体包被发光板,FITC-T4类似物与抗FITC抗体结合形成固相抗原,血清标本经处理后使T4均呈游离状态,固相抗原与血清T4竞争结合抗T4抗体-HRP,建立化学发光法(CLIA)血清TT4检测系统(FITC系统),进行方法 学评价,并与T4-牛血清γ球蛋白直接包被系统(非FITC系统)和罗氏公司Elecsys2010系统进行比较.结果 FITC系统检测线性范围为0.1~320 ng/mL,灵敏度为0.1 ng/mL;批内变异系数小于5%,优于非FITC系统;与Elecsys2010系统检测结果 具有良好的相关性(r=0.916 9).结论 应用FITC系统建立的非均衡竞争TT4 CLIA分析系统灵敏度高、特异性,可用于临床标本的检测.     

应用FITC系统建立非均衡竞争雌二醇(E2)化学发光法

目的 建立能广泛应用于雌二醇(E2)检测的方法.方法 制备辣根过氧化物酶(HRP)标记兔抗人E2多克隆抗体及异硫氰酸荧光素(FITC)标记E2类似物.以抗FITC抗体包被发光板,FITC-E2类似物与抗FITC抗体结合形成固相抗原,固相抗原与血清中E2竞争结合抗E2抗体-HRP,建立化学发光法(CLIA)血清E2检测系统(FITC系统),进行方法 学评价,并与E2-牛血清清蛋白直接包被系统(非FITC系统)和罗氏公司Elecsys2010系统进行比较.结果 FITC系统检测线性范围为10~3 000 pg/mL,灵敏度为10 pg/mL;批内、批间变异系数均小于5%,优于非FITC系统;与Elecsys2010系统检测结果 的相关系数为0.978 0,测定结果 差异无统计学意义(P＞0.05).结论 成功建立基于FITC系统的非均衡竞争E2检测CLIA系统,精密度、灵敏度等指标均符合临床要求,可用于临床标本检测.     

应用FITC系统建立非均衡竞争孕酮(P)化学发光法

目的 建立可以广泛应用于孕酮(P)检测的方法.方法 制备辣根过氧化物酶(HRP)标记兔抗人多克隆抗体及异硫氰酸荧光素(FITC)标记孕酮类似物.以抗FITC抗体包被发光板,FITC-P类似物与抗FITC抗体结合形成固相抗原,并与血清中的P竞争结合抗P抗体-HRP,建立化学发光血清P检测系统(FITC系统),进行方法学评价,并与P-牛血清白蛋白直接包被系统(非FITC系统)和罗氏Elecsys2010系统进行比较.结果 FITC系统检测线性范围为0.1～60 ng/mL,灵敏度为0.1 ng/mL;批内变异系数小于5%优于非FITC系统;与Elecsys2010系统检测结果有良好的相关性(r= 0.961 9).结论 应用FITC系统建立的非均衡竞争P 化学发光免疫分析系统灵敏度高、特异性强,可用于临床标本的检测.     

应用FITC系统建立非均衡竞争三碘甲腺原氨酸化学发光法

目的 制备抗人三碘甲腺原氨酸(T3)多克隆抗体,应用异硫氰酸荧光素(FITC)系统开发新型非均衡竞争技术,建立一种能广泛应用于临床检测总三碘甲腺原氨酸(TT3)的方法.方法 以T3-牛血清清蛋白(BSA)为抗原免疫新西兰大白兔,制备抗人T3多克隆抗体,亲和层析法纯化特异性的抗人T3多克隆抗体并连接辣根过氧化物酶(HRP).用FITC标记T3类似物,采用抗FITC抗体包被发光板,FITC-T3类似物与抗FITC抗体结合形成固相抗原,固相抗原与T3校准品或样本中的T3非均衡竞争结合T3-HRP抗体,建立标准曲线,血清中TT3通过标准曲线计算浓度.由此建立TT3化学发光检测方法进行方法学评价并与直接用T3-牛血清γ球蛋白(BGG)包被(非FITC系统)的检测系统进行比较.将该方法应用于临床100份血清标本的检测,定量结果与德国Roche 2010电化学发光全自动免疫分析系统(Elecsys 2010)结果进行比较.结果 抗体对T3具有高度特异性,线性相关系数r>0.99,线性范围为0.1～8 ng/mL,分析灵敏度为0.1 ng/mL,精密度测试批内、批间变异系数CV<5%,检测结果优于非FITC系统的检测.对于临床血清标本的检测,其定量结果与德国Elecsys 2010定量试剂盒的结果有很好的相关性,相关系数为0.961 9,临床符合率良好.结论 该方法精密性好、灵敏度高、稳定性强,有良好的准确性,适用于临床标本的检测.     

