8株海洋真菌的抗氧化和抗肿瘤活性筛选

目的通过抗氧化和抗肿瘤活性双生物活性筛选模型评估来源于东海海洋的8株海洋真菌提取物的生物活性。方法对8株海洋真菌菌体甲醇提取物和发酵液乙酸乙酯提取物进行体外抗氧化活性(DPPH法)和抗肿瘤(MTT法)双生物活性模型筛选研究。结果菌株251#,28#,111#的发酵液提取物在剂量为2mg.mL-1时,对DPPH的清除率大于90%;当剂量为50μg.mL-1时,菌株28#,111#,21#发酵液提取物对HeLa和H460肿瘤细胞的抑制率均大于50%。结论菌株28#,111#发酵液提取物在体外具有较强的清除自由基的能力,对HeLa和H460肿瘤细胞具有较高的细胞毒性。提示菌株28#,111#的活性代谢产物可能来源于菌株生长过程中产生的胞外物。同时,表明海洋真菌是潜在的活性代谢产物的重要来源。     

海藻抗A-549和HL-60肿瘤细胞及抗菌活性研究

目的:为了从海藻中寻找天然药物活性前体。方法:对山东沿海的 39种海藻的甲醇提取物进行了抗肿瘤(肿瘤细胞A-549和HL-60)及抗菌(金葡菌、大肠杆菌和白色假丝酵母菌)活性筛选。结果:抗肿瘤活性研究中,海藻提取物表现出较好的活性,19种对HL-60有抑制作用,34种对A-549有抑制作用。其中,石花菜、萱藻和小粘膜藻对2种肿瘤细胞的抑制率均大于80％;而三叉仙菜和绳藻的抑制率均大于90％。在抗菌活性实验中,海藻提取物的最低抑菌浓度均大于 20mg·L~(-1)。结论:海藻作为抗肿瘤活性前体的来源,值得深入研究。     

放线菌野生株代谢功能的核糖体工程改造与新产抗肿瘤活性产物研究

目的利用核糖体工程技术,改造放线菌次级代谢功能,筛选获得抗肿瘤活性突变株,并对突变株新产活性产物进行研究。方法以海洋来源无活性放线菌野生株HLF-9和HLF-43为出发菌,通过单菌落挑选与平板划线培养,分离纯化链霉素抗性突变株,通过摇床液态发酵和发酵提取物乙酸乙酯萃取样品的抗肿瘤活性筛选,获得抗肿瘤活性突变株;采用活性跟踪与微量预试先导．放大实验制备组合的实验模式,与原始菌样品对照比较,在快速确定差异活性斑点基础上,组合各种色谱技术,分离纯化突变株新产抗肿瘤活性产物;根据理化性质和波谱数据鉴定化合物结构;采用MTF法测评抗肿瘤活性。结果链霉素对HLF-9和HLF-43的最低抑菌浓度分别为3和10mg·L^-1。经抗性筛选,得到对链霉素产生抗性的HLF-39突变株28株、HLF-43突变株204株。在所得突变株中,3株HLF．39突变株和14株HLF-43突变株有抗肿瘤活性,100mg·L^-1样品对K562细胞的抑制率大于20％;其中,4株分别对11、100、200和300mg·L^-1链霉素产生抗性的HLF43突变株CHS-21101、CHS-210010、CHS-220002和CHS-230001活性显著,100mg·L^-1样品对K562细胞的抑制率分别达59．5％、50．0％、44．1％和59．6％。从CHS-21101发酵物中分离得到2个该突变株新产抗肿瘤活性产物,并分别鉴定为环（4-羟脯-亮）二肽（1）和phencomycin（2）。化合物1和2对K562细胞呈抑制活性,100mg·L-1抑制率分别为33．9％和21．4％。结论利用核糖体工程抗性筛选技术,从2株无活性放线菌野生菌株成功筛选得到17株具有抗肿瘤活性的链霉素抗性突变株,从其中1株发酵物中分离鉴定了2个该突变株新产抗肿瘤活性产物。用核糖体工程技术改造无活性放线菌野生株的次级代谢功能,可筛选获得活性突变株并提供深入研究新产活性产物,从中筛选新药及其先导结构,从?     

