粘着斑激酶反义寡核苷酸与胃癌细胞生长及凋亡的关系

根据FAKcDNA序列设计合成与FAKmRNA碱基序列互补的FAK反义寡核苷酸,导入BGC－823胃癌细胞,通过MTT比色法、细胞免疫化学染色法、逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）、细胞周期及电镜等方法,检测FAK反义寡核苷酸对人胃癌细胞的影响。结果示：①胃癌细胞生长明显受到抑制,抑制效应呈浓度和时间依赖性。②细胞内P125蛋白和FAKmRNA表达均明显下降。③经FAK反义寡核苷酸处理后BGC－823胃癌细胞发生凋亡,FCM普上可见明显的凋亡峰,电镜观察呈现凋亡早期形态改变,认为FAK反义寡核甘酸导入BGC－823胃癌细胞后,使BGC－823胃癌细胞FAKmPNA及P125蛋白表达水平下降,抑制PGC－823胃癌细胞增列,同时诱导BGC－823胃癌细胞发生凋亡。     

MUC2反义脱氧寡核苷酸对胃癌细胞体外黏附侵袭活性的影响

目的 探讨黏蛋白MUC2反义脱氧寡核苷酸（ASODN）对人胃癌细胞株SGC7901黏附侵袭活性的影响。方法 采用人工合成的MUC2 ASODN经阳离子脂质体包裹后转染入SGC7901细胞中,采用黏附试验、Boyden小室体外侵袭试验观察比较转染前后癌细胞黏附率,穿膜细胞相对百分率及组织蛋白酶D、钙黏蛋白表达的变化。结果 转染SGC7901细胞48h后,癌细胞黏附率在30、60、90、120min各时间段逐渐升高,但低于空白对照组（P均〈0．01）;转染后癌细胞穿膜细胞相对百分率明显下降;转染后SGC7901细胞的E-钙黏蛋白表达明显增高,组织蛋白酶D水平明显降低。结论 人工合成的MUC2 ASODN能有效抑制胃癌细胞株SGC7901黏附侵袭能力。     

缺氧诱导因子-1α反义寡核苷酸对肺癌细胞生长的抑制作用

恶性肿瘤在生长过程中 ,由于组织增生过快必然会造成局部组织缺氧和供能与耗能之间的不平衡[1] 。缺氧诱导因子 1(hypoxia induciblefactor 1,HIF 1)能通过诱导血管内皮生长因子 (VEGF)和糖酵解相关酶的表达 ,增加供血、供氧、供能 ,改善这一失衡 ,与肿瘤的发生、发展密切相关[2 ] 。本研究拟设计HIF 1α的反义寡核苷酸 ,并研究它对体内、外肺癌细胞株A5 4 9的抑瘤效应 ,为肺癌的基因治疗寻找一条可行的途径。材料与方法　细胞株与试剂 :肺癌细胞株A5 4 9购自武汉大学典型生物保藏中心 ;脂质体lipofect2 0 0 0和新生牛血清购自Gibcol…     

存活素反义寡核苷酸对甲状腺癌细胞生长的抑制作用

目的 探讨利用凋亡抑制基因存活素反义寡核苷酸（ASODN）诱导甲状腺癌细胞凋亡的效应。方法 设计合成特异性靶向存活素的ASODN，以不同浓度和时间对人甲状腺髓样癌细胞进行转染，并设空白、正义（SODN）对照组进行比较。采用RT-PCR、Western印迹、免疫细胞化学技术检测各组细胞中存活素mRNA、蛋白表达水平，DNA裂解分析、吖啶橙／溴化乙锭（AO／EB）染色法、流式细胞仪检测细胞凋亡水平和形态变化，MTT法检测细胞生长抑制情况。结果 转染ASODN各组细胞存活素mRNA和蛋白表达均较空白对照组、SODN组明显减弱；细胞凋亡率显著增加，细胞生长相应受抑，上述效应在ASODN转染24h最为明显，并呈浓度依赖性；而各时段SODN组与空白对照组间各项指标差异均无统计学意义。结论 ASODN能够特异性地下调甲状腺癌细胞中存活素基因表达，进而诱导肿瘤细胞凋亡，并抑制其增殖。     

