六味安消胶囊对慢传输型便秘大鼠肠道推进功能影响的实验研究

目的探究六味安消胶囊对慢传输型便秘(STC)大鼠肠道功能、排便量、肠神经递质及水通道蛋白(AQP)的影响。方法雄性SD大鼠60只,随机分为对照组、模型组、六味安消胶囊组(30 mg/kg,40 mg/kg,50 mg/kg)及莫沙必利组;模型组、六味安消胶囊组及莫沙必利组采用复方地芬诺酯混悬液10 mg/(kg·d)灌胃,连续给药14 d,建立STC模型;模型建立后,六味安消胶囊组及莫沙必利组分别给予六味安消胶囊(30 mg·kg~(-1),40mg·kg~(-1),50 mg·kg~(-1))及莫沙必利混悬液1.5 mg/(kg·d)灌胃,对照组及模型组给予等体积0.9%Na Cl溶液灌胃,连续给药14 d。检测各组大鼠造模前、造模期及治疗期粪便数量及含水量;计算各组大鼠碳末推进率;蛋白免疫印迹(Western blot)检测各组大鼠结肠组织水通道蛋白1,3,4,8(AQP1,3,4,8)、干细胞因子及其受体(SCF/c-kit)蛋白表达。结果与对照组相比,模型组大鼠碳末推进率、排便量及粪便含水量降低,模型组大鼠结肠AQP1、3、4、8表达升高,SCF、c-kit蛋白表达降低(P0.05);与模型组相比,六位安消胶囊组及莫沙必利组大鼠碳末推进率、排便量及粪便含水量升高,结肠AQP1,3,4,8表达降低,SCF/c-kit蛋白表达升高(P0.05)。结论六味安消胶囊可改善STC大鼠肠道功能、排便数量及粪便含水量,其机制可能与改善AQPs蛋白及SCF/c-kit信号通路有关。     

脑缺血后Caspase-3蛋白Bcl-2和Bax基因表达在神经损伤中的作用

目的:探讨实验性大鼠脑缺血/再灌注损伤后Caspases-3蛋白、Bax和BcL-2基因调控神经元凋亡的作用机制与临床意义。方法:成年健康雄性Wistar大鼠64只,随机分为对照组和实验组各32只。实验组大鼠制备大脑中动脉闭塞再灌注模型。再灌注后2组大鼠均于不同时间点进行神经功能评分(Bederson评分)、按Feeney评分测定整合及协调功能,检测前肢放置试验和运动功能得分;利用TUNEL法观察脑神经元凋亡情况;免疫组化法检测脑缺血区Caspases-3、Bax和BcL-2阳性神经元的表达。结果:实验组大鼠再灌注6h～7d时Bederson和Feeney评分明显低于对照组;而前肢放置检测评分高于对照组(均P0.05,0.01)。14d各项检测指标转为正常,与对照组相同。再灌注48h点实验组大鼠皮质及海马区TUNEL、Caspase-3和Bax阳性神经元达高峰,然后开始下降,14d接近3h点表达,但均明显高于对照组(P0.05,0.01);再灌注6h～7d点皮质海马区Bcl-2阳性神经元表达呈降低趋势,14d接近3h点。结论:脑缺血后Caspases-3蛋白、Bax和Bcl-2基因表达调控神经元凋亡并促进神经损伤。     

