密蒙花提取物对去势导致干眼症白兔泪腺细胞凋亡的影响

目的观察密蒙花提取物对去势导致的干眼症兔基础泪液分泌量、泪膜稳定性和凋亡相关基因蛋白Fas、FasL表达的影响,探讨密蒙花提取物抗性激素水平失调导致的干眼症的作用机制。方法将60只日本大耳白兔(雌雄各半)随机分为雄、雌兔空白组(A1、A2),雄、雌兔模型组(B1、B2),雄、雌兔1倍剂量密蒙花提取物治疗组(C1、C2),雄、雌兔2倍剂量密蒙花提取物治疗组(D1、D2),雄、雌兔染料木黄酮治疗组(E1、E2),每组6只。对B、C、D、E组行去势术建立动物模型,对C、D、E组分别以密蒙花提取物1倍剂量和2倍剂量以及染料木黄酮连续灌胃1月。对全部实验兔行SchirmerI试验、测量泪膜破裂时间,用免疫组织化学的方法对兔泪腺组织中凋亡相关基因蛋白Fas、FasL进行检测。结果C、D、E组SchirmerI试验测量值明显高于B组(P<0.01)、泪膜破裂时间明显长于B组(P<0.01),泪腺导管及腺泡上皮细胞中,Fas、FasL阳性表达的细胞数均明显低于B组(P<0.01)。以上检测结果C、D组优于E组(P<0.05)。结论密蒙花提取物中主要成分为黄酮类物质,可显著抑制性激素水平降低后兔干眼症的发生。其作用机制可能与黄酮类物质为植物雌激素的一种有关,可调节体内性激素水平,从而可调节和抑制泪腺细胞凋亡。密蒙花提取物可能成为治疗干眼症的新途径。     

密蒙花颗粒剂对去势雄兔泪腺细胞凋亡因子Bax、Bcl-2、Fas和FasL的影响

目的观察密蒙花颗粒剂对去势雄兔泪腺细胞凋亡因子Bax、Bcl-2、Fas和Fas L的影响,探讨密蒙花颗粒剂对去势雄兔干眼症模型的疗效。方法将密蒙花原药材制备成颗粒剂。将30只健康成年新西兰长耳白兔(雄性),随机分为空白组(A组),模型组(B组),密蒙花颗粒剂组(C组),安慰剂组(D组),睾酮组(E组)5组,每组6只。除A组外其余4组实验用兔行双侧睾丸及附睾切除术。除A、B组外,从术后第3日开始C组予密蒙花颗粒剂,按100 mg/kg灌胃,3次/日;D组予生理盐水20 m L灌胃,3次/日;E组按2 mg/kg在大腿肌肉处注射丙酸睾酮注射液,每3日注射1次。各组实验用兔,分别于术前和术后第4周各进行1次SchirmerⅠ试验(SchirmerⅠtest,SⅠT)和泪膜破裂时间(tear break-up time,BUT)测定。用药观察4周后采用空气栓塞法处死各组兔子,摘取双眼泪腺组织,采用免疫组化法对泪腺细胞凋亡因子Bax、Bcl-2、Fas和Fas L的表达进行检测,并观察泪腺组织结构形态图。结果 (1)SⅠT及BUT结果:与本组术前及术后A组比较,B、D组SⅠT及BUT均明显下降(P0.01);与B、D组术后比较,C、E组SⅠT及BUT升高,且差异均有统计学意义(P0.01)。(2)Bax、Bcl-2、Fas、Fas L表达:与A组比较,B、D组Bax、Fas、Fas L表达均明显增多,Bcl-2表达明显减少(P0.01);与B、D组比较,C、E组Bax、Fas、Fas L表达均明显减少,Bcl-2表达明显增多(P0.01)。(3)Bax、Bcl-2、Fas、Fas L表达观察结果:A组:泪腺结构清晰,未见Bax、Bcl-2、Fas、Fas L表达;B组:泪腺结构模糊,Bax、Fas、Fas L均大量表达于细胞膜和细胞浆中,呈棕黄色颗粒,Bcl-2仅少量表达;C组:泪腺结构清晰,散见Bax、Fas、Fas L表达,Bcl-2大量表达于细胞膜和细胞浆中,呈棕黄色颗粒;D组:泪腺结构模糊,Bax、Fas、Fas L均大量表达于细胞膜和细胞浆中,呈棕黄色颗粒,Bcl-2仅少量表达;E组:泪腺结构清晰,散见Bax、Fas、Fas L表达,Bcl-2未见表达。结论密蒙花颗粒剂具有与雄激素相似的抑制泪腺细胞凋亡因子Bax、Fas和Fas L表达,同时上调Bcl-2的作用,能抑制雄激素缺乏所致兔泪腺细胞的凋亡,维持泪腺基础分泌量,但其作用弱于雄激素。     

