还精方胶囊的主要药效学研究

目的探讨还精方对人精子功能的影响及其调节睾丸间质细胞(Leydigcell)合成睾酮的分子机制,阐明其治疗男性不育症的作用机理和临床应用的意义.方法通过人精子与还精方含药血清共培养,观察还精方对人精子运动能力、精子顶体反应和穿透去透明带地鼠卵能力的影响.采用体外培养的成熟大鼠Leydig细胞技术和血清药理学的方法,观察还精方对Leydig细胞中睾酮分泌和11β-羟类固醇脱氢酶(11β-HSD)mRNA表达的影响.结果含药血清加入培养可显著提高人精子运动速度(P<0.01)、精子头部侧置振幅(ALH)和鞭毛摆动频率(BCF)及前向运动精子密度(P<0.05),提高精子顶体反应发生率(P<0.001)、卵子受精率(FR)和受精指数(FI)(P<0.01).还精方可明显提高Leydig细胞睾酮的分泌和11β-HSDmRNA的表达,且含药血清刺激作用呈现出一定的量效关系.结论还精方具有提高人精子运动能力和受精能力的作用.Leydig细胞是还精方发挥治疗作用的靶细胞,促进Leydig细胞中11β-HSDmRNA的表达是该方对生殖激素调节的重要机制之一.     

生精方对人精子运动能力影响的研究

目的研究生精方含药血清体对人精子运动能力和受精能力的影响。方法通过人精子与生精方含药血清共培养,观察生精方对人精子运动能力(精子运动CASA分析)、精子爬高试验的影响。结果含药血清加入共培养可显著提高人精子运动速度(精子运动路径速度(VAP)、精子轨迹速度(VCL)、精子前向运动速度(VSL,P均<0.01)、精子头部侧置振幅(ALH)和鞭毛摆动频率(BCF)及前向运动精子密度(P均<0.05)),提高精子爬高试验(P<0.01)。结论生精方具有提高人精子离体质量的作用。     

化瘀祛痰颗粒剂含药血清对LPS诱导大鼠内皮细胞p65表达的影响

目的:通过研究化瘀祛痰颗粒剂含药血清对原代培养的大鼠内皮细胞p65mRNA和蛋白表达的影响,探讨其抗炎机制。方法:以血清药理学方法制备中药化瘀祛痰颗粒剂含药血清;原代培养的大鼠内皮细胞分为空白组、阳性对照组、化瘀祛痰颗粒剂含药血清低剂量组、中剂量组和高剂量组、采用RT—PCR方法观察各组p65mRNA表达情况;用WestenBlot方法检测p65蛋白表达情况。结果:与空白组比较,阳性对照组p65mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.001);与阳性对照组比较,化瘀祛痰颗粒剂含药血清各组p65mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.05);血清各组在影响p65蛋白含量方面存在剂量依赖性(P<0.05),但在影响p65mRNA表达方面无明显剂量依赖性(P>0.05)。结论:化瘀祛痰颗粒剂能够通过抑制核因子KB,减少炎症因子的基因表达起到抗炎作用进而发挥其抗动脉硬化作用。     

“润精汤”与还少胶囊治疗脾肾亏虚型特发性少弱精子症疗效比较

目的:比较润精汤与还少胶囊治疗脾肾亏虚型特发性少弱精子症的临床疗效。方法:将72例特发性少弱精子症患者随机分为润精汤组与还少胶囊组,每组36例。润精汤组予中药汤剂润精汤口服,还少胶囊组予还少胶囊口服,2组疗程均为3个月。观察并比较2组患者治疗前后精液质量、性激素水平和中医证候积分变化情况,并评估临床疗效。结果:治疗后2组患者精液质量[精液量、精子浓度、精子总数、精子前向运动百分率(PR)、精子非前向运动百分率(NP)、精子总活动力(PR+NP)]和性激素水平[卵泡刺激素(FSH)、睾酮(T)、泌乳素(PRL)]均较治疗前明显改善(P<0.05),润精汤组上述指标改善程度明显优于还少胶囊组(P<0.05)。治疗后2组患者中医证候积分均较治疗前明显降低(P<0.05),润精汤组明显低于还少胶囊组(P<0.05)。润精汤组总有效率为83.33%,明显高于还少胶囊组的69.44%(P<0.05)。结论:润精汤和还少胶囊均可显著改善脾肾亏虚型特发性少弱精子症患者的精液质量,调节激素水平,提高患者配偶妊娠率,有较好的临床疗效,润精汤效果更加显著。     

