粉防己碱调控miR-21表达抑制卵巢癌上皮间质转化的实验研究

目的研究粉防己碱(TET)调控miR-21表达抑制卵巢癌上皮间质转化(EMT)的作用。方法以人卵巢癌细胞(A2780细胞)、人卵巢透明癌细胞(ES-2细胞)和正常人卵巢上皮细胞(IOSE80细胞)作为研究对象,采用MTT法测定0、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0μmol/L的TET对上述3种细胞增殖的影响。实验分为IOSE80细胞对照组、A2780细胞对照组、ES-2细胞对照组、A2780细胞TET组、ES-2细胞TET组,采用实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)测定各组细胞miR-21表达水平;迁移实验和侵袭实验考察TET对细胞迁移和侵袭的影响;蛋白印迹法(Western blot)测定各组细胞GSK3β、p-GSK3β、β-catenin、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平。结果①与对照组相比,TET浓度在1.0～20.0μmol/L时,A2780细胞和ES-2细胞存活率随着TET浓度的增加显著降低(P0.05);为减少TET药物对细胞的毒性,采用TET对A2780细胞和ES-2细胞的处理浓度分别为5.0μmol/L和3.0μmol/L进行后续实验。②与IOSE80细胞组相比,A2780细胞对照组和ES-2细胞对照组miR-21表达水平显著升高(P0.05);与A2780细胞对照组和ES-2细胞对照组相比,A2780细胞5.0μmol/L TET组和ES-2细胞3.0μmol/L TET组miR-21表达水平、迁移能力、侵袭能力、GSK3蛋白磷酸化水平、β-catenin蛋白表达水平、N-cadherin蛋白表达水平、Vimentin蛋白表达水平明显降低(P0.05),E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P0.05)。结论 TET可能通过下调miR-21表达水平,从而阻断Wnt/β-catenin信号通路抑制卵巢癌EMT。     

载槲皮素-粉防己碱纳米凝胶的制备、表征与体外评价

[目的]制备一种纳米凝胶制剂以提高槲皮素及粉防己碱的生物利用度及抗氧化性。[方法]通过反相乳化法制备载槲皮素-粉防己碱纳米凝胶(QU-TE-NP);通过粒径与Zeta电位测定,透射电子显微镜(TEM),差示扫描量热分析(DSC)以及傅里叶变换红外光谱(FT-IR)进行表征分析;高效液相法测定两种药物的载药率及包封率;1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)清除实验比较槲皮素及该纳米凝胶的体外抗氧化性。[结果]该纳米凝胶通过钙离子交联,平均粒径为(38.86±1.81)nm,Zeta电位为(-15.9±4.1)m V,槲皮素和粉防己碱的载药率分别为(0.98±0.04)%和(2.75±0.07)%,包封率分别为(96.80±1.10)%和(94.80±0.90)%。纳米凝胶的抗氧化性明显优于槲皮素单体。[结论]纳米凝胶体系的制备可提高槲皮素及粉防己碱的水溶性,并增强其抗氧化能力。     

汉防己甲素联合屈洛昔芬逆转K562/A02细胞耐药与诱导凋亡相关性的研究

本研究旨在探讨汉防己甲素(tetrandrine，Tet)联合屈洛昔芬(droloxifene，DRL)对耐药细胞系K562／A02的逆转作用与诱导凋亡有无相关性。采用Annexin V/PI法测定耐药调节剂汉防己甲素、屈洛昔芬单独或联合应用后细胞凋亡的情况。结果发现0.62ug/ml汉防己甲素或1/94ug/ml屈洛昔芬单独作用于K562细胞48小时后均可诱导一定比例的细胞凋亡，作用呈时间依赖性，两者联合应用作用增强。0.62ug/ml汉防己甲素或1.94ug/ml屈洛昔芬单独作用于K562／A02细胞均不能诱导细胞凋亡，两者联合应用72小时可诱导小部分细胞凋亡。结论：汉防己甲素，屈洛昔芬逆转耐药的机理与诱导K562／A02细胞凋亡无关。     

汉防己甲素对食管癌放疗增敏作用的临床研究

目的观察汉防己甲素在食管癌放疗中的增敏作用及毒副反应。方法 76例经病理确诊的食管癌患者分为汉防己甲素+放疗组、顺铂+放疗组和单纯放疗组,3组采用完全相同的放疗,前2组在放疗期间分别给予汉防己甲素、顺铂。结果汉防己甲素+放疗组、顺铂+放疗组的近期疗效略优于单纯放疗组;汉防己甲素+放疗组、单纯放疗组的毒副反应略轻于顺铂+放疗组。结论汉防己甲素在食管癌放疗过程中应用具有一定的放疗增敏作用,且毒副反应未见明显增加。     

Tetrandrine induces autophagy and differentiation by activating ROS and Notch1 signaling in leukemia cells

All-trans retinoic acid (ATRA) is a differentiating agent for the treatment of acute promyelocytic leukemia (APL). However, the therapeutic efficacy of ATRA has limitations. Tetrandrine is a traditional Chinese medicinal herb extract with antitumor effects. In this study, we investigated the effects of tetrandrine on human PML-RARα-positive acute promyelocytic leukemia cells. Tetrandrine inhibited tumors in vivo. It induced autophagy and differentiation by triggering ROS generation and activating Notch1 signaling. Tetrandrine induced autophagy and differentiation in M5 type patient primary leukemia cells. The in vivo results indicated that low concentrations of tetrandrine inhibited leukemia cells proliferation and induced autophagy and then facilitated their differentiation, by activating ROS and Notch1 signaling. We suggest that tetrandrine is a potential agent for the treatment of APL by inducing differentiation of leukemia cells.     