GABAA受体γ2亚单位在海人酸颞叶癫痫大鼠海马内的表达

目的:探讨癫痫发作后GABAA受体γ2亚单位在海马各区的动态表达以及氯硝西泮干预对其表达的影响。方法:健康成年雄性SD大鼠40只,随机分为对照组5只,致痫组15只,干预组15只,干预对照组5只。大鼠海马CA3区注射海人酸建立颞叶癫痫模型,干预组大鼠在致痫前予以氯硝西泮灌胃。于致痫后6 h、12 h和1 d采用免疫组化法检测各组大鼠海马CA1及CA3区γ-氨基丁酸A受体γ2亚单位(GABAARγ2)的动态表达水平。结果:致痫组在海人酸给药后6 h、12 h及1 d,海马CA3区GABAARγ2蛋白表达均显著低于对照组(P0.01);CA1区GABAARγ2蛋白表达也下降,注射后1 d显著低于对照组(P0.01)。干预组在海人酸注射后1 d CA1和CA3区GABAARγ2蛋白表达低于对照组(P0.05);海人酸注射后6 h、12 h及1 d,CA3区GABAARγ2蛋白表达均高于同时间点致痫组(P0.05),CA1区于海人酸注射后1 d,GABAARγ2蛋白表达显著高于同时间点致痫组(P0.01)。结论:海人酸诱导的颞叶癫痫模型中,海马GABAARγ2蛋白表达减少,氯硝西泮可缓解颞叶癫痫导致的GABAARγ2蛋白表达减少。     

谷氨酰胺对脓毒症大鼠心肌细胞Bcl-2/Bax表达的影响

目的 研究脓毒症大鼠心肌细胞凋亡与Bcl-2/Bax基因及蛋白表达的关系,探讨谷氨酰胺(Gin)对脓毒症心肌细胞凋亡的保护作用.方法采用内毒素(LPS 4 ms/ks)腹腔注射法制作脓毒症大鼠模型,实验地点在中山大学北校区动物实验中心.健康Sprague-Dawley(sD)大鼠72只随机分为对照组、LPS组及LPS+Gln(0.3g/kg)组,再分为0 h,6 h,12 h,24 h亚组(腹腔注射后每组成功存活至观察时间点的大鼠累积达到6只,n=6),检测各时点心肌细胞凋亡率和Bcl-2及Bax蛋白的含量,同时检测心肌Bcl-2及Bax mRNA表达.对结果进行方差分析和相关性统计分析.结果 LPS组大鼠心肌细胞凋亡率6 h、12 h及24 h均明显高于埘照组(F=186.786,P<0.01);心肌细胞Bax蛋白表达术后6 h降低(F=9.027,P<0.01),之后高于对照组;而Bcl-2蛋白表达6 h,12 h及24 h均低于对照组(F=301.142,P<0.01);Bax/Bcl-2蛋白表达比明显高于对照组(F=527.373,P<0.01);BaxmRNA和Bcl-2 6 h,12 h及24 h较对照组均明显上调(F=126.157,80.745,P<0.01).LPS+Gln组与LPS组比较,6 h,12 h及24 h心肌细胞凋亡率明显低于LPS组(F=75.187,P<0.01);Bax蛋白表达下降(F=20.981,P<0.01),而Bcl-2蛋白却升高(F 164.969,P<0.000);Bax/Bcl-2蛋白表达比降低(F=141.426,P<0.01);Bax mRNA和Bcl-2 6 h,12 h及24 h组较LPS组均明显下调(F=103.463,89.373,P<0.01).结论 Bcl-2抗凋亡基因及Bax促凋亡基因及其蛋白的表达参与脓毒症心肌细胞凋亡;应用Gln能影响凋亡相关基因及蛋白表达,减轻脓毒症心肌细胞的凋亡,改善脓毒症预后.     

