重组SEA基因真核表达载体的构建及诱导小鼠抗肝癌免疫的效应

目的：构建葡萄球菌肠毒素A（SEA）真核表达载体，并通过体内转染，观察其诱导抗小鼠肝癌的免疫效应。方法：采用基因工程技术构建SEA基因的真核表达载体，使其表达SEA分子。通过阳离子脂质体介导的体内转染，观察其对小鼠肝癌的治疗作用。用^51Cr释放法测定治疗组与对照组动物脾淋巴细胞杀伤H22细胞的活性。结果：成功地构建了SEA真核表达载体pLXSN-SEA,体内转染pLXSN-SEA的荷瘤小鼠肿瘤明显缩小，生存期延长，4／10小鼠肿瘤完全消退，且长期无瘤生存。CTL杀伤活性实验表明，瘤区内转染pLXSN-SEA可诱导强烈的CTL杀伤效应，与对照组相比较差异显著（P＜0．01）。结论：超抗原SEA体内转染对肿瘤具有明显的治疗作用，有望用于抗肿瘤的生物治疗。     

肝癌单克隆抗体HAb18-1血清学诊断肝癌的应用

单克隆抗体技术的发展提供了一个有效的手段去发现一些新的肿瘤相关抗原(TA-A)或肿瘤抗原新的位点,并可检测这些抗原的表达。 本文报告应用本室制备的肝癌单抗H-Ab 18-1与郑州搏赛生物试剂实验研究所国     

纳米疫苗经不同途径给药后的抗肿瘤免疫学效应比较

目的比较纳米乳剂包裹的复合抗原NE(MHS)经不同途径免疫小鼠后的抗肿瘤免疫学效应,探索肿瘤疫苗有效的给药途径。方法采用磁力超声法制备纳米疫苗NE(MHS)(融合蛋白MAGE1-HSP70和超抗原SEA按摩尔比100∶1混合),评价其粒径、包裹率及稳定性。以NE(MHS)经口服、皮下、静脉和腹腔注射4种途径免疫C57BL/6小鼠,IFN-γELISPOT和LDH杀伤实验检测小鼠特异性细胞免疫反应情况,肿瘤治疗、攻击实验比较4种不同途径免疫的抗肿瘤效应。结果所制备纳米乳剂为乳白色均质胶体混悬液,粒径为20±5nm,包裹率为87%。B16-MAGE1接种后第28天,口服免疫组小鼠肿瘤体积明显大于其他3组(P<0.05),而小鼠脾淋巴细胞中分泌IFN-γ的特异性T淋巴细胞频数及对B16-MAGE1的杀伤效果、荷瘤小鼠的生存期、小鼠成瘤时间等4组间两两比较均无统计学差异。结论纳米乳剂疫苗NE(MHS)经不同途径给药后对小鼠的抗肿瘤免疫学效应相近,表明其适用于多种途径给药(包括口服),是一种使用方便的肿瘤基因工程纳米疫苗。     

儿童恶性骨肿瘤患者Th1/Th2亚群漂移的研究

儿童恶性骨肿瘤的发病率仅次于造血系统恶性肿瘤,其中成骨肉瘤约占儿童恶性肿瘤的5%。本病对手术及放化疗的效果不佳,预后极差[1]。随着肿瘤免疫学的发展,以细胞因子为核心的免疫治疗逐渐被临床所接受。根据分泌细胞因子的不同,可将辅助性Ｔ淋巴细胞亚群分为辅助性亚群1(Ｔｈ1)和辅助性亚群2(Ｔｈ2)两个亚群。Ｔｈ1亚群与Ｔｈ2亚群平衡状态的失调,必然导致细胞因子网络的紊乱,从而影响细胞免疫和体液免疫的功能。通过检测细胞因子的水平,可以反映Ｔｈ1/Ｔｈ2的平衡状态[2]。恶性骨肿瘤患儿体内Ｔｈ1/Ｔｈ2状态尚未见报道。本实验对此进行了…     

