日本汉方药企业近十年申请专利的分析及思考——以津村制药和Kracie为例＊

目的 对日本医疗用汉方医药品和一般用汉方医药品市场占有率最大的企业日本津村制药公司和Kracie制药公司2008-2020年间申请的专利内容进行综述，为国内中药经典名方和保健食品研发、知识产权保护提供参考。方法 通过日本专利局的官方检索渠道J-PlatPat平台，检索日本津村制药公司和Kracie制药公司在2008年至2020年间申请的专利，并进行专利布局和技术内容分析。结果 共收集43项日本津村制药公司特许和实用新案专利，其围绕汉方制剂产品全过程质量控制构建了坚实的专利技术体系；共收集52项Kracie制药公司特许和实用新案专利，其致力于功能性制剂和组合物的开发，重点在生活改善、老龄化和癌症等领域进行专利布局，还创建了多种产品功效和功能的客观评价方法。结论 津村制药近十年专利布局提示在中药现代化制造和走向国际的过程中，应把提高品质作为主攻方向，树立持续质量改进理念，完善产品有效性证据链。Kracie制药公司践行的以人为中心的汉方药设计理念，以及精准满足消费者健康需求的研发模式值得借鉴。     

汉防己丙素干预亚硝基胺致大鼠膀胱癌的作用及机制研究

目的探讨汉防己丙素(Cyc)干预亚硝基胺(BBN)致大鼠膀胱癌的作用及机制。方法雄性SD大鼠随机分为对照组,模型组,Cyc低、高剂量(20、40 mg/kg)组,顺铂(5 mg/kg)组。大鼠ig 0.5 m L BBN(0.4 kg/L),2次/周,连续8周,建立膀胱癌模型。除对照组和模型组ip生理盐水外,其余各组ip设定剂量的药物,1次/d,连续8周。实验结束后,收集大鼠膀胱组织;通过HE染色观察大鼠膀胱组织病理变化;通过免疫组化法检测膀胱组织MMP9、Ki67的表达;通过免疫印迹法检测膀胱组织KLF4、p21、CyclinD1、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Wnt、β-catenin蛋白的表达。结果与模型组相比,Cyc可有效抑制膀胱炎细胞浸润、促进癌细胞出现不同程度退变、减少质比例;显著下调膀胱组织MMP9、Ki67的表达(P0.05、0.01);显著上调膀胱癌组织中KLF4、p21、E-cadherin的表达(P0.05、0.01);显著下调CyclinD1、Wnt、β-catenin、N-cadherin、Vimentin的表达(P0.05、0.01)。结论 Cyc通过促进KLF4表达、阻断Wnt/β-catenin信号传导、抑制膀胱癌细胞上皮细胞-间充质转化进程,进而抑制膀胱癌细胞迁移与侵袭能力;同时通过上调KLF4水平,调控下游因子p21、CyclinD1表达,影响膀胱癌细胞的增殖能力,从而延缓BBN诱导的大鼠膀胱癌的病理进程。     

杨本雷主任医师彝医临床经验初步总结

杨本雷主任医师从事彝族医药和中医药工作40年,在彝医药和中医药临床、科研方面均有很深造诣,2007年享受国务院特殊津贴,2014年被评为云南省首批"云岭名医"。笔者有幸作为云南省中医药(民族医药)师带徒工作杨本雷主任医师的学术继承人跟师学习多年,受益匪浅,现将导师在彝医药方面的主要临床经验总结如下。1主要临床经验1.1治疗恶性肿瘤的经验。导师认为,彝医治疗恶性肿瘤总的治则是扶正祛邪,但核心在扶正,强调"留得青山在"。     

分析汉防己甲素治疗尘肺的疗效及对免疫功能的影响

目的分析汉防己甲素对免疫功能的影响。方法患者随机分成两组,对比汉防己甲素和尘肺宁在尘肺患者中的疗效。结果两组尘肺患者接受治疗后,观察组在气紧、胸痛等临床症状改善程度显著优于对照组;观察组的治疗效果、总有效率显然优于对照组。结论采用汉防己甲素治疗尘肺的疗效显著,而且还能调节细胞免疫功能,值得临床推广应用。     

基于三黄泻心汤的黄芩-大黄-黄连不同剂量配伍对黄芩苷和汉黄芩苷溶出的影响

目的:基于三黄泻心汤(简称"泻心汤")考察黄芩-大黄-黄连不同剂量配伍对黄芩苷和汉黄芩苷溶出的影响,为研究中药复方药味剂量组成配伍的化学机制提供参考。方法:以高效液相色谱法测定黄芩苷、汉黄芩苷含量。固定黄芩剂量(3 g)不变,以大黄和黄连的不同剂量为因素,黄芩苷和汉黄芩苷的溶出率为响应值,设计二因素五水平星点试验,采用响应面法优化黄芩-大黄-黄连最佳剂量配伍,并与经典剂量泻心汤(黄芩3 g、大黄6 g、黄连3 g)比较其中黄芩苷和汉黄芩苷溶出率的变化。结果:黄芩、大黄、黄连的剂量分别为3、1.76、0.17 g时提取液中黄芩苷和汉黄芩苷的总溶出率最高,验证试验中黄芩苷和汉黄芩苷的总溶出率平均为21.89%(RSD=0.46%,n=3),与预测值22.54%的相对误差为2.88%;与经典剂量泻心汤比较,最优配伍剂量黄芩-大黄-黄连提取液中黄芩苷和汉黄芩苷总溶出率提高了47.21%。结论:基于泻心汤的黄芩-大黄-黄连不同剂量配伍对黄芩苷和汉黄芩苷溶出有一定影响,当黄芩、大黄、黄连的剂量分别为3、1.76、0.17 g时其溶出率高于经典剂量。     

