PCR扩增梅毒螺旋体polA基因及其在一期梅毒诊断中的应用

目的提高对梅毒诊断的灵敏性和特异性.方法运用PCR扩增了梅毒螺旋体(Tp)的DNA多聚酶I基因(polA)的特异性片段,检测了该方法的特异性和灵敏性;用该方法检测了118例生殖器溃疡,同时用Tp PCR试剂盒和血清学方法平行检测同批病人的溃疡或血清标本.结果polA PCR只在扩增Tp时有特异性产物,灵敏性约为20个Tp拷贝;检测118例生殖器溃疡标本,用Tp PCR试剂盒为对照,polA PCR方法的特异性和灵敏性分别为96.8%和95.7%,两种PCR检验结果差异无显著性(x2=o.25,P＞0.05);polA PCR方法与血清学方法对一期梅毒诊断结果差异有显著性(x2=4.45,P＜0.05).结论 polA PCR方法高度敏感、特异,在一期梅毒诊断中优于血清学方法,可作为血清学方法的补充用于梅毒的诊断.     

半巢式聚合酶链反应扩增全血中梅毒螺旋体polA基因

目的探讨半巢式聚合酶链反应（PCR）扩增梅毒螺旋体（Tp）的DNA多聚酶Ⅰ基因（polA）以探讨检测全血标本中微量Tp的可行性。方法应用半巢式PCR和常规PCR分别扩增165例可疑梅毒及非梅毒患者全血中Tp的polA,与血清学方法比较,探讨半巢式PCR方法在扩增全血中Tp DNA的意义。结果待测的165例标本中,与血清学方法比较,半巢式PCR检测Tp的敏感性和特异性分别为62.7%和95.9%,两者符合率为82.4%;两种PCR方法检测结果差异有显著性（P〈0.01）,半巢式PCR敏感性远高于常规PCR。结论半巢式polA PCR检测全血中Tp较常规PCR灵敏,是血清学方法诊断梅毒的有效补充,但其检测的灵敏度仍有待进一步提高。     

PCR法和TP-ELISA法检测梅毒的结果分析

目的:探讨巢式PCR法在血液样本梅毒检测中适用性.方法:运用常规及巢式PCR 扩增了梅毒螺旋体(Treponema pallidum,TP)的DNA多聚酶I基因(DNA polymerase I,polA) 的特异性片段,与血清学方法比较,评价了两方法在诊断梅毒中的意义.结果:用PCR法和TP-ELISA检测89份拟诊为梅毒的血液标本,TP-ELISA方法与巢式polA(DNA polymerase I)PCR结果差异有统计学意义;巢式PCR敏感性高于常规PCR.结论:巢式polA(DNA polymerase I )PCR虽然具有高度敏感、特异等优点,但对全血、血清等标本要求较高,是否适合用于血液样本的检测有待进一步研究.     

梅毒螺旋体Tp0993重组蛋白的表达及鉴定

目的表达、鉴定梅毒螺旋体（Tp）重组蛋白Tp0993（rTp0993）,为进一步评价其在梅毒血清学诊断中的意义奠定基础。方法 PCR扩增去除信号肽核苷酸序列的Tp0993基因,构建原核重组体pET-28a/Tp0933并诱导表达蛋白;Ni-NTA法纯化重组蛋白,Western blot检测表达产物的抗原性。结果成功构建了原核重组体pET-28a/Tp0993,经诱导表达了一分子量大约为40 Ku的重组蛋白;Western blot结果显示纯化蛋白能被梅毒患者血清特异性识别。结论 rTp0993有较好的抗原性,为进一步研究其在梅毒血清学诊断中的作用奠定了基础。     

感染依赖性抗原Tp0470的鉴定及在梅毒诊断中的应用

为筛选新型梅毒诊断抗原,以改进梅毒早期诊断及预后判断血清学诊断方法,本研究在鉴定Tp0470蛋白为感染依赖性抗原的基础上,建立基于Tp0470的ELISA方法,检测468份临床血清标本,并与TPPA、LZ-ELISA及RPR结果比较,初步评价该蛋白的诊断价值;同时对Tp0470-ELISA A₄₅₀值与RPR滴度进行相关性分析。结果显示:Tp0470-ELISA的灵敏度和特异度分别为95.32%和95.66%,ROC分析其AUC值为0.907。与TPPA、LZ-ELISA及RPR结果相比,Tp0470-ELISA的符合率分别为95.51%(kappa=0.907)、94.87%(kappa=0.897)、88.67%(kappa=0.771)。Tp0470-ELISA的A₄₅₀值与RPR滴度的相关系数为0.38,P=0.96。以上结果表明基于Tp0470蛋白的ELISA在梅毒血清学诊断中具有较高的潜在应用价值。     