谷氨酰胺对脓毒症大鼠心肌细胞Bcl-2/Bax表达的影响

目的 研究脓毒症大鼠心肌细胞凋亡与Bcl-2/Bax基因及蛋白表达的关系,探讨谷氨酰胺(Gin)对脓毒症心肌细胞凋亡的保护作用.方法采用内毒素(LPS 4 ms/ks)腹腔注射法制作脓毒症大鼠模型,实验地点在中山大学北校区动物实验中心.健康Sprague-Dawley(sD)大鼠72只随机分为对照组、LPS组及LPS+Gln(0.3g/kg)组,再分为0 h,6 h,12 h,24 h亚组(腹腔注射后每组成功存活至观察时间点的大鼠累积达到6只,n=6),检测各时点心肌细胞凋亡率和Bcl-2及Bax蛋白的含量,同时检测心肌Bcl-2及Bax mRNA表达.对结果进行方差分析和相关性统计分析.结果 LPS组大鼠心肌细胞凋亡率6 h、12 h及24 h均明显高于埘照组(F=186.786,P<0.01);心肌细胞Bax蛋白表达术后6 h降低(F=9.027,P<0.01),之后高于对照组;而Bcl-2蛋白表达6 h,12 h及24 h均低于对照组(F=301.142,P<0.01);Bax/Bcl-2蛋白表达比明显高于对照组(F=527.373,P<0.01);BaxmRNA和Bcl-2 6 h,12 h及24 h较对照组均明显上调(F=126.157,80.745,P<0.01).LPS+Gln组与LPS组比较,6 h,12 h及24 h心肌细胞凋亡率明显低于LPS组(F=75.187,P<0.01);Bax蛋白表达下降(F=20.981,P<0.01),而Bcl-2蛋白却升高(F 164.969,P<0.000);Bax/Bcl-2蛋白表达比降低(F=141.426,P<0.01);Bax mRNA和Bcl-2 6 h,12 h及24 h组较LPS组均明显下调(F=103.463,89.373,P<0.01).结论 Bcl-2抗凋亡基因及Bax促凋亡基因及其蛋白的表达参与脓毒症心肌细胞凋亡;应用Gln能影响凋亡相关基因及蛋白表达,减轻脓毒症心肌细胞的凋亡,改善脓毒症预后.     

大鼠慢传输型便秘发病的Cajal间质细胞特异性蛋白c-kit-SCF调控机制研究

目的分析大鼠慢传输型便秘发病的Cajal间质细胞特异性蛋白c-kit的调控机制。方法成年雄性SD大鼠皮下注射吗啡25 mg/kg,共45 d,诱导大鼠慢传输型便秘发病模型。分析便秘大鼠日均粪便粒数和质量及首粒黑便排出时间,Real-time PCR及Western blot法检测便秘大鼠SCF及c-kit蛋白表达水平,酶联免疫吸附测定法分析便秘大鼠体内炎症因子水平变化。结果便秘组大鼠日均粪便粒数明显降低,便粒质量明显升高,首粒黑便排出时间明显延长,且与对照组相比存在显著差异(P0.05);便秘组大鼠SCF及c-kitmRNA及蛋白表达水平明显降低,炎症因子IL-1β、IL-2及IL-10水平明显升高,且与对照组相比存在显著差异(P0.05)。结论 SCF及c-kit蛋白调控了大鼠慢传输型便秘发病过程,且此过程与炎症反应有关。     

电针“风府、太冲”穴对帕金森病模型大鼠内质网应激相关蛋白表达的影响

目的:探讨内质网应激相关蛋白活化转录因子6(ATF6)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)在针刺防治帕金森病中的作用。方法:84只雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、电针治疗7d组、电针治疗14d组、电针治疗21d组、电针治疗28d组,每组12只。模型组采取颈背部皮下注射鱼藤酮法,假手术组只注射不含鱼藤酮的等量葵花油乳化液。各电针治疗组取穴"风府"、"太冲",每次治疗20min,每天1次,分别治疗7d、14d、21d、28d。采用免疫组化法检测大鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性表达,运用Western blot检测大鼠黑质区ATF6、CHOP的表达。采用RT-PCR检测大鼠黑质区ATF6 mRNA、CHOP mRNA的表达。结果:电针治疗后,各组大鼠行为学评分较模型组显著降低(P0.01)。与正常组和假手术组相比,模型组大鼠黑质区TH的阳性表达显著降低(P0.01),大鼠黑质区ATF6、CHOP表达显著提高(P0.01),大鼠黑质区ATF6mRNA、CHOP mRNA表达升高(P0.05);与模型组相比,大鼠黑质区TH的阳性表达提高(P0.05),ATF6、CHOP蛋白表达显著减少(P0.01),大鼠黑质区ATF6 mRNA、CHOP mRNA表达减少(P0.05)。结论:电针"风府、太冲"穴能有效保护多巴胺能神经元,其机制可能与针刺治疗能抑制内质网应激途径下游的细胞凋亡因子有关。     

