补骨脂素对成骨细胞Caspase-3、8、9蛋白和Bcl-2、Bax、Bid蛋白的调控机制

摘要：目的 分析补骨脂素对成骨细胞Caspase-3、8、9蛋白和Bcl-2、Bax、Bid蛋白的调控,探讨细胞凋亡信号途径和骨质疏松症的相关关系。方法 选用1日龄SD大鼠获取原代的成骨细胞体外培养,细胞分成观察组、对照组和正常组,观察组的培养基中添加补骨脂素,对照组的培养基中添加雌二醇,正常组常规培养,采用MTT比色法检测补骨脂素的最佳浓度及最佳时间,荧光定量PCR法检测各组Caspase-3、8、9蛋白和Bcl-2、Bax、Bid蛋白的表达。结果 在补骨脂素的最佳浓度及最佳时间方面,第8天时成骨细胞的OD值达最大值,而且以5umol/L显著;对于Bax蛋白,与正常组比较,对照组更能显著下调Bax蛋白的表达（P<0.05）。对于Bid蛋白,观察组较对照组更能上调该蛋白的表达量（P<0.05）。对于Bcl-2蛋白,观察组的相对表达量高于对照组和正常组（P<0.05）,而且观察组的Bcl-2/Bax的相对量也高于对照组（P<0.05）。在Caspase表达方面,相对于正常组,观察组和对照组均能显著下调Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达量（P<0.05）,而且观察组比对照组更能下调Caspase-9蛋白的表达（P<0.05）。结论 补骨脂素可以上调成骨细胞内Bid蛋白和Bcl-2蛋白的表达,结合补骨脂素对成骨细胞的增殖情况,提示补骨脂素有可能以上调抑制凋亡蛋白为主,而且补骨脂素可能通过线粒体途径进行细胞凋亡的调控。     

OSTA在中国各级医疗机构骨质疏松筛查中的应用进展

中国人口老龄化日益严重,骨质疏松症的发生率愈来愈高,其防治费用给患者家庭和社会经济造成了沉重的负担。随着国家分级诊疗制度建设的深入,各级医疗机构就诊人数越来越多,其中大部分对于骨质疏松症的认识程度较低。在此背景下,骨质疏松症初筛工具的应用显得尤为重要。亚洲人骨质疏松自我筛查工具(osteoporosis self-assessment tool for Asians,OSTA)是针对亚洲绝经后女性制定的一套工具,只参考年龄和体重两个因素。虽然在使用过程中仍存在一定的局限性,但具有操作简单方便,灵敏度相对较高的特点,特别是在缺乏检测手段的基层医疗机构中进行骨质疏松筛查应用方面前景广阔。本文将近年来利用OSTA在中国各级医疗机构进行骨质疏松筛查的相关研究进行综述,旨在探讨OSTA在此方面的适用性,以期为骨质疏松症的初筛、管理、分级诊疗等方面提供新视角。     

山茱萸新苷Ⅰ对成骨细胞的增殖及成骨分化的影响

目的基于Wnt信号通路及内质网应激研究山茱萸新苷Ⅰ对大鼠原代成骨细胞的增殖及成骨分化的影响。方法提取原代成骨细胞,CKK8实验检测在药物浓度下山茱萸新苷Ⅰ对成骨细胞增殖的影响;碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色检测不同浓度山茱萸新苷Ⅰ干预下成骨细胞ALP的活性情况; Real-time PCR检测Wnt2、β-catenin、BMP2、OPG、NOX4、PERK基因mRNA的表达; Western blot检测Wnt2、β-catenin、PDI、CHOP和BIP蛋白表达量。结果 CKK8实验及ALP染色表明山茱萸新苷Ⅰ对成骨细胞增殖及分化有一定影响,不同浓度山茱萸新苷Ⅰ干预下成骨细胞出现不同程度的增殖;与空白对照组相比,山茱萸新苷Ⅰ组的Wnt2、BMP2、β-catenin、OPG、NOX4的mRNA表达水平显著升高(P0. 01),而PERK明显降低(P0. 01)。与空白对照组相比,山茱萸新苷Ⅰ组的成骨细胞Wnt2、β-catenin、PDI蛋白表达量显著升高(P0. 01),CHOP表达亦有轻微上升,但不明显(P0. 05),而BIP的蛋白表达水平明显降低(P0. 01)。结论山茱萸新苷Ⅰ浓度为1 mmol/mL时在促进成骨细胞的增殖分化的作用上表现最佳,其能显著升高成骨细胞Wnt2、BMP2、β-catenin、OPG和NOX4的mRNA表达水平,而降低PERK的mRNA表达水平,升高Wnt2、β-catenin、PDI的蛋白表达量,降低BIP的表达量,在山茱萸新苷Ⅰ的干预下,Wnt信号通路及内质网应激途径对成骨活动的发生发展起着重要作用。     