梅毒螺旋体重组蛋白Tp0608的表达与鉴定

目的表达梅毒螺旋体(Tp)重组蛋白Tp0608(rTp0608)并鉴定其抗原性,为深入探讨其在梅毒血清学诊断中的价值奠定基础。方法 PCR扩增Tp0608全长基因,构建原核表达重组体pET-28a(+)/Tp0608,转化宿主菌诱导表达rTp0608,Ni-NTA亲和层析法纯化蛋白,SDS-PAGE分析蛋白表达形式与纯度,Western blot鉴定rTp0608的抗原性。结果原核表达重组体pET-28a(+)/Tp0608在宿主菌内经诱导表达了分子量大约为38 kDa的重组蛋白,以包涵体表达形式为主,纯化蛋白的纯度>95%;Western blot结果显示纯化蛋白能被梅毒患者混合血清特异性识别。结论 PET-28a(+)表达载体高效表达了rTp0608,该重组抗原有良好的抗原性。     

早期梅毒实验室检测方法的评价

目的:评价在梅毒早期诊断中,四种梅毒血清学检测方法的比较及在临床诊断中应用价值。方法:应用快速血浆反应素试验(RPR)、梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)、梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测182例血清标本。结果:RPR、TPHA、TPPA、ELISA的敏感性分别为88.3%、92.2%、94.8%、98.7%,特异性分别为85.7%、94.3%、96.2%、98.1%,其中RPR、TPHA、TPPA与灵敏性、特异性较好的ELISA比较,RPR、TPHA、TPPA的敏感性较低,差异有显著性(P<0.05),特异性方面,除TPHA、TPPA差异无显著性(P>0.05),RPR低于ELISA,差异有显著性(P<0.05);RPR滴度随治疗时间的增加而逐渐下降。结论:ELISA方法操作简单,结果判断可标准化,特异性高,敏感性高,可作为早期梅毒检测较理想的方法,RPR试验可用于梅毒治疗期间的疗效判定。     

牛淑会为并列第一作者.梅毒螺旋体重组蛋白Tp0608的表达与鉴定

目的表达梅毒螺旋体(Tp)重组蛋白Tp0608(rTp0608)并鉴定其抗原性,为深入探讨其在梅毒血清学诊断中的价值奠定基础。方法PCR扩增Tp0608全长基因,构建原核表达重组体pET-28a(+)/Tp0608,转化宿主菌诱导表达rTp0608,Ni-NTA亲和层析法纯化蛋白,SDS-PAGE分析蛋白表达形式与纯度,Western blot鉴定rTp0608的抗原性。结果原核表达重组体pET-28a(+)/Tp0608在宿主菌内经诱导表达了分子量大约为38 kDa的重组蛋白,以包涵体表达形式为主,纯化蛋白的纯度>95%;Western blot结果显示纯化蛋白能被梅毒患者混合血清特异性识别。结论PET-28a（+）表达载体高效表达了rTp0608,该重组抗原有良好的抗原性。     

3种方法在梅毒检测中的比较

目的:比较TRLIST、TP-ELISA、TPPA 3种血清学检测方法对梅毒血清标本进行检测的结果,评价3种方法在临床的适用性.方法:甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)做非特异性抗体定性检测,酶联免疫双抗原夹心试验(TP-ELISA)、梅毒螺旋体明胶颗粒凝聚集试验(TPPA)做特异性抗体定性检测.结果:TP-ELISA、TPPA两种方法对梅素特异性检测结果差异无显著性;TRUST法和TPPA法对梅毒非特异性检测结果有显著差异.结论:TP-ELISA、TPPA两种检测方法与TRUST比较,具有较高的灵敏度和特异性,考虑TP-ELISA比TPPA的方法的试剂成本便宜,且操作简便、快速和高通量的优点,应是目前梅毒血清学诊断的首选方法.     

不同梅毒检测方法在孕妇梅毒筛查中的应用

目的探讨酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)、梅毒螺旋体明胶试验(TPPA)和甲苯胺红不加热血清学试验(TRUST)三种梅毒血清学检测方法在孕妇梅毒筛查中的应用。方法对2012年3月~2014年3月间就诊的24 964例孕妇同时采用ELISA、TPPA和TRUST等方法进行血清学检测,对检测结果进行分析。结果 24 964例孕妇标本中ELI-SA阳性180例,TPPA阳性178例,TRUST阳性74例。新感染患者74例,既往感染的患者104例,患者阳性率为0.71%;TPPA和ELISA检测结果比较差异无统计学意义(P=0.754,κ=0.972),在45例一期梅毒患者中,阳性符合率为97.78%,23例二期梅毒患者阳性符合率为95.65%,在6例三期梅毒患者中,阳性符合率为100.00%;TPPA和TRUST检测结果有显著性差异(P0.001,κ=0.476),在一期梅毒中的阳性符合率为71.11%,在二期梅毒中的阳性符合率为100.00%,在三期梅毒中的阳性符合率为66.67%。结论对于孕妇梅毒筛查,可先用ELISA方法进行筛查,提高初检结果的检出率,阳性结果通过TPPA确诊,用TRUST试验观察疗效、判断预后。     

