胃泌素及丙谷胺对胃癌细胞株MKN45增殖及EGF表达的影响

目的:观察五肽胃泌素(PG)及其受体拮抗剂丙谷胺(PGL)对人胃癌细胞株MKN45增殖及表皮生长因子(EGF)表达的影响。方法:MTT法检测人胃癌细胞株MKN45增殖;放射免疫法(RIA)测定表皮生长因子(EGF)的表达。结果:PG(10-6mol/L)明显促进人胃癌细胞株MKN45增殖,24、48h的促细胞增殖率分别为11.24%、17.63%,丙谷胺(2.0～10.0mmol/L)能阻断这一促增殖作用,并可剂量依赖性地抑制胃癌细胞的生长,且随作用时间延长而增强。同时,在胃癌细胞株MKN45培养液中可检测到EGF,且随培养时间延长EGF含量增加;PG(10-6mol/L)可显著增加MKN45培养液中EGF的含量,丙谷胺(6.0mmol/L)不仅明显阻断PG诱导的EGF增加,并且能够减少胃癌细胞MKN45培养液EGF的含量。结论:五肽胃泌素能促进胃癌细胞株MKN45增殖及EGF表达,而其受体拮抗剂丙谷胺不仅能阻断这一的促进作用,并可抑制胃癌细胞株MKN45增殖及EGF的表达。提示PG的促胃癌细胞增殖作用可能与促进EGF表达有关。     

钙通道阻滞剂对胃泌素促人结肠癌细胞增殖的影响

目的　观察硝苯地平 ( Nif)对五肽胃泌素促人结肠癌细胞增殖的影响并初步探讨其作用机制。方法　采用流式细胞仪检测细胞内游离钙离子浓度水平 (〔 Ca2 +〕i) ,结合 MTT比色法测定细胞增殖情况。结果　 2 .5× 10 - 6mol/ L的五肽胃泌素 ( PG)作用于 HT2 9细胞后 ,可引起〔 Ca2 +〕i 水平迅速升高 ( P<0 .0 1)。 10 - 5 mol/ L的 Nif可使 PG引起的〔 Ca2 +〕i 水平升高幅度明显降低 ( P<0 .0 1) ,同时 10 - 5～ 10 - 6mol/ L 的 Nif可以抑制 PG促 HT2 9细胞增殖的作用 ( P<0 .0 5 )。结论　 Nif通过抑制胞外 Ca2 +内流 ,阻止〔 Ca2 +〕i 水平升高 ,是其抑制 PG促 HT2 9细胞增殖的一个主要机制     

β-AR信号通路介导去甲肾上腺素提高 HT-29细胞侵袭能力的研究

目的 探讨去甲肾上腺素通过β-AR信号通路对结肠癌侵袭能力的影响及可能的作用机制。方法 以人结肠癌细胞株HT-29为研究对象,采用Transwell观察去甲肾上腺素对HT-29细胞侵袭能力的影响,同时观察加入非选择性β-AR阻断剂普萘洛尔后,HT-29细胞侵袭能力的变化。实时荧光定量PCR和Western blot法检测去甲肾上腺素通过β-AR信号通路对HT-29细胞MMP-2、MMP-9和VEGF的表达及ERK1/2活性的影响。结果 0.1、1、10μmol/L去甲肾上腺素组处理后,HT-29细胞的侵袭能力显著高于空白对照组,并且随着去甲肾上腺素浓度的提高,细胞的侵袭能力逐渐增强。而普萘洛尔可逆转去甲肾上腺素对HT-29细胞的促侵袭作用。与空白对照组比较,10μmol/L去甲肾上腺素可显著上调HT-29细胞MMP-2、MMP-9、VEGF mRNA和MMP-2、MMP-9、VEGF、pERK1/2蛋白表达水平。普萘洛尔可拮抗去甲肾上腺素的作用,下调MMP-9和VEGF表达,并减弱去甲肾上腺素对HT-29细胞ERK1/2活性的影响。结论 去甲肾上腺素可通过β-AR信号通路提高HT-29细胞的体外侵袭能力。     

