HPV6／11相关尖锐湿疣皮损中P53和P21蛋白的表达

目的：了解P53和P21在HPV6/11相关尖锐湿疣（CA）皮损中的表达和意义。方法：用免疫组化SP法检测经PCR法证实HPVDNA6/11阳性的27例CA皮损和10例正常皮肤。结果：（1）CA皮损基底细胞和棘细胞表达P53较正常皮肤显著增加；（2）CA皮损棘细胞表达P21与正常皮肤无显著差异。结论：（1）P53可能刺激和促进HPV6/11相关CA皮损的细胞增殖；（2）P21在抑制CA的细胞增殖中无重要作用。     

应用组织芯片技术观察HPV16/18相关外阴尖锐湿疣DNA倍体类型及cyclin D1、P53、P21WAF1蛋白的表达

目的探讨HPV16/18阳性的尖锐湿疣DNA倍体和cyclin D1、P53、P21WAF1蛋白表达的改变.方法使用组织芯片技术和DNA计算机图像分析方法观察227例外阴尖锐湿疣和21例外阴鳞状细胞癌的DNA倍体类型,并进行cyclin D1、P53、P21WAF1免疫组化研究.结果HPV 16/18阳性外阴尖锐湿疣2C细胞占(44.36±6.66)%,3C～4C占(37.72±8.43)%,5C占(15.21±6.33)%,＞5C占(2.71±1.04)%.98例HPV16/18阳性尖锐湿疣中,cyclin D1、P53、P21WAF1阳性者分别为39例(39.80%)、52例(53.06%)、47例(47.96%).HPV 16/18阳性外阴尖锐湿疣与阴性者差异有显著性(P＜0.01).结论HPV16/18阳性外阴尖锐湿疣DNA倍体图像分析显示高度增殖活性,cyclin D1、P53高表达,P21WAF1低表达.     

外阴白斑和鳞癌细胞中P53和P21ras基因的检测

Ｐ５３和Ｐ２１ｒａｓ基因在正常细胞增殖调控过程中起着重要作用，已有研究证实，癌基因ｒａｓＰ２１和Ｐ５３的表达与肿瘤的生物学行为有密切关系［１，２］。本研究应用免疫组化方法，同时检测ｒａｓＰ２１及Ｐ５３在外阴白斑及鳞癌中的表达，旨在探讨其表达与外阴白斑的生物学行为的关系。材料和方法材料　１０２份标本来自西安市５家医院１９７０年～１９９１年病理ＨＥ染色确诊标本，根据Ｆｒｉｄｒｉｃｈ命名［３］，其中外阴白斑增生型２０例，硬化萎缩型２８例，混合型２３例，不典型增生８例，鳞癌２３例，并以２１例手术病人胸腹…     

黑素瘤p16INK4、p21WAF1/CIP1的检测及临床意义

黑素瘤(malignant melanoma,MM)是一种恶性程度较高的黑素细胞肿瘤,多发生于皮肤,也见于眼、直肠、肛门、食管和软脑膜[1]。自1992年Cannon-Albright等[1]发现p21存在黑素瘤的一个易感基因以来,对其发病分子学机制的研究有了长足的进步。目前的热点是pRb和p53对G1-S调控点的调节作用[2],作为pRb上游的重要调控点,p16INK4、p21WAF1在黑素瘤的发病机制中具有举足轻重的作用。1对象和方法1.1对象1.1.1标本搜集组织病理诊断明确的黑素瘤标本50份,患者均来自黑龙江省肿瘤医院2002—2005年住院病人,年龄22～71岁,平均47岁。标本经10%甲醛固…     

尖锐湿疣组织中HPV型别检测及HPV11型L1基因的克隆与测序

目的分析黑龙江地区尖锐湿疣组织感染的HPV型别分布情况,并对HPV11型流行株L1基因进行克隆和测序,检测序列变异情况。方法提取30例尖锐湿疣组织标本中的DNA,用HPVL1区通用引物及特异性HPV6b,11,16,18型引物进行PCR扩增,分析尖锐湿疣组织中感染的HPV型别分布。对其中4株HPV11型阳性标本L1基因,经酶切、连接,分别构建pSP73-HPV11L1重组质粒,并对其L1片段进行测序。结果30例标本中,HPV6b和11型感染数分别为11例,各占36.7%;有2例合并HPV6b/11/16型的混合感染,占总病例数的6.7%;1例HPV16型单独感染,未鉴定出HPV18型感染,其他型别5例。pSP73HPV11L1重组质粒测序后,4株HPV11L1基因序列完全一致,可认为是黑龙江省流行株。其序列与原始株序列相比,仅发现了两处同义点突变。结论黑龙江地区尖锐湿疣组织中HPVDNA检出率为100%,以6b和11型为主,偶见高危型别16型感染。克隆测序表明黑龙江省流行株HPV11型L1基因高度保守。     