汉防己甲素、托瑞米芬及其联合应用逆转K562/A02细胞多药耐药的研究

本研究探讨汉防己甲素（Tet）、雌激素受体抑制剂托瑞米芬（Tor）及其联合应用对K562/A02细胞多药耐药的逆转作用。采用噻唑蓝法（MTT）测定阿霉素（ADR）的半数抑制量,RT-PCR法检测MDR1基因mRNA表达水平,FCM检测P-gp的表达和细胞内ADR浓度。结果表明：ADR对K562/A02和K562细胞的IC50分别为57.43和1.16mg/L,Tet（1μmol/L）和Tor（2.5μmol/L）单用及两药联用处理K562/A02细胞时,ADR的IC50值分别为14.12,20.74和9.14mg/L。Tet及Tor单独作用后耐药株MDR1 mRNA下调微弱,联合用药下调效果明显。Tet及Tor均可降低P-gp蛋白的表达,且具有协同作用。Tet及Tor作用后细胞内ADR浓度增加,两药联合作用时效果增强。结论：Tet及Tor均可逆转K562/A02细胞多药耐药,联合作用时效果增强。     

汉防己甲素联合屈洛昔芬对K562细胞bcr/abl表达的影响

为了研究汉防己甲素(Tet)联合屈洛昔芬(DRL)对K562细胞株凋亡相关因子bcr／abl mRNA及蛋白表达的影响，Tet(1μmol／L)和DRL(5μmol／L)单用及联合应用于K562细胞一定时间后，分别采用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)和Western blot方法检测K562细胞bcr／abl mRNA和蛋白表达的变化。结果表明：Tet和DRL单独应用对K562细胞bcr／abl mRNA及蛋白表达均无影响，两药联合应用于48小时K562细胞bcr／abl mRNA表达开始下调，K562细胞P^210 BCR／ABL蛋白表达于72小时开始下调。结论：Tet和DRL联合应用可下调K562细胞bcr／abl的表达，这可能是两药联用逆转耐药的机制之一。     

汉防己甲素对K562/A02细胞株SORCIN基因表达的影响

本研究旨在探讨汉防己甲素（Tet）在逆转K562/A02细胞耐药与耐药相关的可溶性钙结合蛋白（SORCIN）基因表达之间的关系,为Tet的临床应用提供新的理论基础。通过MTT法筛选出所需浓度Tet,与K562/A02细胞株孵育培养48小时后,通过MTT检测Tet对柔红霉素（DNR）细胞毒性的影响,用RT-PCR方法检测SORCIN基因表达的变化,用Western blot方法检测sorcin表达蛋白的变化。结果表明：在所选浓度范围内,Tet可以增强DNR对K562/A02的细胞毒作用,（Tet浓度为0,0.5,1.0,2.0mg/L时DNR和Tet的IC50分别为11.3±0.17,5.15±0.10,3.91±0.06,2.52±0.04mg/L,p〈0.01）;K562/A02细胞中SORCIN基因高表达,且随着Tet浓度的增加SORCIN的表达先增强后减弱（Tet浓度为0.5mg/L时增强,1.0和2.0mg/L时减弱,p〈0.05）;K652细胞中sorcin蛋白低表达,K562/A02细胞中sorcin蛋白高表达,且随着Tet浓度的增加先增强后减弱（Tet浓度为0.5mg/L时增强、1.0和2.0mg/L时减弱,p〈0.05）。结论：MTT检测显示Tet对K562/A02耐药逆转呈浓度依赖性,Tet可能通过调整SORCIN基因及蛋白的表达参与逆转K562/A02的耐药性,但并不与其耐药逆转作用完全相关。     

汉防己甲素治疗尘肺临床效果评述

目的：对汉防己甲素治疗尘肺的临床效果进行评价。方法该研究的临床资料为该院2012年2月—2014年1月收治的尘肺病患者184例,随机分为治疗组和对照组。两组患者均进行常规综合防治措施,治疗组患者给予汉防己甲素片,治疗结束后对患者疗效进行评价并比较。结果治疗组的显效率69.6%和总有效率89.1%均高于对照组;在治疗12个月后治疗组的下降速度明显慢与对照组的下降速度;对照组患者痰液中的肿瘤坏死因子和白介素-1的含量明显高于治疗组患者痰液中含量。结论汉防己甲素可在根本上改善尘肺患者的肺功能和临床表现,在临床中值得推广。     

汉防己甲素诱导肝癌细胞氧化损伤的实验研究

研究汉防已甲素（tetrandrine，TTD）抑制肝癌细胞增殖的作用机理。采用流式细胞仪法观察了TTD对肝癌细胞内活性氧的影响；采用MTT比色法观察了TTD对细胞增殖的影响。TTD作用于肝癌细胞后，在2小时内引起活性氧的发生；TTD抑制肝癌细胞的增殖。TTD能够通过诱导细胞内活性氧的产生，抑制肝癌细胞的增殖。