Empagliflozin restores chronic kidney disease–induced impairment of endothelial regulation of cardiomyocyte relaxation and contraction

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虎杖苷对体外培养乳鼠心肌细胞肥大及成纤维细胞增殖的影响

目的研究虎杖苷对新生乳鼠离体培养心肌细胞和成纤维细胞增殖的影响及其抗氧化作用。方法剪取新生SD大鼠左心室,采用差速贴壁法分离并培养心肌细胞和成纤维细胞,将培养成功的成纤维细胞和心肌细胞均分为5组,即正常对照组、虎杖苷对照组(10-4mol/L)、模型组[10-6mol/L异丙肾上腺素(ISO)]、虎杖苷低浓度组(10-5mol/L+ISO 10-6mol/L)和虎杖苷高浓度组(10-4mol/L+ISO 10-6mol/L),进行相应干预。孵育2天后,采用考马斯亮兰法测定心肌细胞蛋白质含量,并测定其超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;测定成纤维细胞增殖及其培养液中SOD和GSH-Px及NO浓度。结果与正常对照组比较,模型组可诱导心肌细胞蛋白含量增多,明显降低SOD及GSH-Px活力(P0.05);与模型组比较,虎杖苷高低浓度组心肌细胞蛋白含量明显降低,且SOD及GSH-Px活力明显升高(P0.05);虎杖苷高浓度对GSH-Px活性的升高明显较低浓度强,差异有统计学意义(P0.05)。与正常对照组比较,模型组可诱导成纤维细胞增殖,明显降低SOD及GSH-Px活力和NO含量(P0.05);与模型组比较,虎杖苷高浓度组能抑制成纤维细胞的增殖,显著升高NO含量和SOD及GSH-Px活力(P0.05)。结论虎杖苷对ISO诱导的乳鼠心肌细胞肥大和成纤维细胞增殖有一定对抗作用,其作用机制与其抗氧化作用以及影响NO生成有关。     

三维多孔电磁复合支架构建与理化表征

模拟心肌细胞外基质(ECM)的组织结构和电生理特性,构建具有导电性和超顺磁响应性的三维多孔纳米纤维复合材料支架,为细胞黏附、增殖和分化提供有利的微环境。以明胶为壳层、聚乳酸为芯层,并在各层中引入四氧化三铁纳米颗粒,采用共轴静电纺丝技术,制备纳米纤维薄膜;将其粉碎并与碳纤维混合,经冷冻干燥和交联处理,得到三维多孔支架。用扫描电镜和透射电镜观察支架形貌及结构,用四探针仪测定支架的电导率,用振动样品磁强计测量支架磁滞回线,用万能材料试验机检测支架材料的压缩应力-应变曲线;根据质量和体积计算支架密度,根据支架吸水前后质量计算吸水率。用CCK-8和Western Blot,分析细胞在支架上的活性及功能。支架内部呈多孔蜂窝结构,孔隙间相互贯通;当碳纤维含量为0、1、3、5 mg/mL时,支架密度分别为73.07、72.56、65.88、63.34 mg/cm³,吸水率分别为1 164.60%、1 186.48%、1 284.84%、1 323.66%;电导率分别为0、0.008 8、0.246 7、2.662 5 s/m,最大磁饱和强度分别为3.68、3.15、2.45、2.90 emu/g,抗压缩能力也相应提高。上述复合材料支架能够显著促进心肌细胞成熟相关蛋白Cx43和RhoA的表达,诱导心肌细胞向成熟分化。三维多孔电磁复合支架同时具有超顺磁性和导电性,微观上具有纳米纤维网络和多孔结构,并通过碳纤维的复合,使力学性能得到显著提高,支持心肌细胞生长并促进其成熟。     

反式油酸对H9c2心肌细胞增殖抑制及诱导凋亡作用的研究

目的研究反式油酸(9t-C18:1)对H9c2心肌细胞增殖抑制及诱导凋亡作用并探寻其可能的机制。方法体外培养H9c2大鼠心肌细胞,9t-C18:1高、中、低剂量组及阴性对照组(NC)分别作用于随机分组的H9c2细胞。采用CCK-8法检测细胞增殖能力;AO-EB染色后观察细胞形态学变化;流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)及细胞凋亡情况;实时定量PCR(QRTPCR)法检测Bcl-2、Bax基因表达,免疫荧光染色后流式细胞仪检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果荧光显微镜下可见,9t-C18:1作用后的H9c2细胞出现典型的凋亡形态学特征;与NC组比较,随着9t-C18:1剂量的增加细胞增殖抑制作用明显,ROS、细胞凋亡率显著升高,Bcl-2基因及蛋白表达下调,Bax基因及蛋白表达上调(P <0. 05,P <0. 01)。结论 9t-C18:1能抑制H9c2细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与促进细胞线粒体凋亡通路有关。     

