NIH 3T3细胞转化前后细胞骨架及细胞表面纤维粘连蛋白的免疫荧光观察

本实验用抗纤维粘连蛋白(FN)亲和层析纯抗体和抗管蛋白抗体及鬼笔环肽,以免疫荧光组织化学方法,对NIH3T3细胞转染人肺腺癌细胞系AGZY基因组DNA前后细胞表面FN及细胞内骨架系统进行染色观察。结果表明,细胞在发生转化后,微丝及微管均表现出明显受损,细胞骨架结构不清,呈现为弥散样荧光;细胞表面FN大量减少,仅及正常NIH3T3细胞的1/9,其分布也由细丝形成的网状,变成斑点或斑块状。这一结果进一步证实,细胞恶变是涉及到细胞骨架系统及膜表面糖蛋白变化的复杂过程,并预示这些变化可能就是导致细胞形态发生变化、细胞失去正常生长调控的原因之一。     

太子参化学成分、药理作用和应用的研究进展

太子参Pseudostellariae Radix是中国传统补益中药材之一,兼具药用和食疗功效,主要含有挥发油、多糖、环肽、生物碱、皂苷、酚类等成分,具有降血糖、抗炎、抗癌、保护细胞、抑制酪氨酸酶、免疫调节等药理作用。对太子参的化学成分及其药理作用,以及太子参在临床、食疗、保健食品、化妆品、兽药制剂和功能性饲料添加剂等方面应用进行总结,为太子参进一步开发利用提供依据。     

基于HPLC多成分定量分析不同产地太子参药材的质量

目的 建立太子参Pseudostellaria heterophylla HPLC多成分定量检测方法,结合化学计量学和加权逼近理想解排序（TOPSIS）法对不同产地太子参药材质量进行评价。方法 以Agilent Zorbax ODS C₁₈柱为色谱柱,乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长分别为254、285、203 nm,采用HPLC法同时检测尿苷、肌苷、鸟苷、川陈皮素、染料木苷、木犀草素、金合欢素、白杨素、水杨酸、阿魏酸、肉桂酸、太子参环肽B、太子参环肽A、乌苏酸和β-谷甾醇的含量。利用SIMCA 14.1和SPSS 26.0软件对上述15种成分含量检测结果进行主成分分析（principal component analysis,PCA）和正交偏最小二乘法-判别分析（orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA）,挖掘影响太子参产品质量的差异性标志物。运用加权TOPSIS法进行7省17批次太子参药材综合质量评价。结果 HPLC多成分定量分析方法学考察符合《中国药典》规定要求。PCA结果显示前2个主成分特征值均大于1,累积方差贡献率为87.843%,17批次太子参样品分为3类。OPLS-DA筛选出尿苷、金合欢素、肌苷、太子参环肽A、太子参环肽B、β-谷甾醇和阿魏酸为影响太子参产品质量的差异标志物。EW-TOPSIS欧氏贴近度在0.258 5～0.642 5,表明不同产地太子参质量差异较大,其中江苏、安徽地区太子参排名靠前,其次为福建、江西和湖南地区,云南、四川地区太子参排名靠后。结论 建立的太子参HPLC多成分定量检测方法操作便捷、结果准确可靠,PCA、OPLS-DA联合加权TOPSIS法可用于不同产地太子参药材的质量评价。     

RGD环肽修饰的姜黄素/黄芩苷靶向共递送纳米脂质体的制备工艺优化及表征

目的 优化RGD环肽修饰的姜黄素（curcumin,Cur）/黄芩苷（baicalin,Bai）共递送靶向纳米脂质体（RGD-Cur/Bai-Lip）的制备工艺并进行表征评价。方法 采用乙醇注入法制备RGD-Cur/Bai-Lip,首先通过Plackett-Burman筛选实验确定超声时间、胆脂比、水合温度作为制备RGD-Cur/Bai-Lip的关键因素,然后采用Box-Behnken响应面法进行工艺优化,以姜黄素包封率、黄芩苷包封率、总载药量为考察指标,采用AHP-复相关系数法-拉开档次法进行多指标组合赋权以确定各指标权重系数并计算综合评分,从而确定RGD-Cur/Bai-Lip的最优处方及关键工艺参数。最后对其形态、粒径电位、稳定性、体外释放度及溶血性等进行表征评价。结果 优选得到的最佳工艺为胆脂比1：12,水合温度60℃,探头超声时间为10 min。RGD-Cur/Bai-Lip外观澄清透明,呈亮黄色,对光可视淡蓝色乳光,透射电子显微镜下观察形态圆整、分散均匀。平均粒径为（101.10±0.62）nm,多分散系数（PDI）为0.191 0±0.014 3,Zeta电位为（1.59±0.07）mV,姜黄素包封率为（94.28±4.51）%,黄芩苷包封率为（76.93±1.35）%,总载药量为（2.27±0.09）%。7 d内稳定性良好,无溶血性,并具有一定的缓释作用。结论 优化处方后制备的RGD-Cur/Bai-Lip包封率高,粒径分布均匀,7 d内较稳定,无溶血性,并具有一定的缓释作用,为RGD-Cur/Bai-Lip的后续抗肝纤维化体内外研究提供了制剂基础。     