瘦素对结肠癌细胞株HT-29的影响

目的:观察瘦素对结肠癌细胞株HT-29的细胞生长的作用。方法:贴壁培养HT-29细胞,分别给予不同浓度的瘦素(0.5×10-6、5×10-5,1×10-4,2×10-4g/L)。并同时以浓度为1×10-4g/L的表皮生长因子(EGF)作为阳性对照组,通过测定生长曲线、四甲基谷氮唑蓝实验MTT法观察瘦素对HT-29细胞生长的影响。结果:通过生长曲线,发现在相同时间段,瘦素浓度在5×10-6-2×10-4g/L时,呈剂量依赖性促进HT-29细胞增殖。但即使在瘦素促细胞增殖最为明显的2×10-4g/L组中,和阳性对照组EGF比较,其细胞增殖数量仍为低。MTT法结果显示,不同浓度的瘦素作用于HT-29细胞后,在72 h内,呈时间、剂量依赖性促进HT-29细胞生长,其增长率在5.1%-67.9%之间。细胞计数和MTT法均显示瘦素可促进结肠癌细胞HT-29的生长和增殖。提示瘦素作为多功能的细胞因子和结肠癌的发生密切相关。结论:在离体实验中,瘦素具有促结肠癌细胞HT-29生长增殖的作用,且和其浓度、时间相关。     

姜黄素对人结肠癌Lovo细胞VEGF表达的影响

目的 研究姜黄素体外对人结肠癌Lovo细胞血管内皮生长因子VEGF表达的影响。方法不同浓度（0μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L）姜黄素处理2013年8月—2014年2月中南大学提供的人结肠癌细胞株Lovo24 h后,用Real-time PCR检测姜黄素对人结肠癌细胞株血管内皮生长因子VEGF m RNA表达的变化,用Western blot法检测姜黄素对人结肠癌细胞株VEGF蛋白表达的变化。结果人结肠癌Lovo细胞经过姜黄素处理24 h后,5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L姜黄素组VEGF m RNA及蛋白的表达均明显下降,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论姜黄素能下调人结肠癌Lovo细胞VEGF的表达,并呈剂量依赖,这可能是姜黄素抑制结肠癌Lovo细胞增殖及侵袭性的机制之一。     

Celebrex对VEGF诱导的内皮细胞迁移的影响及其机制

目的:观察选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂celebrex对血管内皮生长因子(VEGF)诱导的内皮细胞细胞迁移能力的影响及其与细胞内MMP-9表达的关系。方法:体外培养内皮细胞系ECV304,将细胞分为4组:①空白对照组(ECV304);②VEGF组(ECV304+VEGF);③celebrex+VEGF组(ECV304+VEGF+cele-brex);④celebrex组(ECV304+celebrex)。观察:①用损伤修复实验观察不同浓度celebrex对ECV304细胞迁移能力影响及对VEGF诱导下ECV304细胞迁移速度影响;②用半定量RT-PCR法检测VEGF及celebrex对ECV304细胞MMP-9 mRNA表达的影响。结果:ECV304细胞的迁移速度随VEGF浓度(0.02,0.2,2μmol/L)的增加呈降低趋势;celebrex+VEGF组(2μmol/L celebrex+5μg/L VEGF)迁移速度为(3.55±0.02)μm/h与VEGF组(5μg/L VEGF)迁移速度(7.66±0.02)μm/h比较,两者有显著差异(P<0.01);celebrex+VEGF组(2μmol/L celebrex+5μg/L VEGF)的MMP-9表达量明显低于VEGF组(5μg/L VEGF)。结论:celebrex能抑制VEGF诱导的ECV304细胞迁移,并使COX-2下游的MMP-9表达量显著下调,这是可能的机制之一。     