应用FITC系统建立非均衡竞争游离雌三醇(E3)化学发光法

目的 建立可以广泛应用于游离雌三醇(E3)检测的方法.方法 制备辣根过氧化物酶(HRP)标记兔抗人多克隆抗体及异硫氰酸荧光素(FITC)标记雌三醇类似物.以抗FITC抗体包被发光板,FITC-E3类似物与抗FITC抗体结合形成固相抗原,并与血清中的free E3竞争结合抗E3抗体-HRP,建立化学发光血清free E3检测系统(FITC系统),进行方法学评价,并与E3-牛血清白蛋白直接包被系统(非FITC系统)和西门子ADVIA CentaurXP系统进行比较.结果 FITC系统检测线性范围为0.1～40 ng/mL,灵敏度为0.1 ng/mL;批内变异系数小于5%优于非FITC系统;与西门子ADVIA CentaurXP系统检测结果有良好的相关性(r=0.965 7).结论 应用FITC系统建立的非均衡竞争free E3化学发光免疫分析系统灵敏度高、特异性强,可用于临床标本的检测.     

基于磁颗粒化学发光免疫分析方法检测鳞状细胞癌抗原?

目的：建立一种快速、灵敏的化学发光免疫分析方法检测人血清中鳞状细胞癌抗原(SCCA)水平。方法使用异鲁米诺(ABEI)和异硫氰酸荧光素(FITC)分别标记 SCCA 的单克隆抗体,与待测 SCCA 抗原通过夹心法免疫反应形成抗原抗体复合物,采用包被有 FITC 的磁颗粒作为固相分离载体,加入底物之后检测发光强度。结果本方法线性范围达到22 ng/mL,灵敏度为0.025 ng/mL,批内变异系数(CV)和批间 CV 分别小于6%和7%。与现有的 SCCA 检测方法进行比对,相关系数为0.9901。结论基于磁颗粒化学发光免疫分析检测 SCCA 的方法性能稳定、可靠,可用于定量检测人血清中 SCCA 浓度。     

人血清胱抑素C化学发光免疫分析检测系统的建立

目的 建立可用于人血清胱抑素C(Cys C)检测的化学发光免疫分析(CLIA)系统.方法 制备抗人Cys C多克隆及单克隆抗体,以单克隆抗体包被发光板,以辣根过氧标记多克隆抗体作为游离抗体,以夹心法为检测原理,建立Cys C CLIA检测系统;对自建检测系统进行方法 学评价,并与罗氏MODULAR P800颗粒增强透射免疫分析(PETIA)系统进行比对.结果 自建CLIA检测系统线性范围为0.05~20 mg/L,灵敏度为0.05 mg/L,标准曲线线性相关系数为0.999 7,批内、批间变异系数均小于5%;与罗氏MODULAR P800 PETIA检测系统检测结果 的相关系数为0.980 2.结论 成功建立人血清Cys C CLIA检测系统,该检测系统灵敏度高、精密度好、稳定性高,能够满足临床应用要求.     

