山茱萸果核不同提取物体外抗氧化活性

目的:对山茱萸果核不同提取物的体外抗氧化作用进行评价。方法:通过测定山茱萸果核石油醚、乙酸乙酯、无水乙醇和水提取物清除羟自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O_2~-·)及1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)的能力,评价其抗氧化活性。结果:山茱萸果核石油醚、乙酸乙酯、无水乙醇、水提取物和VC体外清除羟自由基的IC_(50)值分别为3.860、4.578、2.900、2.222、0.46 mg;清除超氧阴离子自由基的IC_(50)值分别为4.345、4.329、4.278、4.258、0.36 mg;果核乙酸乙酯、无水乙醇、水提取物和VC清除DPPH自由基的IC_(50)值分别为0.130、0.137、0.026、0.029 mg。结论:山茱萸果核的水提取物具有良好的抗氧化活性,具有潜在的开发应用价值。     

山茱萸历代用药剂量考

本研究拟从历代医籍中记载包含山茱萸的方剂的剂量信息入手,通过中医古籍数据库检索,计算出方药用量的最大剂量、最小剂量、中位剂量、最常用剂量和常用剂量范围,绘制均值及中位剂量的历代折线图。结果发现,汉晋时期对于山茱萸的应用处于探索时期应用较少,用药剂量也有较大波动;唐宋元时期应用逐渐增多,而且后期因战乱散剂盛行;至明清时期转为较多应用汤剂,用量达到相对较高水平;自民国以来用量趋于平稳,平均剂量31.1 g,但医家临床应用仍高于2015年版《中国药典》推荐剂量。藉此,望为医家临床应用提供一定参考。     

山茱萸新苷对过氧化氢诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

目的:探究中药山茱萸提取物山茱萸新苷对SH-SY5Y细胞生长的影响及对过氧化氢诱导SH-SY5Y细胞损伤的神经保护作用。方法:体外培养的SH-SY5Y细胞与山茱萸新苷(0.3、1、3μmol/L)作用2 h后,加入过氧化氢300μmol/L作用12 h诱导SH-SY5Y细胞产生氧化损伤。显微条件下观察细胞形态;CCK8法检测细胞存活率;分光光度计法测定LDH释放率;JC-1法检测线粒体膜电位;荧光显微镜检测胞内ROS水平;Hochest 33258和AO/EB染色法检测细胞凋亡情况;分光光度计检测胞内SOD活力、GSH水平和MDA含量。结果:山茱萸新苷在0.01μmol/L～30μmol/L条件下对正常SH-SY5Y细胞不产生毒性作用;与模型对照组相比,山茱萸新苷在0.3、1和3μmol/L条件下可呈浓度依赖性地提高细胞存活率,并明显改善细胞受损形态和凋亡水平;同时山茱萸新苷0.3、1、3μmol/L能降低LDH渗漏率并升高线粒体膜电位;此外,山茱萸新苷各浓度还能提高胞内抗氧化酶水平和GSH含量,减少丙二醛的产生,在浓度为1μmol/L时效果最佳,其抗氧化损伤效果与维生素E相当。结论:山茱萸新苷对正常SH-SY5Y细胞无毒性作用,且对过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有较好的保护作用,这可能与其降低细胞氧化损伤,抑制细胞凋亡相关。     

基于经典名方的山茱萸本草考证

山茱萸作为临床常用中药,具有补益肝肾,收涩固脱之效。鉴于历代医药学家对山茱萸药用部位颇有争议,笔者通过查阅历代本草、医学典籍,结合现代相关文献、标准等资料,对山茱萸名称、基原、产地变迁及品质、药用部位、采收加工及炮制、性味功效、用法用量等内容进行本草学考证,为确保含有山茱萸的经典名方能够精准用药以及为进一步开发利用提供参考。经考证可知,山茱萸从古至今来源为山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalis Sieb.et Zucc.,最早产于山东、陕西一带,后延伸至河南、浙江等地大量栽培,现商品多以浙江所产品质为佳。山茱萸最初应是以全果实入药,但由于“核能滑精”说的影响致使山萸肉(去核之果肉)成了历代主流品规,但在临床实际应用中,2种规格均存在,应根据患者类型辨证使用。山茱萸在历代本草、医学典籍中记载的炮制方法也较多,但主流品种为山茱萸生品和酒萸肉。此外,山茱萸性味也从最初“味酸,平、微温无毒”演变为“味酸、涩,性微温”,历代用药剂量更是与药典规定的剂量范围出入较大,建议临床医师在条件允许的情况下,应根据患者及病证类型,选择合适的经方剂量,以最大限度保证山茱萸应有的临床疗效。     

