黄花蒿Dof基因家族鉴定及在GA-UV处理下对青蒿素生物合成的影响＊

目的 Dof（DNA binding with one finger）家族是高等植物中特有的一类转录因子家族，参与植物中光、激素、非生物胁迫等多种胁迫响应调控。本研究基于全基因组数据对黄花蒿Dof（AaDof）转录因子家族进行鉴定及表达模式分析，探究Dof家族基因在青蒿素合成调控中的作用。方法 经PFAM数据库鉴定获得AaDof序列，通过生物信息学软件分析其理化性质、亚细胞定位、基因结构、蛋白保守结构以及启动子序列结合元件等，并基于赤霉素（Gibberellic acid， GA）、紫外线B（UV-B）及二者协同胁迫下黄花蒿转录组数据对其表达模式进行分析。结果 本研究从全基因组水平共鉴定出51个AaDof基因，均含有保守的C₂-C₂单锌指结构，依据系统发育分析分为8个亚族，同一亚族内基因结构与蛋白保守结构域相对保守。亚细胞定位预测显示12个AaDof蛋白定位在细胞外，其余均定位在细胞核。启动子元件分析发现AaDof家族基因启动子区富含光、激素等多种响应元件。对AaDof在GA、UV-B和GA+UV-B处理下的表达模式分析发现，AaDof基因对GA胁迫处理响应较弱，仅有少量基因敏感，其表达主要受到UV-B胁迫影响。C1及C2.1亚族大部分基因在UV-B胁迫下上调表达，而A亚族大部分基因在UV-B胁迫下下调表达。qRT-PCR验证表明AaDof1、AaDof17和AaDof44在GA和UV-B处理下表达量显著上调，推测其可能通过参与GA和UV-B调控网络，正向调控青蒿素生物合成。结论 本研究系统鉴定了黄花蒿AaDof家族基因并筛选了3个可能正向调控青蒿素生物合成的候选AaDof基因，为黄花蒿Dof家族基因功能研究及其在青蒿素生物合成中的调控机制解析奠定基础。     

基于网络药理学和分子对接法探索复方一枝蒿颗粒治疗新型冠状病毒肺炎的潜在分子机制

目的 通过网络药理学及分子对接技术探寻复方一枝蒿颗粒治疗新型冠状病毒肺炎的作用机制。方法 应用TCMSP数据库、BATMAN-TCM数据库及文献收集复方一枝蒿颗粒活性成分及潜在靶点。通过TTD、GeneCards和OMMI数据库检索新型冠状病毒肺炎相关的靶点。将复方一枝蒿颗粒药物靶点和新型冠状病毒肺炎相关基因取交集，使用String数据库构建靶蛋白相互作用（PPI）网络。通过Cytoscape构建“药物–活性成分–靶点基因–疾病”网络。对交集靶点进行GO功能、KEGG通路富集分析。利用Autodock_vina软件对活性成分和靶点进行分子对接。结果 共筛选92个活性成分，1 627个靶点，新型冠状病毒肺炎疾病靶点464个，两者取交集筛选出87个潜在靶点。GO功能富集得到2 040个条目（P＜0.05），与病毒过程、参与共生相互作用的生物过程、活性氧代谢过程的调节、与宿主相互作用的生物过程、病毒生命周期、炎症反应的调节等生物学过程有关。KEGG通路分析共得到150条通路，与新冠肺炎密切相关的有人巨细胞病毒感染、结核、COVID-19、IL-17信号通路等。分子对接结果证实，筛选的靶点受体蛋白与活性成分可以较好地结合。结论 复方一枝蒿颗粒可通过多组分、多靶点和多途径的方式对新型冠状病毒肺炎产生治疗作用。     