双链RNA依赖的蛋白激酶在放射性肺损伤中的作用及机制研究

目的:探讨双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)在放射性肺损伤中的作用和分子机制。方法:将20只雄性SD大鼠随机分成对照组和放射组,对照组不做任何处理,放射组大鼠左肺一次性给予20Gy照射,观察1个月。人肺泡上皮细胞(HPAEpiC)分别转染高、低表达的PKR后,给予15Gy照射。采用支气管肺泡灌洗液的分析、Masson染色、免疫组织化学、MTT法、Real-time PCR和Western blot等方法研究PKR在放射性肺损伤中的作用及机制。结果:与对照组比较,放射组大鼠体重明显较低,肺/体重比值明显较高(P0.05);通过ELISA检测发现,放射组大鼠肺组织中促炎因子IL-1β和TNF-α相对表达水平显著高于对照组,而抑炎因子IL-10相对表达水平则明显低于对照组(P0.05);Masson染色结果表明,放射组大鼠肺间隔纤维组织沉积显著高于对照组(P0.05);放射组肺组织TUNEL阳性细胞及促凋亡因子Bax、Caspase-3的mRNA和蛋白水平明显高于对照组,且抗凋亡因子Bcl-2mRNA和蛋白水平显著低于对照组(P0.05);放射组大鼠肺组织PKR蛋白表达水平明显低于对照组,而p-PKR蛋白表达水平明显高于对照组(P0.05);实验结果表明,PKR敲低细胞照射组细胞生存率、PKR蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达显著低于正常细胞照射组,而促凋亡蛋白Bax和Caspase-3表达显著高于正常细胞照射组(P0.05);PKR过表达细胞照射组细胞生存率、PKR蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达显著高于正常细胞照射组,而促凋亡蛋白Bax和Caspase-3表达显著低于正常细胞照射组(P0.05)。结论:放射可以导致严重的肺损伤,肺损伤发生机制可能与PKR通路有关。     

甲强龙对环扎法所致大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的相关性研究

目的探讨甲强龙(MP)对大鼠脊髓损伤(SCI)后神经细胞凋亡的影响,以及相关分子机制研究。方法 45只SD大鼠随机分为3组,对照组(n=15),模型组(n=15)和实验组(n=15)。实验组于术后给与甲强龙尾静脉注射(30 mg/kg),模型组为SCI模型,对照组只切开椎板,不损伤脊髓。分别于7 d、14 d和21 d进行下肢功能评分(BBB评分);21 d后取出损伤脊髓,利用Western blot法检测Bax和Bcl-2蛋白表达;免疫组织化学染色及TUNEL染色检测Caspase-3阳性细胞数和神经细胞凋亡水平。结果各时间点BBB评分,模型组显著低于对照组,而实验组明显高于模型组(P0.05);Western blot法显示,甲强龙显著抑制Bax,提高Bcl-2表达(P0.05);组织学观察显示,甲强龙显著抑制Caspase-3表达,以及下调TUNEL阳性细胞数(P0.05)。结论甲强龙可通过抑制大鼠脊髓损伤Bax和Caspase-3表达,提高Bcl-2表达,从而抑制神经细胞的凋亡。     

磷酸肌酸对大鼠心肺复苏后心肌细胞凋亡的影响

目的 通过观察大鼠心肺复苏(CPR)后心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2的表达及外源性磷酸肌酸(CP)干预的影响,研究大鼠CPR后心肌损伤机制及外源性CP的保护作用.方法 将32只成年雄性SD大鼠随机分为对照组(A组)、常规复苏组(B组)、常规剂量CP组(C组,胸外按压时首次给药CP 0.5g/kg,2 h后再次给药1.0g/kg)、大剂量CP组(D组,胸外按压时首次给药CP 1.0g/kg,2 h后再次给药2.0g/kg).每组动物8只.建立窒息型大鼠心搏骤停(CA)-CPR模型,ROSC后24 h取心肌标本待测.以脱氧核糖核昔酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测ROSC后24h的心肌细胞凋亡指数(AI);以免疫组化法检测ROSC后24h的心肌细胞Bcl-2,Bax蛋白表达.数据比较采用方差分析.结果 与A组比较,CPR后24h B,C,D各组心肌凋亡指数及Bax,Bcl-2蛋白表达均显著升高(均P＜0.01),Bcl-2/Bax值均明显降低(P＜0.01);与B组比较,C组和D组心肌的凋亡指数及Bax,Bcl-2蛋白表达均明显降低,Bcl-2/Bax值均明显上升(P＜0.01);与C组比较,D组的凋亡指数及Bax,Bcl-2蛋白表达均明显降低,Bcl-2/Bax值明显上升(P＜0.05).结论 外源性磷酸肌酸可明显抑制窒息型大鼠CPR后心肌细胞凋亡,对心肺复苏后心肌损伤具有保护作用,该作用以大剂量时更明显.     