人血清层粘连蛋白直接化学发光免疫分析法的建立及评价

目的建立检测人血清层粘连蛋白(LN)的直接化学发光免疫分析法(CLIA),并对检测性能进行方法学评价。方法采用包被有抗人LN单抗的微米级磁珠和吖啶酯标记抗人LN单抗分别作为固相试剂和发光试剂,建立并优化定量检测人血清LN水平的CLIA法,评价该方法的线性范围、灵敏度、精密度和特异性等性能指标,并与市场上同方法学的LN检测试剂盒进行相关性比对分析。结果该方法线性范围为5.00~1 000.00ng/mL,检测灵敏度小于5.00ng/mL,血清平均回收率为97.60%,批内变异系数(CV)小于5.00%,批间CV小于8.00%,特异性、稳定性良好,与市场上同方法学的LN检测试剂盒具有较好相关性。结论建立的人血清LN直接化学发光免疫分析法能够满足临床检测需求。     

流式微球分析技术检测人心肌钙蛋白T方法的建立

目的建立流式微球分析技术（cytoometric bead assay,CBA）检测人肌钙蛋白T（cTnT）方法。方法用鼠抗人的cTnT的单克隆抗体包被在已激活的羧基化聚苯乙烯微球上,然后再用包被好的微球与检测标本进行抗原抗体免疫反应,并加入羊抗人cTnT的多克隆抗体和异硫氰酸荧光素（FITC）标记的驴抗羊的IgG,室温避光免疫反应一定时间后洗涤一次,上流式细胞仪检测FITC的荧光强度,以此测定标本中cTnT含量。结果通过正交试验,在100μl反应体系中,微球含量大约为1.25×106,选择10μg的鼠抗人cTnT单克隆抗体为最佳加入量,加入标本和抗体后,选择避光反应时间为120 min,洗涤选择一次,选择8μg/ml羊抗人cTnT多克隆抗体和20μg/ml FITC标记驴抗羊IgG为最佳工作浓度;方法检测灵敏度为16.0 pg/mL,线性范围是16-5 000 pg/mL,批内重复性变异系数为5.2-11.3%,回收率是94.7-111.5%,高浓度的胆红素、胆固醇和甘油三脂无明显干扰,与Roche Elecsys的电化学发光法有较好的相关性。结论自建CBA检测cTnT技术性能较好,可在临床工作中推广使用。     

癌胚抗原化学发光免疫分析方法学研究

目的研制化学发光免疫分析法(CLIA)癌胚抗原(CEA)检测试剂盒。方法采用双抗体夹心法用2种不同的单克隆抗体分别与CEA分子上不同的抗原决定簇发生反应。用1株单抗包被微孔板制成固相抗体,用另1株单抗标记碱性磷酸酶(ALP)制成酶标抗体。在包被微孔中加入CEA校准品或待测血清及酶标抗体,温育后即形成固相抗体-抗原-酶标抗体的复合物,充分洗涤后加入化学发光底物液,于30～90 min内测定其发光强度(RLU),根据标准曲线即可算出标本中CEA的含量。结果该试剂盒其敏感性可达0.058 ng/mL;批内和批间变异系数(CV)分别为5.5%～9.3%和10.2%～12.2%。经实验表明,CLIA与免疫放射分析法(IRMA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)分别呈高度相关,相关系数(r)分别为0.991、0.984;平均回收率为97.3%。结论新研制的CEA CLIA试剂盒各项技术指标均达到了国外同类产品水平。     

Multicenter evaluation of a new 4th generation HIV screening assay Elecsys HIV combi

Fourth-generation screening assays which permit a simultaneous detection of human immunodeficiency virus (HIV) antigen and antibody reduce the diagnostic window on average by four days in comparison to third-generation antibody assays. Recently, the new automated Elecsys HIV combi was compared in a multicenter study to alternative fourth- and third-generation assays, p24 antigen test and HIV-1 RNA RT-PCR. A total of 104 serocon-version panels, samples of the acute phase of infection after seroconversion (n = 33), anti-HIV-1 positive specimens (n = 572) from patients in different stages of the disease, 535 subtyped samples from different geographical locations, including group M (subtypes A-J) and group O, anti-HIV-2 positive sera (n = 364), dilutions of cell culture supernatants (n = 60) infected with different HIV-1 subtypes, selected performance panels, 8406 unselected samples from blood donors originating from different blood transfusion centers, 3810 unselected sera from daily routine and from hospitalized patients, 9927 unselected samples from South Africa and 1943 potentially interfering samples were tested with the Elecsys HIV combi. Elecsys HIV combi showed a comparable sensitivity to HIV-1 Ag stand-alone assays for early detection of HIV infection in seroconversion panels. The mean time delay of Elecsys HIV combi (last negative sample + 1 day) in comparison to HIV-1 RT-PCR for 92 panels tested with both methods was 3.23 days. The diagnostic window was reduced with Elecsys HIV combi between 1.56 and 5.32 days in comparison to third-generation assays. The specificity of Elecsys HIV combi in blood donors was 99.80% after repeated testing. Our results show that a fourth-generation assay with improved specificity and sensitivity like the Elecsys HIV combi is suitable for blood donor screening due to its low number of false positives and since it detects HIV p24 antigen with a comparable sensitivity to single antigen assays.     

