重组人白介素-24蛋白对荷人A375细胞黑素瘤裸鼠的抑瘤作用

目的 研究原核表达及纯化、复性的重组人白介素24蛋白(recombined human interlukin 24,rhIL-24)对荷人A375细胞黑素瘤裸鼠的抑制肿瘤生长的作用.方法 将人A375黑素瘤细胞注射至裸鼠体内,待肿瘤生长到一定体积后,向裸鼠的肿瘤内注射rhIL-24,2周后切取肿瘤称重、量体积,进行病理检查及免疫组化检测.结果 经rhIL-24注射的肿瘤体积及重量与对照组相比明显减小、减轻;Bax基因表达上调、Bcl-2、CD34及VEGF基因表达下调,显示肿瘤细胞生长受到抑制,凋亡率增加.结论 rhIL-24对荷人A375细胞黑素瘤裸鼠的肿瘤有显著抑制生长的功能,可促进A375细胞凋亡,而对裸鼠则无明显的不良反应.     

脐带血清对骨髓粒—巨噬细胞集落形成的影响

在骨髓细胞半固体琼脂培养体系中，研究脐带血清（ＣＢｓ）对骨髓粒—巨噬细胞集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ）的影响，单纯应用ＣＢｓ培养可使骨髓ＣＦＵ－ＧＭ（ｘ±ｓ为２６．０３７５±１０．２３２７）显著的高于正常成人外周血清（ＰＢｓ）组（ｘ±ｓ为１１．５９１７±３．６０４７；Ｐ＜０．００１）。ＣＢｓ加粒－巨噬细胞刺激因子，ＧＭ－ＣＳＦ组ＣＦＵ－ＧＭ（ｘ±ｓ为１１９．０７９２±３５．０９９１）是单纯ＣＢｓ组的４．５７倍；而ＰＢｓ加ＧＭＣ－ＳＦ组（ｘ±ｓ为９７．１２５±２６．７５５９）是单纯ＰＢｓ组的８．３８倍。有白细胞介素－６（ＩＬ－６）存在的ＣＢｓ组，ＣＦＵ－ＧＭ（ｘ±ｓ为３１．９３３３±１０．９１４４）明显的高于单纯ＣＢｓ组（Ｐ＜０．０２）。提示ＣＢｓ中含有较高水平的内源性ＧＭ－ＣＳＦ。     

重组人IL-18在大肠杆菌中的表达及其抗肿瘤作用

目的：获取rhIL-18原核表达产物并研究其活性。方法：用本室构建的含基因重组表达载体PBV220-IL-18的大肠杆菌DHSot，经42℃热诱导表达和包涵体提取纯化后获取rhIL-18蛋白；采用ELISA试剂盒检测rhIL-18刺激PBMC分泌IFN-γ的活性及MTT法检测其对NK细胞杀伤K562细胞自然杀伤活性；同时用荷瘤小鼠模型检测其体内抗瘤功能。结果：诱导含重组表达载体PBV220-IL-18的大肠杆菌D145ct后，蛋白电泳显示出一条相对分子量（Mτ）为18000的蛋白条带；10μg rhIL-18蛋白体外刺激PBMC后，其分泌IFN-γ的能力与对照组相比提高了8倍，细胞毒性提高3倍；同时rhIL-18蛋白能明显抑制肿瘤生长和延长荷瘤鼠生存期。结论：获得了有免疫调节功能和抗肿瘤活性的rhIL-18蛋白。为今后IL-18重组产物的研制和开展肿瘤的生物治疗提供了实验依据。     

人IL-31基因克隆、表达及在皮肤炎症中的作用

目的 克隆人IL-31基因,构建原核表达载体,并诱导其在大肠杆菌中表达,研究hIL-31蛋白与皮肤炎症的关系.方法 采用RT-PCR克隆人IL-31基因,将其克隆到原核表达载体pET28a( ),并通过IPTG诱导目的基因在大肠杆菌中表达,用该目的蛋白刺激人表皮角质细胞HaCaT,RT-PCR检测趋化因子MIP-3β、TARC及TCA-3(I-309)mRNA的表达;小鼠皮内注射该目的蛋白,观察局部炎症表现,皮肤标本HE染色观察皮肤炎性特征,采血进行白细胞计数及分类,ELISA法检测血清IL-1βIL-6和TNF-α水平,流式细胞仪分析胸腺及脾脏T细胞亚群.结果 成功获得495bp的人IL-31基因,原核表达质粒构建正确,IPTG诱导目的基因在大肠杆菌中大量表达;该目的蛋白可刺激HaCaT表达趋化因子MIP-3β、TARC、I-309;小鼠皮肤注射部位有脱毛,HE染色可见炎性细胞浸润,外周血白细胞总数增加,中性粒细胞比例增高,血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平增高,脾脏CD4 T细胞百分比增高,CD8 T细胞百分比减少.结论 人IL-31基因克隆及原核表达已获成功,hIL-31蛋白可刺激HaCaT细胞表达MIP-3β、TARC、I-309,诱导小鼠皮肤炎症反应.     