HPLC双波长法同时测定炎热清片中6种有效成分的含量

目的 建立HPLC双波长法同时测定炎热清片中龙胆苦苷、栀子苷、芒果苷、黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素6种成分的含量。方法 采用Agilent TC-C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,流动相为甲醇∶0.2%磷酸水溶液（梯度洗脱）,柱温为35℃,流速为1.0 mL·min^-1,检测波长0~20 min为254 nm,同时检测龙胆苦苷、栀子苷、芒果苷,20~50 min为280 nm,同时检测黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素。结果 龙胆苦苷、栀子苷、芒果苷、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素分别在18.92~189.2 ng（r=0.999 9）,107.44~1 074.4 ng（r=0.999 9）,9.82~98.2 ng（r=0.999 9）,767.68~7 676.8 ng（r=1.000 0）,100.94~1 009.4 ng（r=0.999 9）,49.84~498.4 ng（r=0.999 9）线性良好,平均回收率（n=9）分别为98.31%,98.35%,98.40%,98.03%,98.46%,98.24%,RSD分别为0.4%,0.3%,0.3%,0.4%,0.4%,0.3%。结论 该方法灵敏、简便、准确,可用于炎热清片的质量控制。     

汉黄芩素对肺癌肿瘤细胞生长和转移抑制作用机制的研究

目的:探讨明胶酶(MMP-2)、表皮生长因子受体酪氨酸蛋白激酶(EGFR-TPK)和氨肽酶N(APN)抑制剂汉黄芩素对肺癌细胞的生长和转移抑制机制。方法:本文采用酶抑制学方法,研究了汉黄芩素(0~100μmol/L)对MMP-2、APN和EGFR-TPK的抑制作用,并进一步的分析了汉黄芩素(0~100μmol/L)对肺癌A549的生长、细胞转移的抑制作用和A549细胞中TIMP-2和TGF-β1表达水平的影响,酶标仪吸光度法检测细胞凋亡蛋白Caspase 3活性。结果:汉黄芩素能够抑制MMP-2、APN和EGFR-TPK的活性(汉黄芩素半抑制浓度IC50分别为7.26±0.33、7.11±0.43和5.32±0.22μmol/L)和诱导A549的凋亡(汉黄芩素半抑制浓度IC50为49.13±4.90μmol/L);随着汉黄芩素作用浓度(1、10、50、100μmol/L)的增加,TGF-β1表达均呈现降低趋势,TIMP-2的表达呈增加趋势,且A549细胞穿过人工基底膜的能力下降而凋亡蛋白Caspase 3活性增加。结论:汉黄芩素通过诱导TIMP-2表达增强和TGF-β1表达的降低,对MMP-2、APN和EGFR-TPK的活性产生抑制作用,对Caspase 3活性产生激活作用,最终对肺癌A549细胞的转移和凋亡起到重要作用。     

HPLC同时测定糖痹康颗粒中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的含量

目的建立同时测定糖痹康颗粒中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素含量的方法。方法采用高效液相色谱法。色谱柱:Thermo syncronis C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:0.1%甲酸乙腈(A)-0.1%甲酸水(B);梯度洗脱:0~3 5 m i n,2 0%(B)~5 5%(B);3 5~4 0 m i n,1 0 0%(B);流速:1 m L/min;柱温为40℃;检测波长为275 nm;进样量为20μL。结果黄芩苷检测浓度在5~500μg/m L范围内与峰面积积分值呈良好线性关系Y=6×107X+62726(r=0.9996,n=7);平均回收率为100.06%,RSD=1.08%(n=9);汉黄芩苷检测浓度在1~85μg/m L范围内与峰面积积分值呈良好线性关系Y=90214X-51875(r=0.9997,n=7);平均回收率为100.11%,RSD=0.41%(n=9);黄芩素检测浓度在0.4~25μg/m L范围内与峰面积积分值呈良好线性关系Y=158201X-10020(r=0.9997,n=7);平均回收率100.00%,RSD=0.73%(n=9);汉黄芩素检测浓度在0.1~10μg/m L范围内与峰面积积分值呈良好线性关系Y=69606X-29918(r=0.9991,n=7);平均回收率为100.07%,RSD=1.17%(n=9);结论该方法操作简单,结果可靠,可为糖痹康颗粒的质量控制提供参考。