血管内皮生长因子C反义脱氧寡核苷酸对肺癌细胞的作用

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCC)中血管内皮生长因子C(VEGF-C)信使核糖核酸(mRNA)的表达及其反义脱氧寡核苷酸(antisense oligodeoxyribonucleotide,ASODN)对人肺癌细胞的作用.方法 应用原位杂交技术检测48例新鲜肺癌标本中VEGF-C mRNA的表达,将脂质体介导的VEGF-C ASODN转染人肺癌细胞株A-549,用Western印迹法检测肺癌细胞VEGF-C蛋白的表达.结果 VEGF-C mRNA在肺鳞癌和腺癌细胞中的表达阳性率分别为65.4%(17/26)和59.1%(13/22),经VEGF-C ASODN转染的细胞株A-549中,VEGF-C蛋白表达水平明显下降(P＜0.01).结论 VEGF-C mRNA在NSCC中有一定程度的表达,体外实验VEGF-C ASODN通过下调VEGF-C蛋白的表达抑制肺癌细胞的侵袭作用.     

粘着斑激酶的表达与直肠癌侵袭、转移的相关性研究

应用免疫组化S-P方法检测78例直肠癌手术标本中FAK的表达情况.结果示直肠癌原发灶FAK表达阳性率为79.49%,其中无区域淋巴结转移者阳性率为60.71%,有区域淋巴结转移者阳性率为90%(P＜0.01),FAK表达水平与直肠癌浸润深度和Dukes′分期呈正相关(P＜0.01,P＜0.01).FAK阳性者术后3年、5年生存率分别为44.4%、33.99%.而阴性者为88.24%、82.35%,二组均有显著性意义(P＜0.01,P＜0.01).认为直肠癌由于FAK增加,加速了恶性细胞的增殖、浸润和转移;检测直肠癌组织中FAK表达状况,有助于进一步了解直肠癌生物学行为和预后判断.     

硫代磷酸反义寡核苷酸对丙型肝炎病毒基因表达的体外抑制作用

目的：研究硫代磷酸反义寡核苷酸(ASON)的抗丙型肝炎病毒(HCV)作用。方法：针对HCV结构基因C区(含AVG)设计合成了18聚线性硫代磷酸ASON和自身稳定性ASON，通过体外无细胞转录、翻译系统定量分析核心蛋白表达情况。结果：ASON对HCV基因表达有明显的抑制作用，当ASON浓度为2.0μmol/L时，抑制率为82.6％～84.9％，ASON浓度大于4.0μmol/L时、抑制率呈平台趋势。线性ASON和自身稳定性ASON对HCV的抑制效果相似。结论：ASON可抑制HCV基因表达，有可能成为抗HCV的一种有效制剂。     

肝纤维化大鼠肝窦内皮细胞整合素α6β1及粘着斑激酶表达的变化

目的研究正常及肝纤维化时大鼠肝窦内皮细胞(SEC)表面层粘连蛋白(LN)的整合素受体α 6 β 1及粘着斑激酶(FAK)的变化.方法用胶原酶原位灌注、Percoll不连续密度梯度离心法分离正常及四氯化碳(CCl4)实验性大鼠肝纤维化模型中的SEC,并进行体外培养.采用细胞-ELISA和免疫沉淀-蛋白质酪氨酸激酶活性测定的方法,分别观察SEC细胞表面整合素α 6 β 1表达及FAK活性的变化.结果正常大鼠SEC细胞表面几乎不表达整合素α6 β 1;在肝纤维化时SEC细胞表面α 6 β 1蛋白表达却明显增加(P＜0.05),且细胞中FAK活性明显增高(P＜0 05).结论在肝纤维化时SEC细胞表面整合素α 6 β 1的表达及FAK活性明显增高,可能在SEC的形态及功能改变中起重要作用.     

C-myc反义寡核苷酸对人肝癌移植瘤生长的影响

在肝癌组织中 ,Ｃ ｍｙｃｍＲＮＡ及蛋白均有较高表达[1 ] 。我们发现 ,脂质体 (ＬＲ)介导Ｃ ｍｙｃ反义寡核苷酸 (Ａ ＳＯＤＮ)对人肝癌细胞ＳＭＭＣ 772 1在体外细胞培养实验中有抑制肿瘤细胞生长作用[2 ] 。为此 ,我们选择 9只裸鼠 ,制成肝癌移植瘤模型 ,初步观察Ｃ ｍｙｃ反义寡核苷酸对裸鼠肝癌移植瘤生长的影响。材料和方法一、反义寡核苷酸的制备采用计算机辅助设计针对Ｃ ｍｙｃｍＲＮＡ第二外显子起始码ＡＵＧ及其后四个密码子合成Ｃ ｍｙｃ反义寡核苷酸 5′ ＡＡＣＧＴＴＧＡＧＧＧＧＣＡＴ 3′ ,错配链寡核苷酸 (ＭＯＤＮ) ,5′ …     