蒿甲醚对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用研究

目的:研究蒿甲醚对胃癌细胞（AGS和SGC-7901）的增殖、侵袭以及迁移的影响并探讨其分子机制。方法:分别利用MTT、集落形成试验检测胃癌细胞的活力和生长；流式细胞技术检测胃癌细胞的凋亡率；利用细胞侵袭和划痕愈合试验检测胃癌细胞的侵袭和迁移；Western blot检测相关蛋白的表达水平。结果:蒿甲醚（0~800 μmol/L）能够浓度和时间依赖性的抑制 AGS和SGC-7901细胞的增殖（P＜0.05）。集落形成试验以及流式细胞术结果显示蒿甲醚（400 和 600 μmol/L）能够抑制AGS和SGC-7901细胞的生长以及促进细胞凋亡（P＜0.05）。细胞侵袭和划痕愈合试验发现蒿甲醚（400 和 600 μmol/L）能够抑制AGS和SGC-7901细胞的侵袭和迁移（P＜0.05）。Western blot结果显示蒿甲醚(400 和 600 μmol/L)能够增加AGS和SGC-7901细胞的cleaved caspase-3,cleaved caspase-9以及Bax的蛋白水平（P＜0.05）；同时能够抑制N-cadherin 和vimentin的蛋白表达并促进E-cadherin蛋白的表达。结论:蒿甲醚可以显著抑制胃癌细胞的增殖、侵袭以及迁移，其机制可能是与促进细胞凋亡以及抑制上皮间质转化有关。     

复方一枝蒿不同剂型对甲型H1N1流感病毒体外作用研究

目的研究复方一枝蒿不同剂型(颗粒剂、微丸、滴丸)对甲型H1N1流感病毒的体外作用,反应药效与提取工艺、剂型的关系。方法进行复方一枝蒿不同剂型(颗粒剂、微丸、滴丸)体外抗病毒试验。利巴韦林、奥司他韦为阳性对照药,通过甲型H1N1流感病毒致人喉癌上皮细胞(Hep-2)病变实验,研究指标TC50、TC0、IC50、SI(即半数有毒浓度、最大无毒浓度、半数抑制浓度、治疗指数),以上研究指标均通过Reed-Muench法计算所得。结果复方一枝蒿不同剂型(颗粒剂、微丸、滴丸)对流感病毒(甲型)均有抑制作用,其抑制作用表现为:提取工艺优化后制备的微丸、滴丸与提取工艺优化前制备的颗粒剂相比,体外抗病毒作用效果增强;相同提取工艺条件下,复方一枝蒿微丸的体外抗病毒作用优于复方一枝蒿滴丸。结论复方一枝蒿不同剂型(颗粒剂、微丸、滴丸)具有不同程度的抗H1N1(甲型流感病毒)作用,复方一枝蒿微丸作用效果优于其他两种剂型。     

奇正青鹏膏联合点阵激光治疗增生性瘢痕疗效观察

目的:探讨奇正青鹏膏联合点阵激光治疗增生性瘢痕的疗效。方法:选择2016年7月-2018年7月笔者医院接诊的70例增生性瘢痕患者为研究对象,以随机数表法分为观察组(n=36)和对照组(n=34),对照组使用点阵激光进行治疗,观察组在对照组的基础上加用奇正青鹏膏治疗。比较两组的临床疗效、瘢痕厚度、改良温哥华烧伤瘢痕评分(VSS)、抑郁评分、焦虑评分及不良反应发生情况。结果:治疗后,观察组总有效率97.22%,高于对照组的79.41%(P<0.05);治疗前,两组患者瘢痕厚度、VSS评分无显著性差异;治疗后,两组患者瘢痕厚度、VSS评分均显著性降低,且观察组患者瘢痕厚度、VSS评分均显著低于对照组(P<0.05);治疗前,两组患者抑郁评分、焦虑评分无显著性差异;治疗后,两组患者抑郁评分、焦虑评分均显著性降低,且观察组患者抑郁评分、焦虑评分均显著低于对照组(P<0.05);治疗期间,观察组患者不良反应总发生率为5.56%,显著低于对照组的23.53%(P<0.05)。结论:增生性瘢痕采用奇正青鹏膏联合点阵激光治疗效果显著,可有效改善患者心理情况。     