鬼针草对2 种兔干眼模型泪液分泌、泪膜质量及泪腺中致炎因子和凋亡相关因子表达的影响

目的观察鬼针草对2种干眼兔模型（阿托品点眼和去势）泪液分泌、泪膜稳定性及泪腺中致炎因子IL-1、TNF—α,凋亡相关因子Fas、Bcl-2蛋白表达的影响。方法成年新西兰白兔28只。分为阿托品滴眼剂干眼模型组14只（鬼针草治疗组11只22只眼,空白对照组3只6只眼）和去势雄兔干眼模型组14只（鬼针草治疗组11只22只眼,空白对照组3只6只眼）。鬼针草治疗前和治疗后2周测量泪液分泌量和泪膜破裂时间,取其泪腺标本行免疫组织化学染色检测IL一1、TNF—α、Fas和Bcl-2的表达。结果鬼针草能明显提高2种干眼兔的泪膜稳定性（P〈0．05）。阿托品滴眼剂干眼模型兔鬼针草治疗组泪腺腺泡上皮细胞中Fas和IL—1蛋白阳性表达量较空白对照组明显减少（P〈0．05）;去势干眼模型兔鬼针草治疗组和对照组泪腺腺泡上皮细胞中Fas、Bcl-2、IL-1及TNF—α表达比较,差异无统计学意义（乃0．05）。结论鬼针草能够改善阿托品滴眼剂干眼兔（泪液分泌不足型干眼）和去势干眼兔（雄激素缺乏干眼）的泪膜稳定性,并能够抑制阿托品滴眼剂干眼兔泪腺组织的凋亡和炎性反应。对其泪腺组织具有保护作用。     

密蒙花提取物对干眼症雄兔泪腺局部炎症反应影响的研究

目的:观察密蒙花提取物对去势所致干眼症雄兔基础泪液分泌量、泪腺局部炎症因子TGF-β1、IL-1β、TNF-α的影响,探讨密蒙花提取物抗雄激素水平下降所致的干眼症的作用机制。方法:将30只日本大耳雄兔随机分为空白组(A),模型组(B),治疗组(C、D、E),每组6只,对B、C、D、E组行去势术建立动物模型,对C、D、E组分别以密蒙花提取物1倍剂量和2倍剂量以及染料木黄酮连续灌胃1月,对全部实验兔行Schirmer I试验,采用免疫组织化学的方法,对兔泪腺组织中炎症因子TGF-β1、IL-1β、TNF-α进行检测。结果:C、D、E组Schirmer I试验测量值明显高于B组(P(0.01),泪腺导管及腺泡上皮细胞中,IL-1β、TNF-α阳性表达的细胞数均明显低于B组而TGF-β1阳性表达的细胞数均明显高于B组(P(0.01)。以上检测结果C、D组均优于E组(P(0.05)。结论:密蒙花提取物对于雄激素水平所致兔干眼症有良好的实验疗效,其作用机制可能与其中主要成分黄酮类物质拟雄激素效应调节体内性激素水平有关,从而可抑制泪腺局部炎症反应来起到疗效。     