广东省女性绝经后原发性骨质疏松症调查分析

目的探讨广东省女性绝经后骨密度的变化规律及其影响因素相关分析。方法本研究通过对广东省50～87岁的1772名中老年人完成骨质疏松症问卷调查和进行双能X-ray骨密度测量。筛选绝经后原发性骨质疏松症患者274例,以5岁为1个年龄段,将其分成7个组。分析腰椎和髋部BMD值的变化规律。体重指数、脂肪含量与骨密度的关系。结果广东省不同城市女性原发性骨质疏松症患病率为11.1%～19.2%,总体患病率为15.5%。体重指数与髋部neck、Total骨密度相关系数(r=0.282,r=0.272,P<0.05),脂肪含量与腰椎正位Total骨密度相关系数(r=0.086,P<0.05)。结论广东省女性骨质疏松症患者腰椎骨密度在55～65岁和70～79岁两个年龄段丢失明显,髋部骨密度丢失在65岁以后下降速率加快。体重指数与髋部骨密度值有一定相关性,脂肪含量和腰椎骨密度值有较小相关性。     

沉默ERRα对过表达DKK1、Sost重组腺病毒载体转染的MG63细胞影响研究

目的:探讨雌激素相关受体α(ERRα)对Wnt信号通路抑制因子Dickkopf(DKK)1、骨硬化蛋白Sclerostin(Sost)过表达腺病毒载体转染的MG63细胞和相关蛋白Lrp5、CTGF、FGF2、OPN的影响作用。方法:将培养好的MG63细胞经过表达DKK1、Sost转染后分为空白对照组、过表达DKK1组、过表达Sost组、过表达(DKK1+Sost)组,根据组别不同用包装好的沉默ERRα干预过表达DKK1、Sost重组腺病毒载体转染后的MG63细胞,采用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法(MTT)检测细胞增殖、考马斯亮蓝蛋白定量法测定ALP活性、流式分析法测定钙离子浓度,Western blot检测MG63细胞中Lrp5、CTGF、FGF2、OPN蛋白的表达量。结果:①与空白对照组比较,过表达DKK1、Sost、DKK1+Sost组、沉默ERRα干预空载腺病毒组的高细胞活性、ALP活性和Lrp5、CTGF、FGF2、OPN的表达量均降低,钙离子浓度均升高,差异均有统计学意义(P0.05)。②与过表达DKK1、Sost、DKK1+Sost组比较,沉默ERRα干预过表达DKK1、Sost、DKK1+Sost组的细胞活性、ALP活性和Lrp5、CTGF、FGF2、OPN的表达量均降低,钙离子浓度均升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:沉默ERRα可降低过表达DKK1、Sost重组腺病毒转染后的MG63细胞增殖和ALP活性,升高钙离子浓度,对Lrp5、CTGF、FGF2、OPN蛋白表达有一定影响作用,尤其对DKK1、Sost同时过表达时的作用最为明显。     

骨康对去卵巢大鼠骨源性碱性磷酸酶和胰岛素样生长因子的影响

目的:探讨骨康对去卵巢大鼠血清中骨碱性磷酸酶(BALP)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的影响,及其治疗骨质疏松症的作用机制.方法:6月龄雌性SD大鼠68只按简单随机方法分为空白组和手术组,分别为22只和46只.空白组行假手术,手术组行卵巢切除术.术后3个月后从两组随机各选出10只大鼠行骨密度检查,以确定造模成功.在确定造模成功后,将手术组中剩下的36只大鼠再随机分为3组,每组12只,分别为手术模型组、雌激素组、中药组.空白组中剩下的12只大鼠为空白对照组.对各组进行灌胃给药治疗,灌胃给药容积为10ml/kg,空白对照组、手术模型组灌服蒸馏水;中药组灌服相应的药物,雌激素组给予尼尔雌醇灌胃.治疗3个月后采取动物血清进行实验指标检测,测定动物血清中E2、IGF-1、BALP含量.结果:雌激素组、中药组血清E2、BALP水平高于手术模型组,其差异有统计学意义(P<0.05).而雌激素组与中药组血清E2水平相比较差异无统计学意义(P0.05).中药组血清IGF-1水平高于手术模型组及空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:中药骨康能提高去卵巢大鼠血清中雌二醇、胰岛素样生长因子、骨源性碱性磷酸酶水平,间接促进成骨细胞增殖,抑制破骨细胞骨吸收,促进成骨细胞的骨形成功能.     