粘着斑激酶相关非激酶质粒转染抑制肝星状细胞周期进程及机制研究

粘着斑激酶（focal adhesion kinase，FAK）磷酸化后，对多种类型细胞的生物学行为具有重要影响，如促进增殖，正性调控细胞周期，增强粘附、迁移，控制凋亡等。粘着斑激酶相关非激酶（FAK—related non-kinase，FRNK）是FAK的内源性抑制剂。本研究应用体外细胞培养技术，以纤维连接蛋白（fibronectin，FN）刺激肝星状细胞（hepatic stellate cell，HSC）增殖，在脂质体介导下瞬时转染FRNK质粒，探讨选择性阻断FAK磷酸化对HSC增殖周期及细胞周期相关蛋白的影响。     

缺氧环境中黏着斑激酶对SMMC-7721细胞侵袭能力的影响

目的 研究缺氧对人肝癌细胞SMMC-7721黏着斑激酶(FAK)表达的影响以及FAK表达对SMMC-7721细胞侵袭能力的影响.方法 通过1%体积分数O2的低氧培养建立人肝癌细胞SMMC-7721物理缺氧模型,Western blot检测FAK的表达.构建针对FAK mRNA的干扰质粒pshRNA-FAK及阴性对照质粒pGensil-2,并将其转染至SMMC-7721细胞,G418筛选稳定转染细胞株.Western blot检测FAK蛋白表达的变化,细胞迁移和侵袭实验检测缺氧条件下细胞迁移和侵袭能力的改变.在正常条件下将FAK真核表达质粒pcDNA3-FAK转染至SMMC-7721细胞,观测其侵袭能力的改变.根据数所资料的不同分别采用t检验、单因素方差分析,LSD法及Dunnett法进行统计学处理. 结果低氧培养的SMMC-7721细胞FAK蛋白表达水平逐渐升高,24 h后较0 h时明显升高(P<0.01).SMMC-7721细胞稳定转染pshRNA-FAK后,FAK蛋白表达显著下降,抑制率达74.6%±5.1%,在正常及缺氧条件下都对FAK表达有显著抑制作用.细胞迁移实验结果显示,缺氧显著促进SMMC-7721细胞迁移能力(t=18.66,P<0.01),侵袭实验结果与迁移实验结果一致.转染pshRNA-FAK对促进SMMC-7721细胞在缺氧环境中的迁移能力有显著抑制作用,透膜细胞数(353±36)个较对照组(392±31)个明显降低(F=173.983,P<0.05);细胞侵袭实验显示,转染pshRNA-FAK对促进SMMC-7721细胞侵袭能力有显著抑制作用,透膜细胞数(160±12)个较对照组(194±13)个明显降低(F=59.674,P<0.05).同时转染真核表达质粒pcDNA3-FAK显著促进SMMC-7721细胞侵袭能力.结论 缺氧促进SMMC-7721细胞侵袭可能与FAK表达水平升高相关,FAK表达的上调可能是缺氧促进肝癌细胞侵袭转移的机制之一.     

反义寡核苷酸抑制肝癌血管内皮生长因子表达

目的 探讨不同序列的反义寡核苷酸对肝癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的抑制效果。 方法 SMMC7721细胞于正常氧和缺氧条件下培养24 h,观察缺氧对VEGF mRNA表达的影响;SMMC7721细胞接种于6孔板后,各加入不同的反义寡核苷酸(反帽子结构A06513、反翻译起始部位A06514、反第三外显子A06515、反翻译终止部位A06516和空白组),缺氧培养24 h,然后收集细胞提取总RNA并作逆转录聚合酶链反应分析,同时以管家基因GAPDH(3-磷酸甘油醛脱氢酶)表达为内对照。 结果 缺氧条件下,SMMC7721细胞VEGF mRNA表达明显增强,而有氧条件下未见表达;反义寡核苷酸具有明显抑制VEGF mRNA表达,和空白对照组相比,A06513、A06514、A06515及A06516的VEGF/GAPDH值分别为0.49±0.08、0.71±0.12、0.72±0.11及0.86±0.12(F=12.21,P<0.05)。帽子结构的反义基因表现最强的抑制作用(P<0.0 1)。 结论 与VEGF帽子结构作用的反义寡核苷酸,有望成为肝癌反义基因治疗的新选择。     