密蒙花颗粒剂对去势雄兔泪腺细胞凋亡因子Bax、Caspase-3、Fas和FasL的影响

目的观察密蒙花颗粒剂对去势雄兔泪腺细胞Bax、Caspase-3、Fas和FasL表达的影响。方法 30只新西兰长耳白兔随机平均分为5组,分别为:A组:空白组,不灌胃;B组:模型组,不灌胃;C组:密蒙花颗粒剂组,灌胃药物为密蒙花颗粒剂;D组:安慰剂组,灌胃药物为生理盐水;E组:睾酮组,在兔大腿肌肉处注射丙酸睾酮注射液。除A组外,所有兔子在干预前的造模方式均为双侧睾丸及附睾切除术,并在造模前1天和造模后第30天测定SIT和BUT。干预30天后,将所有兔子处死,摘取泪腺组织进行伊红染色观察泪腺组织结构,免疫组化法检测各组泪腺组织中Bax、Caspase-3、Fas和FasL表达。结果 HE染色显示:密蒙花颗粒剂组兔子泪腺组织排列整齐,细胞结构清晰,有少量炎症细胞浸润和细胞凋亡,Bax、Caspase-3、Fas和FasL少量表达于细胞膜和细胞浆中。免疫组化检测显示密蒙花颗粒剂组Bax、Caspase-3、Fas和FasL平均光密度均较模型组减少(P0.01)。结论密蒙花颗粒剂对去势雄兔泪腺细胞Bax、Caspase-3、Fas和FasL表达具有抑制作用;密蒙花颗粒剂通过抑制泪腺组织中Bax、Caspase-3、Fas和FasL的表达减轻泪腺组织的凋亡,达到治疗干眼的目的。     

密蒙花总黄酮对去势雄鼠干眼症模型角膜和泪腺组织的保护作用

目的探讨密蒙花总黄酮对去势雄鼠干眼症动物模型角膜及泪腺组织的保护作用与炎症反应的关系。方法150只健康1月龄Wistar雄性大鼠随机分为5组(正常组、假手术组、手术对照组、雄激素治疗组、密蒙花总黄酮治疗组,分别用A、B、C、D、E组表示),每组30只。A组不作处理;B组只切开阴囊,不切除睾丸,作为假手术对照组;C、D、E三组实验鼠切除双侧睾丸及附睾。自造模后1周,待伤口基本愈合开始用药。A、B、C组以生理盐水灌胃,1次/天;D组用丙酸睾酮注射液大腿肌肉注射,1次/3天;E组以密蒙花提取物生理盐水混悬液灌胃,1次/天。各组实验动物分别于用药1、3、5个月后随机取10只,行Schirmer I试验(SIT)、泪膜破裂时间(break-up,BUT)及角膜荧光素染色检查并处死各组动物,取双眼泪腺、角膜组织进行光镜和透射电镜观察。结果SIT、BUT、角膜荧光素染色:A、B组这3项指标无明显变化(P0.05);C、D、E组去势治疗1个月,角膜荧光素染色、SIT、BUT各段时间差异均无统计学意义(P0.05);C组3个月起角膜荧光素染色阳性,且随实验时间延长而加重;5个月起泪液浸湿滤纸长度较实验前短、BUT明显低于正常对照组,且随观察时间的延长而缩短,差异有统计学意义(P0.05);D、E组于去势3、5个月后,角膜荧光素染色点较C组减少,SIT、BUT明显高于C组,差异有统计学意义(P0.05);D、E两组间3个月后,SIT、BUT及角膜荧光素染色差异无统计学意义(P0.05);D、E两组间5个月后,差异有统计学意义(P0.05)。角膜和泪腺结构:A与B各组结构均无明显改变;C组自1个月起结构开始改变,且随时间延长逐渐加重;D、E两组间结构改变较C组相比明显减轻。结论密蒙花总黄酮能减轻去势雄鼠逐渐加重的泪腺分泌功能损害和角膜上皮缺失并减轻其局部炎症反应,对干眼症模型角膜和泪腺有一定的保护作用。     

密蒙花提取物滴眼剂对实验性干眼症大鼠泪腺组织雄激素受体数量的影响

目的观察密蒙花提取物滴眼剂对去势所致干眼症雄鼠基础泪液分泌量、泪膜稳定性及泪腺中雄激素受体(AR)表达的影响,探讨密蒙花提取物滴眼剂抗雄激素水平下降所致干眼症的作用机制。方法将45只Wistar雄性大鼠随机分为空白组、模型组、密蒙花提取物滴眼剂治疗组(治疗组),每组又分为饲养1、2、3个月的3个亚组,共9组,每组5只,模型组及治疗组行去势术建立动物模型,治疗组以密蒙花提取物滴眼剂连续滴眼治疗1个月,对大鼠行Schirmer Ⅰ试验(SIT)、测量泪膜破裂时间(BUT),采用流式细胞仪检测泪腺中AR的表达。结果模型组1、2、3个月亚组SIT值、BUT及AR表达低于同期空白组(P<0.01);治疗组与模型组间比较以3个月的亚组为例,给药后,治疗组SIT值(12.667±5.221)mm,明显高于模型组(2.676±1.987)mm;治疗组BUT(11.758±4.415)s,明显长于模型组(4.667±2.108)s;治疗组AR阳性表达率(49.33±3.44)%,明显高于模型组(33.32±7.12)%(P<0.01)。结论密蒙花提取物滴眼剂中主要成分为黄酮类物质,可显著抑制雄激素水平降低后大鼠干眼症的发生,其作用机制可能与黄酮类物质结构与雄激素类似相关。     