解毒化浊方含药血清调控TANs对HER-2阳性乳腺癌肿瘤微环境的影响

目的 通过解毒化浊方含药血清干预乳腺癌细胞和中性粒细胞共培养的体外肿瘤微环境的实验研究，探讨其抑制乳腺癌复发转移的作用机制。方法 选用雌性SD大鼠分为生理盐水组、中药组，分别给药制备含药血清，给药血清干预共同培养的乳腺癌MDA-MB-453细胞和小鼠外周血中性粒细胞，采用流式细胞术检测MDA-MB-453细胞和中性粒细胞凋亡率。结果 解毒化浊方含药血清干预肿瘤微环境中性粒细胞24h后，中药组与生理盐水组比较中性粒细胞的凋亡率增加，但不明显(P>0.05);干预48h后，中药组与生理盐水组比较中性粒细胞的凋亡率明显增加(P<0.05);中药组与中药对照组比较中性粒细胞的凋亡率明显减少(P<0.05),生理盐水组与生理盐水对照组比较中性粒细胞的凋亡率明显减少(P<0.05)。解毒化浊方含药血清干预肿瘤微环境中乳腺癌MDA-MB-453细胞48h后,中药组与生理盐水组比较乳腺癌细胞凋亡率明显增加(P<0.05),中药组与中药对照组乳腺癌细胞比较凋亡率明显增加(P<0.05)。结论 解毒化浊方中药重塑肿瘤微环境后，能促进中性粒细胞的凋亡。且能阻止中性粒细胞驯...     

野山楂根含药血清对弱精子症患者精子运动参数影响的体外研究

目的:研究野山楂根含药血清体外对弱精子症患者精子运动能力的影响。方法:将16例弱精子症患者精子与野山楂根含药血清共同孵育,在5,15,30,60,120 min采用计算机辅助精子分析系统(CASA)检测精子活动率和精子运动参数。结果:含药血清在5,15 min即能显著提高弱精子症患者精子前向运动百分率(P<0.05),在60 min和120 min时使精子活动率和前向运动百分率有极显著的增加(P<0.01),其刺激作用呈现出一定的时效关系。结论:野山楂根在体外能改善弱精子症患者精子运动功能,可能对弱精子症有一定的治疗功效。     

益气养阴解毒方对5-Fu诱导HepG2细胞凋亡的影响

目的:观察益气养阴解毒方的含药血清与化疗药5-FU体外共同作用于肝癌HepG2细胞后,对细胞增殖和凋亡的影响。方法:备大鼠的益气养阴解毒方的含药血清,分为中药含药血清组、化疗药物5-Fu组和中药含药血清+5-Fu组,并设不含药的空白大鼠血清为对照组,分别作用于HepG2细胞。结果:1益气养阴解毒复方中药含药血清作用于HepG2细胞24h、48h、72h后,对细胞生长未出现明显的抑制作用(与对照组相比,P>0.05);5-FU组及中药含药血清+5-FU组与HepG2细胞共同培养48h、72h后,HepG2细胞的生长明显受到抑制(与对照组相比,P<0.05);中药含药血清与5-FU共同作用于HepG2细胞抑制作用更明显(与5-FU组相比,P<0.05)。2中药含药血清组作用24h、48h、72h后流式细胞术检测到HepG2细胞凋亡指数与空白对照组无明显差异(P>0.05);5-FU组与HepG2细胞共同培养48h、72h后检测到凋亡指数增多(与对照组相比,P<0.05;P<0.01);中药含药血清+5-FU组48h、72h细胞凋亡指数明显高于5-FU组(P<0.05)。结论:益气养阴解毒方含药血清可增强5-FU对HepG2细胞的凋亡诱导作用,这可能是本方与化疗合用增效的重要机制之一。     