小剂量阿司匹林对糖尿病大鼠心脏的保护作用

目的 探讨小剂量阿司匹林对糖尿病大鼠心脏的保护作用及机制.方法 雄性SD大鼠尾静脉注射链脲佐菌素30 mg/kg,造成1型糖尿病动物模型后,随机分为糖尿病模型组和阿司匹林组各8只,另选8只健康雄性大鼠为对照组.阿司匹林组大鼠灌服阿司匹林9 mg/kg+蒸馏水,对照组和糖尿病模型组大鼠灌服同体积的蒸馏水,12周后检测各组大鼠空腹血糖、血清肌酸激酶(creatine kinase,CK)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平,HE染色法检查心肌组织病理显微结构,免疫组织化学法检测Caspase-3,Bax和Bcl-2的表达情况.结果 糖尿病模型组和阿司匹林组大鼠空腹血糖、CK和LDH水平较对照组明显升高(P＜0.05),阿司匹林组空腹血糖较糖尿病模型组降低(P＜0.05);阿司匹林组CK和LDH水平较糖尿病模型组降低,但差异均无统计学意义(P＞0.05);糖尿病模型组大鼠心脏显微结构基本正常,但可见局部心肌纤维排列紊乱等病理改变,小剂量阿司匹林治疗12周后,心肌上述病理改变明显减轻;糖尿病模型组Caspase-3和Bax表达均强于对照组(P＜0.05),Bcl-2表达弱于对照组(P＜0.05),Bcl-2/Bax比值低于对照组(P＜0.05);阿司匹林组Caspase-3和Bax表达均弱于糖尿病模型组(P＜0.05),Bcl-2表达明显强于糖尿病模型组(P＜0.05),Bcl-2/Bax比值明显高于糖尿病模型组(P＜0.05).结论 小剂量阿司匹林可能通过调节细胞凋亡相关蛋白表达对糖尿病大鼠心脏起保护作用.     

帕金森病大鼠黑质细胞凋亡与Bax蛋白表达相关性的实验研究

目的：观察6-羟基多巴胺（6-OHDA）能否诱发黑质细胞凋亡以及Bax蛋白表达与黑质细胞凋亡的关系。方法：72只Wistar雄性大鼠随机分为对照组36只及通过脑立体定位注射60HDA的方法建立的大鼠帕金森病模型组（PD）组36只，采用TUNEL方法、免疫组织化学、电镜等观察术后l、7、14及21d时2组大鼠脑黑质细胞凋亡的数量及超微结构变化，并检测黑质细胞Bax蛋白的表达。结果：术后TUNEI．法发现，与对照组比较，PD组存在明显的黑质细胞凋亡（P％0．05），且在1—21d时细胞凋亡数逐渐增高；电镜观察显示，PD组黑质细胞存在典型细胞凋亡，Bax蛋白表达在ld为最高，其后很快下降，但仍显著高于对照组。结论：6-羟基多巴胺能诱发大鼠黑质细胞凋亡，Bax蛋白是黑质细胞凋亡的关键启动因素。     