运动对去卵巢大鼠骨组织形态计量学的影响

目的评价运动对去卵巢大鼠骨组织形态计量学的影响。方法46只SD大鼠随机分为正常对照组(A组)、去卵巢手术组(B组)、雌激素对照组(C组)、运动组(D组)。A组行假手术,其余各组行双侧卵巢切除术,术后3 个月开始为期3 个月的治疗。C组用尼尔雌醇治疗,D组按要求进行运动。治疗结束后对胫骨作骨组织形态计量学分析。结果D组的骨小梁面积、骨小梁面积百分数、骨小梁周长、骨小梁数目明显高于B组,且在行卵巢切除术各组中骨小梁分离度、单位骨小梁面积破骨细胞数、每毫米破骨细胞数最低,荧光周长百分数、矿化沉积率、骨形成率最大。结论运动能增加去卵巢大鼠骨的骨量,具有促进骨形成和抑制骨吸收的双重作用。     

腹部易筋九宫推拿理论基础及其临床应用

目的探讨腹部易筋九宫推拿防治疾病的理论基础,为通过腹部易筋九宫推拿防治疾病提供理论支持。方法通过九宫力网理论分析人体核心结构,阐述腹部易筋九宫推拿防治机制,并通过临床案例来验证防治效果。结果临床案例经以腹部九宫力网理论为指导的易筋九宫推拿治疗后均取得满意临床效果。结论核心结构力网失衡是导致疾病发生的主要原因,经腹部易筋九宫推拿可矫正力网失衡状态,从而为腹部易筋九宫推拿防治颈肩腰腿痛提供理论支持。     

“肌少-骨质疏松症”的研究现状与进展

人口的老龄化增加了许多老年慢性疾病的患病率,肌少症和骨质疏松症是与年龄相关的退行性疾病,具有相似的病理生理基础,包括遗传学、脂肪浸润、内分泌和机械因素等。"肌少-骨质疏松症"是一种新的老年综合征,在老年人群中广泛存在,并且可能带来严重的并发症,临床实践中应常规使用DXA、手握力、步行速度来评估老年人群的肌肉和骨骼情况,这对于有高危因素的老年患者可能会有帮助。针对"肌少-骨质疏松症"的研究可以更加全面的认识肌肉骨骼相关的退行性疾病,治疗上提示骨质疏松症和骨质疏松性骨折需要全面考虑肌肉和骨骼的情况并进行综合干预。尽管目前没有明确关于"肌少-骨质疏松症"的治疗药物,但有充分证据表明足够的蛋白质和钙摄入量,增加身体活动及维持维生素D的适当水平可以对骨骼和肌肉产生双重作用,这些都有助于改善身体的活动功能并减少老年人群跌倒和发生骨折的风险。笔者对"肌少-骨质疏松症"的流行病学、病理生理学、诊断、治疗和管理策略进行综述。     

Bcl2及Bak1重组表达腺病毒对MG63细胞的影响

目的研究Bcl2、Bak1重组表达腺病毒载体单独或共转染对MG63细胞活性及结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、Runx2、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的影响。方法收集对数期MG63细胞,分为4组:A组:空载腺病毒干预组;B组:Bcl2重组表达腺病毒转染组;C组:Bak1重组表达腺病毒转染组;D组:Bcl2、Bak1重组表达腺病毒共转染组。A组给予空载腺病毒转染,B、C组分别给予Bcl2重组表达腺病毒、Bak1重组表达腺病毒转染,D组给予Bcl2、Bak1重组表达腺病毒共转染,MTT法检测细胞活性,碱性磷酸酶(alkaline phosphates,ALP)活性检测试剂盒检测ALP活性,流式细胞仪检测钙离子浓度,Western Blot检测CTGF、Runx2、OPN、TNF-α的表达。结果与A组相比,B组细胞活性、ALP活性升高,钙离子浓度降低,CTGF、OPN、Runx2蛋白相对表达量均升高,TNF-α表达量则降低,差异有统计学意义(P0.05);C组细胞活性、ALP活性降低,钙离子浓度升高,各蛋白相对表达趋势与B组相反,差异有统计学意义(P0.05);D组细胞活性、ALP活性、钙离子浓度升高,CTGF、Runx2相对表达量升高,OPN、TNF-α相对表达量降低,但差异均无统计学意义(P0.05)。(2)B组、C组、D组各检测指标组间比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 Bcl2重组表达腺病毒载体转染MG63细胞可增强细胞活性及钙化能力,促进骨形成。