滋补肝肾方含药血清对B16黑素细胞活性黑素含量及cAMP水平的影响

目的:通过对含滋补肝肾中药大鼠血清对黑素细胞(B16)活性、黑素含量和cAMP水平影响的研究,探讨滋补肝肾方治疗白癜风的机制。方法:体外培养小鼠B16细胞,于对数生长期加不同浓度含滋补肝肾中药的大鼠血清培养后,分别采用MTT法、NaOH法和放免法检测细胞活性、黑素含量和cAMP水平。结果:与空白对照组比较,滋补肝肾方含药血清各剂量组对B16增殖均没有明显促增殖活性;但20%含药血清可明显促进B16合成黑素量(P<0.05),并提高细胞内cAMP水平(P<0.05)。结论:滋补肝肾方可能通过提高黑素细胞cAMP的水平,从而促进B16细胞合成黑素的功能。     

扶正消瘤方对人乳腺癌MCF-7干细胞体外增殖及凋亡的影响

目的:观察扶正消瘤方含药血清对人乳腺癌MCF-7干细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用体外悬浮培养乳腺癌MCF-7干细胞作为研究对象,中药灌胃方法制备大鼠含药血清;实验设计为空白对照组,无药血清模型组、中药等效量组、中药1倍量组、中药2倍量组共5组;噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况,荧光免疫细胞化学法检测细胞凋亡情况。结果:中药含药血清等效剂量组、中药1倍剂量组和中药2倍剂量组对人乳腺癌MCF-7干细胞的抑制率均明显高于空白对照组和无药血清组(P0.05);与空白对照组及无药血清组比较,扶正消瘤方含药血清组人乳腺癌MCF-7干细胞凋亡明显增多。结论:扶正消瘤方能明显抑制人乳腺癌MCF-7细胞的增殖,诱导其细胞凋亡。     

三氧化二砷对雄性大鼠性激素影响的实验研究

目的:观察三氧化二砷(As2O3)对雄性大鼠血清性激素的影响。方法:将32只雄性大鼠随机分为4组,其中1组为对照组,其余3组分别给予不同剂量的As2O3腹腔注射,2周后检测血清睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)及黄体生成素(LH)含量,同时检测血清砷浓度、测定大鼠睾丸脏器系数、精子头数。结果:小剂量组血清T稍有下降,中剂量和大剂量组可使T明显减少,与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05,P<0.01)。各剂量组的As2O3对FSH及LH均无影响。正常大鼠血清中有微量砷存在,随着给大鼠腹腔注射As2O3的量增加,血中砷浓度明显增加,各组与对照组比较,差异有非常显著性意义(P<0.01)。不同剂量的As2O3对大鼠的睾丸脏器系数无明显影响。但大鼠精子头计数随剂量增加而有所减少,以大剂量组最为的明显,与对照组比较,差异有非常显著性意义(P<0.01)。血清砷含量与血清T及精子头数之间呈直线负相关(r=-0.489和-0.515,均P<0.05),血清T与精子头数之间呈直线正相关(r=0.351,P<0.05)。结论:As2O3可能通过对睾丸组织的损伤而抑制大鼠体内T分泌,导致精子生成减少,产生雄性生殖毒性。     

补肾益精方含药血清对人精子离体质量的影响

目的 研究补肾益精方含药血清体外对人精子运动能力和受精 能力的影响。方法通过人精子与补肾益精方含药血清共培养，观察补肾益精方对人精子运动能力（精子运动CASA分析）、精子爬高试验的影响。结果 含药血清加入共培养可显著提高人精子运动速度[精子运动路径速度（VAP）、精子轨迹速度（VCL）、精子前向运动速度（VSL）]（P〈0．01）、精子头部侧置振幅（ALH）和鞭毛摆动频率（BCF）及前向运动精子密度（P〈0．05），提高精子爬高试验（P〈0．01）。结论 补肾益精方具有提高人精子离体质量的作用。     