超短波和旋磁对局灶性脑缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨超短波、旋磁治疗对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响。方法 应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。将52只健康Wistar大鼠随机分为假手术组、对照组、超短波治疗组（超短波组）及旋磁治疗组（旋磁组）。脑缺血再灌注后18h给予治疗，24h取脑，观察各组大鼠脑组织含水量、脑梗死体积及Bcl-2、Bax蛋白表达，进行组间比较。结果 脑缺血再灌注后18h，超短波治疗能减少脑含水量，减小梗死体积；超短波组与旋磁组Bcl-2的表达均提高，Bax蛋白表达降低，Bcl-2／Bax提高，超短波组与旋磁组间差异无统计学意义（P〉0．05）；在减少脑含水量和减小脑梗死体积方面，旋磁组与对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 脑缺血再灌注后18h，应用超短波治疗对局灶性脑缺血再灌注损伤有显著疗效；本实验条件下旋磁治疗对改善脑水肿、减小脑梗死体积未见显著疗效，在改善凋亡方面有显著疗效。     

栀子苷对大鼠类风湿性关节炎的治疗作用和机制研究

目的探索栀子苷对大鼠类风湿性关节炎的治疗作用及相关机制。方法 60只SD大鼠随机分为对照组、模型组和实验组,每组20只。模型组制作类风湿关节炎模型,实验组在制作模型后给以栀子苷50 mg/(kg·d)处理,连续28 d,对照组和模型组给予等量生理盐水处理。观察各组大鼠体重、关节肿胀和多发关节炎指数的影响;ELISA检测血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平;Western blot检测关节软骨Bax及Bcl-2蛋白表达。结果造模后,模型组大鼠自第14天体重增长较慢,关节炎指数明显提高,后肢关节严重肿胀;第28天开始,实验组体重增长开始增加,关节炎指数明显降低,关节肿胀程度降低,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05);ELISA结果显示,第42天,模型组大鼠血清TNF-α和IL-6水平明显提高,而实验组大鼠血清TNF-α和IL-6水平明显减低,与模型组比较差异具有统计学意义(P0.05);Western blot结果显示,第42天,模型组大鼠关节软骨Bax蛋白表达显著提高,Bcl-2蛋白表达显著降低,而实验组Bax蛋白和Bcl-2蛋白表达得到明显逆转(P0.05)。结论栀子苷能明显减轻类风湿关节炎对大鼠的炎性损伤,可能是通过降低血清炎性因子水平及抑制软骨细胞凋亡从而达到治疗作用。     

凋亡相关因子TNF-α、Bcl-2及Bax在脓毒症大鼠肺组织的表达

目的观察脓毒症模型大鼠肺组织中凋亡相关因子的表达情况。方法 30只雌性SD大鼠随机分为脓毒症模型组(n=20)及正常对照组(n=10)。以经典盲肠结扎穿孔法(CLP)成功制作脓毒症大鼠模型。分别在造模后3h及12h处死大鼠,石蜡切片HE染色光镜观察各时间点肺组织的病理变化;取血清ELISA法检测肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达水平;免疫组织化学染色法检测造模12hBcl-2及Bax蛋白在大鼠肺组织的表达情况,并计算两种蛋白的累积吸光度值。结果模型组大鼠在造模后3h开始出现脓毒症的相关表现;3h及12h肺组织石蜡切片HE染色可见肺组织炎症反应明显,肺血管充血,肺泡萎陷,炎细胞渗出,并随着观察时间延长有加重趋势。对照组与模型组血清(3h及12h)TNF-α平均吸光度值分别为0.2510±0.0038、0.7392±0.0526及0.4203±0.0256;对照组与模型组2个观察时间点的TNF-α的平均吸光度值差异均有统计学意义(P=0.000;P=0.000),模型组在2个观察时间点的TNF-α的平均吸光度值差异有统计学意义(P=0.000)。免疫组化结果可见Bcl-2蛋白及Bax蛋白在对照组及模型组12h均有表达,但Bcl-2表达在对照组高于模型组(P=0.002),而Bax表达在对照组低于模型组(P=0.012)。结论细胞凋亡可能在脓毒症肺组织损伤中发挥重要作用。     