山茱萸新苷Ⅰ对成骨细胞的增殖及成骨分化的影响

目的基于Wnt信号通路及内质网应激研究山茱萸新苷Ⅰ对大鼠原代成骨细胞的增殖及成骨分化的影响。方法提取原代成骨细胞,CKK8实验检测在药物浓度下山茱萸新苷Ⅰ对成骨细胞增殖的影响;碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色检测不同浓度山茱萸新苷Ⅰ干预下成骨细胞ALP的活性情况; Real-time PCR检测Wnt2、β-catenin、BMP2、OPG、NOX4、PERK基因mRNA的表达; Western blot检测Wnt2、β-catenin、PDI、CHOP和BIP蛋白表达量。结果 CKK8实验及ALP染色表明山茱萸新苷Ⅰ对成骨细胞增殖及分化有一定影响,不同浓度山茱萸新苷Ⅰ干预下成骨细胞出现不同程度的增殖;与空白对照组相比,山茱萸新苷Ⅰ组的Wnt2、BMP2、β-catenin、OPG、NOX4的mRNA表达水平显著升高(P0. 01),而PERK明显降低(P0. 01)。与空白对照组相比,山茱萸新苷Ⅰ组的成骨细胞Wnt2、β-catenin、PDI蛋白表达量显著升高(P0. 01),CHOP表达亦有轻微上升,但不明显(P0. 05),而BIP的蛋白表达水平明显降低(P0. 01)。结论山茱萸新苷Ⅰ浓度为1 mmol/mL时在促进成骨细胞的增殖分化的作用上表现最佳,其能显著升高成骨细胞Wnt2、BMP2、β-catenin、OPG和NOX4的mRNA表达水平,而降低PERK的mRNA表达水平,升高Wnt2、β-catenin、PDI的蛋白表达量,降低BIP的表达量,在山茱萸新苷Ⅰ的干预下,Wnt信号通路及内质网应激途径对成骨活动的发生发展起着重要作用。     

《傅青主女科·种子》固涩药应用浅析

纵观历代医家对治疗不孕症的理论阐述,并无明确指出配伍固涩药的必要性,而探究《傅青主女科·种子》可知,固涩药在治疗女子不孕时配伍使用,多有画龙点睛之效,既可敛摄气血精液,又可调补冲任加强固藏,又不孕症多虚多损,在临床中以相应的补益药佐固涩药同用,可标本兼顾,能收到较好的疗效。《傅青主女科·种子》中十方有三方未运用固涩药:嫉妒不孕之开郁种玉汤、肥胖不孕之加味补中益气汤、腰酸腹胀不孕之升带汤,三方皆为治疗不孕实证,这提示固涩法仅适用于虚证、脱证及久病大病后邪不猖盛的情况,如运用不当就会造成"闭门留寇",其害无穷,不可不慎。     

RP-HPLC法测定保肝丸中五味子甲、乙、丙素及熊果酸

目的建立RP-HPLC法测定保肝丸中五味子甲、乙、丙素及熊果酸的量,对保肝丸的制剂质量提供保障。方法采用ZORBAX SB-C_(18)(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(67:33),体积流量1.0mL/min;紫外检测波长为210 nm;柱温30℃;进样量10μL。结果五味子甲、乙、丙素及熊果酸的最低检测质量浓度分别为0.016、0.019、0.020、0.025 mg/L,线性范围分别为3.906~250.000、5.323~340.000、3.225~205.000、5.323~340.000 mg/L。供试样品中五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素及熊果酸的平均回收率分别为100.79%、101.09%、101.26%、101.16%;精密度RSD分别为1.76%、1.69%、1.80%、1.86%;重复性试验RSD分别为1.77%、1.66%、1.49%、1.56%;稳定性试验分别为1.61%、1.39%、1.60%、1.56%。保肝丸(0.560 mg)含五味子甲、乙、丙素及熊果酸平均量分别为0.444、1.066、0.3125、1.068μg/丸。结论该方法简便、灵敏度高、重复性好、回收率高,是检测五味子甲、乙、丙素及熊果酸质量浓度的可信方法。     