Multicenter evaluation of a rapid electrochemiluminescent adrenocorticotropic hormone (ACTH) immunoassay

BACKGROUND: Measuring plasma adrenocorticotropic hormone (ACTH) is a key step in the differential diagnosis of hypothalamic-pituitary-adrenal disorders. METHODS: The recently developed electrochemiluminescence Elecsys ACTH immunoassay (Roche Diagnostics, Mannheim, Germany) was evaluated at six clinical laboratories on the Modular E170 and/or the Elecsys 2010 (Roche Diagnostics) immunoanalysers. RESULTS: The within-run and between-run imprecision was 相似文献   

磁分离酶联免疫法检测AFP

目的建立检测甲胎蛋白(AFP)的磁分离酶联免疫法(Magnetic affinity immunoassay,MAIA)。方法采用双抗体夹心法,用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)分别标记识别不同表位的两种抗AFP单克隆抗体(mAb)4A3和5H7,以偶联羊抗FITC mAb包被的免疫磁珠作为固相载体,单磷酸酚酞(phenolphthalein monophosphate,PMP)做显色底物,建立检测AFP的MAIA法。结果成功实现了用MAIA法对AFP的定量检测,其检测灵敏度0.2 IU/ml,线性范围0.2-510 IU/ml,批内CV5.5%-9.3%,批间CV1.6%-9.7%。添加回收率101.4%-104.9%,稀释回收率78.3%-123%。与雅培AxSYM及i2 000的检测结果对比,相关系数分别为0.984和0.985。结论MAIA法的性能优于现有的ELISA和RIA试剂盒,接近进口同类试剂的水平,有助于为市场提供一种高质量而价廉的AFP测定试剂盒。     

化学发光免疫分析法快速检测血清登革热病毒NS1 抗原方法的建立及初步应用评价

目的 建立一种化学发光免疫分析法( chemiluminescence immunoassay,CLIA) 用于血清中登革热病毒（denguevirus,DENV）NS1 抗原的定量检测。方法 先制备NS1 单抗与吖啶酯发光剂的偶联物,同时活化磁珠并标记抗NS1的配对单抗,基于双抗体夹心检测方法的技术原理构建定量检测血清中NS1 抗原浓度的化学发光检测方法。通过对其灵敏度、特异度和参考区间等试验评估其检测性能。取85 例临床确诊的登革热阳性血清样本和20 份健康志愿者阴性血清样本,采用美国Cortez 公司的登革热NS1 快速检测试剂盒和该方法进行临床样本验证。结果 该方法对血清中NS1抗原的检测灵敏度为1.12ng/ml,线性范围在0.1 ～ 1 000ng/ml;与血清中常见干扰物质的交叉反应率均低于2%,检测特异度较好;参考区间的cut off 值为3.66ng/ml;对临床样本的检测准确度较高,与Cortez 公司NS1 检测试剂盒比较无显著性差异（χ2 检验P=1.000,一致性检验,Kappa=0.876）。结论 建立了一种可定量检测血清中登革热病毒NS1抗原的CLIA 法,该方法具有高灵敏度、高准确度、操作简单和方便快捷等优点,有望为登革热临床样品的早期准确筛查提供一种新的选择。