黄体酮对大鼠外伤性脑损伤后脑水肿及周围组织细胞凋亡和神经功能的影响

目的探究黄体酮对大鼠外伤性脑损伤后脑水肿及周围组织细胞凋亡和神经功能的影响。方法雄性Wistar成年大鼠随机分为假手术组(Sham组;开右侧顶部骨窗而无脑损伤)、脑损伤组(TBI组;开右侧顶部骨窗,且参照Freeney自由落体撞击致伤方法建造重型颅脑损伤模型)、脑损伤后接受黄体酮治疗组(P-TBI组;建立脑损伤模型后腹腔注射0.8 ml/kg黄体酮)、脑损伤后注射二甲基亚砜(DMSO)组(D-TBI组;建立脑损伤模型后腹腔注射0.8 ml/kg DMSO),每组24只,再将其分为损伤后1 d、3 d、5 d、7 d组,各6只。比较各组大鼠不同时间点环氧化物水解酶-2(COX-2)表达量,脑组织含水量、Bcl-2及Bax蛋白阳性细胞数及神经细胞凋亡情况。利用m NSS量表评价各组大鼠损伤后不同时间的神经功能。结果随着损伤时间延长,Sham组大鼠脑组织COX-2表达水平、脑组织含水量、神经细胞凋亡百分比及m NSS评分无明显变化(P>0.05)。TBI组大鼠随着损伤时间延长其脑组织COX-2表达水平、脑组织含水量、神经细胞凋亡百分比及m NSS评分均降低(P<0.05),且各时间点均高于Sham组(P<0.05)。D-TBI组及P-TBI组大鼠随着损伤时间延长其脑组织COX-2表达水平、脑组织含水量、神经细胞凋亡百分比及m NSS评分均降低(P<0.05),且P-TBI组高于TBI组(P<0.05)。损伤后7 d,TBI组大鼠脑组织Bcl-2、Bax阳性细胞数均高于Sham组(P<0.05);且P-TBI组大鼠脑组织Bcl-2阳性细胞数高于TBI组,Bax阳性细胞数低于TBI组(P<0.05)。结论黄体酮能有效缓解大鼠外伤性脑损伤后脑水肿情况、抑制周围组织细胞凋亡,对其神经功能有一定保护作用。     

促红细胞生成素对大鼠脑出血神经的保护作用

目的 研究促红细胞生成素(EPO)对脑出血神经保护作用的机制.方法 用立体定向技术,将自体小凝血注入大鼠尾状核区制备脑出血模型.110只Wistar雄性大鼠,随机分成四组:正常组、假手术组、ICH对照组、rhEPO治疗组.应用免疫组化及原位细胞凋亡检测脑出血灶周组织Bcl-2、Bax表达及凋亡细胞.统计学方法采用LSD-t检验及Pearson相关分析.结果 ICH对照组及rhEPO治疗组术后6 h血肿周围皮质TUNEL,Bcl-2,Bax阳性细胞明显增加,72 h达到高峰,120 h下降,各时间点与假手术组比较,差异具有统计学意义(P<0.01).rhEPO治疗组TUNEL、Bax阳性细胞数明显少于同时点ICH对照组(P<0.01),但Bcl-2阳性细胞数明显增加(P<0.01).Bax蛋白表达及Bax/Bcl-2均与细胞凋亡呈正相关(P<0.01).结论 凋亡机制参与脑出血后继发性损伤过程,EPO通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,对脑出血后神经损伤起保护作用.     

BMSC对大鼠脊髓损伤神经凋亡的保护作用及相关机制研究

目的探索骨髓间充质干细胞(BMSC)对大鼠脊髓损伤(SCI)后神经凋亡的作用及其相关机制。方法体外获取大鼠BMSC进行增殖培养,利用流式细胞仪检测BMSC细胞表型,Allen法制作大鼠脊髓损伤模型,42只大鼠随机等分为3组,对照组,SCI组和BMSC+SCI组,分别于7 d、14 d和21 d对各组大鼠下肢运动功能评分;21 d后取出各组大鼠损伤脊髓进行组织切片染色,并利用Western blot法检测脊髓Bax/Bcl-2含量,ELISA法检测Caspase-3含量。结果 BMSC细胞表型CD90表达(98.92±0.62)%,CD34表达(0.47±0.16)%;BMSC在7 d、14 d和21 d可明显改善SCI大鼠下肢运动功能(P均0.05);免疫组化结果显示,BMSC可显著抑制Bax和Caspase-3在损伤脊髓中的表达(P均0.05);Western blot显示,BMSC明显抑制Bax,提高Bcl-2表达(P均0.05);ELISA结果显示,BMSC可显著机制损伤脊髓中Caspase-3含量(P均0.05)。结论 BMSC对大鼠脊髓损伤神经凋亡具有明显抑制作用,可能是通过抑制Bax、Caspase-3,提高Bcl-2蛋白表达实现的。     