三苯氧胺联合5-氟尿嘧啶对人结肠癌细胞HT-29的抑制作用

目的 探讨三苯氧胺(tamoxifen,TAM)联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对人结肠癌细胞株HT-29的增殖、凋亡及细胞迁移的影响.方法 采用MTT法、流式细胞仪分别检测不同浓度(12.5、25、50 μmol/L)5-FU及其联合TAM对HT-29细胞增殖的抑制作用、细胞凋亡的诱导作用,应用细胞划痕实验检测TAM(1×10-7、1×10-6、1×10-5、1×10-4mol/L)、5-FU及其联合TAM对细胞迁移的抑制作用.结果 5-FU及其联合TAM均可提高HT-29细胞增殖抑制率,单用5-FU的抑制率分别为(50.8±8.9)%和(62.8±8.8)%和(69.7±9)%,12.5 μmol/L 5-FU联合低浓度TAM(1×10-7、1×10-6 mol/L)的抑制率分别为(82.9±2.9)%和(84.0±1.6)%,其作用呈剂量依赖关系;高浓度(1×10-4mol/L)TAM联合12.5 μmol/L 5-FU表现出明显的促细胞凋亡作用[凋亡率为(95.7±4.2)%];划痕实验证实经1×10-6和1×10-5mol/L TAM及单用5-FU处理HT-29细胞72 h后均可明显地抑制细胞的迁移,但联合用药未显示出较TAM单药更明显的抑制作用.结论 TAM和5-FU均具有抑制细胞增殖、迁移和促进细胞凋亡的作用,TAM亦可增加结肠癌细胞株HT-29对5-FU的敏感性.     

塞来昔布对结肠癌细胞株HT-29的放射增敏研究

目的研究塞来昔布对结肠癌细胞株HT-29的放射增敏效应,并初步探讨其作用机制。方法体外培养结肠癌细胞株HT-29,用不同浓度的塞来昔布作用于HT-29细胞,以成克隆实验检测细胞辐射敏感性;建立结肠癌荷瘤裸鼠模型,不同实验条件下观察肿瘤体积变化并绘制肿瘤生长曲线;采用免疫组织化学方法检测肿瘤组织中血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果克隆形成实验结果显示,塞来昔布30μmol/L和50μmol/L作用后的放射增敏比分别为1.304和1.475;肿瘤生长曲线表明,联合治疗组的肿瘤增长最缓慢;塞来昔布组可致肿瘤组织中VEGF表达下降（P〈0.05）。结论塞来昔布在体内和体外实验中均可增强结肠癌细胞HT-29细胞的放射敏感性,其机制可能与其抑制肿瘤新生血管形成相关。     

表皮生长因子对大鼠肺动脉平滑肌细胞的影响

本研究探讨表皮生长因子(EGF)对大鼠肺动脉平滑肌细胞的影响,发现EGF能促进平滑肌细胞的DNA 合成,该作用与剂量呈正相关(r=0.823;P<0.05),EC_(50)=6.5×10~(-12)mol/L。1×10~(-9)mol/L的EGF+0.5％胎牛血清(FCS)能产生与10％FCS 相当的促细胞分裂增殖能力。在培养的第1、3、5、7天,二者相差不明显,P均>0.05,第9天时,前者大于后者,P<0.05。1×10~(-9)mol/L EGF 单独存在时对平滑肌细胞未能显示出明显的致分裂活性。上述作用提示 EGF在某些肺血管增生性病变中可能有一定意义。     