活血解毒方对糖尿病早期大鼠视网膜功能的影响

目的 观察活血解毒方对糖尿病早期大鼠模型视网膜电图(electroretinogram, ERG)和大鼠视网膜组织胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acid protein, GFAP)表达的影响。方法 采用链脲佐菌素(65 mg/kg)一次性腹腔注射SD大鼠建立糖尿病大鼠模型,随机分为模型组和活血解毒方低(3.85 g/kg)、中(7.70 g/kg)、高剂量组(15.40 g/kg)及西药组(羟苯磺酸钙胶囊,0.167 g/kg),每组8只。另设正常对照组(8只,给予等体积蒸馏水灌胃),各组均灌胃给药20周。测定ERG,检测暗适应眼最大电反应的a、b波振幅及振荡电位(oscillatory potentials, OPs)振幅总和。并采用免疫组织化学法、Western blot和荧光定量PCR法检测大鼠视网膜积分光密度值(integral optical density, IOD)、GFAP蛋白及 mRNA表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠ERG a波、b波和OPs振幅降低(P<0.01), IOD、GFAP蛋白及mRNA表达升高(P<0.01)。与模型组比较,活血解毒方各剂量组b波和OPs振幅升高, IOD、GFAP蛋白及mRNA表达降低,活血解毒方中、高剂量组a波振幅值升高;西药组b波振幅值升高, IOD表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05, P<0.01)。西药组与活血解毒方各剂量组各指标比较,差异无统计学意义。结论 活血解毒方可减轻糖尿病早期大鼠视觉电生理功能损害,对视网膜神经胶质细胞有一定的保护作用。     

补肾活血方含药血清对弱精子症精子运动能力的影响

目的研究体外添加补肾活血方含药血清对弱精子症精子运动能力的影响。方法将弱精子症患者精子与补肾活血方含药血清共培养，应用精子运动CASA分析观察补肾活血方对精子运动能力的影响。结果与含药血清共培养后，运动精子率，前向性运动精子率、平均路径运动速度、曲线运动速度、精子头部侧摆幅度和鞭毛摆动频率均显著提高。结论体外添加补肾活血方含药血清能提高精子运动能力。     

首乌还精胶囊含药血清对人类精子运动能力和受精能力的影响

目的　探讨首乌还精胶囊对人精子功能的影响 ,阐明其治疗男性不育症的作用机制。方法　通过人精子与首乌还精胶囊含药血清共培养 ,分析首乌还精胶囊对人精子运动速度、活力指数、毛细管穿透试验、精子低渗肿胀试验和穿透去透明带仓鼠卵能力的影响。结果　首乌还精胶囊含药血清对精子的运动能力和膜功能有促进作用。含药血清加入培养可显著提高卵子受精率、受精指数。结论　首乌还精胶囊具有提高人精子运动能力和受精能力的作用。     

复方中药含药血清对大鼠成骨细胞增殖及矿化功能的影响

目的：观察补肾健脾活血方中药含药血清对大鼠成骨细胞增殖及矿化功能的影响。方法：制备补肾健脾活血方复方中药含药血清，取不同浓度剂量干预体外培养的成骨细胞，用MTT法检测成骨细胞增殖率，用茜素红染色法显示矿化结节的形成。结果：补肾健脾活血方含药血清能明显增加成骨细胞增殖率和矿化结节形成数，且与含药血清浓度呈正相关。结论：补肾健脾活血方能明显促进成骨细胞的增殖，并能促进成骨细胞对骨机质的矿化功能。     

补肾活血汤对小鼠体外受精及其早期胚胎发育的影响

目的：探讨补肾活血汤对女性生殖活动的影响,揭示其治疗不孕的作用机现。方法：以补肾活血汤的兔含药血清作为培养基添加剂,分别与未交配小鼠的精,卵及交配后雌鼠体内回收的2细胞期胚胎共同体外培养,观察小鼠体外受精及早期胚胎体外发育的变化。结果：含药血清加入培养能显著提高小鼠的体外受精率（P＜0．01）,并可促进其后的各期胚胎发育,尤其对4细胞及8细胞期胚胎的发育有显著促进作用。（P＜0．05）,对小鼠体内2细胞期胚胎的体外4细胞发育率无明显影响,而对其8细胞期胚,桑椹胚,囊胚,孵化胚的各期发育率均有明显促进作用（P＜0．05或P＜0．01）,结论：补肾活血汤具有提高卵子受精率和促进早期胚胎发育的作用。     