鬼针草治疗阿托品干眼兔模型的实验研究

目的:探讨鬼针草治疗实验性干眼症的疗效和作用机制。方法:将18只成年新西兰白兔随机分为正常对照组、模型组、鬼针草治疗组,每组6只。模型组和鬼针草治疗组点用阿托品滴眼液建立干眼模型,鬼针草治疗组同时给予鬼针草灌胃,连续4周。实验前和实验后2周、4周对角膜荧光染色和泪液分泌量进行眼表评估,并在第4周取泪腺标本行免疫组织化学染色检测IL-1、TNF-α、Fas和bcl-2表达。结果:模型组2周角膜荧光染色阳性,4周加重,鬼针草治疗组2周时角膜荧光染色阳性,但较模型组轻,且4周时未加重;泪液分泌量方面,模型组实验2周、4周较实验前明显下降(P0.O5);鬼针草治疗组实验后SIT较实验前下降,但无统计学意义(P0.05),与模型组相比,明显优于模型组(P0.05);鬼针草治疗组泪腺腺泡上皮细胞中Fas和IL-1蛋白阳性表达量较模型组减少,差异有统计学意义(P0.05)。结论:鬼针草能改善干眼兔的角膜上皮损伤和泪液分泌,能够抑制泪腺组织的凋亡和炎性反应,对干眼症泪腺组织具有保护作用。     

逍生散颗粒剂对干眼小鼠模型泪腺 Bax mRNA、Bcl-2 mRNA表达的影响

目的：研究逍生散颗粒剂对干眼小鼠模型泪腺Bax mRNA、Bcl-2 mRNA表达的影响。方法选择c57小鼠,分为空白对照组、干眼模型组、逍生散低剂量组、逍生散中剂量组、逍生散高剂量组,测定泪液分泌量和泪膜破裂时间,采用荧光定量PCR的方法检测泪腺中Bax、Bcl-2的mRNA含量。结果（1）干眼模型组的泪液分泌试验Ⅰ（ SIT）、泪膜破裂时间（ BUT）低于空白对照组,逍生散组的SIT、BUT均高于干眼模型组,且逍生散中剂量组的SIT、BUT均高于逍生散低剂量组和逍生散高剂量组;（2）干眼模型组泪腺组织Bcl-2的mRNA含量低于空白对照组、Bax的mRNA含量高于空白对照组,逍生散低剂量组、逍生散中剂量组、逍生散高剂量组泪腺组织Bcl-2的mRNA含量高于干眼模型组、Bax的mRNA含量低于干眼模型组;（3） SIT、BUT与泪腺中Bax的mRNA含量呈负相关、Bcl-2的mRNA含量呈正相关。结论逍生散颗粒剂能够调节干眼小鼠模型泪腺中Bcl-2、Bax的mRNA,3．6 mg/g＆#183;d中等剂量的调节作用最为明显,且Bcl-2、Bax的含量与干眼的体征存在相关性。     

针刺对干眼兔模型泪液分泌及泪腺中乙酰胆碱含量的影响

目的：观察针刺对兔干眼模型泪液流量及泪腺组织中乙酰胆碱（Ach）含量的影响,探讨针刺促进干眼泪液分泌的机制。方法：选取纯种新西兰白兔42只,分为空白组6只,针刺组18只,模型组18只。以1％硫酸阿托品滴眼液滴眼3天,遣模成功后,模型组仍予1％硫酸阿托品滴眼液滴眼至实验结束,共25天;针刺组在模型组处理的基础上加用针刺治疗,取睛明、攒竹、丝竹空、瞳子谬、太阳穴,每天针刺1次,每次留针15分钟,共治疗25天,观察针刺对干眼兔模型泪液流量及泪腺组织中Ach含量的影响。结果：在实验第5、7、14天针刺组泪液流量分别与模型组比较,差异均有显著性意义（P〈0．05）。针刺组实验第5、7、14、21、28天泪液流量分别与实验第3天比较,差异均有显著性意义（P〈0．05）。实验第14天针刺组泪腺中Ach浓度与模型组比较,差异有显著性意义（P〈0．05）。结论：针刺能够促进泪液分泌,提高泪腺中Ach的含量,提示针刺治疗干眼的作用机制可能是通过增加Ach含量实现的。     