Activation of voltage‐gated sodium current and inhibition of erg‐mediated potassium current caused by telmisartan,an antagonist of angiotensin II type‐1 receptor,in HL‐1 atrial cardiomyocytes

Telmisartan (TEL) is a non‐peptide blocker of angiotensin II type‐1 (AT₁) receptor. However, the mechanisms through which this drug interacts directly with ion currents in hearts remain largely unclear. Herein, we aim to investigate the effects of TEL the on ionic currents and membrane potential of murine HL‐1 cardiomyocytes. In whole‐cell recordings, addition of TEL stimulated the peak and late components of voltage‐gated Na⁺ currents (I_Na) with different potencies. The EC₅₀ values required to achieve the stimulatory effect of this drug on peak and late I_Na were 0.2 and 1.2 μmol/L, respectively, and the current‐voltage relationship of peak I_Na shifted toward less‐depolarized potentials during exposure to TEL. Telmisartan not only increased peak I_Na but also prolonged the inactivation time course of late I_Na. Amiodarone (Amio) or ranolazine (Ran), but not angiotensin II, could reverse TEL‐mediated effects. The drug enhanced the recovery rate of I_Na inactivation and exerted an inhibitory effect on erg‐mediated K⁺ and L‐type Ca²⁺ currents. In whole‐cell current‐clamp recordings, addition of the drug resulted in prolongation of the duration of action potentials (APs) in a dose‐dependent manner in HL‐1 cells; Amio or Ran could reverse this increase in AP durations. Telmisartan‐mediated prolongation of AP was attenuated in KCNH2 siRNA‐transfected HL‐1 cells. In cultured smooth muscle cells of the human coronary artery, TEL enhanced I_Na amplitudes and slowed current inactivation. Stimulation by TEL of I_Na in HL‐1 cells did not simply increase current magnitude but altered current kinetics, thereby suggesting state‐dependent activation. Telmisartan may have greater affinity to the open/inactivated state than to the resting state residing in Na_V channels. Collectively, TEL‐mediated stimulation of I_Na and inhibition of I_K(erg) could be an important ionic mechanism underlying the increased cell excitability of HL‐1 cells; these actions, however, cannot be entirely explained by its blockade of AT₁ receptor.     

黄芪多糖通过抑制NF-κB和JNK信号通路减轻LPS诱导的小鼠心肌细胞凋亡

目的研究黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠心肌细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法体外实验采用H9c2细胞预先给予APS,30 min后加入LPS(1 mg·L^-1)共孵育24 h,建立心肌细胞凋亡模型。体内实验采用SPF级昆明小鼠预防性给予APS 14 d后,腹腔注射LPS(10 mg·kg^-1)建立心肌细胞凋亡模型。8 h后采用超声心动测定小鼠心脏射血分数(EF)、左心室缩短分数(FS)等;TUNEL测心肌细胞凋亡;ELISA检测血清中IL^-1β、TNF-α含量;Western blot检测组织和体外心肌细胞中JNK、NF-κB信号通路及Bcl-2家族、caspase-3相关蛋白表达。结果 LPS能明显抑制小鼠的左心室收缩功能;促使心肌细胞凋亡;增加血清中IL^-1β、TNF-α,心肌细胞中JNK、p-JNK、Bax、caspase-3,胞核中NF-κB蛋白浓度;降低Bcl-2和胞质中NF-κB、IκB-α蛋白浓度。APS能明显保护LPS诱导的小鼠心肌收缩功能,减少心肌细胞凋亡;减少血清中IL^-1β、TNF-α,心肌组织细胞中p-JNK、Bax、caspase-3和胞核NF-κB蛋白含量;相对增加Bcl-2和胞质中NF-κB、IκB-α蛋白含量。而JNK蛋白表达无明显变化。结论 APS通过抑制NF-κB和JNK信号通路,减轻LPS诱导的小鼠心肌细胞凋亡。     