蛋白质内含子研究进展

介绍了蛋白质内含子的结构、功能和其介导的蛋白质剪接机理及应用研究进展。蛋白质内含子目前已广泛应用于蛋白质纯化、蛋白质连接、以及环肽和毒素蛋白的制备,且对蛋白质结构和功能关系的研究具有重要价值。     

三种红树林内生真菌的环肽类次级代谢产物的研究

从三种红树林内生真菌Paecilomyces sp.(treel-7),4557,ZZF65中分到九个环肽类的次级代谢产物,分别是viscumamide(1),cyclo(Pro-Iso)(2),cyclo(Phe-Gly)(3),cyclo(Phe-Ana)(4),cyclo(Gly-Pro)(5),cyclo(Gly-Leu)(6),cyclo(Trp-Ana)(7),neoechinulin A(8),cyclo(Pro-Thr)(9)。其中化合物1,7,8,9是首次从海洋真菌中分离得到。     

枣属植物化学成分研究进展

已从枣属植物中分得新化合物200多个,分别属于生物碱类、三萜皂苷类、黄酮及其苷类。总结了20世纪80年代以来从该属植物中得到的化合物,尤其是环肽类生物碱的研究进展。     

耳蜗毛细胞凋亡早期的检测方法

目的：介绍一种耳蜗毛细胞凋亡早期的检测方法。方法：将豚鼠暴露于155dB SPL的脉冲噪声75次，于噪声暴露后5min解剖取耳蜗。采用异硫氰酸荧光素标记的鬼笔环肽(FITC-labeled phalloidin)进行毛细胞表皮板和纤毛肌动蛋白的染色，DNA荧光染料碘化丙锭(propidium Iodide，PI)进行细胞核染色，标记鉴别毛细胞死亡方式。原位末端标记法(TUNEL)进一步确认凋亡的毛细胞，荧光显微镜下观察凋亡的毛细胞形态学变化。结果：异硫氰酸荧光素标记的鬼笔环肽和PI双重染色发现毛细胞核发生轻微固缩时，其表皮板结构完好。TUNEL阳性标记物存在于固缩的细胞核内。结论：应用异硫氰酸荧光素标记的鬼笔环肽和PI双重染色法能够发现凋亡早期的毛细胞。     

人ⅡA型磷脂酶A_2衍生肽P26抗菌作用与结构修饰的研究

目的比较人ⅡA型磷脂酶A2(phospholipase A2,PLA2)C末端衍生的多肽和经修饰后的环肽对不同细菌在体外的杀菌效应,了解其作用机制。方法根据人ⅡA型PLA2氨基酸顺序C末端26个氨基酸残基,合成直链肽P26,同时将其修饰为环肽P26。采用琼脂铺板计数法,将不同浓度的两种多肽分别与6种细菌在37℃孵育2 h,然后铺板并置于37℃恒温箱培养18～24 h,记录每一琼脂板上的菌落数(CFU),并计算多肽作用后的杀菌率。结果两种多肽对革兰阳性菌金黄色葡萄球菌、枯草杆菌和炭疽杆菌有较强的杀菌活性,环肽P26的作用比直链肽P26强4倍左右;对革兰阴性菌大肠杆菌、变形杆菌和绿脓杆菌的杀菌作用较弱,而环肽P26的作用更弱。结论衍生自人ⅡA型PLA2 C末端26个氨基酸残基的肽P26和修饰得到的环肽P26对G+菌有较强的杀菌活性,经修饰成环肽后作用更强,可能与环肽分子带的正电荷更集中有关。     

栽培银柴胡化学成分的研究

从栽培银柴胡Stellaria dichotoma L.vat.lanceolata Bge.的根中分析鉴定了7个化合物,经理化常数测定,气相色谱及光谱分析鉴定为α-菠甾醇(α-spinasterol)(1),β-谷甾醇(β-sitosterol)(2),豆甾醇(stigmasterol)(3),豆甾-7-烯醇(stigmast-7-enol)(4),α-菠甾醇葡萄糖甙(α-spinasterol glucosido)(5),豆甾-7-烯醇葡萄糖甙(stigmast-7-enol glucoside)(6),及银柴胡环肽(stellaria cy(?)lapeptide)(7).