丝素蛋白材料生物相容性评价研究进展

丝素蛋白是一种具有优良理化特性的高分子生物材料，而且具有良好的生物相容性。主要对国内外关于丝素蛋白材料生物相容性评价的研究进展，尤其是其优异的生物功能性做了综述，并对下一步研究其生物相容性分子机制的发展趋势进行了探讨。     

rhIFNα_(2a)、IFNα_(2b)和IFNα_(1b)、IFNα_(1b)突变体的抗病毒效应的对比分析

目的　进一步研究不同亚型不同品牌基因工程干扰素的抗病毒效应。方法　采用微量细胞病变 (CPE)抑制法进行抗病毒试验。结果　不同品牌IFNα2a或IFNα2b5 0 0、5 0、5IU/ml在Vero细胞上分别可抗 10 0 0、10 0、10TCID50 的Ⅰ型和Ⅱ型单纯疱疹病毒感染细胞 ;5 0 0、5 0、5IU/mlIFNα1b或IFNα1b突变体 ,在Vero细胞上分别也可抗8、4、2TCID50 的Ⅰ型和Ⅱ型单纯疱疹病毒感染细胞。结论　进口和国产不同品牌的IFNα2a或IFNα2b对上述 2种病毒具有同等抗病毒作用。IFNα1b突变体抗病毒效果和IFNα1b无明显差别。     

α2b干扰素对体外培养兔角膜基质细胞抗单纯疱疹Ⅰ型病毒实验研究

目的 研究α2b干扰紊对体外培养兔角膜基质细胞抗单纯疱疹病毒的作用。方法 采用微量细胞病变法。观察α2b干扰紊在体外培养的兔角膜基质细胞上的抗I型单纯疱疹病毒的作用。结果 24小时5u、50u、500uIFNα2b分别可以抗8、32、64TCID50的HSV—I型病毒感染。48小时5u、50u、500uIFNα2b分别可以抗16、64、528TCID50的HSV—I型病毒感染。结论 α2b干扰紊对体外培养兔角膜基质细胞具有明显抗I型单纯疱疹病毒的作用。     

牛磺酸抑制新生大鼠心肌重塑的体外研究

目的 通过牛磺酸对新生大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成及对I／Ⅲ型胶原比值的影响，从细胞水平探讨其在体外抑制心肌重塑的作用。方法 在培养的心肌成纤维细胞中加入不同浓度的牛磺酸，用羟脯氨酸法测定胶原量，MTT比色法检测细胞增殖情况，SDS-PAGE电泳测胶原I／Ⅲ型比值。结果 100mmol／L、200mmol／L牛磺酸用药24h和48h及50mmol／L用药72h后能明显抑制心肌成纤维细胞的增殖及胶原的合成，I／Ⅲ型胶原比值明显下降。结论 牛磺酸能通过抑制心肌成纤维细胞增殖和胶原合成，降低I／Ⅲ型胶原比值起到抗心肌重塑的作用。     

应用密度梯度离心法分离扩增兔骨髓基质细胞的体会

目的探讨密度梯度离心法分离培养兔骨髓基质干细胞(BMSc)的条件，为组织工程学选择合适的种子细胞奠定基础。方法采用密度梯度离心法将兔BMSc自小量骨髓中分离并培养，观察其增殖和生长特性，绘制生长曲线，测定分裂指数和贴壁率。结果兔．BMSc在第7代前性状稳定，生长曲线相似；第4天分裂指数最高为15％；传代后10h贴壁率高达90％。结论密度梯度离心法是分离兔BMSc的理想方法，BMSc能为未来组织工程提供足量种子细胞。     

rhIL-24基因抑制胃癌生长及作用机制的实验研究

目的 探讨rhIL-24蛋白体外对胃癌生长的影响及作用机制。方法用已构建成功的真核表达载体pcDNA3．0-IL24质粒转染中国仓鼠卵巢细胞CHO细胞，使其上清稳定表达rhIL-24。同时用已构建成功的原核表达载体PET21a（＋）IL-24．BL-21。抽提BL-21菌中表达的rhIL-24，行SDS-PAGE电泳和Western-Blotting鉴定rhIL-24的表达，MTT法检测rhIL-24对SGC7901胃癌细胞生长的影响；Hoechst染色、流式细胞术检测CHO细胞和BL-21菌表达的rhIL-24诱导胃癌细胞凋亡；鸡胚绒毛尿囊膜试验观察rhIL-24对血管形成的影响。结果rhIL-24对胃癌细胞的生长有明显的抑制作用；rhIL-24可诱导SGC7901胃癌细胞凋亡；rhIL-24具有抑制血管形成的作用。结论rhIL-24蛋白有多重抗肿瘤能力，其可能的作用机制是明显抑制胃癌细胞增殖，诱导肿瘤细胞凋亡，抑制血管生成。