参芪利心汤对心力衰竭大鼠心肌细胞的保护作用及机制研究

目的研究参芪利心汤对阿霉素诱导心力衰竭大鼠心肌细胞的保护作用及机制。方法雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、依那普利(2.1 mg/kg)组以及参芪利心汤低、中、高剂量(9.975、19.950、39.900 g/kg)组,除对照组外,其余大鼠ip阿霉素诱导心力衰竭模型;各给药组ig相应药物,对照组和模型组ig等体积蒸馏水,1次/d,连续4周。给药结束后,采用心脏彩色多普勒超声仪测定各组大鼠左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左室短轴缩短率(left ventricular fractional shortening,LVFS)以及每搏心输出量(stroke volume,SV);采用苏木素-伊红(HE)染色法观察各组大鼠心肌组织病理变化;采用透射电镜观察各组大鼠心肌细胞超微结构;采用ELISA法检测各组大鼠血浆N端B型利钠肽(N-terminal B-type natriuretic peptide,NT-pro BNP)及心肌组织三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)含量;采用流式细胞仪检测各组大鼠心肌细胞凋亡情况;采用qRT-PCR法检测各组大鼠心肌组织B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2associated X protein,Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α(peroxisome proliferator activated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α)m RNA表达情况;采用Western blotting法检测各组大鼠心肌组织Bcl-2、Bax、Caspase-3和p53蛋白表达情况。结果与对照组比较,模型组大鼠LVEF、LVFS和SV显著降低(P0.01),血浆NT-pro BNP含量显著升高(P0.01),心肌组织ATP含量显著降低(P0.01),心肌细胞凋亡率显著升高(P0.01);心肌组织Bcl-2和PGC-1αmRNA表达水平显著降低(P0.01),Bax和Caspase-3 mRNA表达水平显著升高(P0.01);心肌组织Bcl-2蛋白表达显著降低(P0.01),Bax、Caspase-3和p53蛋白表达水平显著升高(P0.01)。与模型组比较,参芪利心汤中、高剂量组和依那普利组大鼠LVEF、LVFS和SV均显著升高(P0.01);血浆NT-pro BNP含量显著降低(P0.01),心肌组织ATP含量显著升高(P0.01),心肌细胞凋亡率显著降低(P0.01);心肌组织Bcl-2和PGC-1αmRNA表达水平均显著升高(P0.01),Bax和Caspase-3 mRNA表达水平均显著降低(P0.01);心肌组织Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.01),Bax、Caspase-3和p53蛋白表达水平均显著降低(P0.05、0.01)。结论参芪利心汤能够改善心力衰竭大鼠的心肌结构、能量代谢及心功能,并减少心肌细胞凋亡,其作用机制可能与调控PGC-1α和线粒体凋亡通路相关蛋白表达有关。     

香椿子总多酚对心肌缺血/再灌注损伤大鼠细胞凋亡的影响

目的:探讨香椿子总多酚(TSTP)对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠细胞凋亡信号通路的影响。方法:采用左冠脉球囊垫扎术,缺血45 min再灌注6 h制备大鼠MIRI模型,随机分为模型组、TSTP高剂量组(100 mg·kg^-1)、TSTP低剂量组(50 mg·kg^-1)、假手术组,于造模术前7 d开始灌胃给药;采用染色法评估心肌梗死情况,FCM法检测细胞凋亡率,ELISA法检测胞浆线粒体细胞色素C(Cyt C)含量,荧光底物法检测心肌半胱氨酸蛋白酶caspase-3、caspase-8、caspase-9、caspase-12活性,RT-qPCR法测定心肌凋亡死亡受体通路指标(Fas和Fas-L)、线粒体通路指标(Bax和Bcl-2)、内质网应激通路指标(GRP78和CHOP)的基因表达。结果:TSTP高、低剂量组明显缩小心肌梗死区面积,与模型组比较差异有统计学意义;与模型组相比,TSTP高、低剂量组可显著降低心肌细胞凋亡率,可显著减少胞浆Cyt C释放量,明显降低胞浆caspase-3、caspase-9和caspase-12活性,可明显...     

α-硫辛酸对H9 c2心肌细胞低氧及低氧/复氧损伤的保护作用及其机制探讨

目的：探讨α-硫辛酸(α-LA)对H9c2心肌细胞低氧及低氧/复氧损伤的保护作用及其作用机制。方法研究包括H9 c2心肌细胞低氧实验和低氧/复氧实验两部分,分成常氧组、低氧组或低氧/复氧组、LA组、乙醛脱氢酶抑制剂异黄酮苷(Daidzin)组(Daidzin组)、二甲亚砜(DMSO)溶剂对照组( DMSO组)。采用噻唑蓝( MTT)比色法检测心肌细胞存活率;微量酶标法测定乳酸脱氢酶( LDH)活性;ELISA法检测心肌细胞乙醛脱氢酶2(ALDH2)活性;硫代苯巴比妥酸法检测丙二醛( MDA)水平。结果与常氧组比较,低氧组及低氧/复氧组细胞存活率均下降(P<0．01),LDH活性及MDA含量均升高(P<0．01);与低氧组或低氧/复氧组比较, LA组细胞存活率上升( P <0．01)、ALDH2活性增加( P <0．05)、LDH活性及MDA含量降低(P<0．01);LA组、Daid-zin组、DMSO组3组比较, LA组与DMSO组间存活率、AL-DH2、LDH、MDA比较差异均无统计学意义( P>0．05);Daid-zin组与LA组、DMSO组比较,细胞存活率及ALDH2活性降低(P<0．05),LDH活性及MDA含量升高(P<0．05),差异均有统计学意义( P<0．05)。结论α-LA可通过上调AL-DH2活性并减少过氧化终产物形成,最终减轻心肌细胞低氧及低氧/复氧过程中的氧化损伤。