P53,CyclinD1和Ki67蛋白在外阴HPV相关疾病中的表达及意义

目的探讨P53,CyclinD1和Ki67蛋白在外阴HPV相关疾病尖锐湿疣、外阴上皮内瘤变、外阴鳞状细胞癌中的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测30例尖锐湿疣;60例外阴上皮内瘤变;20例外阴鳞状细胞癌标本中P53,CyclinD1,Ki67的表达情况,并与10例正常组织进行对照。结果 P53在尖锐湿疣组,外阴上皮内瘤变(VINⅠ级、Ⅱ级、Ⅲ级)组,外阴鳞状细胞癌组,正常组的阳性表达率分别为63.66%,43.48%,52.63%,61.11%,70.00%和0。CyclinD1的阳性表达率分别为43.33%,34.78%,47.37%,55.56%,60.00%和0。Ki67的阳性表达率分别为46.67%,47.83%,57.89%,72.22%,85.00%和0。P53与Ki67蛋白阳性表达呈正相关(P<0.05),Ki67与CyclinD1蛋白阳性表达呈正相关(P<0.05),P53与CyclinD1蛋白阳性表达无相关性(P>0.05)。三者均表达随外阴上皮恶变的进展而增加。结论 P53,CyclinD1和Ki67蛋白在外阴HPV相关疾病的发生,发展中起一定作用。     

细胞周期蛋白A,p21~(WAF1)及C-myc在皮肤瘢痕及瘢痕癌中的表达及意义

目的探讨细胞周期蛋白A(CyclinA),p21WAF1和C-myc在病理性皮肤瘢痕和瘢痕癌中的表达及意义。方法采用免疫组化(SP)法分别检测正常皮肤、皮肤瘢痕和瘢痕癌中CyclinA,p21WAF1和C-myc蛋白的表达,采用原位杂交技术分别检测CyclinA mRNA,p21WAF1 mRNA的表达,并对数据进行统计学分析。结果 CyclinA,p21WAF1及其mRNA在瘢痕癌组织中呈强阳性表达,与正常皮肤组及皮肤瘢痕组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);但其在正常皮肤组与瘢痕组比较,差异无统计学意义(P>0.05);C-myc蛋白在正常皮肤、皮肤瘢痕和瘢痕癌组织中的表达分别为弱阳性、阳性和强阳性,差异均有统计学意义(P<0.01)。瘢痕癌中CyclinA与CyclinA mRNA;Cy-clinA与p21WAF1,C-myc;CyclinA mRNA与p21WAF1 mRNA的表达均呈正相关。结论 CyclinA,C-myc的高表达与皮肤瘢痕癌的发生有相关性,这两种因子在瘢痕癌的发生中发挥协同作用;C-myc蛋白的表达可作为皮肤瘢痕癌变早期诊断的一个指标。p21WAF1在瘢痕癌中高表达的意义尚有待于进一步论证。     

核因子-κBp50和P16INK4A在尖锐湿疣皮损中的表达及意义

尖锐湿疣(condyloma acuminatum,CA)是由人乳头瘤病毒(HPV)感染引起的性传播疾病之一,最常见于HPV6、11型感染.国内外研究表明CA可发生癌变[1],因此尖锐湿疣与癌变的关系日益受到人们的关注.笔者通过免疫组化方法对尖锐湿疣组织中核因子(NF)-kBp50和P16INK4A表达进行了研究,以便进一步了解尖锐湿疣的发病机制.     

尖锐湿疣患者皮损及外观正常皮肤表皮中P21~(ras)和c-myc的表达

目的探讨P21ras和c-myc在尖锐湿疣(CA)发病机理中的作用。方法采用免疫组化二步法检测15例CA损害中P21ras和c-myc的表达情况,并与CA非皮损、正常人表皮及高分化鳞癌皮损组织作对照。结果CA皮损中P21ras阳性细胞广泛分布于基底层、棘层、颗粒层中,在表皮各层中其表达均显著强于正常人组(P<0.05),与CA非皮损组及鳞癌组比较差异无显著性(P>0.05);在CA皮损中c-myc蛋白在表皮各层中的表达均强于正常人组(P<0.05),与CA非皮损组比较差异无显著性(P>0.05),在棘层、颗粒层中的表达则弱于鳞癌组(P<0.05)。结论c-ras是参与细胞信号传导的重要的原癌基因,在CA表皮增殖信号传导过程中发挥重要作用。转录因子c-myc蛋白可直接与DNA作用,促进与增殖有关的基因开放,导致角质形成细胞的过度增殖。     

P16、P21WAF1/CIP1、PCNA和cyclin E在脂溢性角化病中的表达及其意义

目的：研究脂溢性角化病皮损组织中P16、P21^WAF1/CIP1、PCNA、cyclinE四种细胞周期素相关因子的表达及意义。方法：应用免疫组化PV法（改进的SP法），对50例脂溢性角化病病人和10例正常人皮肤进行P16、P21^WAF1/CIP1、PCNA、cyclinE四种细胞周期素相关因子的测定。结果：脂溢性角化病患者中这四种因子的表达阳性率分别为：78％、68％、70％、46％；而正常对照组的阳性率仅为：40％、30％、50％、10％。结论：P16、P21^WAF1/CIP1、PCNA、cyclinE四种细胞周期素相关因子在脂溢性角化病的发病中可能起重要作用。     