淫羊藿总黄酮含药血浆对泪腺上皮细胞凋亡模型Caspase-3及Caspase-8表达的影响

目的观察淫羊藿总黄酮含药血浆对雄兔泪腺上皮细胞半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及Caspase-8表达的影响,探究其作用机制。方法将体外培养的雄兔泪腺上皮细胞,随机分为淫羊藿黄酮治疗组(黄酮组)、含雄激素培养对照组(雄激素组)和空白对照组(空白组)。分别加入含淫羊藿总黄酮血浆、丙酸睾酮、空白血浆干预48 h后,各组加入双氧水(H2O2)诱导细胞凋亡。采用Western Blot法检测Caspase-3、Caspase-8的表达情况。结果与空白组比较,黄酮组及雄激素组Caspase-3、Caspase-8蛋白表达降低(P<0.01),同时黄酮组较雄激素组的Caspase-3、Caspase-8蛋白表达降低(P<0.01)。结论淫羊藿总黄酮含药血浆作用于泪腺上皮细胞凋亡模型可抑制Caspase-3及Caspase-8的表达。     

针刺对去势雌兔干眼症模型的实验研究

目的:观察针刺眼周五穴对去势雌兔干眼症模型的炎症因子及黏蛋白MUC5AC、MUC19的影响。方法:60只新西兰雌兔,随机分为空白对照组(A),针刺对照组(B),针刺组(C)和模型对照组(D),每组15只。针刺组和模型对照组采用双侧卵巢切除术制造去势雌兔干眼症模型,其中针刺对照组和针刺组给予针刺睛明、攒竹、阳白、丝竹空、瞳子髎,模型对照组给予针刺眼周空白穴。针刺每周3次,4周为1个疗程。分别于治疗前、治疗后1周、2周及4周收集泪液检测IL-6、TNF-α、LF、MUC5AC、MUC19的浓度,并于治疗后采用荧光免疫组织化学法检测结膜组织中MUC5AC、MUC19的表达。结果:针刺后,针刺组较治疗前IL-6、TNF-α明显降低,LF、MUC5AC、MUC19明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01),与模型对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。治疗后模型对照组结膜MUC5AC、MUC19总阳性率显著低于空白对照组,差异具有统计学意义(P<0.01),针刺组结膜MUC5AC、MUC19总阳性率较空白对照组总阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05),但明显优于模型对照组(P<0.01)。结论:针刺治疗可以抑制IL-6、TNF-α的促炎活性,增加LF水平达到抑菌作用,从而抑制眼表的炎症反应;另一方面通过促进杯状细胞及睑板腺对黏蛋白的合成和分泌,提高泪液中黏蛋白的表达,恢复泪膜的稳定性,从而恢复眼表的正常结构和功能。     

针刺对东莨菪碱诱导的兔干眼模型的作用及机制探讨

目的探讨针刺对皮下注射氢溴酸东莨菪碱诱导的水液缺乏性兔干眼模型的作用机制。方法将健康新西兰白兔18只随机分为空白组、模型组、针刺组共3组,每组6只;空白组不作任何处理;模型组皮下注射氢溴酸东莨菪碱,每日4次,每次2 mg/kg;针刺组在皮下注射东莨菪碱的基础上从实验第15 d开始针刺,每日针1次,共针14 d。分别于实验前1 d及实验第7、14、17、21、28 d观察各组的Schirmer I试验(SIT)、泪膜破裂时间(BUT)、角膜荧光素钠染色(CFS),及泪腺形态学变化。结果针刺组与模型组比较,在实验第17、21、28 d即针刺第3、7、14 d时,SIT、BUT、CFS均差异显著,P<0.05。而针刺组在实验第28 d即针刺第14 d时与实验前1 d相比,SIT和CFS已无明显差异(P>0.05)。针刺后针刺组光镜显示泪腺形态变化明显,胞浆丰富,细胞活动良好。结论针刺能有效促进兔干眼模型的泪腺代谢,增加泪液分泌及泪膜稳定,改善角膜状况。     