补肾解毒活血方与益气补血方预防化疗后骨髓抑制的比较研究

目的:比较补肾解毒活血方与益气补血方预防环磷酰胺(CTX)引起骨髓抑制小鼠造血功能的效果及作用机制,为临床合理配伍提供依据.方法:清洁级昆明种小鼠80只,随机分为正常对照组、模型组、补肾解毒活血组和益气补血组,中药组分别给予25.55,17.47 g?kg-1 ?d-1中药灌胃,正常对照组和模型组给予等体积的生理盐水,每日灌胃1次,连续给药10d,第8天时采用腹腔注入环磷酰胺(100 mg?kg-1?d-1),连续造模3d.各组随机抽取10只,在第7天(造模前1d)及造模完成后的第1,3,5,7,10天做外周血象检测,剩余10只于造模后第1天进行骨髓有核细胞计数(BMNC)、粒系、红系造血祖细胞(CFU-GM,CFU-E和BFU-E)集落形成单位、细胞凋亡检测及血清粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及促红细胞生成素(EPO)检测.结果:各组小鼠白细胞和血小板数分别于造模后第1天和第5天降至最低,并分别于第5天和第10天基本恢复至正常,但益气补血组下降程度较模型组轻(P＜0.01),而补肾解毒活血组恢复明显早于模型组和益气补血组(P＜0.05);造模后模型组BMNC,CFU-GM及BFU-E显著下降(P＜0.01),且两中药组均明显高于模型组(P＜0.01),其中BFU-E以补肾解毒活血组为优(P＜0.05);造模后小鼠骨髓细胞凋亡率明显增加(P＜0.01),约是正常组的14.7倍,两中药组骨髓细胞凋亡率均明显低于模型组(P＜0.01);造模后GM-CSF较正常组显著降低(P＜0.01),但两中药组GM-CSF明显高于模型组(P＜0.05).各组血清EPO水平较正常组没有明显差异.结论:预防给予益气补血药或补肾活血解毒药均可以加快化疗后骨髓抑制白细胞的恢复,尤以益气补血方为优;益气补血方减轻血小板下降程度更好,补肾活血解毒方促使血小板恢复更佳.预防给予两组中药均可减轻小鼠环磷酰胺造成的BMNC和CFU-GM下降程度,从而有利于白细胞的恢复;两组中药不是通过提高血清促红细胞生成素的水平,而是通过减轻环磷酰胺造成的BFU-E的减少,达到保护红系造血的效果,以补肾解毒活血方为优.预防应用补肾解毒活血药与益气补血药可以明显降低环磷酰胺引起的骨髓细胞凋亡,似以益气补血组为佳.     

六味地黄丸含药血清对MC3T3-E1细胞增殖以及对Runx2、FOXO1 mRNA表达的影响

目的探讨六味地黄丸含药血清对MC3T3-E1细胞增殖以及对Runx2、FOXO1 mRNA表达的影响。方法制作六味地黄丸混悬液,对成年Wistar大鼠进行灌胃,获取六味地黄丸含药血清。常规培养MC3T3-E1细胞24 h后更换含10%不同浓度含药血清的培养基,分别培养48 h和72 h后用CCK-8法检测MC3T3-E1细胞的增殖;对MC3T3-E1细胞进行诱导培养22天后进行饥饿培养24h,随后更换含10%不同浓度的含药血清,培养72 h后检测Runx2、FOXO1 mRNA表达。结果六味地黄丸含药血清能促进MC3T3-E1细胞增殖,并且呈现一定的剂量依赖性;同时六味地黄丸含药血清各剂量组均能明显促进Runx2 mRNA的表达(P0.01),高剂量组的表达明显高于低剂量组(P0.01)。高剂量组的FOX01 mRNA表达明显高于其他3组(P0.01)。结论六味地黄丸含药血清能促进MC3T3-E1细胞增殖,同时能促进Runx2、FOXO1 mRNA表达。