黏着斑激酶在结直肠癌中的研究进展

黏着斑激酶(focal adhe sion kinase,FAK)是一种非受体酪氨酸激酶,他作为整合素介导的信号传导过程中的中心分子与多个信号通路相交通,参与细胞的生长、增殖、损伤修复及凋亡等多种生物学行为.FAK在结直肠癌中高表达,在正常大肠组织中呈弱阳性或阴性.FAK可能成为结直肠癌治疗的一个重要靶点,抑制FAK的功能可以阻断多条与肿瘤相关的信号通路.     

粘着斑激酶在胃癌中的表达及临床意义

目的观察粘着斑激酶(FAK)在胃癌及癌旁组织表达的差异,探讨FAK与胃癌临床病理参数的关系。方法应用免疫组化SP法检测61例胃癌组织及其癌旁组织FAK的表达。结果FAK在胃癌及其癌旁组织阳性表达率分别为86.8%(53/61)和75.4%(46/61),差异无显著性(P>0.05);但FAK较强阳性/强阳性(即++/+++)的表达率分别为59%、26.2%,差异有显著性(P<0.05),且其表达水平与胃癌分化程度、浸润深度、淋巴结转移、临床分期呈正相关。结论在胃癌组织中FAK(++/+++)的表达水平较正常组织明显增高,提示FAK参与胃癌的发病,并与胃癌的浸润、转移关系密切。     

Ezrin、FAK及E-cadherin在大肠癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨大肠癌组织中埃兹蛋白(Ezrin),黏着斑激酶(FAK)及上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)的表达及其与肿瘤侵袭和转移的关系.方法:大肠癌组织标本50例,其中高分化腺癌13例,中低分化腺癌37例;无淋巴结转移30例,淋巴结转移20例.采用免疫组织化学方法检测50例大肠癌组织中Ezrin,FAK及E-cadherin的蛋白表达,并运用统计学方法分析Ezrin,FAK及E-cadherin的表达与大肠癌各种临床病理特征的关系及三者的相关性.结果:Ezrin在中低分化、伴有淋巴结转移及Dukes C D期大肠癌的阳性表达率显著高于高分化、无淋巴结转移及Dukes A B期大肠癌(83.78% vs 46.15%,P<0.01;95.00%vs 60.00%,P<0.01;95.00% vs 60.00%,P<0.01),而E-cadherin在以上组织中的表达正好相反(24.32% vs 69.23%,P<0.01;10.00% vs 53.33%,P<0.01;10.00% vs 53.33%,P<0.01),其均与患者性别及年龄大小均无关(P>0.05).FAK在Dukes C D期、伴有淋巴结转移大肠癌组织中的阳性表达显著高于Dukes A B、无淋巴转移组织(100.00% vs 63.33%,P<0.01;100.00% vs 63-33%,P<0.01),而与肿瘤的分化程度、患者性别及年龄大小均无关(P>0.05).经Spearman相关分析,Ezrin与FAK在大肠癌组织中的表达呈正相关(r=0.346,P<0.05),E-cadherin与Ezrin、FAK在大肠癌组织中的表达均呈明显负相关(r=-0.410,P<0.01;r=-0.406,P<0.01).结论:Ezrin,FAK及E-cadherin在大肠癌组织中的异常表达与肿瘤组织的浸润和转移密切相关,联合检测可以作为一组有效的大肠癌肿瘤标记和预后指标.     

纤粘连蛋白介导的平滑肌细胞粘附迁移与粘着斑激酶的磷酸化

目的　探讨纤粘连蛋白介导的血管平滑肌细胞粘附和迁移与粘着斑激酶 (focaladhesionkinase ,FAK)的磷酸化的关系。方法　不同浓度的纤粘连蛋白 (fibronectin ,FN)刺激培养的血管平滑肌细胞 (smoothmusclecells,SMCs) ,观察细胞粘附反应 ,统计铺展比率。免疫沉淀和Wsternblot分别检测FAK及FAK磷酸化的表达量。利用改良的BoydenChamber测SMCs迁移。结果　FN有效地促进了SMC粘附 ,其铺展比率、迁移细胞数均显著高于对照 (P <0 0 5 ) ,且随FN浓度递增而增加。其中 2 0、40、6 0 μg ml组分别为 (75 6± 6 5 ) %、(80 9± 5 4) %和 (82 4± 7 9) % ,无组间差异 ,但均高于 5 μg ml的 (2 0 8± 3 2 ) %和 10 μg ml组的 (32 8± 4 7) % ,各组迁移细胞数也从 16 8± 3 6 HFP 2 0 0×增加到48 9± 6 1 HFP 2 0 0×。不同浓度FN作用后均有FAK的表达 ,FN10 μg ml即可致FAK磷酸化。表明FN介导SMCs粘附和迁移时伴有显著的FAK活化。结论　FN诱导平滑肌细胞粘附和迁移可能是通过FAK介导的 ,对其活性进行调控将有助于抑制血管损伤后内膜平滑肌细胞的迁移。     