早期梅毒临床诊断分析(附465例报告)

目的 探讨血清学、组织病理学在早期梅毒诊断中的意义。方法 对465例早期梅毒进行临床分析，所有患者均作梅毒血清学检测，其中28例做了病理学检查。结果 一期梅毒81例，RPR(快速血浆反应素试验)及TPPA(梅毒螺旋体抗体凝集试验)阳性79例；二期梅毒316例、隐性梅毒20例RPR及TPPA均呈阳性。一期梅毒易误诊为软下疳、生殖器疱疹、疥结节、女阴溃疡等；二期梅毒斑疹及斑丘疹易误诊为玫瑰糠疹、过敏性皮炎等；鳞屑性丘疹易误诊为银屑病；扁平湿疣疹易误诊为尖锐湿疣等。结论 梅毒血清学检测对早期梅毒的诊断具有重要意义，病理检查对硬下疳、扁平湿疣、鳞屑性丘疹皮疹诊断有一定意义，而斑疹呈非特异性炎症改变，不具诊断意义。     

3TP法与ELISA法检测梅毒螺旋体抗体的价值对比研究

目的:比较乳胶凝集免疫比浊法( 3TP )与酶联免疫吸附法( ELISA)检测诊断梅毒的临床应用价值. 方法:对80份确诊为梅毒的患者血清与60份确诊梅毒特异性抗体检测阴性体检者血清标本分别采用3TP 法与ELISA法检测,比较两种检测方法检测结果. 结果:ELISA法检测出现3例假阴性、4例假阳性,检测梅毒的敏感性及特异性、阳性预测值分别为95.00%(57/60)、93.33%(56/60)、93.44%(57/61),3TP 法检测出现3例假阳性,未出现假阴性,检测梅毒的敏感性及特异性、阳性预测值分别为100.00%(60/60)、95.00%(57/60)、95.24%(60/63),两组检测方法诊断梅毒的敏感性、特异性及阳性预测值比较差异无统计学意义( P>0.05);梅毒血清标本全部稀释至3TP 法能检出最低的稀释浓度,此浓度下用ELISA法检测有47份标本S/CO在阳性范围内. 结论:3TP 法与ELISA法两种检测方法诊断梅毒的敏感性、特异性均较高,均能用于诊断梅毒血清学筛查,但是3TP 法相对在梅毒螺旋体低浓度时诊断敏感性更高一些,并且具有检测方法方便的优势.     

一期梅毒半巢式聚合酶链反应检测的效果

目的 探讨半巢式聚合酶链反应（PcR）在一期梅毒早期诊断中的意义。方法应用半巢式PCR检测一期梅毒溃疡组织液和血清中TP-DNA,与IPPA结果进行比较。结果60例临床诊断为一期梅毒患者,溃疡组织液、血清半巢式PCR和TPPA检测的阳性分别为56例（93．33％）、13例（21．67％）和53例（88．33％）。组织液半巢式PCR检测结果与血清半巢式PCR检测结果比较,差异有统计学意义（P〈0．05）,与rI胛A结果比较,差异无统计学意义（D0．05）。结论半巢式PCR检测一期梅毒溃疡组织液中TP-DNA较检测血清中的TP-DNA敏感性高、特异强,可做为TPPA诊断早期梅毒的有效补充。     

梅毒重组抗原酶联免疫吸附试验与快速血浆反应素试验的比较研究

目的 比较传统的快速血浆反应素试验（RPR）与重组梅毒螺旋体抗原为基础的梅毒快速试验的敏感性和特异性。方法 选择249例性传播疾病中心门诊患者,签署知情同意书后采集其静脉血,取血清进行梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）、RPR试验和重组抗原的酶联免疫吸附试验并对结果进行比较。结果 以TPHA结果为标准,重组抗原的酶联免疫吸附试验血清敏感性为100％,特异性为98．4％。RPR试验血清敏感性为65．1％,特异性为98．4％。结论 以重组梅毒螺旋体抗原为基础的试验方法与RPR试验相比,具有更高的敏感性。     