海洋微藻体外抗肿瘤血管生成活性的研究

目的研究海洋微藻提取物对肿瘤血管生成的影响。方法采用MTT法测定6种海洋微藻的12种提取物对正常的血管内皮细胞、肿瘤细胞培养液诱导的内皮细胞的增殖影响;采用创伤愈合法测定了肿瘤细胞培养液诱导的内皮细胞迁移影响。结果亚心形扁藻、新月菱形藻、小球藻、米氏凯伦藻的70%乙醇提取物均在一定程度上抑制肿瘤细胞培养液诱导的ECV304细胞的增殖;小球藻、米氏凯伦藻的水提取物、70%乙醇提取物能够抑制肿瘤细胞诱导液对ECV304迁移的促进作用。结论一些海洋微藻具有抑制肿瘤血管生成活性。     

10株东海海水来源真菌的抗肿瘤活性筛选研究

目的运用MTT法抗肿瘤生物活性模型对来源于东海海水的10株真菌提取物进行生物活性筛选。方法对10株海水来源真菌的发酵液乙酸乙酯提取物进行体外抗肿瘤活性(MTT法)筛选研究评估。结果菌株12010104、12010103、12010101和08010101的发酵液提取物对PC12肿瘤细胞的细胞毒性较强,当浓度为200μg·mL-1时抑制率可达70%以上。菌株12010104、12010109、及08010101的发酵液提取对HepG2肿瘤细胞物表现出较强的抑制活性,抑制率在浓度为200μg·mL-1时可达85%以上,真菌12010101的抑制活性次之,在同浓度为77%。而菌株12010104、12010101及08010101在浓度为100μg·mL-1时对U937肿瘤细胞具有较强的细胞毒性,抑制率可达90%以上。结论菌株12010104、12010101和08010101的发酵液提取物在体外具有较好的PC12、HepG2、U937细胞毒活性,具有潜在的海洋药物研究价值。     

真菌来源的蛋白酶体抑制剂F04W2166A的研究

目的 通过蛋白酶体抑制剂筛选模型从微生物代谢产物中筛选出具有蛋白酶体抑制活性的化合物.方法 对1株筛选得到的阳性真菌进行放大发酵,通过硅胶和Sephadex LH-20柱色谱等分离手段进行单体化合物分离.结合理化性质和质谱及核磁共振等数据的分析,确定其化学结构.测定化合物的蛋白酶体抑制活性以及抗肿瘤细胞增殖活性.结果 从1株具有活性的轮枝孢霉菌F04W2166中得到活性化合物F04W2166A,并确定其结构与环缩酚酞类己知化合物Pullularin C相同.体外酶抑制活性说明该化合物对蛋白酶体有很强的抑制活性,其IC_50为3.1μg/mL.进一步的抗肿瘤细胞增殖活性结果证明该化合物对人结肠癌细胞株HT-29和人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的增殖均有很高的抑制活性,其IC_50分别为28.3和271.6ng/mL.结论 F04W2166A是一个环缩酚酞类的蛋白酶体抑制剂,具有强的体外抗肿瘤细胞增殖活性.     

红树林放线菌筛选及其抗肿瘤活性测定

目的 从我国湛江红树林采集的海泥样品中分离纯化微生物菌株并进行筛选及抗肿瘤活性测定.方法 采用形态学方法鉴定放线菌菌株;采用四氮唑盐(MTT)法测定筛选出的72株放线菌发酵液对肺癌细胞A549与人类慢性髓性白血病细胞K562两种肿瘤细胞的细胞毒活性.结果 经鉴定分离得到了72株放线菌,其中18%的放线菌发酵液具有不同程度的细胞毒活性.N2010-37和N2010-68两株放线菌发酵液对上述两种肿瘤细胞株作用较显著.结论 该研究结果为从湛江红树林放线菌中寻找抗肿瘤活性成分奠定了基础.     

贻贝提取物的抗氧化活性研究

目的：对海洋软体动物贻贝的抗氧化活性进行体外研究。方法贻贝匀浆后分别用正己烷、乙酸乙酯、氯仿、正丁醇、水进行提取,并对提取物进行抗氧化试验,同时与没食子酸和抗坏血酸两种合成抗氧化剂进行对照。结果试验结果表明乙酸乙酯提取物具有较高的抗氧化活性,在浓度为10～80μg·mL －1范围内,随着浓度的增加其抗氧化能力与没食子酸和抗坏血酸接近。结论贻贝提取物具有显著的抗氧化活性,抗氧化活性与提取物的浓度之间具有很好的相关性。     

三种藻类硫酸多糖的提取及其清除自由基活性研究

目的通过对紫莱、海带、羊栖莱3种藻类硫酸多糖进行提取和体外活性检测,以期筛选出具有一定开发潜力的抗氧化剂。方法以稳定自由基(DPPH)等抗氧化检测方法对提取物进行抗氧化活性的测定。结果3种硫酸多糖均有不同程度的抗氧化活性。但它们之间的抗氧化活性大小差异较大,并且用不同溶剂提取的硫酸多糖抗氧化活性也有差异。结论水提的羊栖菜硫酸多糖(SPS)具有较强抗氧化活性。     