3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的制备及其对HeLa细胞的抗增殖活性研究

目的 制备高纯度3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸，并评价其对人宫颈癌HeLa细胞的抗增殖活性。方法 采用柱色谱提取法和中压液相色谱法从奇蒿花中分离、纯化得到高纯度的3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸。采用MTT法评价该化合物对人宫颈癌HeLa细胞的体外抗增殖活性。结果 柱色谱提取的提取率和中压液相色谱法的回收率分别为99.0%，61.2%，总回收率为54.0%。随着3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸浓度升高，HeLa细胞存活率下降，细胞形态损伤增加，受试药物的IC₅₀值为26.5µg·mL^-1。结论 本研究提供了一种简单、高效、节能的3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸制备方法。3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸对HeLa细胞具有一定的体外抗增殖活性。     

基于UHPLC-MS/MS的药用植物内源性激素含量检测方法及黄花蒿不同器官激素的测定

目的 激素是调控植物活性次生代谢产物合成途径的核心调控因子，内源激素结构多样、含量极低，检测难度高，缺乏高效、准确的检测方法。本研究利用超高效液相色谱串联质谱（UHPLC-MS/MS）技术构建了对黄花蒿中茉莉酸、细胞分裂素、赤霉素、生长素、脱落酸等多类植物内源性激素高效定量检测方法。方法 使用Agilent Poroshell 120 EC-C18（2.7 μm， 3.0×150 mm）色谱柱，流动相为0.05%甲酸水-乙腈溶液，梯度洗脱，采用多反应监测模式验证方法可行性，并对黄花蒿不同器官中植物激素进行定量分析。结果 本方法中检测的16种植物激素均呈良好线性，加样回收率、精密度和稳定性均符合植物样品的测定要求。利用此方法测定青蒿不同器官的激素含量，结果表明脱落酸、茉莉酸、茉莉酸甲酯均在叶中含量较高，赤霉素和生长素在根部含量高，细胞分裂素在叶和茎中含量高。结论 青蒿不同器官的激素测定结果可进一步印证脱落酸、茉莉酸、茉莉酸甲酯在调控青蒿素合成中起着重要作用的相关报道，同时表明该方法检测性良好。本文构建的植物内源性激素的检测方法为进一步探究植物生长发育、抵御外界胁迫的相关机制及次生代谢产物的合成等方面提供了手段。     

基于高光谱遥感的荒漠草地围栏封育监测

荒漠草地作为一个非常脆弱的生态系统,其保护对于整个生态系统的平衡具有重要意义.围栏封育对于荒漠草地生态系统具有显著的修复作用.本研究从高光谱角度,对位于乌鲁木齐市米东区的封育的蒿属荒漠草地进行监测.结果表明:利用高光谱技术可以对典型荒漠植被进行识别,将伊犁绢蒿荒漠草地的3个层片进行区分开来;通过对草地特征数据与光谱数据的聚类,发现两者对于不同封育年限及不同群落结构草地群落的识别均有较好地效果,表明高光谱数据可用于草地群落组成及结构的识别,在草地封育状况的监测方面表现出巨大的潜力.     

万年蒿活性部位中总香豆素和3种化合物的含量测定

[目的]测定万年蒿活性部位中总香豆素及3种化合物的含量.[方法]采用紫外分光光度法,以东莨菪内酯为对照品,测定万年蒿中总香豆素的含量.采用HPLC法,选择ZORBAX Eclipse Plus C_(18)色谱柱,以乙腈-0.3%(体积分数)磷酸水为流动相,建立万年蒿活性部位中3种化合物的含量测定方法.[结果]东莨菪内酯在3.2～9.6 mg/L范围内质量浓度与吸光度的线性关系良好(r=0.999 1),精密度RSD为0.34%,稳定性RSD为0.39%,重复性RSD为0.60%,回收率为101.6%～106.3%,总香豆素的质量分数为15.9%.万年蒿活性部位中的3种化合物中东莨菪苷的含量为13.14 mg/g,东莨菪内酯的含量为15.07 mg/g,芦丁的含量为2.27 mg/g.[结论]该方法准确、快速、重复性好,可用于万年蒿活性部位中总香豆素及3种化学成分含量的测定.