塞来昔布对人结肠癌细胞裸鼠移植瘤肝转移和血管生成的影响

目的研究COX-2选择性抑制剂塞来昔布对结肠癌肝转移瘤微血管生成以及血管生成因子VEGF、bFGF表达的影响,从而探讨COX-2对结肠癌肝转移瘤血管形成的作用机制.方法细胞培养建立稳定的结肠癌细胞株HT-29和HCT-116,利用脾切除法建立结肠癌肝转移动物模型,免疫组化检测结肠癌肝转移瘤MVD、VEGF、bFGF蛋白表达.结果结肠癌肝脏转移率,HT-29组、HCT-116组和塞来昔布组分别为83.33%、16.67%和33.33%.肝脏转移瘤MVD、VEGF、bFGF的表达,HT-29组与HCT-116组、塞来昔布组比较治疗组表达减弱,有显著统计学差异(P＜0.01,P＜0.05);塞来昔布组与HCT-116组比较无显著性差异(P＞0.05).结论塞来昔布可能通过抑制促血管生成因子VEGF、BFGF的表达,进而抑制了结肠癌肝转移瘤新生血管生成.     

感觉神经肽P物质对肉芽组织成纤维细胞表达表皮生长因子与成纤维细胞生长因子-2及受体的调控作用

目的 从基因水平探讨感觉神经肽SP对肉芽组织成纤维细胞表达表皮生长因子（EGF）、成纤维细胞生长因子-2（FGF-2）及受体的调控作用。方法 由在体和离体实验两部分组成。在体实验采用Wistar大鼠50只,随机分为辣椒素组和对照组。辣椒素组大鼠皮下注射辣椒素50mg/kg毁损感觉神经,1周后行皮肤全层切割伤,采用免疫组化结合图像分析,观察伤后3-12d伤口肉芽组织内神经肽P物质（SP）含量。采用原位杂交方法观察EGF、表皮生长因子受体（EGFR）、FGF-2、成纤维细胞生长因子受体-1（FGFR-1）的基因表达,对照组除不化学毁损感觉神经外,余处理同辣椒素组。离体实验采用RT-CPR技术观察不同浓度（10^-9～10^-5mol/L)SP作用于培养肉芽组织成纤维细胞后,上述生长因子及受体的表达。结果 在体实验示,肉芽组织SP免疫阳性染色与EGF、FGF-2及其受体表达有关,化学毁损感觉神经,肉芽组织SP免疫阳性染色减弱,上述因子及受体的表达也明显抑制。离体实验发现,上调培养肉芽组织成纤维细胞内源性EGF和EGFR mRNA表达的SP浓度为10^-8～10^-6mol/L和10^-6～10^-5mol/L,上调FGF-2和FGFR-1 mRNA表达的SP浓度分别为10^-9～10^-5mol/L和10^-6～10^-5mol/L。结论 伤口愈合中,感觉神经释放的SP参与肉芽组织成纤维细胞表达EGF、FGF-2及受体mRNA的调控。     

ERβ在结肠癌细胞株的表达及他莫昔芬对结肠癌细胞株体外抑制实验

目的：探讨ERβ在结肠癌细胞株Lovo、HT-29的表达和他莫昔（tamoxifen,TAM）对结肠癌细胞株抑制作用.方法：体外培养人结肠癌细胞株Lovo、HT-29,用细胞爬片免疫组化、RT-PCR、Western blot方法检测ER α、ERβ表达,用MTT法检测不同浓度的17β-E2、TAM、5-Fu、TAM＋5-Fu、TAM对结肠癌细胞株的生长影响作用.流式细胞仪（FCM）测定细胞凋亡率.结果：①在结肠癌细胞株Lovo、HT29中稳定表达ERβ而不表达ER α ②TAM、5-Fu能抑制Lovo、HT29细胞株的增殖 ③TAM协同5-FU对Lovo、HT29细胞株有促使细胞凋亡的作用.结论：①结肠癌细胞株Lovo表达ERβ而不表达ER α ②TAM以ERβ为靶点抑制Lovo细胞株的增殖 ③TAM协同5-FU抑制Lovo细胞株的增殖,TAM协同5-FU对Lovo、HT29细胞株促细胞凋亡的作用.     