水飞蓟茎叶中具有抗氧化活性的黄酮类化学成分研究

目的:通过已经建立并且行之有效的化学筛选(LC-MSn)和活性筛选集成系统获取水飞蓟茎叶中具有抗氧化活性的黄酮类化合物.方法:95％乙醇提取药材获得总提取物,D101型大孔树脂富集总黄酮类化合物,多种色谱方法(sephadex-LH20,HPLC等)相结合分离得到目标化合物,NMR谱鉴定化合物结构;采用Fe2+半胱氨酸诱导的肝微粒体脂质过氧化模型进行化合物抗氧化活性筛选.结果:从水飞蓟茎叶中首次分离得到5个黄酮类化合物,这5个化合物均具有较强的抗氧化活性,IC50值8.5～11.2.结论:从水飞蓟茎叶中获取的黄酮类化合物具有较强的抗氧化活性,我们将进一步研究抗氧化活性与临床治疗相关疾病的关系.     

章鱼胺衍生物的合成及抗氧化活性研究

目的以章鱼胺为原料合成其衍生物,考察它们的抗氧化活性。方法利用DPPH法对酪胺、章鱼胺及章鱼胺衍生物的抗氧化活性进行测定。结果与结论既往研究指出,章鱼胺的前体化合物酪胺具有较高的抗氧化活性。本研究结果表明,章鱼胺及其两种衍生物具有高于酪胺的抗氧化活性,值得进一步研究。     

4种海参多肽抗氧化活性的比较研究

目的比较大西洋海参(Holothuria coluber Semper)、东海海参(Acaudina mobpadioides Semper)、刺参(Apostichopus japonicus)和加州拟刺参(Parastichopus californicus)这4种海参多肽的抗氧化活性。方法经酶解、超滤得到海参多肽,通过其对DPPH.、.OH和O2-.的清除效率来比较4种海参多肽的抗氧化活性。结果与结论4种海参多肽对自由基的清除能力总体上均随样品质量浓度的增加而增强,但同一种海参多肽对3种自由基的清除能力各不相同。大西洋海参多肽、刺参多肽和加州拟刺参多肽分别对.OH、DPPH.和O2-.的清除能力最强。此外,4种海参多肽中含有的主要氨基酸均为甘氨酸和丙氨酸。     

海洋微藻对蔬菜生长及病原真菌的活性初探

选用病原菌离体抑菌及植物幼苗活休试验的方法,测试了７种海洋微藻对３种蔬菜的幼苗生长,以及对４种蔬菜病原菌的作用。试验表明,经微藻悬浮液喷施处理的蔬菜的苗普遍生长健壮,叶色浓绿,幼苗变黄死亡时间延长３￣１９ｄ,４种微藻对植物病原真蓖有不同程度的抑制作用,认为,海洋微藻肯有促进植物生长和抑制植物病原菌的作用可作为开发生物源农药的新资源。     

Evaluation of microalgae and cyanobacteria as potential sources of antimicrobial compounds

In recent decades, marine microorganisms have become known for their ability to produce a wide variety of secondary bioactive metabolites. Several compounds have been isolated from marine microorganisms for the development of novel bioactives for the food and pharmaceutical industries. In this study, a number of microalgae were evaluated for their antimicrobial activity against gram-positive and gram-negative bacteria, including food and plant pathogens, using various extraction techniques and antimicrobial assays. Disc diffusion and spot-on-lawn assays were conducted to confirm the antimicrobial activity. To measure the potency of the extracts, minimum inhibition concentrations (MIultCs) were measured. Three microalgae, namely Isochrysis galbana, Scenedesmus sp. NT8c, and Chlorella sp. FN1, showed strong inhibitory activity preferentially against gram-positive bacteria. These microalgal species were then selected for further purification and analysis, leading to compound identification. By using a mixture of different chromatography techniques gas chromatography–mass spectrometry (GC–MS) and high-performance liquid chromatography (HPLC) and ultra-high performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry (UHPLC-Q-TOF-MS), we were able to separate and identify the dominant compounds that are responsible for the inhibitory activity. Additionally, nuclear magnetic resonance (NMR) was used to confirm the presence of these compounds. The dominant compounds that were identified and purified in the extracts are linoleic acid, oleic acid, docosahexaenoic acid (DHA) and eicosapentaenoic acid (EPA). These compounds are the potential candidates that inhibit the growth of gram-positive bacteria. This indicates the potential use of microalgae and their antimicrobial compounds as biocontrol agents against food and plant pathogens.     