巢式PCR检测梅毒螺旋体DNA方法研究

目的建立一种血清梅毒螺旋体DNA提取及PCR鉴定方法。方法基于化学热裂解法和柱式核酸提取原理进行血清梅毒螺旋体DNA提取。根据文献筛选优化引物建立巢式PCR检测体系,并对实验方法的特异性、抗干扰性、检测梯度进行评价。结果建立的实验方法特异性好、抗干扰性强,对TRUST为1：8以上的标本检测全部为阳性。结论提取梅毒螺旋体DNA及PCR鉴定有助于梅毒的快速诊断,对于血液中梅毒螺旋体增殖能力判断具有重大潜在应用价值。     

Tp-19(s)-IgM-ELISA诊断早期先天梅毒

目的　通过梅毒几种检测方法的比较 ,寻找一种诊断早期先天梅毒的方法。方法　用梅毒甲苯胺红不加热血清实验 (TRUST)、梅毒螺旋体颗粒凝集实验 (TPPA)和梅毒螺旋体 19(s) IgM酶联免疫吸附法 [Tp 19(s) IgM ELISA]对 6例血清快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR)阳性新生儿 (其母亲已在怀孕时被确诊为不同病期梅毒 )的血清进行检测。结果　 6例新生儿中有 4例TRUST、TPPA、Tp 19(s) IgM阳性 ;另 2例TRUST、TPPA均阳性 ,但Tp 19(s) IgM阴性。前 4例新生儿确诊为早期先天梅毒 ,后面 2例排除早期先天梅毒。结论　特异性IgM检测应该作为早期先天梅毒确诊的实验诊断方法。     

CLINICAL EVALUATION OF FOUR RECOMBINANT TREPONEMA PALLIDUM ANTIGEN-BASED RAPID TESTS IN THE DIAGNOSIS OF SYPHILIS

Objective To assess the sensitivity,specificity,and feasibility of 4 recombinant Treponema pallidum antigen-based rapid tests in the diagnosis of syphilis.Methods A total of 970 outpatients were selected from the Sexually Transmitted Diseases Centre of Peking Union Medical College Hospital.Venous blood was collected and serum was extracted.T.pallidum antibodies in whole blood,anticoagulant whole blood,and serum were detected using 4 recombinant T.pallidum antigen-based rapid tests.T.pallidum haemagglutination test(TPHA) was considered as the gold standard for the detection of T.pallidum specific antibodies in serum.The sensitivities and specificities of four methods were analyzed.Results The sensitivities and specificities of Abbott Determine Syphilis TP test,SD-BIOLINE Syphilis 3.0 test,VISITECT-SYPHILIS test,and Syphicheck-WB test for serum specimens were 100% and 98.9%,95.7% and 98.0%,94.6% and 98.2%,68.1% and 98.9%;for whole blood were 74.1% and 99.5%,87.9% and 99.4%,73.2% and 99.7%,64.7% and 99.7%.The observed sensitivities of the 4 rapid diagnosis tests were not significantly different with TPHA(P>0.05).Conclusions The 4 rapid tests show good performance and characteristics in the diagnosis of syphilis.Furthermore,they are more sensitive for serum specimens than whole blood.     

梅毒螺旋体血清学检测方法的临床评价

目的比较几种梅毒螺旋体血清学检测方法。方法对我站2005年1月～2006年1月的门诊梅毒患者血清，采用甲苯胺红不加热血清反应素试验、梅毒螺旋体明胶凝集试验、蛋白印迹试验检测IgM。结果WB检测IgM对早期梅毒的诊断有统计学意义。结论梅毒螺旋体特异性IgM抗体检测灵敏度高、特异性强，适用于未经治疗的各个时期的梅毒诊断。WB检测IgM简便易行，是筛查和检测早期梅毒的首选方法。     

血清学实验室检查在梅毒临床诊断中的应用研究

目的:比较分析甲苯胺红不加热血清反应素试验(TRUST)、梅毒胶体金法(SYP)、双抗原夹心酶联免疫法(ELISA)三种实验室检查方法的诊断意义。方法:临床入选226例志愿者,通过梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)检查,分为TP-PA(+)组(n=129)和TPPA(-)组(n=97),均采用TRUST、SYP和ELISAA检测其梅毒螺旋体抗体。结果:TPPA(+)组和TPPA(-)组之间的TRUST阳性率、SYP阳性率及ELISA阳性率均具有统计学差异(P<0.05);在TPPA(+)组中,与TRUST和SYP相比较,ELISA阳性率最高,高达96.12%(P<0.05)。而在TPPA(-)组中,与TRUST和ELISA相比较,SYP阳性率最高,为20.62%(P<0.05)。与TRUST和SYP相比较,ELISA的灵敏度和Youden指数最高(P<0.05)。与TRUST相比较,ELISA对不同阶段梅毒阳性率均显著升高(P<0.05)。结论:ELISA具有较高的敏感度和特异度、成本低、操作简易优点,可以替代TPPA作为梅毒血清学诊断的首选方法。