秦皮滴眼液抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路缓解兔自身免疫性干眼的实验研究

目的 研究秦皮滴眼液改善兔自身免疫性干眼泪液学指标及眼表慢性炎症的机制。方法 健康成年雌性新西兰大白兔随机分为对照组(CG)、模型组(MG)和秦皮组(QP)，各12只。MG、QP组通过耳缘静脉回输激活的自体外周血淋巴细胞(PBL)建立兔自身免疫性干眼模型。CG、MG组兔予磷酸盐缓冲液滴眼，QP组兔予秦皮滴眼液滴眼，连续给药6周。给药完成后检测兔泪液学指标，包括泪液分泌量(SⅠT)、泪膜破裂时间(BUT)、角膜荧光素染色(FL)评分；取兔右眼泪腺进行称重，苏木精-伊红(HE)染色观察泪腺、角膜结构，过碘酸雪夫(PAS)染色观察结膜杯状细胞形态及密度；实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western Blot法分别检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关的蛋白激酶B(Akt)、叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3)、维甲酸核孤儿受体-γ(t_ROR-γt)mRNA和蛋白的表达水平。结果 (1)泪液学指标：与CG组比较，MG组给药6周后兔的SⅠT、BUT降低(t_SⅠT=9.493,t...     

心脑通络液对动脉粥样硬化兔平滑肌细胞Bcl-2、Caspase-3的影响

目的：探讨心脑通络液对动脉粥样硬化兔平滑肌细胞的干预作用。方法：选取健康雄性新西兰大耳兔40只。随机分成假手术组、模型组、血脂康组、心脑通络液高、低剂量组,对除假手术组外的其余组动物建立腹主动脉粥样硬化模型。造模成功后,各组分别灌胃给药,连续治疗8周,采用SP法测定各组家兔Bcl-2、Caspase-3的阳性表达率。结果：与假手术组比较,模型组Bcl-2含量明显降低,Casapase-3含量明显升高,差异有统计学意义（P〈0．05）;与模型组比较,血脂康组和高低剂量组Bcl-2含量均增高、Caspase-3含量均降低（P〈0．05）,以高剂量改善最显著（P〈0．05）。结论：心脑通络液可能通过对bcl-2及Caspase-3蛋白表达的调控而降低动脉斑块内过度凋亡的平滑肌细胞,从而抑制粥样斑块的形成。     

电针对干眼症兔结膜细胞凋亡及相关蛋白Caspase-3、Fas和Bcl-2表达的影响

目的:通过观察电针对干眼症兔结膜细胞凋亡及相关蛋白Caspase-3、Fas和Bcl-2表达的影响,从细胞凋亡角度探讨电针治疗干眼症的作用机制.方法:雄性新西兰兔随机分为正常组、模型组、电针组和假电针组.采用0.1%苯扎氯铵滴眼制作兔干眼症模型.检测各组兔泪液分泌量、泪膜破裂时间;采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定(TUNEL)法检测结膜细胞凋亡情况;应用免疫组化法检测结膜细胞Caspase-3、Fas和Bcl-2蛋白表达.结果:与正常组比较,模型组兔泪液分泌量降低,泪膜破裂时间缩短(均P<0.01);与模型组、假电针组比较,电针组兔泪液分泌量增多,泪膜破裂时间延长(均P<0.05).与正常组比较,模型组兔结膜细胞凋亡增加(P<0.01),Caspase-3和Fas蛋白表达增加(均P<0.05),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.01);与模型组、假电针组比较,电针组兔结膜细胞凋亡减少(均P<0.01),Caspase-3和Fas蛋白表达减少(均P<0.05),Bcl-2蛋白表达增加(均P<0.01).结论:电针能抑制干眼症兔结膜细胞凋亡,下调凋亡相关蛋白Caspase-3和Fas表达,上调Bcl-2蛋白表达,该作用可能是电针治疗干眼症的作用机制之一.     