超抗原葡萄球菌肠毒素A对肝癌细胞免疫原性影响的研究

目的给肝癌细胞转入超抗原分子葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal enterotoxin A,SEA)的编码基因,使其表达这种毒素分子,以增强肝癌细胞的免疫原性,达到增强肝癌细胞诱导免疫排斥反应的目的.方法构建SEA编码基因的逆转录真核表达载体,转染病毒包装细胞系PA317后,行滴度测定.以高滴度克隆培养上清转导肝癌细胞株HHCC,筛选获得阳性表达株.然后利用外周血混合淋巴细胞进行杀伤实验.结果成功的构建了SEA的逆转录真核表达载体pLXSN-SEA,转导肝癌细胞后,获得表达SEA分子的阳性克隆HHCC-SEA.培养上清中SEA含量在pg的水平.外周血混合淋巴细胞杀伤实验结果显示,T淋巴细胞对转导后肝癌细胞的杀伤率可达45.6%.高于对HHCC 20.7%的杀伤率,T细胞对转导后肝癌细胞杀伤反应的Km值为5.18×104,而HHCC组的Km值为2.92 × 105,与前者的差别有统计学意义.结论肝癌细胞在转入SEA分子的编码基因后,表达出微量的SEA蛋白,却具有较强的免疫激活能力.即表达SEA的肝癌细胞在很低的浓度下,激活的T细胞即可对其达到最大杀伤反应速度,对T细胞的激活能力远远高于HHCC.     

人原发性肝细胞癌中HBxAg的免疫组化及免疫电镜研究

作者用免疫组化和胶体金免疫电镜方法,观察乙型肝炎x抗原(HBxAg)在肝癌组织(35例)及癌旁肝组织(29例)内的分布及亚细胞定位。结果显示,HBxAg在癌组织及癌旁肝组织内的检出率分别为60.0％和82.8％,阳性物质主要位于细胞浆内。电镜观察,HBxAg主要定位于粗面内质网和胞浆基质中,少数位于核内,并可见游离核糖体及核孔附近阳性,推测HBxAg在内质网及游离核糖体上合成,并可经核孔进入核内。     

131 碘肝癌单克隆抗体Fab片段偶合物体内放射免疫显像研究

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肝癌免疫导向药物内在化及其意义

肝癌免疫导向药物内在化及其意义隋延仿孙志伟陈志南肝癌免疫导向药物内在化及其意义@隋延仿@孙志伟@陈志南...     

The determination and significance of C/EBP in cells of liver cancer and different liver tissues

C/EBP is a sequence-specific DNA-binding protein.In order to identify its distribu-tion,localization and function,immunocytochemical technique(ABC method)was done usinganti-C/EBP polypeptide antibodies 1103~#,425~# in liver specimens from 20 normal adult,5neonatal,6 patients with hepatitis,25 patients with liver cirrhosis,80 patients with hepatocellu-lar carcinoma(40 cases were associated with surrounding nontumorous tissues)and 26 patientswith cholangiocarcinoma(15 cases were associated with surrounding nontumorous tissues).Theresults showed that C/EBP was diffusely distributed in nuclei and cytoplasm of differentiated liv-er cells and very low or undetectable in liver cancer cells.The expression of C/EBP was in pro-portion to differentiated degree of tumor cells,and was obviously weaker than that in surround-ing nontumorous tissues.C/EBP positive staining has also been found in regenerating epithelialcells of bile ductules.The results suggested that C/EBP might play an important role in estab-lishing and maintaining the differentiation of liver cells and might exert an inhibiting effect againsttransformation of liver cells and proliferation of neoplastic tissue.     

高效凝胶色谱一步法制备级纯化单克隆抗体

作者采用ＰｈａｒｍａｃｉａＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ—３００凝胶色谱柱，建立了ＩｇＧ类ＭｃＡｂ的一步法制各级纯化方法。该法是将ＭｃＡｂ腹水直接上样，用ｐＨ７．４１０ｍｍｏｌ／ＬＰＢＳ洗脱（流速０．５ｍｌ／ｍｉｎ），即得到纯化的ＭｃＡｂ。一次上样量４０～５０ｍｌ腹水，回收率为８５％－９０％．整个纯化周期４ｈ。纯化的ＭｃＡｂ经ＳＤＳ—ＰＡＧＥ测定，纯度＞９０％，免疫组化ＡＢＣ法测定活性为１：８００００（７．８×１０－１１ｍｏｌ／Ｌ）。该法操作简单、快速，只要有一台核酸／蛋白检测仪，便可进行制备级水平的纯化。