山茱萸、生地有效部位及配伍组合抑制糖基化终末产物致肾小球系膜细胞增殖的研究

目的:通过体外培养大鼠肾小球系膜细胞(GMC),建立糖基化终末产物(AGEs)致肾小球系膜细胞增殖的细胞模型,观察山茱萸有效部位、生地有效部位及其配伍组合对糖基化终末产物致肾小球系膜细胞增殖的抑制作用,以确定最佳配伍组合物。方法:体外培养肾系膜细胞,当细胞贴壁生长至80%~90%时,(1),用浓度为50、100、200、400mg/L的山茱萸各部位(环烯醚萜苷、三萜酸、多糖)、生地各部位(环烯醚萜苷、多糖、寡糖)进行干预,然后加入200mg/L的糖基化终末产物刺激,24 h后检测细胞增殖情况,筛选出活性较强的部位。(2),将活性较强的部位山茱萸环烯醚萜苷和三萜酸(A)、生地环烯醚萜苷(B)按1:0、0:1、1:1、1:2、2:1进行配伍组合(分别为A1、B1、A1B1、A1B2、A2B1),以浓度为25、50、100mg/L生药及含药血清进行干预,加入200mg/L的AGEs刺激,24 h后检测细胞增殖情况以及细胞上清液中纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(Coll-Ⅳ)水平。结果:(1)山茱萸环烯醚萜苷部位、山茱萸三萜酸部位与生地环烯醚萜苷部位活性较强,具有显著抑制糖基化终末产物致肾小球系膜细胞增殖的作用。(2)配伍组合物(A1、B1、A1B1、A1B2、A2B1)生药及含药血清均能够抑制肾小球系膜细胞增殖及其分泌纤维连接蛋白、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原的水平,并呈一定量效关系。结论:山茱萸环烯醚萜苷部位、山茱萸三萜酸部位、生地环烯醚萜苷部位及其配伍组合能够明显抑制糖基化终末产物致肾系膜细胞增殖及其分泌的纤维连接蛋白、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原水平,减少细胞外基质沉积,其中配伍组合A2B1抑制效应最强,为最佳配伍组合。     

基于复杂网络分析中医药治疗早期糖尿病肾病用药规律

目的分析中医药治疗早期糖尿病肾病的配伍组合及其核心药物。方法以"早期糖尿病肾病""中医""治疗"等为主题词,系统检索中国知网数据库、重庆维普中文科技期刊数据库近5年来所有相关文献,使用Epi Data建立典型病例治疗中所用中医复方的药物数据库,选取其中具有早期糖尿病肾病典型病例有效治疗的文献,用复杂网络挖掘中医治疗早期糖尿病肾病的用药关系及其核心药物。结果治疗早期糖尿病肾病核心处方包括以下药物:黄芪、益母草、当归、山茱萸、大黄等,其中黄芪、山茱萸、山药、丹参处于处方配伍网络的核心节点。结论该研究可为进一步指导临床用药提供一定的指导,其结果能够与名老中医的用药规律进行对比,为以后名老中医临床学术经验的挖掘提供更广阔的思路。     

山茱萸药材鲜品与干品总DNA提取方法比较

目的:探讨山茱萸药材鲜品与干品总DNA的提取方法,比较鲜、干品总DNA质量,为以后的研究奠定基础。方法:采用改良CTAB法A,B和经典SDS法,提取山茱萸药材鲜品和干品总DNA,对其进行DNA含量测定和电泳检测。结果:改良CTAB法A提取山茱萸药材鲜品与干品总DNA的OD260/OD280比值在1.7~1.9之间,电泳条带清晰,无拖尾,对山茱萸药材鲜品与干品DNA进行综合比较,结果显示鲜品获得的DNA质量高于干品。结论:改良的CTAB法A是分离高质量完整DNA的方法简便、快速,该方法得到的DNA适合下一步分子生物学研究。