菊花总黄酮含药血清对干眼细胞模型AR、NF-κB磷酸化蛋白及TGF-β1表达的影响＊

目的 观察菊花总黄酮在体外条件下对泪腺上皮细胞中雄激素受体（Androgen Receptor，AR）的调控作用及对下游的核因子κB（Nuclear Factor kappa B，NF-κB）、转化生长因子-β1（transforming growth factor-beta1，TGF-β1）的表达影响。方法 以过氧化氢（H₂O₂）诱导泪腺上皮细胞凋亡，建立细胞模型，设立无雄激素培养空白对照组、含雄激素培养对照组、无雄激素培养黄酮治疗组。以MTT法摸索含药血清最佳干预加入量；免疫印迹实验（Western Blot）以及实时荧光定量PCR法（Quantitative Real-Time PCR，qPCR）检测泪腺上皮细胞中AR、NF-κB及TGF-β1的表达情况；并应用雄激素受体阻断剂氟他胺进行AR阻断后再次检测上述指标 。结果 MTT法检测后计算得出含药血清干预细胞的最终浓度为13.2%；无雄激素培养黄酮治疗组及含雄激素培养对照组中AR、NF-κB及TGF-β1的表达增强，与空白对照组对比有显著差异（P<0.01）；无雄激素培养黄酮治疗组中NF-κB表达量比含雄激素培养对照组表达量低，两者间的差异有统计学意义。氟他胺及含药血清干预后，无雄激素培养黄酮治疗组及含雄激素培养对照组中AR及NF-κB的表达未见提高，无统计学意义。结论 菊花总黄酮对泪腺上皮细胞可能存在拟雄激素效应，从而使AR、NF-κB表达增加，并通过上调TGF-β1的表达，可能起到在泪腺局部的抗炎作用。     

大黄素对人宫颈癌Hela细胞Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9表达的影响

1材料大黄素:美国Sigma公司。人宫颈癌细胞Hela:ATCC。Caspase-9、Caspase-8、Caspase-3和β-actin一抗:美国CellSig-naling Technology公司;荧光标记的二抗:Invitrogen公司。电泳仪和电转仪:美国Bio-Rad公司;扫膜仪:购自美国LI-COR公司。2方法人宫颈癌细胞Hela培养和传代:于含10%胎牛血清、100μg/ml链霉素和100U/ml青霉素的DMEM中培养,细胞在相对湿度为95%、37℃     

鸡血藤总黄酮对HeLa细胞周期和凋亡及相关因子VEGF-A、Caspase-3表达的影响

目的:评价鸡血藤总黄酮对宫颈癌细胞HeLa细胞周期和凋亡及VEGF-A、Caspase-3含量的影响,为鸡血藤用于抗子宫癌提供实验依据。方法:设定不同浓度的鸡血藤总黄酮,用MTT法筛选出合适的给药浓度以及给药时间。运用流式细胞仪将不同浓度的鸡血藤总黄酮作用于HeLa细胞,测定细胞周期与凋亡。运用ELISA试剂盒,测定鸡血藤总黄酮对HeLa细胞分泌Caspase-3、VEGF-A的影响。结果:通过MTT法最终选定药物浓度为2.00、1.45、0.70 mg/m L为最佳浓度,36 h为最佳时间。与空白对照组比较,鸡血藤总黄酮各组细胞G0/G1期、S期比例及早凋与晚凋比例显著升高,VEGF-A分泌量显著降低,Caspase-3分泌量显著升高。结论:鸡血藤总黄酮对宫颈癌细胞HeLa有显著的增殖抑制作用。     

基于干眼症细胞凋亡模型观察淫羊藿总黄酮含药血浆对foxp3mRNA的作用＊

目的 基于干眼症细胞凋亡模型观察淫羊藿总黄酮含药血浆对foxp3mRNA的作用。方法 对雄性新西兰大耳白兔的泪腺上皮细胞进行培养，实验采用3代泪腺上皮细胞，将其随机分为淫羊藿总黄酮、雄激素和空白组。建立干眼细胞模型，将含有淫羊藿总黄酮、丙酸睾酮和空白的血浆分别加入三组泪腺上皮细胞进行干预，然后加入Trizol试剂分离RNA，最终免疫反应相关因子Foxp3mRNA的表达采用定量PCR法来检测。结果 雄激素组和淫羊藿总黄酮组中Foxp3mRNA的含量高于空白组，差异显著(P < 0.01)；淫羊藿总黄酮组中Foxp3mRNA的含量高于雄激素组，差异显著(P < 0.01)。结论 含有淫羊藿总黄酮的血浆可增加干眼泪腺上皮细胞凋亡模型中Foxp3mRNA的含量。淫羊藿总黄酮含药血浆可增加Foxp3mRNA的含量来减少细胞凋亡。