反义寡核苷酸抑制β-catenin表达及细胞生长的研究

反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)可以选择性和特异性地阻断目的基因的表达,是基因治疗的重要组成部分。随着ASODN硫代磷酸化修饰技术的出现,ASODN在透膜性和抗核酸酶降解方面都有很大提高,一些ASODN药物已进入了临床试验。ASODN技术目前主要应用于抗病毒和抗肿瘤的研究。     

体外RNA干扰下调黏着斑激酶表达对HSC-T6细胞黏附与迁移的影响

目的 探讨特异性阻断黏着斑激酶(FAK)表达对纤维连接蛋白刺激的肝星状细胞(HSC-T6)黏附与迁移的影响.方法 构建靶向FAK的RNA干扰重组体,在阳离子聚合物介导下转染大鼠肝星状细胞系HSC-T6,筛选出可高效抑制FAK表达的重组质粒;荧光实时定量PCR和Western blot检测FAK基因敲除效果;甲苯胺蓝染色法检测细胞黏附,划痕修复实验和改良的Boyden双腔系统检测细胞迁移.多组间均数差异性比较采用单因素方差分析.结果 成功构建并筛选出可高效抑制FAK的质粒表达载体.质粒转染后,FAK mRNA和蛋白表达分别下降了76.82%和72.53%,同时,p-FAK(Tyr397)蛋白表达下降了62.71% FAK表达下调可明显抑制HSC-T6细胞黏附,抑制率约58.69%;FAK基因沉默可显著抑制纤维连接蛋白诱导的HSC迁移,使细胞迁移距离降低了58.27%,跨膜迁移细胞数减少了83.70%. 结论 RNA干扰技术可选择性下调HSC中FAK的表达,并可显著抑制HSC-T6的黏附和迁移.     

Progress in researches about focal adhesion kinase in gastrointestinal tract

Focal adhesion kinase (FAK) is a 125-kDa non-receptor protein tyrosine. Growth factors or the clustering of integrins facilitate the rapid phosphorylation of FAK at Tyr-397 and this in turn recruits Src-family protein tyrosine kinases, resulting in the phosphorylation of Tyr-576 and Tyr-577 in the FAK activation loop and full catalytic FAK activation. FAK plays a critical role in the biological processes of normal and cancer cells including the gastrointestinal tract. FAK also plays an important role in the restitution, cell survival and apoptosis and carcinogenesis of the gastrointestinal tract. FAK is overexpressed in cancer cells and its over-expression and elevated activities are associated with motility and invasion of cancer cells. FAK has been proposed as a potential target in cancer therapy. Small molecule inhibitors effectively inhibit the kinase activity of FAK and show a potent inhibitory effect for the proliferation and migration of tumor cells, indicating a high potential for application in cancer therapy.     

Role and significance of focal adhesion proteins in hepatocellular carcinoma

Focal adhesions are structural links between the extracellular matrix and actin cytoskeleton. They are important sites where dynamic alterations of proteins in the focal contacts are involved during cell movement. Focal adhesions are composed of diverse molecules, for instance, receptors, structural proteins, adaptors, GTPase, kinases and phosphatases. These molecules play critical roles in normal physiological events such as cellular adhesion, movement, cytoskeletal structure and intracellular signaling pathways. In cancers, aberrant expression and altered functions of focal adhesion proteins contribute to adverse tumor behavior. It is evident that these proteins do not function alone, but rather associate and work together in the process of tumor development and cancer metastasis. Focal adhesion proteins have been shown to play critical roles in hepatocellular carcinoma. Understanding the molecular interactions and mechanisms of the interconnected focal adhesion proteins is of particular importance in understanding mechanisms underlying hepatocellular carcinoma progression and development of potential effective treatment.