乌司他丁对脓毒症大鼠肠屏障保护抗凋亡机制研究

目的:探讨乌司他丁对脓毒症大鼠受损肠屏障的保护作用及其可能机制。方法:采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制作脓毒症模型,36只雄性SD大鼠随机分为对照组、脓毒症组和乌司他丁组,每组各12只大鼠。乌司他丁组实验前15min大鼠尾静脉注射乌司他丁(20万U/kg),12h后重复给药,对照组、脓毒症组于上述时间点注射等量生理盐水,建模后6、12、24、48h大鼠尾静脉采血测定TNF-α、IL-6的质量浓度;留取肠组织行石蜡包埋,苏木精-伊红染色及Bax、Caspase-3凋亡蛋白检测;透射电镜下观察肠黏膜内部超微结构改变。结果:脓毒症组大鼠血清中TNF-α、IL-6质量浓度明显升高(与对照组比较,P0.01;与乌司他丁组比较,P0.05),而乌司他丁组较对照组高,但明显低于脓毒症组(P0.05);苏木精-伊红染色可见脓毒症组肠黏膜水肿、充血,炎症细胞浸润,而乌司他丁组较脓毒症组明显减轻;凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达较乌司他丁组明显减少(P0.05);通过透射电镜观察脓毒症组肠上皮及毛细血管基底膜肿胀、细胞间紧密连接明显开放增宽,中性粒细胞侵润,肠黏膜细胞绒毛倒伏及脱落、线粒体肿胀及空化,而乌司他丁组明显减轻。结论:乌司他丁改善脓毒症大鼠肠黏膜高炎症状态,减少促炎因子的释放,降低凋亡蛋白Bax、Caspase-3的表达,减少肠黏膜上皮细胞凋亡,对肠屏障有保护作用。     

表儿茶素对大鼠缺血再灌注后神经元凋亡及Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白的影响

目的:研究表儿茶素(EC)对大鼠缺血再灌注后缺血侧脑皮质神经元凋亡及Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白的影响。方法:将SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(I/R组)、EC5mg/kg组、EC10mg/kg组、EC20mg/kg组、依达拉奉(ED)3 mg/kg组,每组9只。除Sham组外,其余组采用线栓法制备大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,缺血2 h,于再灌注后0 h、12 h、24 h三个时间点给药,第12 h、24 h进行神经功能评分,第36 h取脑称重,应用缺口末端标记法(TdT-mediated d UTP nick end labeling,TUNEL)检测缺血侧脑皮质区神经元凋亡情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2的表达情况。结果:与Sham组比较,I/R组神经功能评分显著升高(P0.05),脑指数无明显差异,凋亡指数明显增大(P0.05),Caspase-3、Bax蛋白表达显著增加(P0.05),Bcl-2蛋白表达显著减少(P0.05)。与I/R组比较,EC5mg/kg组、EC10mg/kg组、EC20mg/kg组、ED3mg/kg组脑指数无明显差异,凋亡指数明显减小(P0.05),Caspase-3蛋白表达明显减少(P0.05),Bcl-2蛋白表达显著增加(P0.05),EC10 mg/kg组、EC20 mg/kg组、ED3mg/kg组神经功能评分显著降低(P0.05),Bax蛋白表达明显减少(P0.05)。结论:表儿茶素可增强大鼠脑缺血再灌注后抗凋亡能力,可能与减少Caspase-3、Bax蛋白表达,增加Bcl-2蛋白表达有关。