外阴鳞状上皮内瘤变皮损中人乳头瘤病毒16、18癌基因整合性研究

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)16、18在外阴鳞状上皮内瘤变(VIN)皮损中的感染和其癌基因在人基因组中的整合情况。方法采用捕获杂交法及PCR技术筛选高危型HPV和HPV16、18DNA阳性VIN标本：经RT-PCR、巢式PCR及DNA杂交研究HPV16、18 DNA阳性VIN标本中的HPV基因转录。结果 32例VIN患者皮损中24例(75%)为高危型HPV阳性,23例为HPV 16阳性,1例为HPV 18阳性。23例HPV 16阳性标本中除1例VIN Ⅱ皮损无HPV转录外,15份标本为游离体型HPV 16基因转录,其余7例VIN Ⅲ标本呈现整合型HPV 16癌基因转录；1例HPV 18阳性VIN Ⅲ标本发现为整合型HPV 18癌基因转录。结论大部分VIN Ⅱ、Ⅲ标本存在HPV 16感染,HPV癌基因的整合多发生于VIN Ⅲ的皮损；推测高危型HPV癌基因在人基因组中的整合与VIN的发生及其向外阴鳞状细胞癌的发展有关。     

突变型P53蛋白在皮肤黑素瘤中的检测及临床意义

目的探讨突变型P53蛋白在黑素瘤组织中的检测及临床意义。方法SP免疫组化法检测突变型P53蛋白在40例原发性皮肤黑素瘤中的水平,以20例色素痣作为对照。结果突变型P53蛋白在皮肤黑素瘤和色素痣中的阳性率分别为80.00%和20.00%,其在黑素瘤中的水平明显高于色素痣中,两组相比差异有统计学意义(P<0.05)。突变型P53蛋白分布与黑素瘤病理学类型、病理分级、分期、淋巴结转移及预后相关。结论突变型P53蛋白在皮肤黑素瘤中的较高水平,对皮肤黑素瘤的辅助诊断及预后评估具有重要的临床意义。     

表达人乳头瘤病毒6b和11型E6/E7基因的小鼠肿瘤细胞株的建立

目的 构建含有人乳头瘤病毒(HPV)6b和11型E6/E7基因的表达质粒和建立这些基因的转染细胞株。方法 分别将HPV6bE6、HPV6bE7、HPV11E6和HPV11E7克隆于含绿色荧光蛋白基因的真核表达载体pcDNA3.1,经脂质体介导转染B16细胞,以G418筛选阳性克隆,荧光显微镜观察,RT-PCR鉴定mRNA转录。结果 通过酶切鉴定和基因测序证实,构建质粒中目的基因片段序列完全正确。转染后荧光显微镜下可观测到B16细胞发出绿色荧光。以G418筛选的抗性细胞克隆提取RNA并经RT-PCR扩增出与目的基因大小一致的基因片段。结论 建立的小鼠肿瘤细胞B16表达HPV6bE6、HPV6bE7、HPV11E6和HPV11E7基因。提示转染的细胞株可移植于小鼠,利于体内研究这些基因的生物学作用和免疫学机制。     

The temporal and spatial distribution of p21WAF expression in skin appendages

p21WAF is a cyclin-dependent kinase inhibitor which is widely expressed in epidermal structures. Using a combination of double immunocytochemical staining and combined in situ hybridization, we show that there is a striking exclusivity between the expression of Ki67 and p21WAF in the hair matrix. Some cells that are Ki67-positive also express p53, but as they exit the cell cycle they assume p21WAF-positive/p53-negative status. By contrast, cells in the interfollicular epidermis of psoriatic lesions, in the sebaceous gland, and in the outer root sheath are p21WAF-positive/p53-positive but Ki67-negative. These results suggest that in some anatomical parts of the epidermis, p21WAF expression can accompany p53 expression, whereas in other parts, the expression of these markers is reciprocal, suggesting that other pathways may be controlling p21WAF expression. In order to define, functionally, the presence of p53-independent p21WAF expression in skin, we examined lesions of Bowen's disease in which both alleles of p53 were inactivated. p21WAF expression was still observed, confirming a role for p53-independent expression of p21WAF in human skin in vivo.     

细胞周期相关蛋白和增殖细胞核抗原蛋白在Bowen病皮损中的表达

目的探讨细胞周期相关蛋白-细胞周期蛋白A,E(CyclinA,E),P16INK4a(P16),P21WAF1(P21)和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白在Bowen病发病中的作用。方法采用免疫组化法检测24例Bowen病皮损中CyclinA,CyclinE,P16,P21和PCNA蛋白的表达。结果CyclinA,P21,PCNA蛋白在所有的Bowen病标本中呈阳性表达,P16和CyclinE蛋白在22例Bowen病标本中呈阳性表达;其中13例、6例和23例Bowen病标本分别呈现强而弥漫的P16、P21和PCNA蛋白表达。结论CyclinA,CyclinE,P16,P21和PCNA蛋白在Bowen病皮损中的高表达可能与其增殖和分化有关。