超声波辅助提取西藏雪莲总黄酮及其抗氧化性研究

目的研究以西藏雪莲为原料、乙醇为溶剂,超声提取黄酮类化合物工艺过程的最优条件。方法在单因素试验基础上通过响应面试验优化乙醇体积分数、超声时间和温度等工艺条件,并研究了其对DPPH·的清除作用。结果西藏雪莲总黄酮的最优超声提取工艺:乙醇浓度70%,提取温度60℃,液料比13:1(m L/g),提取时间50 min,提取2次,在此条件下,得到的总黄酮提取物含量为4.246%。其具有较好的清除DPPH·效果。结论超声提取西藏雪莲总黄酮工艺具有时间短、提取物含量高等优点,具有进一步开发应用的价值。     

海洋动物共附生微生物抗B16肿瘤细胞活性菌株的筛选

目的分离具有小鼠黑色素瘤B16细胞毒活性海洋微生物。方法通过M1培养基、Gause培养基、Martin培养基分离单菌落,利用黄豆粉培养基发酵,目测法测定发酵液活性,利用SAS软件对结果统计分析。结果分离获得634株海洋微生物,筛选到活性菌株56株,活性菌株所占的比率为8.83%。结论从寄居蟹、毛螺、苔藓虫、三角涡虫、水螅、海绵分离筛选到的总菌数明显的高于其他动物,而从海葵、贻贝、文蛤、江瑶、海鞘、管虫、螃蟹分离到的活性菌株数高于其他动物。采样地点与分离到的微生物类别有显著相关性,各地点样品分离到的放线菌、细菌和真菌数占该地区分离到的菌株总数的比率最大的的地点依次是新村渔排、古城岭红树林和南湾港渔排;细菌、放线菌、真菌等不同微生物种类与活性菌株比率有显著相关性,细菌的活性菌株比率最高。     

马齿苋提取物体外清除自由基活性的研究

目的:研究马齿苋全草提取物体外的抗氧化活性。方法:选取1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazine,DPPH)自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基,以及还原能力体系对马齿苋提取物进行抗氧化活性测定。与阳性对照药没食子酸和维生素C作比较。结果:马齿苋提取物清除DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基的能力在低浓度时弱于阳性对照药没食子酸和维生素C,但随着浓度的增加,其清除活性均明显优于阳性对照药。在0~200μg/ml浓度范围内,马齿苋提取物的还原能力弱于2,6-二叔丁基对甲酚。结论:马齿苋提取物具有较好的清除自由基能力,但还原能力相对较弱。马齿苋可能是有效的外源性天然有机抗氧化剂。     

In vitro inhibition of the replication of haemorrhagic septicaemia virus (VHSV) and African swine fever virus (ASFV) by extracts from marine microalgae

We have screened for in vitro inhibition of viral replication with extracts from the following marine microalgae: Porphyridium cruentum, Phaeodactylum tricornutum, Tetraselmis suecica, Chlorella autotrophica, Dunaliella tertiolecta, Dunaliella bardawil, Isochrysis galbana, Isochrysis galbana var Tiso, Ellipsoidon sp. and Tetraselmis tetrathele. We have used as viral models two enveloped viruses of significant economic importance, the viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV) of salmonid fish and the African swine fever virus (ASFV). The aqueous extracts from P. cruentum, C. autotrophica and Ellipsoidon sp., produced a significant inhibition of the in vitro replication of both viruses in a dose-dependent manner. That this inhibition could be due to sulfated polysaccharides was suggested because the same pattern of viral inhibition was obtained by using exocellular extracts from microalgae enriched in these compounds and/or dextran sulfate of high molecular weight. However, the inhibition of viral replication did not correlate with the percentage of sulfatation of the exocellular polysaccharides. Extracts from marine microalgae may have prophylactic utility against fish and mammalian viral diseases.     

利用海洋微藻发酵生产二十二碳六烯酸的研究

综述利用海洋微藻发酵生产二十二碳六烯酸(DHA)的研究背景、DHA生产菌的种类和培养、DHA高产菌种的选育方法及影响DHA发酵生产的因素等。目前DHA产品主要来源于深海鱼油,但由鱼油提取DHA存在诸多弊端,影响DHA的产量和质量,远不能满足市场需求,而利用海洋微藻发酵生产DHA则可弥补不足,前景广阔。