GnRH-Ⅱ对子宫内膜异位症患者离体培养的子宫内膜间质细胞分泌VEGF的影响

目的:检测体外培养的子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)患者在位和异位内膜间质细胞分泌的血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF)的浓度,并观察不同浓度的II型促性腺激素释放激素（GnRH-Ⅱ)对在位和异位内膜间质细胞分泌VEGF的影响。方法:分别给予原代培养的EMs患者在位与异位子宫内膜间质细胞不同浓度（1×10-10~1×10-6 mol/L)的GnRH-Ⅱ处理,不加GnRH-Ⅱ组作为对照,采用酶联免疫吸附法（ELISA)测定培养液中VEGF浓度并进行比较。结果:体外培养的EMs患者异位子宫内膜间质细胞分泌VEGF,培养48 h后分泌量与在位子宫内膜间质细胞比较差异无统计学意义（P﹥0.05)。1×10-10~1×10-6 mol/L的GnRH-Ⅱ可呈浓度依赖性地抑制体外培养的在位和异位子宫内膜间质细胞分泌VEGF（P<0.01),且对异位子宫内膜间质细胞的抑制作用强于在位（P<0.01)。结论:EMs患者的异位子宫内膜间质细胞分泌VEGF的能力与在位子宫内膜的相近,这对EMs的形成和发展可能起重要作用。GnRH-Ⅱ对EMs患者体外培养的异位子宫内膜间质细胞VEGF的分泌有明显的抑制作用,且作用明显强于对在位内膜间质细胞的。     

罗格列酮体外抗结肠癌作用的实验研究

目的探讨罗格列酮（Rosiglitazone,ROZ）体外抑制结肠癌生长的作用。方法体外培养人结肠癌细胞HT-29,不同浓度ROZ（10、20、40、80μmol／L）干预。MTT法测定细胞增殖,透射电镜、TUNEL法及流式细胞术观察细胞凋亡情况,免疫组织化学法检测各组细胞中Bax及Bcl-2的表达。结果MTT法显示ROZ抑制HT-29细胞生长,且具有时间和浓度依赖性,透射电镜、TUNEL法及流式细胞术可观察到ROZ具有诱导结肠癌细胞凋亡的作用,免疫组化法显示经ROZ处理后的结肠癌细胞Bax蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达减弱。结论ROZ体外具有抑制结肠癌细胞生长的作用,与其诱导细胞凋亡有关,可能通过增强Bax的表达及减弱Bcl-2的表达实现。     

Rg3对人肺腺癌A549细胞及其内源性VEGF的影响

目的探讨人参皂甙-RG3在抑制肿瘤新生血管生成过程中的作用,对人肺腺癌A549细胞的影响及其内源性分泌的血管内皮细胞生长因子(VEGF)的作用。方法培养人肺腺癌细胞株A549细胞,采用MTT法检测不同浓度RG3(10-4MOL/L,10-5MOL/L,10-6MOL/L)对人肺腺癌A549细胞增生的影响、流式细胞仪观察不同浓度RG3(3×10-7MOL/L、10-6MOL/L,3×10-6MOL/L)对A549细胞凋亡的影响、放射免疫分析法定量检测细胞培养液中加入不同浓度RG3(10-7MOL/L、10-6MOL/L、10-5MOL/L和10-4MOL/L)后内源性VEGF含量的变化。结果RG3对A549细胞的增生无明显抑制作用,3×10-6MOL/L RG3作用120H后A549细胞凋亡百分数为29.8%(P<0.05)。RG3浓度为10-5MOL/L和10-4MOL/L组的VEGF明显低于对照组(P<0.05),10-4MOL/L RG3组的VEGF低于10-7MOL/L和10-6MOL/L RG3组,作用72H的VEGF水平明显低于48H和24H组(P<0.05)。结论适当浓度的RG3作用一定时间后,可促使人肺腺癌A549细胞的凋亡,并可抑制肿瘤细胞内源性分泌的VEGF含量,RG3抑制肿瘤血管生成机制之一是通过影响细胞分泌上述因子而起作用的。